Эти методы могут помочь ответить на ключевые вопросы в области неврологии и офтальмологии, а также помочь оценить большое разнообразие ретинопатий и проявлений сетчатки в различных моделях грызунов. Основным преимуществом этих методов является то, что неинвазивные продольные исследования могут быть выполнены, уменьшая изменчивость и сокращая количество животных, необходимых для экспериментов. Эти методы позволяют количественно in vivo исследование структуры и функции, которые могут быть использованы для исследования патологических состояний, или для оценки потенциальной полезности новых терапевтических средств.
Однако, особенно применение технологии оптической скооренности томографии в моделях грызунов по-прежнему является сложной задачей, главным образом из-за небольшого размера глаз. Демонстрацией процедур будет Майкл Дитрих, аспирант нашей лаборатории. После анестезии грызунов, применить одну каплю фенилэфрин Tropicamide на каждом глазу для зрачка расширение.
Протрите любой избыток капли глаза мокрой через одну минуту. И смазать глаза метилцеллюлозы основе офтальмологического геля, чтобы избежать высыхания глаза и создания мутной роговицы. Затем используйте типсы, чтобы поместить пользовательские контактные линзы на глаз.
Нажмите кнопку «Пуск» в правом углу дисплея панели управления, чтобы начать режим приобретения. Далее, чтобы изображение левого глаза, положение держателя, чтобы убедиться, что левая лампочка глаза грызуна сталкивается с камерой. Установите уровень фильтра до R, и выберите BR и OCT для синих отражений fundus изображений и B-сканирования приобретения в программном обеспечении.
Затем установите расстояние фокусировки примерно до 38 диоптрий, используя ручку фокусировки на задней части камеры. И увеличьте масштаб сетчатки до тех пор, пока на экране не будет видно сканирование OCT. Затем, чтобы обеспечить путь пучка через середину зрачка, с ортогональным углом сетчатки во всех плоскостях, положение оптического диска в середине освещенного поля.
И отрегулируйте горизонтальную и вертикальную линию B-сканы до горизонтального уровня, вращая держатель. На экране программного обеспечения выберите режим сканирования громкости и установите его на 25 B-сканирований в режиме высокого разрешения при 50 автоматическом отслеживании в режиме реального времени. Центр середине сетки сканирования громкости на оптическом диске и начать приобретение, нажав на черную ручку чувствительности, а затем приобрести на панели управления.
После завершения приобретения установите уровень фильтра на A.Select Blue Autofluorescence на панели управления. И отрегулируйте яркость изображения с помощью ручки чувствительности. Нажмите ручку чувствительности, а затем приобрести для изображения флуоресцентных клеток или аутофторесцентных отложений.
Для анализа объема сканирования используйте автоматизированную сегментацию программного обеспечения устройства OCT, нажав правой кнопкой мыши на сканировании. И выберите сегментации, то все слои. Выполните ручную коррекцию слоев, дважды нажав на нужное сканирование.
Выберите профиль thickness. И нажмите на сегментации слоя редактирования. Выберите один слой за один раз.
И при необходимости исправить зеленую линию, перемещая красные точки, перетаскивая и опуская в правильное положение. Далее выберите карту thickness вкладки. Выберите сетку 1, 2, 3 миллиметра ETDRS.
Центр внутреннего круга на оптическом диске. Наконец, вычислите толщину слоев сетчатки из значений толщины, предоставляемых программным обеспечением для различных секторов сетчатки, представляющих интерес. Для расчета основных значений толщины от сканирования громкости используйте всю сетку ETDRS диаметром 1, 2, 3 миллиметра, которая охватывает угол около 25 градусов, за исключением внутреннего одного миллиметрового круга, который содержит оптический диск.
Начните с выбора платформы для измерения грызунов. Откройте окно Presettings, дважды нажав на программное обеспечение. Выберите Новую группу и выберите название группы, количество испытуемых, видов и штаммов.
Выберите переменный стимул, spatiotemporal частоты, контрастной чувствительности, скорости или ориентации в меню высадки и нажмите Создать новую группу. Сосредоточьтесь на платформе, манипулируя фокусным кольцом камеры в верхней части камеры. И откалибровать систему путем выравнивания красного круга вокруг черного круга на платформе.
Затем поместите грызуна на платформу и дайте ему адаптироваться к окружающей среде в течение примерно пяти минут. Затем начните измерение, выбрав левую стрелку для да или квадрата нет, если животное отслеживает или не отслеживает соответственно. Вручную выберите размер шага стимула, нажав на Стрелки вверх и вниз рядом с переменным стимулом.
Наконец, выберите вкладку Резюме и нажмите на таблицу файлов, экспорта или график для экспорта желаемого набора данных. Результаты показывают, что дегенерация внутренних слоев сетчатки уменьшается. И клинический балл EAE затухается во время курса EAE, когда вещество 1 вводилось.
Кроме того, OKR показывает улучшение остроты зрения животных, обработанных веществом 1 по сравнению с необработанными мышами MOG EAE, измеренными пространственным пороговым тестированием частоты в течение 120 дней. При выполнении измерений OCT важным шагом является ортогональная ориентация лазерного луча во всех плоскостях по отношению к сетчатке для обеспечения качества и воспроизводимости значений толщины. Для okR техники, различая отслеживания и нормальных поведенческих движений животного, требует некоторой подготовки следователя.
Важно быть ослепленным для экспериментальной группы. После этих исследований структурных и функциональных повреждений, происходящих в контексте экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита, процедура также может быть полезна в других моделях, связанных с зрительной системой, в том числе, но не ограничиваясь моделями ретинопатии, или травмы зрительного нерва. Эти методы прокладывают путь для исследований in vivo в области неврологии и офтальмологии и легко передаются в клинические испытания.
