Deze methoden kunnen helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van neurologie en oogheelkunde, en helpen bij het evalueren van een grote verscheidenheid aan retinopathieën en netvliesmanifestaties in verschillende knaagdiermodellen. Het belangrijkste voordeel van deze technieken is dat niet-invasieve longitudinale onderzoeken kunnen worden uitgevoerd, waardoor de variabiliteit wordt verminderd en het aantal dieren dat nodig is voor de experimenten wordt verminderd. Deze methoden maken kwantitatief in vivo onderzoek van structuur en functie mogelijk die kunnen worden gebruikt om de pathologische omstandigheden te onderzoeken, of om het potentiële nut van nieuwe therapieën te evalueren.
Echter, vooral de toepassing van optische coherentie tomografie technologie in knaagdier modellen is nog steeds uitdagend, vooral vanwege de kleine ooggrootte. Het aantonen van de procedures zal worden Michael Dietrich, een promovendus uit ons laboratorium. Na het verdoven van het knaagdier, breng een druppel Fenylephrine Tropicamide op elk oog voor pupillary dilatatie.
Veeg elke overtollige oogdruppel nat na een minuut. En smeer de ogen methylcellulose op basis van oogheelkundige gel om te voorkomen dat uitdrogen van het oog en het creëren van een troebel hoornvlies. Gebruik vervolgens tangen om een aangepaste contactlens op het oog te plaatsen.
Druk op de knop Start in de rechterhoek van het weergave van het bedieningspaneel om de acquisitiemodus te starten. Vervolgens, om het linkeroog te beeld, plaats de houder om ervoor te zorgen dat de linker oogbol van het knaagdier naar de camera kijkt. Stel het filterniveau in op R en selecteer BR en OCT voor blauwe reflecties fundus imaging en B-scan acquisitie in de software.
Stel vervolgens de scherpstelafstand in op ongeveer 38 diopters, met behulp van de focusknop op de achterkant van de camera. En zoom in op het netvlies, totdat de OCT-scan zichtbaar is op het scherm. Om vervolgens een straalpad door het midden van de pupil te garanderen, met een orthogonale hoek van het netvlies in alle vlakken, plaatst u de optische schijf in het midden van het verlichte veld.
En pas de horizontale en verticale lijn B-scans aan op een horizontaal niveau door de houder te draaien. Selecteer op het softwarescherm de volumescanmodus en stel deze in op 25 B-scans in hoge resolutiemodus op 50 automatische real-time tracking. Centreer het midden van het volumescanraster op de optische schijf en begin met acquisitie door op de zwarte gevoeligheidsknop te drukken en vervolgens Op het bedieningspaneel te verwerven.
Nadat de overname is voltooid, stelt u het filterniveau in op A.Select Blue Autofluorescentie op het bedieningspaneel. En pas de helderheid van het beeld aan met de gevoeligheidsknop. Druk op de gevoeligheidsknop en verwerf vervolgens fluorescerende cellen of autofluorescerende afzettingen.
Voor analyse van de volumescans wordt de geautomatiseerde segmentatie van de software van het OCT-apparaat gebruikt door met de rechtermuisknop op de scan te klikken. En selecteer Segmentatie, vervolgens Alle lagen. Voer handmatige correctie van de lagen uit door dubbel te klikken op de gewenste scan.
Selecteer Dikteprofiel. En klik op Layer Segmentations bewerken. Selecteer één laag tegelijk.
En indien nodig corrigeer de groene lijn door het verplaatsen van de rode stippen door te slepen en te laten vallen naar de juiste positie. Selecteer vervolgens het tabblad Diktekaart. Kies het ETDRS-raster van 1, 2, 3 millimeter.
Centreer de binnenste cirkel op de optische schijf. Bereken ten slotte de dikte van netvlieslagen op de diktewaarden die door de software worden geleverd voor de verschillende netvliessectoren van belang. Gebruik het hele ETDRS-raster van 1, 2, 3 millimeter dat een hoek van ongeveer 25 graden beslaat, met uitzondering van de binnenste cirkel van één millimeter die de optische schijf bevat.
Begin met het selecteren van een platform om de knaagdieren te meten. Open het venster Instellingen door dubbel op de software te klikken. Selecteer Nieuwe groep en kies de groepsnaam, het aantal onderwerpen, de soorten en stammen.
Selecteer een variabele stimulus, spatiotemporale frequentie, contrastgevoeligheid, snelheid of oriëntatie in het vervolgkeuzemenu en druk op Nieuwe groep maken. Focus op het platform door het manipuleren van de focus ring van de camera op de top van de kamer. En kalibreer het systeem door het uitlijnen van de rode cirkel rond de zwarte cirkel op het platform.
Plaats vervolgens het knaagdier op het platform en laat het zich ongeveer vijf minuten aanpassen aan de omgeving. Start vervolgens de meting door de pijl-links voor ja of het vierkant voor nee te selecteren, als het dier respectievelijk volgt of niet bijhoudt. Selecteer handmatig de stapgrootte van de stimulus door op de pijl-omhoog en pijl-omlaag naast de variabele stimulus te klikken.
Selecteer ten slotte het tabblad Overzicht en klik op het bestand, de tabel of grafiek exporteren om de gewenste gegevensset te exporteren. De resultaten geven aan dat de degeneratie van de binnenste retinale lagen wordt verminderd. En een klinische EAE-score wordt verzwakt tijdens de EAE-cursus wanneer stof 1 werd toegediend.
Verder onthult OKR een verbeterde gezichtsscherpte van dieren die met stof 1 worden behandeld in vergelijking met onbehandelde MOG EAE-muizen, gemeten aan de gelang van de ruimtelijke frequentiedrempeltests over een periode van 120 dagen. Bij het uitvoeren van OCT-metingen, Een kritische stap is de orthogonale oriëntatie van de laserstraal in alle vlakken in relatie tot het netvlies om de kwaliteit en reproduceerbaarheid van de diktewaarden te garanderen. Voor de OKR-techniek vereist het onderscheid tussen tracking en normale gedragsbewegingen van het dier enige training van de onderzoeker.
Het is belangrijk om verblind te worden voor de experimentele groep. Na deze onderzoeken naar structurele en functionele schade die zich voordoen in het kader van experimentele auto-immuunenceomyelitis, kan de procedure ook nuttig zijn in andere modellen met betrekking tot het visuele systeem, met inbegrip van, maar niet beperkt tot de modellen van retinopathieën, of optische zenuwletsel. Deze technieken effenen de weg voor in vivo onderzoek op het gebied van neurologie en oogheelkunde en zijn gemakkelijk overdraagbaar naar klinische proeven.
