이러한 방법은 신경학 및 안과 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며 다양한 설치류 모델에서 다양한 망막병증 및 망막 증상을 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이러한 기술의 주요 장점은 비침습적 종방향 조사를 수행하여 가변성을 줄이고 실험에 필요한 동물의 수를 줄일 수 있다는 것입니다. 이러한 방법은 병리학 적 조건을 조사하거나 새로운 치료법의 잠재적 인 유용성을 평가하는 데 사용할 수있는 구조 및 기능의 생체 내 조사를 허용합니다.
그러나, 특히 설치류 모델에서 광학 일관성 단층 촬영 기술의 적용은 여전히 도전, 주로 때문에 작은 눈 크기. 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 박사 과정 학생 마이클 디트리히될 것입니다. 설치류를 마취한 후, 푸라피 팽창을 위해 각 눈에 페닐레프린 트로피카미드 한 방울을 발라주세요.
1분 후에 젖은 여분의 눈 방울을 닦아냅니다. 그리고 눈을 건조하고 탁상 각막을 만드는 것을 피하기 위해 눈 메틸 셀룰로오스 기반 안과 젤을 윤활. 그런 다음 집게를 사용하여 사용자 지정 콘택트 렌즈를 눈에 배치합니다.
제어판 디스플레이의 오른쪽 모서리에 있는 시작 버튼을 눌러 획득 모드를 시작합니다. 다음으로 왼쪽 눈을 이미지하기 위해 홀더를 배치하여 설치류의 왼쪽 눈 전구가 카메라를 향하도록 합니다. 필터 레벨을 R로 설정하고 소프트웨어에서 블루 반사 fundus 이미징 및 B 스캔 수집을 위해 BR 및 OCT를 선택합니다.
다음으로 카메라 뒷면의 포커스 노브를 사용하여 초점 거리를 약 38디옵터로 설정합니다. 그리고 10 월 스캔이 화면에 표시 될 때까지 망막을 확대합니다. 그런 다음 모든 평면에서 망막의 직교 각도로 동공의 중간을 통과하는 빔 경로를 보장하기 위해 조명 된 필드의 중간에 광학 디스크를 배치합니다.
그리고 홀더를 회전하여 수평 및 수직 라인 B 스캔을 수평 수준으로 조정합니다. 소프트웨어 화면에서 볼륨 스캔 모드를 선택하고 50 자동 실시간 추적에서 고해상도 모드에서 25 B 스캔으로 설정합니다. 광학 디스크의 볼륨 스캔 그리드의 중간을 중앙에 대고 검은 색 감도 노브를 눌러 인수를 시작한 다음 제어판에서 획득합니다.
수집이 완료되면 필터 레벨을 제어판에서 A.Select Blue 자동 불발성으로 설정합니다. 감도 노브로 이미지 밝기를 조정합니다. 감도 노브를 누르고 형광 세포 또는 자동 형광 침전지를 이미지로 획득하십시오.
볼륨 스캔을 분석하기 위해 스캔을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하여 OCT 장치의 소프트웨어의 자동화된 세분화를 사용합니다. 세분화를 선택한 다음 모든 레이어를 선택합니다. 원하는 스캔을 두 번 클릭하여 레이어를 수동으로 수정합니다.
두께 프로파일을 선택합니다. 레이어 세분화 편집을 클릭합니다. 한 번에 하나의 레이어를 선택합니다.
필요한 경우 빨간색 점을 드래그하고 올바른 위치로 떨어뜨려 녹색 선을 수정합니다. 다음 탭 두께 맵을 선택합니다. 1, 2, 3 밀리미터 ETDRS 그리드를 선택합니다.
광학 디스크의 내부 원을 중심으로 합니다. 마지막으로, 관심있는 다른 망막 섹터에 대해 소프트웨어가 제공하는 두께 값에서 망막 레이어의 두께를 계산합니다. 볼륨 스캔에서 주 두께 값을 계산하려면 광학 디스크가 포함된 내부 1mm 원을 제외한 약 25도 각도를 포함하는 전체 1, 2, 3, 밀리미터 ETDRS 그리드를 사용합니다.
설치류를 측정하는 플랫폼을 선택하여 시작합니다. 소프트웨어를 두 번 클릭하여 사전 설정 창을 엽니다. 새 그룹을 선택하고 그룹 이름, 피험자 수, 종 및 균주를 선택합니다.
드롭다운 메뉴에서 가변 자극, 현수성 주파수, 콘트라스트 감도, 속도 또는 방향을 선택하고 새 그룹 만들기를 누릅니다. 챔버 상단에 있는 카메라의 포커스 링을 조작하여 플랫폼에 집중하십시오. 그리고 플랫폼의 검은 원 주위에 빨간색 원을 정렬하여 시스템을 보정합니다.
다음으로 설치류를 플랫폼에 배치하고 약 5분 동안 환경에 적응할 수 있도록 합니다. 그런 다음 동물이 각각 추적하거나 추적하지 않는 경우 예 또는 정사각형에 대한 왼쪽 화살표를 선택하여 측정을 시작합니다. 가변 자극 옆의 위쪽 화살표를 클릭하여 자극의 단계 크기를 수동으로 선택합니다.
마지막으로 요약 탭을 선택하고 파일, 내보내기 테이블 또는 그래프를 클릭하여 원하는 데이터 집합을 내보냅니다. 결과는 내부 망막 층의 변성을 감소시키는 것을 나타낸다. 그리고 물질 1이 투여될 때 임상 EAE 점수는 EAE 과정 중에 감쇠된다.
또한, OKR은 120일 동안 공간 주파수 임계값 테스트에 의해 측정된 치료되지 않은 MOG EAE 마우스에 비해 물질 1로 치료된 동물의 시력향상을 보여준다. OCT 측정을 수행할 때, 중요한 단계는 두께 값의 품질과 재현성을 보장하기 위해 망막과 관련하여 모든 평면에서 레이저 빔의 직교 방향입니다. OKR 기술의 경우, 동물의 추적과 정상적인 행동 움직임을 구별, 조사자의 일부 훈련이 필요합니다.
실험 군을 위해 눈을 멀게 하는 것이 중요합니다. 실험적인 자가면역 뇌척수염의 맥락에서 발생하는 구조적 및 기능적 손상에 대한 이러한 조사에 따라, 이 절차는 망막증 의 모델 또는 시신경 상해를 포함하되 이에 국한되지 않는 시각 시스템을 포함하는 다른 모델에도 도움이 될 수 있다. 이러한 기술은 신경학 및 안과 분야에서 생체 내 연구를 위한 길을 열어주며 임상 시험으로 쉽게 이전할 수 있습니다.
