Name: establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis
Uploaded: 2019-09-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Institute of Health Grant R24OD018546 (til L.Y.P. og S.G.). Forfatterne vil gerne takke weizhe Li, ph.d., for hjælp i kirurgiske procedurer, Amanda Branch Woods, B.S., Yan Cheng for immunohistologi, unmc flow flowcytometri forsknings facilitets medlemmer direktør Phillip hexley, ph.D., Victoria B. Smith, B.S., og Samantha Wall, b.s., unmc avanceret mikroskopi Core Facility medlemmer Janice A. Taylor, b.s., og James R. talaska, b.s., for teknisk support. Forfatterne anerkender DRs. Mamoru Ito og Hiroshi Suemizu fra CIEA for at give TK-NOG mus og Dr. Joachim Baumgart for at give treosulfan. Forfatterne takker Dr. Adrian Koesters, UNMC, for hendes redaktionelle bidrag til manuskriptet.

Denne protokol er blevet godkendt af Udvalget for institutionel dyrepasning og-anvendelse (IACUC) ved University of Nebraska Medical Center.
Bemærk: Få godkendelse fra den lokale IACUC, før du udfører forsøg på dyr.
1. behandling af navlestrengen blod og isolering af humane Hspc'er
<ol><li>Udfør alle trin i protokollen under sterile forhold i laminar flow kabinetter.</li>
	<li>Tag navlestrengsblod (CB), som opsamles i hepariniserede rør, o...

<ol>
	<li>Smith, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+specific+causes+of+death+amongst+HIV-positive+individuals+in+the+D:A:D+Study.">Factors associated with specific causes of death amongst HIV-positive individuals in the D:A:D Study.</a> AIDS. 24 (10), 1537-1548 (2010).</li><li>Puoti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+for+liver+disease+in+patients+with+HIV+infection:+a+cohort+study.">Mortality for liver disease in patients with HIV infection: a cohort study.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 24 (3), 211-217 (2000).</li><li>Rodriguez-Mendez, M. L., Gonzalez-Quintela, A., Aguilera, A., Barrio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence,+patterns,+and+course+of+past+hepatitis+B+virus+infection+in+intravenous+drug+users+with+HIV-1+infection.">Prevalence, patterns, and course of past hepatitis B virus infection in intravenous drug users with HIV-1 infection.</a> The American Journal of Gastroenterology. 95 (5), 1316-1322 (2000).</li><li>Scharschmidt, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+in+patients+with+HIV+infection:+relationship+to+AIDS+and+patient+survival.">Hepatitis B in patients with HIV infection: relationship to AIDS and patient survival.</a> Annals of Internal Medicine. 117 (10), 837-838 (1992).</li><li>Lacombe, K., Rockstroh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+and+viral+hepatitis+coinfections:+advances+and+challenges.">HIV and viral hepatitis coinfections: advances and challenges.</a> Gut. 61, 47-58 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Jouvet, N., Greiner, D. L., Shultz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+the+study+of+infectious+diseases.">Humanized mice for the study of infectious diseases.</a> Current Opinion in Immunology. 25 (4), 428-435 (2013).</li><li>Billerbeck, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+efficiently+engrafted+with+fetal+hepatoblasts+and+syngeneic+immune+cells+develop+human+monocytes+and+NK+cells.">Humanized mice efficiently engrafted with fetal hepatoblasts and syngeneic immune cells develop human monocytes and NK cells.</a> The Journal of Hepatology. 65 (2), 334-343 (2016).</li><li>Dagur, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocyte+depletion+in+the+presence+of+HIV-1+infection+in+dual+reconstituted+humanized+mice.">Human hepatocyte depletion in the presence of HIV-1 infection in dual reconstituted humanized mice.</a> Biology Open. 7 (2), (2018).</li><li>Gaska, J. M., Ploss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+viral+pathogenesis+in+humanized+mice.">Study of viral pathogenesis in humanized mice.</a> Current Opinion in Virology. 11, 14-20 (2015).</li><li>Gorantla, S., Poluektova, L., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+HIV-associated+neurocognitive+disorders.">Rodent models for HIV-associated neurocognitive disorders.</a> Trends in Neurosciences. 35 (3), 197-208 (2012).</li><li>Xu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+TK-NOG+mice:+a+predictive+model+for+cholestatic+human+liver+toxicity.">Chimeric TK-NOG mice: a predictive model for cholestatic human liver toxicity.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 352 (2), 274-280 (2015).</li><li>Washburn, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+humanized+mouse+model+to+study+hepatitis+C+virus+infection,+immune+response,+and+liver+disease.">A humanized mouse model to study hepatitis C virus infection, immune response, and liver disease.</a> Gastroenterology. 140 (4), 1334-1344 (2011).</li><li>Gutti, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+and+hematolymphoid+dual+reconstitution+in+treosulfan-conditioned+uPA-NOG+mice.">Human hepatocytes and hematolymphoid dual reconstitution in treosulfan-conditioned uPA-NOG mice.</a> The American Journal of Pathology. 184 (1), 101-109 (2014).</li><li>Strick-Marchand, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+stable+engraftment+of+a+human+immune+system+and+human+hepatocytes.">A novel mouse model for stable engraftment of a human immune system and human hepatocytes.</a> PLoS One. 10 (3), 0119820 (2015).</li><li>Keng, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+liver+pathogenesis,+human+immune+responses+and+drug+testing+in+a+humanised+mouse+model+of+HCV+infection.">Characterisation of liver pathogenesis, human immune responses and drug testing in a humanised mouse model of HCV infection.</a> Gut. 65 (10), 1744-1753 (2016).</li><li>Li, F., Nio, K., Yasui, F., Murphy, C. M., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+HBV+Infection+and+Therapy+in+Immune-Deficient+NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null+(NRG)+Fumarylacetoacetate+Hydrolase+(Fah)+Knockout+Mice+Transplanted+with+Human+Hepatocytes.">Studying HBV Infection and Therapy in Immune-Deficient NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null (NRG) Fumarylacetoacetate Hydrolase (Fah) Knockout Mice Transplanted with Human Hepatocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 1540, 267-276 (2017).</li><li>Poluektova, L. Y., Garcia, J. V., Koyanagi, Y., Manz, M. G., Tager, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Humanized Mice for HIV Research. , (2014).</li><li>Cheng, L., Ma, J., Li, G., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+Engrafted+With+Human+HSC+Only+or+HSC+and+Thymus+Support+Comparable+HIV-1+Replication,+Immunopathology,+and+Responses+to+ART+and+Immune+Therapy.">Humanized Mice Engrafted With Human HSC Only or HSC and Thymus Support Comparable HIV-1 Replication, Immunopathology, and Responses to ART and Immune Therapy.</a> Frontiers in Immunology. 9, 817 (2018).</li><li>Zhang, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+immunopathogenesis+in+humanized+mouse+models.">HIV-1 immunopathogenesis in humanized mouse models.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 9 (3), 237-244 (2012).</li><li>Nunoya, J., Washburn, M. L., Kovalev, G. I., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+prevent+liver+fibrosis+during+HIV+type+1+infection+in+a+humanized+mouse+model.">Regulatory T cells prevent liver fibrosis during HIV type 1 infection in a humanized mouse model.</a> The Journal of Infectious Diseases. 209 (7), 1039-1044 (2014).</li><li>Hasegawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reconstituted+'humanized+liver'+in+TK-NOG+mice+is+mature+and+functional.">The reconstituted 'humanized liver' in TK-NOG mice is mature and functional.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 405 (3), 405-410 (2011).</li><li>Higuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatic+cell+line+HepaRG+as+a+possible+cell+source+for+the+generation+of+humanized+liver+TK-NOG+mice.">The human hepatic cell line HepaRG as a possible cell source for the generation of humanized liver TK-NOG mice.</a> Xenobiotica. 44 (2), 146-153 (2014).</li><li>Kosaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+TK-NOG+based+humanized+mouse+model+for+the+study+of+HBV+and+HCV+infections.">A novel TK-NOG based humanized mouse model for the study of HBV and HCV infections.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 441 (1), 230-235 (2013).</li><li>Crane, M., Iser, D., Lewin, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+infection+and+the+liver.">Human immunodeficiency virus infection and the liver.</a> World Journal of Hepatology. 4 (3), 91-98 (2012).</li><li>Bility, M. T., Li, F., Cheng, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+immune-pathogenesis+and+therapy+of+human+liver+tropic+virus+infection+in+humanized+mouse+models.">Liver immune-pathogenesis and therapy of human liver tropic virus infection in humanized mouse models.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28, 120-124 (2013).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+HIV+infection+of+hepatocytes.">Low-level HIV infection of hepatocytes.</a> Virology Journal. 9, 1-7 (2012).</li><li>Dash, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-acting+nanoformulated+antiretroviral+therapy+elicits+potent+antiretroviral+and+neuroprotective+responses+in+HIV-1-infected+humanized+mice.">Long-acting nanoformulated antiretroviral therapy elicits potent antiretroviral and neuroprotective responses in HIV-1-infected humanized mice.</a> AIDS. 26 (17), 2135-2144 (2012).</li><li>Sun, S., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+chimeric+mouse+models+of+hepatitis+B+virus+infection.">Humanized chimeric mouse models of hepatitis B virus infection.</a> International Journal of Infectious Diseases. 59, 131-136 (2017).</li><li>Shafritz, D. A., Oertel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+and+experimental+conditions+that+lead+to+effective+repopulation+of+the+liver+by+transplanted+cells.">Model systems and experimental conditions that lead to effective repopulation of the liver by transplanted cells.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 43 (2), 198-213 (2011).</li><li>Almeida-Porada, G., Porada, C. D., Chamberlain, J., Torabi, A., Zanjani, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+hepatocytes+by+human+hematopoietic+stem+cells+in+sheep.">Formation of human hepatocytes by human hematopoietic stem cells in sheep.</a> Blood. 104 (8), 2582-2590 (2004).</li><li>Streetz, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+parenchymal+replacement+in+mice+by+transplanted+allogeneic+hepatocytes+is+facilitated+by+bone+marrow+transplantation+and+mediated+by+CD4+cells.">Hepatic parenchymal replacement in mice by transplanted allogeneic hepatocytes is facilitated by bone marrow transplantation and mediated by CD4 cells.</a> Hepatology. 47 (2), 706-718 (2008).</li></ol>

Leveren er kompromitteret og beskadiget hos HIV-inficerede patienter24. Eksperimentelle små dyremodeller til at studere menneskelige leversygdomme i nærværelse af HIV-1 er yderst begrænset, på trods af tilgængeligheden af et par cotransplanterede dyremodeller med CD34+ hspc'er og hepatocytter7,12, 25. I in vitro forsøg, hepatocytter er vist at have lav-niveau HIV-1-infektion<sup class="...

Siden fremkomsten af antiretroviral behandling, der har været et betydeligt fald i dødsfald relateret til HIV-1-monoinfektion. Men, leversygdom er opstået som en almindelig årsag til sygelighed hos HIV-inficerede patienter1,2. Coinfektioner af hepatitis virus med HIV-1-infektion er mere almindeligt, tegner sig for 10%-30% af HIV-inficerede personer i USA3,4,5.
Den Host-specificitet af HIV-1 og hepatitis vira begrænser nytten af små dyremodeller til at studere menneskelige-specifikke smitsomme sygdomme eller til at undersøge flere aspekter af HIV-1-associeret lever patogenese. Immundefekt mus, der tillader engraftment af humane celler og/eller væv (betegnet humaniseret musemodeller) er acceptable dyremodeller for prækliniske studier6,7,8. Siden introduktionen af humaniserede mus i begyndelsen af 2000 ' erne, flere prækliniske studier af kolestatisk Human levertoksicitet, humane-specifikke patogener, herunder HIV-1 og HIV-associerede neurokognitive lidelser, Epstein Barr virus, hepatitis, og andre smitsomme sygdomme, er blevet undersøgt i disse mus6,9,10,11. Flere musemodeller til CD34+ hspc'er og/eller menneskelig hepatocyt transplantation er længe blevet udviklet og er blevet forbedret med tiden for at studere sygdoms patogenesen af hepatitis B-virus (HBV)-associeret leversygdom12, 13 , 14. flere modeller for HSPC og human hepatocyt (HEP) transplantation er baseret på stammer, kendt som nog (NOD. CG-prkdcscid Il2rgtm1Sug/jictac)8,13, NSG (NOD. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/Szj)15, Balb/C-Rag2-/- γc-/- (Rag2TM 1.1 FLV Il2rgTM 1.1 FLV/j)12, og Fah-/- NOD rag1-/- il2rγnull mus16. Men hver model har sine egne fordele og begrænsninger; for eksempel, AFC8 Dual humaniseret mus til HEPs og humane stamceller (HSCs) på en Balb/C-Rag2-/- γc-/- baggrund muliggør vellykket engraftment af immunceller og hscs, men der er en mangel på en antigen-specifik T-og B-celle respons i denne model12. De største betænkeligheder ved rekonstitution af dobbelte humaniserede mus omfatter suboptimal engraftment, mangel på egnede modeller til at understøtte forskellige væv, uoverensstemmende forhold, immun afvisning eller graft-versus-Host-sygdom (gvhd) og teknisk vanskeligheder, såsom risikable manipulationer med nyfødte og høj dødelighed på grund af metaboliske abnormaliteter13.
Selv om humaniseret mus har været anvendt til hiv-forskning i mange år17,18,19, brugen af humaniserede mus til at studere leverskader forårsaget af HIV-1 har været begrænset20. Vi har tidligere rapporteret etableringen af en dual humaniseret TK-NOG musemodel og dens anvendelse i HIV-associeret leversygdom8. Denne model viser den robuste engraftment af leveren og immunceller og rekapitulerer HIV-smitte patogenese. Denne drøftelse præsenterer en detaljeret protokol, herunder de mest kritiske trin i transplantationen af humane hepatocytter. En beskrivelse af de Hspc'er, der kræves for en vellykket engraftment af HEPs og etableringen af et funktionelt immunsystem i TK-NOG mus er også præsenteret. Brugen af disse mus til at studere HIV-associeret lever immunopogenese er detaljeret. TK-nog hanmus, der bærer en lever specifik herpes simplex virus type 1 thymidinkinase (HSV-tk) transgen anvendes. Mus leverceller, der udtrykker denne transgene kan let være ablateret efter en kort udsættelse for en ikke-toksisk dosis af gcv. Transplanterede humane leverceller holdes stabilt i muse leveren uden udefrakommende lægemidler21. Musene er også konditioneret med nonmyeloablative doser af treosulfan til at skabe en niche i musens knoglemarv for humane celler8. Immunodedygtige TK-NOG-mus injiceres intrasplenisk med HEPs og Multipotente Hspc'er. Musene overvåges derefter regelmæssigt for blod og lever rekonstitution ved blod immunophenotyping og målinger af serum humant-albuminniveauer, hhv. Mus med en vellykket rekonstitution på mere end 15% for både humane immunceller og HEPs er intraperitonealt injiceret med HIV-1. Effekten af HIV på leveren kan vurderes så tidligt som 4-5 ugers post infektion. Det er vigtigt at bemærke, at fordi HIV-1 anvendes, skal alle nødvendige forholdsregler tages, mens håndtering af virus og indsprøjte det i mus.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">27G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305109</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="72">
			<td height="72" style="height:72px;width:125px;">30G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">5 mL polystyrene&#160; round-bottom tube 12 x 75 mm style</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:127px;">352054</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">BD 1 mL Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS array bioanalyzer&#160;</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">For purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">BD FACS array software</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Software to analysis acquired CD34+ cell on FACS array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS lysing solution</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">349202</td>
			<td style="width:167px;">To lyse red blood cells</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD LSR II</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument for acquisiton of flow cytometry samples</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD&#160;Vacutainer Plastic Blood Collection Tube</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">BD 367874</td>
			<td style="width:167px;">To collect Cord blood</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Bovine Serum Albumin&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">A9576</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Controlled substance and pain-killer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD14-PE</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555398</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD19-BV605</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562653</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:125px;">CD34 MicroBead Kit, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-046-702</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; CD34+ HSPC</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">CD34-PE, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-081-002</td>
			<td style="width:167px;">Antibody used for purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD3-AF700</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">557943</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD45-PerCPCy5.5</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">564105</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD4-APC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555349</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD8-BV421</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562428</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cell counting slides</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">ChargeSwitch gDNA Mini Tissue Kit</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">CS11204</td>
			<td style="width:167px;">for extraction of genomic DNA from ear piece</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cobas Amplicor system v1.5&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Roche Molecular Diagnostics</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">bioanalyzer to measure viral load</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cotton-tipped applicators&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;McKesson</td>
			<td style="width:127px;">24-106-2S</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cytokeratin-18 (CK18)</td>
			<td style="width:135px;">DAKO</td>
			<td style="width:127px;">M7010</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">D2650-5X5ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:125px;">Extension set Microbore Slide Clamp(s) Fixed Male Luer Lock. L: 60 in L: 152 cm PV: 0.55 mL Fluid Path Sterile</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">30914</td>
			<td style="width:167px;">Attached to dispensing pippet and to load with HSPC and HEP suspesion</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FACS Diva version 6</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometer software required for&#160; acqusition of sample</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">10438026</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FLOWJO analysis software 
			v10.2</td>
			<td style="width:135px;">FLOWJO, LLC</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometry analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Ganciclovir</td>
			<td style="width:135px;">APP Pharmaceuticals, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">315110</td>
			<td style="width:167px;">Prescripition drug</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Greiner MiniCollect EDTA Tubes</td>
			<td style="width:135px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:127px;">450475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Hepatocytes thawing medium&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">MCHT50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Horizon Open Ligating Clip Appliers</td>
			<td style="width:135px;">Teleflex</td>
			<td style="width:127px;">537061</td>
			<td style="width:167px;">To hold the ligating clips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Hospira Sterile Water for Injection</td>
			<td style="width:135px;">ACE surgical supply co. Inc.</td>
			<td style="width:127px;">001-1187</td>
			<td style="width:167px;">For dilution of Buprenorphine (pain-killer)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human Albumin ELISA Quantitation Set</td>
			<td style="width:135px;">Bethyl laboratories</td>
			<td style="width:127px;">E80-129</td>
			<td style="width:167px;">For assesing human albumin levels in mouse serum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human hepatocyte</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">HUCP1</td>
			<td style="width:167px;">&#160;Cryopreserved human hepatocytes, induction qualified&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Iris Scissors, Straight</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">13295</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Lancet</td>
			<td style="width:135px;">MEDIpoint</td>
			<td style="width:127px;">Goldenrod 5 mm</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">LS columns&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-401</td>
			<td style="width:167px;">Used to entrap CD34+ microbeads (positive selection)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Lymphocyte Separation Medium (LSM)</td>
			<td style="width:135px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:127px;">50494</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; lymphocytes from peripheral blood</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-303</td>
			<td style="width:167px;">holds Qudro MACS seperator and LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5605</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Micro Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5157&#160;</td>
			<td style="width:167px;">to hold and pull out spleen from peritoneal cavity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">mouse CD45-FITC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">553080</td>
			<td style="width:167px;">mouse-specific</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">PBS (Phosphate Buffered Saline)</td>
			<td style="width:135px;">Hyclone</td>
			<td style="width:127px;">SH30256.02</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Qudro MACS separator&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-090-976</td>
			<td style="width:167px;">holds four LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">11875093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">StepOne Plus Real Time PCR&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument used&#160; to&#160; genotype</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Stepper Series Repetitive Dispensing Pipette 1ml</td>
			<td style="width:135px;">DYMAX CORP</td>
			<td style="width:127px;">T15469</td>
			<td style="width:167px;">Used to&#160; dispense&#160; HSPC and HEP supension in controlled manner</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Suturevet PGA synthetic absorbale suture</td>
			<td style="width:135px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:127px;">41178</td>
			<td style="width:167px;">Suturing of skin and peritoneum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">TaqMan Gene Expression Master Mix</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">4369016</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">TC20 automated cell counter</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450102</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:125px;">TK-NOG mice&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by the Central Institute for Experimental Animals (CIEA, Japan; Drs. Mamoru Ito and Hiroshi Suemizu)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Treosulfan</td>
			<td style="width:135px;">Medac GmbH</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by &#160;Dr. Joachim Baumgart (medac GmbH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450022</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Vannas-type Micro Scissors, Straight, 80mm L</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">1346</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Weck hemoclip traditional titanium ligating clips</td>
			<td style="width:135px;">Esutures</td>
			<td style="width:127px;">523700</td>
			<td style="width:167px;">To ligate the spleen post-injection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis

På trods af den øgede forventede levetid for patienter inficeret med humant immundefektvirus-1 (HIV-1), leversygdom er opstået som en almindelig årsag til deres sygelighed. Den lever immunopatologi forårsaget af HIV-1 forbliver undvigende. Små xenograft dyremodeller med humane hepatocytter og humant immunsystem kan rekapitulere den menneskelige biologi af sygdommens patogenese. Heri er en protokol beskrevet for at etablere en dual humaniseret musemodel gennem humane hepatocytter og CD34+ hæmatopoietiske Stem/progenitorceller (HSPCs) transplantation, at studere leveren immunopatologi som observeret hos HIV-inficerede patienter. For at opnå dobbelt rekonstitution, mand TK-NOG (NOD. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Sug TG (Alb-tk) 7-2/shijic) mus intraperitonealt injiceres med ganciclovir (gcv) doser for at eliminere mus transgene leverceller, og med treosulfan til nonmyeloablativ konditionering, som begge fremme menneskelig hepatocyt (HEP) engraftment og menneskelige immunsystem (hans) udvikling. Humant albumin (Alb) niveauer er evalueret for leveren engraftment, og tilstedeværelsen af humane immunceller i blodet detekteret af flow flowcytometri bekræfter etableringen af det menneskelige immunsystem. Den model, der er udviklet ved hjælp af protokollen beskrevet her ligner flere komponenter af leverskader fra HIV-1-infektion. Dets oprettelse kunne vise sig at være afgørende for undersøgelser af co-infektion med hepatitis virus og for evaluering af antivirale og antiretrovirale lægemidler.

Etableringen af en dobbelt humaniseret musemodel med humane lever-og immunceller kan let overvåges ved hvert trin med meget enkel ELISA og flow cytometri hhv. Flow cytometri udføres regelmæssigt for at evaluere udviklingen af et funktionelt immunsystem og for at se effekten af HIV-infektion på immunceller. I dobbelte humaniserede mus kan udviklingen af funktionelle immunceller variere fra 15% til 90% af lymfocyt porten. Repræsentative undergrupper af immunceller er vist i prik plots ...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Denne protokol giver en pålidelig metode til at etablere humaniserede mus med både menneskelige immunsystem og leverceller. Dual rekonstitueret immundefekt mus opnået via intrasplenisk injektion af humane hepatocytter og CD34+ hæmatopoietiske stamceller er modtagelige for human immuninsufficiens virus-1 infektion og rekapitulere leverskader som observeret i HIV-inficerede patienter.

Etablering af Dual humaniseret TK-NOG muse model for HIV-associeret lever patogenesen

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Det overordnede formål med protokollen er at generere en humaniseret musemodel med funktionelt menneskeligt immunsystem og lever ved hjælp af humane hæmatopoietiske stamceller og hepato site. Denne metode kan hjælpe med at besvare vigtige spørgsmål i genetiske lever humaniserede mus. Denne metode giver et effektivt værktøj til at studere immunpatologi forårsaget af HIV som observeret hos mennesker.Demonstration af processen vil være ved Yimin Sun, en vejleder fra patologi og mikrobiologi afdeling, sammen med Weimin Wang og Edwrd Makarov, forskning teknolog. Til at begynde, overføre navlestrengsblod indsamlet i hepariniserede rør til en steril laminar flow kabinet. Tilsæt PBS, indtil lydstyrken øges til 35 milliliter.Lag prøven oven på lymfocyt adskillelse medium og centrifuge det 400 gange G og ved fire grader celsius i 35 minutter uden pauser. Dernæst forsigtigt fjerne den øverste plasma lag og bruge en overførsel pipette til at overføre den hvide buffy pels interface til et nyt rør. Re-suspendere buffy pels i 30 til 40 milliliter iskold buffer.Brug en pipette til at kombinere 20 mikroliter af cellesuspensionen med 20 mikroliter på 0,4 % trypanblå. Pipette 10 mikroliter af denne blanding i den ydre åbning af en af de to kamre i en tælle dias, og indsætte dias i en automatiseret celle tæller til at tælle cellerne. Centrifuge cellerne ved 300 gange G og ved fire grader celsius i 10 minutter.Inspirer forsigtigt supernatanten og tilsæt 300 mikroliter af iskold buffer. Der tilsættes 100 mikroliter human FC-receptorblokerende reagens og 100 mikroliter monoklonale mus anti-humane CD34 antistofkonjugered microBeads til op til 100 millioner celler. Inkuberes i 30 minutter ved fire grader celsius.Tilsæt 10 milliliter iskold buffer til at vaske cellerne og centrifuge det 300 gange G og fire grader celsius i 10 minutter. Fjern forsigtigt supernatanten og re-suspendere pellet i 500 mikroliter af iskold buffer. Derefter skal du placere en positiv markering LS kolonne i den magnetiske aktiverede celle sortering felt og passere det igennem med tre milliliter iskold buffer.Prøven indlæst i LS-kolonnen, der kan fange mikroperler, der er bundet til humane CD34-positive celler i prøver, og lad den flyde under tyngdekraftens indflydelse ind i opsamlingsrøret. Kolonnen vaskes tre gange med iskold buffer, og elueringsrøret opsamls i samme opsamlingsrør. Derefter kaste kolonnen med fem milliliter iskold buffer til at hentyde til CD34 positive celler i en ny samling rør.Gentag proceduren for at opnå en renhed på over 90%Næste, skal du bruge trypan blå farvestof og et hæmocytometer til at tælle de undvigede CD34 positive celler. Efter optælling, centrifuge cellerne ved 300 gange G i fem minutter. Kassér supernatanten og re-suspendere cellerne i 125 mikroliter af PBS for en injektion, der skal anvendes straks i transplantation.For at kontrollere renheden af CD34 positive elueringsstof, tage 50 mikroliter af suspensionen og inkubere det med 10 mikroliter af PE konjugerede anti-menneskelige CD34 antistof ved fire grader celsius i 30 minutter. Derefter vaskes og gensuses cellerne i PBS, og der udføres flowcytometri. Efter anskaffelse skal du analysere dataene som beskrevet i tekstprotokollen.Først skal du hente og tø kryoreserveret hepatocytter som beskrevet i tekstprotokollen. Fjern derefter biohætten og hæld de optøede hepatocytter i et 50 milliliter konisk rør, der indeholder opvarmet optøningsmedium. Rock røret i hånden i et par sekunder for at suspendere cellerne.Pellet cellerne ved 100 gange G og ved stuetemperatur i otte minutter. De pelleterede celler i PBS vaskes med 0,1 %BSA, og de opvarmes med enten friske eller optøede HSPC'er i PBS til et endeligt volumen på 80 mikroliter pr. mus. Først skal du fastgøre den ene ende af et sterilt forlængerrør til en 30 gauge nål og den anden ende til en en milliliter sprøjte.Fyld sprøjten med suspensionen af poolede HEPs og HSPC'er. Sæt sprøjten i hakket på en gentagen dispenserpipette, og juster dispenseren for at dispensere 10 mikroliter i hver presse. Barber hver mus som beskrevet i tekstprotokollen og krat venstre side af kroppen af hver mus med 10%povidone jod fulgt 70% isopropyl alkohol.Brug Vannas type saks, foretage et lille snit i huden, muskel og bughinde til venstre for bugvæggen for at komme ind i bughulen ca 5 millimeter under den nederste kant af brystkassen. Find milten og brug vicessrene til at trække den lidt til arbejdsområdet for nem adgang og sæt 30 gauge-nålen ind i miltens nederste pol. Derefter låses stemplet af dispenserpipetten op og afspærs 10 mikroliter af volumen ad gangen med en grænse på 60 til 80 mikroliter pr. milt.Træk nålen langsomt tilbage, og klip milten med ligerende clips ved hjælp af en ligation. Brug derefter applikatorer med bomuldsspidseret, der er beædet med steril PBS, til at skubbe milten tilbage i kropshulen. Brug en afbrudt sutur mønster til at lukke muskel lag af bugvæggen.Udfør hudlukning med et afbrudt suturmønster ved hjælp af ikke-absorberbare suturer. Overfør alle nødvendige materialer til en udpeget Biosafety Level Two Plus facilitet. Bær personligt beskyttelsesudstyr, herunder engangsdæksel alle kjole, skobetræk, en ansigtsmaske og dobbelt handsker, herunder cut resistente handsker, på alle tidspunkter, mens du arbejder med virus.Vælg mus med en rekonstitution på mere end 15% af humane CD45 positive celler og med en tilstedeværelse af humant albumin i serum for HIV-1 infektion. Intraperitoneally injicere mus med 1, 000 til 10, 000 væv kultur smitsomme doser af 50 HIV-1 ADA i et volumen på 100 til 200 mikroliter per mus. Efter aflive musene, punktafgifter leveren fra hver mus som skitseret i tekstprotokollen.Indsamle og fastsætte leverne i 4% paraformaldehyd natten over. Etableringen af en dobbelt humaniseret musemodel med menneskelever og immunceller kan nemt overvåges ved hvert trin med henholdsvis meget enkel ELIZA og flowcytometri. Flow cytometri udføres regelmæssigt for at evaluere udviklingen af et funktionelt immunsystem og for at se effekten af hiv-infektion på immunceller.I dobbelt humaniserede mus kan udviklingen af funktionelle immunceller variere fra 15 til 90% af lymfocytporten. Til evaluering af engraftment af humane hepatocytter udføres ELIZA for humanspecifikke albuminniveauer hver måned på museserum. Mus indskrevet med både HSPC'er og HEPs viser menneskespecifikke albuminniveauer fra ca. syv mikrogram pr. milliliter til 377 mikrogram pr. milliliter ved en måned, og fortsætter med at vokse i observationstiden.Virkningen af hiv-infektion på humane immunceller i blodet hos dobbelt humaniserede mus overvåges af flowcytometri og på HEPs i leveren af humanspecifikt albumin ELIZA. Efter fem uger, HIV-1 forårsager et fald i humane albumin niveauer i serum, og der er en udtynding af menneskelige CK18 positive hepatocytes i leveren dele af dobbelt humaniserede mus. En lavere andel af CD4 til CD8 er typisk observeret i blod og lever af HIV-inficerede mus, sammenlignet med niveauer observeret i samme mus før infektion.Blod bør lægges omhyggeligt oven på lymfocyt separation medium for isolationer af buffy pels. Til operationen skal milten holdes forsigtigt og stikke nålen i s miltens nederste stang. Efter isolering af hæmatopoietiske stamceller er det afgørende at kontrollere renheden af CD34 positive hæmatopoietiske stamceller for at undgå CD3-positive celler og akutte injektioner af hepatocyt fra forskellige donorer.Som de humaniserede mus viser fysiologiske aspekt af det menneskelige immunsystem og lever, de udviklede mus kunne udnyttes til at studere fysiopathogenesis af HIV og fysiske infektioner og skrumpelever.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Brug af BLT Humaniseret Mouse som en stamcelle baseret genterapi tumormodel

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftfuld Infektion modellen til bakteriel patogenese

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Isolation, rensning og mærkning af museknoglemarv Neutrophils for Funktionelle Studier og adoptiv overføring Experiments

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humaniseret Mouse Model til Study bakterieinfektioner Målretning mikrovaskulaturen

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

To-foton Intravital billeddannelse af leukocytter under immunrespons i LPS-behandlede mus lever

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humaniseret SCID-NOD-IL2rγnull (hu-NSG) mus Model for HIV replikation og Latency undersøgelser

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

En Ex Vivo kylling primære Bursal-cellekultur Model til at studere smitsomme Bursal Disease Virus patogenese

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Evaluering af virulens og patogenese af Aeromonas infektion i en Caenorhabditis elegans Model

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...