Disse metoder kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål inden for neurologi og oftalmologi, og bidrage til at evaluere en lang række retinopatier og retinale manifestationer i forskellige gnavere modeller. Den største fordel ved disse teknikker er, at der kan udføres ikke-invasive undersøgelser i længderetningen, hvilket reducerer variabiliteten og reducerer antallet af dyr, der er nødvendige for forsøgene. Disse metoder gør det muligt at foretage en kvantitativ in vivo-undersøgelse af den struktur og funktion, der kan anvendes til at undersøge de patologiske tilstande eller til at vurdere den potentielle nytteværdi af ny behandling.
Men især anvendelsen af optisk kohærens tomografi teknologi i gnavere modeller er stadig udfordrende, primært på grund af den lille øjenstørrelse. Påvisning af procedurerne vil michael Dietrich, en ph.d.-studerende fra vores laboratorium. Efter bedøvelse af gnaver, anvende en dråbe phenylephrin tropicamid på hvert øje for pupillary dilatation.
Tør overskydende øjendråbe af efter et minut. Og smør øjnene methylcellulose baseret oftalmologiske gel for at undgå udtørring øjet og skabe en uklar hornhinde. Brug derefter antævnt til at placere en brugerdefineret kontaktlinse på øjet.
Tryk på knappen Start i højre hjørne af kontrolpanelvisningen for at starte anskaffelsestilstanden. Dernæst for at billedet venstre øje, skal du placere holderen for at sikre, at venstre øje pære af gnaver vender kameraet. Indstil filterniveauet til R, og vælg BR og OCT til blue reflections fundus imaging og B-scan erhvervelse i softwaren.
Dernæst indstille fokus afstand til ca 38 dioptrere, ved hjælp af fokus knappen på bagsiden af kameraet. Og zoom ind på nethinden, indtil OCT-scanningen er synlig på skærmen. Derefter for at sikre en stråle sti gennem midten af eleven, med en ortogonal vinkel af nethinden i alle planer, placere den optiske disk i midten af det oplyste felt.
Og juster de vandrette og lodrette linje B-scanninger til et vandret niveau ved at dreje holderen. På softwareskærmen skal du vælge lydstyrkescanningstilstanden og indstille den til 25 B-scanninger i høj opløsningstilstand ved 50 automatisk sporing i realtid. Centrer midten af volumenscanningsgitteret på den optiske disk, og start anskaffelsen ved at trykke på den sorte følsomhedsknap, og anskiv derefter på kontrolpanelet.
Når anskaffelsen er fuldført, skal du indstille filterniveauet til A.Select Blå autofluorescens i kontrolpanelet. Og juster billedets lysstyrke med følsomhedsknappen. Tryk på følsomhedsknappen, og anskaf derefter billedlysstofstofrør eller automatiskflydende aflejringer.
Til analyse af volumenscanningerne skal du bruge den automatiske segmentering af OCT-enhedens software ved at højreklikke på scanningen. Og vælg Segmentering, og derefter Alle lag. Udfør manuel korrektion af lagene ved at dobbeltklikke på den ønskede scanning.
Vælg Tykkelsesprofil. Og klik på Rediger lagsegmenteringer. Vælg ét lag ad gangen.
Og om nødvendigt rette den grønne linje ved at flytte de røde prikker ved at trække og slippe til den korrekte position. Vælg derefter fanen Tykkelsesoversigt. Vælg 1, 2, 3 millimeter ETDRS-gitteret.
Centrer den inderste cirkel på den optiske disk. Endelig beregne tykkelsen af retinale lag fra tykkelsen værdier, som softwaren for de forskellige retinale sektorer af interesse. For at beregne de vigtigste tykkelse værdier fra volumen scanninger, skal du bruge hele 1, 2, 3, millimeter ETDRS gitter, som dækker en vinkel på ca 25 grader, bortset fra den indre en millimeter cirkel, som indeholder den optiske disk.
Begynd med at vælge en platform til at måle gnavere. Åbn vinduet Forudindstilling ved at dobbeltklikke på softwaren. Vælg Ny gruppe, og vælg gruppenavnet, antallet af emner, arten og stammerne.
Vælg en variabel stimulus, spatiotemporal frekvens, kontrast følsomhed, hastighed eller orientering i rullemenuen og tryk på Opret ny gruppe. Fokuser på platformen ved at manipulere kameraets fokusring oven på kammeret. Og kalibrer systemet ved at justere den røde cirkel omkring den sorte cirkel på platformen.
Dernæst placere gnaver på platformen og lad det tilpasse sig miljøet i cirka fem minutter. Start derefter målingen ved at vælge den venstre pil for ja eller firkantet for nej, hvis dyret sporer eller ikke sporer henholdsvis. Vælg manuelt stimulansens trinstørrelse ved at klikke på pil op og pil ned ud for den variable stimulus.
Endelig skal du vælge fanen Oversigt og klikke på filen, eksporter tabel eller graf for at eksportere det ønskede datasæt. Resultaterne viser, at degenerationen af de indre retinale lag reduceres. Og en klinisk EAE-score dæmpes under EAE-kurset, da stof 1 blev administreret.
DESUDEN afslører OKR en forbedret synsstyrke hos dyr behandlet med stof 1 sammenlignet med ubehandlede MOG EAE-mus målt ved test af rumlig frekvenstærskel over en periode på 120 dage. Når OLT-målinger udføres, er et kritisk trin laserstrålens ortogonale orientering i alle planer i forhold til nethinden for at sikre kvaliteten og reproducerbarheden af tykkelsesværdierne. For OKR teknik, skelne mellem sporing og normale adfærdsmæssige bevægelser af dyret, kræver en vis uddannelse af investigator.
Det er vigtigt at blive blændet for forsøgsgruppen. Efter disse undersøgelser af strukturelle og funktionelle skader, der opstår i forbindelse med eksperimentel autoimmun encephalomyelitis, kan proceduren også være nyttig i andre modeller, der involverer det visuelle system, herunder, men ikke begrænset til, modeller af retinopatier eller synsnerven skade. Disse teknikker baner vejen for in vivo-forskning inden for neurologi og oftalmologi og kan let overføres til kliniske forsøg.
