이 방법은 효모 세포의 구조를 몇 분 동안 3차원으로 추적하여 세포 내 세포기관 및 구획의 역학을 연구할 수 있도록 합니다. 4D 이미징은 특히 일시적인 구조 또는 마커에 대해 세포 내 역학에 대한 신뢰할 수 있는 결론을 도출할 수 있도록 합니다. 절차를 시연하는 것은 나탈리 존슨, 내 실험실에서 포스트 독이 될 것입니다.
우선 23°C에서 좋은 식기와 15 밀리리터 당황 플라스크에서 비형광 합성 정의, 또는 NSD, 매체의 5
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이 프로토콜은 다중 색상 4D (타임 랩스 3D) 공초점 현미경을 사용하여 신진 효모에서 형광 표지 된 세포 내 구획의 분석을 설명합니다. 이미징 매개 변수는 광손상을 제한하면서 적절한 신호를 캡처하도록 선택됩니다. 사용자 정의 ImageJ 플러그인은 레이블이 지정된 구조를 추적하고 정량적으로 분석할 수 있도록 합니다.