Name: establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis
Uploaded: 2019-09-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Institute of Health Grant R24OD018546 (til L.Y.P. og S.G.). Forfatterne vil gjerne takke Weizhe Li, Ph.D., for hjelp i kirurgiske prosedyrer, Amanda Branch Woods, BS, Yan Cheng for immunohistology, UNMC flyt flowcytometri forskningsanlegg medlemmer direktør Phillip Hexley, Ph.D., Victoria B. Smith, BS, og Samantha Wall, B.S., UNMC avanserte mikroskopi Core Facility medlemmer Janice A. Taylor, BS, og James R. Talaska, BS, for teknisk støtte. Forfatterne erkjenner DRS. Mamoru Ito og Hiroshi Suemizu fra CIEA for å gi TK-NOG mus og Dr. Joachim Baumgart for å gi treosulfan. Forfatterne takker Dr. Adrian Koesters, UNMC, for hennes redaksjonelle bidrag til manuskriptet.

Denne protokollen er godkjent av institusjonelle Animal Care og use Committee (IACUC) ved University of Nebraska Medical Center.
Merk: Få godkjenning fra den lokale IACUC før du utfører eksperimenter på dyr.
1. behandling av navlestreng blod og isolering av Human HSPCs
<ol><li>Utfør alle trinnene i protokollen under sterile forhold i laminær Flow skap.</li>
	<li>Ta navlestreng blod (CB) samlet i heparinisert rør og gjør volumet opp til 35 ...

<ol>
	<li>Smith, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+specific+causes+of+death+amongst+HIV-positive+individuals+in+the+D:A:D+Study.">Factors associated with specific causes of death amongst HIV-positive individuals in the D:A:D Study.</a> AIDS. 24 (10), 1537-1548 (2010).</li><li>Puoti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+for+liver+disease+in+patients+with+HIV+infection:+a+cohort+study.">Mortality for liver disease in patients with HIV infection: a cohort study.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 24 (3), 211-217 (2000).</li><li>Rodriguez-Mendez, M. L., Gonzalez-Quintela, A., Aguilera, A., Barrio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence,+patterns,+and+course+of+past+hepatitis+B+virus+infection+in+intravenous+drug+users+with+HIV-1+infection.">Prevalence, patterns, and course of past hepatitis B virus infection in intravenous drug users with HIV-1 infection.</a> The American Journal of Gastroenterology. 95 (5), 1316-1322 (2000).</li><li>Scharschmidt, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+in+patients+with+HIV+infection:+relationship+to+AIDS+and+patient+survival.">Hepatitis B in patients with HIV infection: relationship to AIDS and patient survival.</a> Annals of Internal Medicine. 117 (10), 837-838 (1992).</li><li>Lacombe, K., Rockstroh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+and+viral+hepatitis+coinfections:+advances+and+challenges.">HIV and viral hepatitis coinfections: advances and challenges.</a> Gut. 61, 47-58 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Jouvet, N., Greiner, D. L., Shultz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+the+study+of+infectious+diseases.">Humanized mice for the study of infectious diseases.</a> Current Opinion in Immunology. 25 (4), 428-435 (2013).</li><li>Billerbeck, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+efficiently+engrafted+with+fetal+hepatoblasts+and+syngeneic+immune+cells+develop+human+monocytes+and+NK+cells.">Humanized mice efficiently engrafted with fetal hepatoblasts and syngeneic immune cells develop human monocytes and NK cells.</a> The Journal of Hepatology. 65 (2), 334-343 (2016).</li><li>Dagur, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocyte+depletion+in+the+presence+of+HIV-1+infection+in+dual+reconstituted+humanized+mice.">Human hepatocyte depletion in the presence of HIV-1 infection in dual reconstituted humanized mice.</a> Biology Open. 7 (2), (2018).</li><li>Gaska, J. M., Ploss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+viral+pathogenesis+in+humanized+mice.">Study of viral pathogenesis in humanized mice.</a> Current Opinion in Virology. 11, 14-20 (2015).</li><li>Gorantla, S., Poluektova, L., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+HIV-associated+neurocognitive+disorders.">Rodent models for HIV-associated neurocognitive disorders.</a> Trends in Neurosciences. 35 (3), 197-208 (2012).</li><li>Xu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+TK-NOG+mice:+a+predictive+model+for+cholestatic+human+liver+toxicity.">Chimeric TK-NOG mice: a predictive model for cholestatic human liver toxicity.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 352 (2), 274-280 (2015).</li><li>Washburn, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+humanized+mouse+model+to+study+hepatitis+C+virus+infection,+immune+response,+and+liver+disease.">A humanized mouse model to study hepatitis C virus infection, immune response, and liver disease.</a> Gastroenterology. 140 (4), 1334-1344 (2011).</li><li>Gutti, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+and+hematolymphoid+dual+reconstitution+in+treosulfan-conditioned+uPA-NOG+mice.">Human hepatocytes and hematolymphoid dual reconstitution in treosulfan-conditioned uPA-NOG mice.</a> The American Journal of Pathology. 184 (1), 101-109 (2014).</li><li>Strick-Marchand, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+stable+engraftment+of+a+human+immune+system+and+human+hepatocytes.">A novel mouse model for stable engraftment of a human immune system and human hepatocytes.</a> PLoS One. 10 (3), 0119820 (2015).</li><li>Keng, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+liver+pathogenesis,+human+immune+responses+and+drug+testing+in+a+humanised+mouse+model+of+HCV+infection.">Characterisation of liver pathogenesis, human immune responses and drug testing in a humanised mouse model of HCV infection.</a> Gut. 65 (10), 1744-1753 (2016).</li><li>Li, F., Nio, K., Yasui, F., Murphy, C. M., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+HBV+Infection+and+Therapy+in+Immune-Deficient+NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null+(NRG)+Fumarylacetoacetate+Hydrolase+(Fah)+Knockout+Mice+Transplanted+with+Human+Hepatocytes.">Studying HBV Infection and Therapy in Immune-Deficient NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null (NRG) Fumarylacetoacetate Hydrolase (Fah) Knockout Mice Transplanted with Human Hepatocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 1540, 267-276 (2017).</li><li>Poluektova, L. Y., Garcia, J. V., Koyanagi, Y., Manz, M. G., Tager, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Humanized Mice for HIV Research. , (2014).</li><li>Cheng, L., Ma, J., Li, G., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+Engrafted+With+Human+HSC+Only+or+HSC+and+Thymus+Support+Comparable+HIV-1+Replication,+Immunopathology,+and+Responses+to+ART+and+Immune+Therapy.">Humanized Mice Engrafted With Human HSC Only or HSC and Thymus Support Comparable HIV-1 Replication, Immunopathology, and Responses to ART and Immune Therapy.</a> Frontiers in Immunology. 9, 817 (2018).</li><li>Zhang, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+immunopathogenesis+in+humanized+mouse+models.">HIV-1 immunopathogenesis in humanized mouse models.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 9 (3), 237-244 (2012).</li><li>Nunoya, J., Washburn, M. L., Kovalev, G. I., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+prevent+liver+fibrosis+during+HIV+type+1+infection+in+a+humanized+mouse+model.">Regulatory T cells prevent liver fibrosis during HIV type 1 infection in a humanized mouse model.</a> The Journal of Infectious Diseases. 209 (7), 1039-1044 (2014).</li><li>Hasegawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reconstituted+'humanized+liver'+in+TK-NOG+mice+is+mature+and+functional.">The reconstituted 'humanized liver' in TK-NOG mice is mature and functional.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 405 (3), 405-410 (2011).</li><li>Higuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatic+cell+line+HepaRG+as+a+possible+cell+source+for+the+generation+of+humanized+liver+TK-NOG+mice.">The human hepatic cell line HepaRG as a possible cell source for the generation of humanized liver TK-NOG mice.</a> Xenobiotica. 44 (2), 146-153 (2014).</li><li>Kosaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+TK-NOG+based+humanized+mouse+model+for+the+study+of+HBV+and+HCV+infections.">A novel TK-NOG based humanized mouse model for the study of HBV and HCV infections.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 441 (1), 230-235 (2013).</li><li>Crane, M., Iser, D., Lewin, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+infection+and+the+liver.">Human immunodeficiency virus infection and the liver.</a> World Journal of Hepatology. 4 (3), 91-98 (2012).</li><li>Bility, M. T., Li, F., Cheng, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+immune-pathogenesis+and+therapy+of+human+liver+tropic+virus+infection+in+humanized+mouse+models.">Liver immune-pathogenesis and therapy of human liver tropic virus infection in humanized mouse models.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28, 120-124 (2013).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+HIV+infection+of+hepatocytes.">Low-level HIV infection of hepatocytes.</a> Virology Journal. 9, 1-7 (2012).</li><li>Dash, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-acting+nanoformulated+antiretroviral+therapy+elicits+potent+antiretroviral+and+neuroprotective+responses+in+HIV-1-infected+humanized+mice.">Long-acting nanoformulated antiretroviral therapy elicits potent antiretroviral and neuroprotective responses in HIV-1-infected humanized mice.</a> AIDS. 26 (17), 2135-2144 (2012).</li><li>Sun, S., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+chimeric+mouse+models+of+hepatitis+B+virus+infection.">Humanized chimeric mouse models of hepatitis B virus infection.</a> International Journal of Infectious Diseases. 59, 131-136 (2017).</li><li>Shafritz, D. A., Oertel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+and+experimental+conditions+that+lead+to+effective+repopulation+of+the+liver+by+transplanted+cells.">Model systems and experimental conditions that lead to effective repopulation of the liver by transplanted cells.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 43 (2), 198-213 (2011).</li><li>Almeida-Porada, G., Porada, C. D., Chamberlain, J., Torabi, A., Zanjani, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+hepatocytes+by+human+hematopoietic+stem+cells+in+sheep.">Formation of human hepatocytes by human hematopoietic stem cells in sheep.</a> Blood. 104 (8), 2582-2590 (2004).</li><li>Streetz, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+parenchymal+replacement+in+mice+by+transplanted+allogeneic+hepatocytes+is+facilitated+by+bone+marrow+transplantation+and+mediated+by+CD4+cells.">Hepatic parenchymal replacement in mice by transplanted allogeneic hepatocytes is facilitated by bone marrow transplantation and mediated by CD4 cells.</a> Hepatology. 47 (2), 706-718 (2008).</li></ol>

Leveren er kompromittert og skadet i HIV-infiserte pasienter24. Eksperimentelle små dyremodeller for å studere Human leversykdommer i nærvær av HIV-1 er svært begrenset, til tross for tilgjengeligheten av et par cotransplanted dyr modeller med CD34+ HSPCs og hepatocytter7,12, 25på. I in vitro eksperimenter, hepatocytter er vist å ha lavt nivå HIV-1 infeksjon26. ...

Siden ankomsten av antiretroviral behandling, har det vært en betydelig nedgang i dødsfall knyttet til HIV-1 monoinfection. Men, leversykdom har dukket opp som en vanlig årsak til sykelighet i HIV-infiserte pasienter1,2. Coinfections av hepatitt virus med HIV-1 infeksjon er mer vanlig, sto for 10%-30% av HIV-smittede personer i USA3,4,5.
Verten-spesifisitet av HIV-1 og hepatitt virus begrenser nytten av små dyremodeller å studere menneskelig-spesifikke smittsomme sykdommer eller å undersøke flere aspekter av HIV-1-assosiert leveren patogenesen. Immunodeficient mus som tillater engraftment av menneskelige celler og/eller vev (kalt humanisert mus modeller) er akseptable dyremodeller for prekliniske studier6,7,8. Siden innføringen av humanisert mus tidlig på 2000-tallet, flere prekliniske studier av kolestatisk Human leveren toksisitet, Human-spesifikke patogener, inkludert HIV-1 og HIV-assosiert nevrokognitive lidelser, Epstein Barr virus, hepatitt, og andre smittsomme sykdommer, har blitt undersøkt i disse musene6,9,10,11. Flere musemodeller for CD34+ HSPCs og/eller menneskelig hepatocytter transplantasjon har lenge vært utviklet og har bedret seg over tid for å studere sykdommen patogenesen av hepatitt B-viruset (HBV)-assosiert leversykdom12, 13 på alle , 14. flere modeller for HSPC og menneskelig HEPATOCYTTER (HEP) transplantasjon er basert på stammer, kjent som NOG (Nod. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac)8,13, NSG (nikk. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)15, Balb/C-Rag2-/- γc-/- (Rag2TM 1.1 FLV Il2rgTM 1.1 FLV/J)12, og Fah-/- Nod rag1-/- il2rγnull mus16. Imidlertid har hver modell sine egne fordeler og begrensninger; for eksempel, AFC8 dual humanisert mus for HEPs og humane stamceller (HSCs) på en Balb/C-Rag2-/- γc-/- bakgrunn muliggjør vellykket engraftment av immunceller og HSCs, men det er et fravær av et antigen-spesifikke T-og B-celle respons i denne modellen12. De største bekymringene i rekonstituering av doble humanisert mus inkluderer suboptimal engraftment, mangel på egnede modeller for å støtte ulike vev, feilaktige forhold, immun avvisning, eller pode-versus-host sykdom (GVHD), og teknisk vanskeligheter, slik som risikabelt manipulasjoner med nyfødte og høy dødelighet på grunn av metabolsk unormalt13.
Selv om humanisert mus har blitt brukt til HIV-forskning i mange år17,18,19, har bruk av humanisert mus for å studere leverskader forårsaket av HIV-1 er begrenset20. Vi har tidligere rapportert etablering av en dobbel humanisert TK-NOG mus modell og dens anvendelse i HIV-assosiert leversykdom8. Denne modellen viser den robuste engraftment av lever og immunceller og viser HIV-smitte patogenesen. Denne diskusjonen presenterer en detaljert protokoll, inkludert de mest kritiske trinnene i transplantasjon av menneskelig hepatocytter. En beskrivelse av HSPCs som kreves for en vellykket engraftment av HEPs og etablering av et funksjonelt immunsystem i TK-NOG mus er også presentert. Bruken av disse musene å studere HIV-assosiert leveren immunopathogenesis er detaljert. TK-NOG mannlige mus bærer en lever-spesifikke herpes simplex virus type 1 tymidin kinase (HSV-TK) transgene brukes. Mus leverceller uttrykker denne transgene kan lett bli ablated etter en kort eksponering for en nontoxic dose av GCV. Transplantert menneskelige leverceller er stabilt opprettholdt i musen leveren uten eksogene narkotika21. Musene er også preconditioned med nonmyeloablative doser av treosulfan å skape en nisje i musen benmargen for menneskelige celler8. Immunodeficient TK-NOG mus er intrasplenically injisert med HEPs og Multipotent HSPCs. Musene overvåkes deretter regelmessig for blod og leveren rekonstituering av blod immunfenotyping og målinger av serum humant-albumin nivåer, henholdsvis. Mus med en vellykket rekonstituering på mer enn 15% for både humane immunceller og HEPs er intraperitonealt injisert med HIV-1. Effekten av HIV på leveren kan vurderes så tidlig som 4-5 uker postinfection. Det er viktig å merke seg at, fordi HIV-1 brukes, må alle nødvendige forholdsregler tas under håndtering av viruset og injisere det i mus.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">27G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305109</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="72">
			<td height="72" style="height:72px;width:125px;">30G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">5 mL polystyrene&#160; round-bottom tube 12 x 75 mm style</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:127px;">352054</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">BD 1 mL Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS array bioanalyzer&#160;</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">For purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">BD FACS array software</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Software to analysis acquired CD34+ cell on FACS array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS lysing solution</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">349202</td>
			<td style="width:167px;">To lyse red blood cells</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD LSR II</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument for acquisiton of flow cytometry samples</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD&#160;Vacutainer Plastic Blood Collection Tube</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">BD 367874</td>
			<td style="width:167px;">To collect Cord blood</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Bovine Serum Albumin&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">A9576</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Controlled substance and pain-killer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD14-PE</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555398</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD19-BV605</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562653</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:125px;">CD34 MicroBead Kit, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-046-702</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; CD34+ HSPC</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">CD34-PE, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-081-002</td>
			<td style="width:167px;">Antibody used for purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD3-AF700</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">557943</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD45-PerCPCy5.5</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">564105</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD4-APC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555349</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD8-BV421</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562428</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cell counting slides</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">ChargeSwitch gDNA Mini Tissue Kit</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">CS11204</td>
			<td style="width:167px;">for extraction of genomic DNA from ear piece</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cobas Amplicor system v1.5&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Roche Molecular Diagnostics</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">bioanalyzer to measure viral load</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cotton-tipped applicators&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;McKesson</td>
			<td style="width:127px;">24-106-2S</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cytokeratin-18 (CK18)</td>
			<td style="width:135px;">DAKO</td>
			<td style="width:127px;">M7010</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">D2650-5X5ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:125px;">Extension set Microbore Slide Clamp(s) Fixed Male Luer Lock. L: 60 in L: 152 cm PV: 0.55 mL Fluid Path Sterile</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">30914</td>
			<td style="width:167px;">Attached to dispensing pippet and to load with HSPC and HEP suspesion</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FACS Diva version 6</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometer software required for&#160; acqusition of sample</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">10438026</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FLOWJO analysis software 
			v10.2</td>
			<td style="width:135px;">FLOWJO, LLC</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometry analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Ganciclovir</td>
			<td style="width:135px;">APP Pharmaceuticals, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">315110</td>
			<td style="width:167px;">Prescripition drug</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Greiner MiniCollect EDTA Tubes</td>
			<td style="width:135px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:127px;">450475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Hepatocytes thawing medium&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">MCHT50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Horizon Open Ligating Clip Appliers</td>
			<td style="width:135px;">Teleflex</td>
			<td style="width:127px;">537061</td>
			<td style="width:167px;">To hold the ligating clips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Hospira Sterile Water for Injection</td>
			<td style="width:135px;">ACE surgical supply co. Inc.</td>
			<td style="width:127px;">001-1187</td>
			<td style="width:167px;">For dilution of Buprenorphine (pain-killer)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human Albumin ELISA Quantitation Set</td>
			<td style="width:135px;">Bethyl laboratories</td>
			<td style="width:127px;">E80-129</td>
			<td style="width:167px;">For assesing human albumin levels in mouse serum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human hepatocyte</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">HUCP1</td>
			<td style="width:167px;">&#160;Cryopreserved human hepatocytes, induction qualified&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Iris Scissors, Straight</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">13295</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Lancet</td>
			<td style="width:135px;">MEDIpoint</td>
			<td style="width:127px;">Goldenrod 5 mm</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">LS columns&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-401</td>
			<td style="width:167px;">Used to entrap CD34+ microbeads (positive selection)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Lymphocyte Separation Medium (LSM)</td>
			<td style="width:135px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:127px;">50494</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; lymphocytes from peripheral blood</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-303</td>
			<td style="width:167px;">holds Qudro MACS seperator and LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5605</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Micro Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5157&#160;</td>
			<td style="width:167px;">to hold and pull out spleen from peritoneal cavity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">mouse CD45-FITC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">553080</td>
			<td style="width:167px;">mouse-specific</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">PBS (Phosphate Buffered Saline)</td>
			<td style="width:135px;">Hyclone</td>
			<td style="width:127px;">SH30256.02</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Qudro MACS separator&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-090-976</td>
			<td style="width:167px;">holds four LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">11875093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">StepOne Plus Real Time PCR&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument used&#160; to&#160; genotype</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Stepper Series Repetitive Dispensing Pipette 1ml</td>
			<td style="width:135px;">DYMAX CORP</td>
			<td style="width:127px;">T15469</td>
			<td style="width:167px;">Used to&#160; dispense&#160; HSPC and HEP supension in controlled manner</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Suturevet PGA synthetic absorbale suture</td>
			<td style="width:135px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:127px;">41178</td>
			<td style="width:167px;">Suturing of skin and peritoneum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">TaqMan Gene Expression Master Mix</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">4369016</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">TC20 automated cell counter</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450102</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:125px;">TK-NOG mice&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by the Central Institute for Experimental Animals (CIEA, Japan; Drs. Mamoru Ito and Hiroshi Suemizu)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Treosulfan</td>
			<td style="width:135px;">Medac GmbH</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by &#160;Dr. Joachim Baumgart (medac GmbH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450022</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Vannas-type Micro Scissors, Straight, 80mm L</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">1346</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Weck hemoclip traditional titanium ligating clips</td>
			<td style="width:135px;">Esutures</td>
			<td style="width:127px;">523700</td>
			<td style="width:167px;">To ligate the spleen post-injection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis

Til tross for økt levealder for pasienter smittet med humant immunsviktvirus-1 (HIV-1), leversykdom har dukket opp som en vanlig årsak til sykelighet deres. Leveren immunopathology forårsaket av HIV-1 er fortsatt unnvikende. Små xenograft dyremodeller med humant hepatocytter og humant immunsystem kan recapitulate menneskets biologi av sykdoms patogenesen. Heri, en protokoll er beskrevet for å etablere en dual humanisert musemodell gjennom menneskelige hepatocytter og CD34+ blodkreft stem/stamceller (HSPCs) transplantasjon, for å studere leveren immunopathology som OBSERVERT i HIV-infiserte pasienter. For å oppnå dobbel rekonstituering, mannlig TK-NOG (NOD. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Sug TG (alb-tk) 7-2/ShiJic) mus er intraperitonealt injisert med ganciklovir (GCV) doser for å eliminere mus transgene leverceller, og med treosulfan for nonmyeloablative condition, som begge lette menneskelig hepatocytter (HEP) engraftment og menneskets immunsystem (HIS) utvikling. Humant albumin (ALB) nivåer er evaluert for leveren engraftment, og tilstedeværelsen av menneskelige immunceller i blodet oppdaget av Flow flowcytometri bekrefter etablering av menneskets immunsystem. Modellen utviklet ved hjelp av protokollen beskrevet her ligner flere komponenter av leverskader fra HIV-1-smitte. Dens etablering kan vise seg å være avgjørende for studier av hepatitt virus co-smitte og for evaluering av antivirale og antiretroviral narkotika.

Etableringen av en dual humanisert musemodell med menneskelige lever og immunceller kan lett overvåkes på hvert trinn med svært enkel ELISA og Flow flowcytometri, henholdsvis. Flow flowcytometri utføres regelmessig for å evaluere utviklingen av et funksjonelt immunsystem og å se effekten av HIV-smitte på immunceller. I dual humanisert mus, kan utviklingen av funksjonelle immunceller varierer fra 15% til 90% av lymfocytter porten. Representative delsett av immunceller er vist i prik...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Denne protokollen gir en pålitelig metode for å etablere humanisert mus med både humant immunsystem og leverceller. Dual rekonstituert immunodeficient mus oppnådd via intrasplenic injeksjon av menneskelig HEPATOCYTTER og CD34+ blodkreft stamceller er mottakelige for humant immunsviktvirus-1 infeksjon og recapitulate leverskader som observert i HIV-infiserte pasienter.

Etablering av dual Humanisert TK-NOG Mouse modell for HIV-assosiert Liver patogenesen

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Det overordnede målet med protokollen er å generere en humanisert musemodell med funksjonelt menneskelig immunsystem og lever ved hjelp av humane hematopoetiske stamceller og hepato-området. Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål i genetisk lever humaniserte mus. Denne metoden gir et kraftig verktøy for å studere immunopatologi forårsaket av HIV som observert hos mennesker.Demonstrere prosessen vil være av Yimin Sun, en veileder fra patologi og mikrobiologi avdeling, sammen med Weimin Wang og Edwrd Makarov, forskning teknolog. For å begynne, overføre navlestreng blod samlet i hepariniserte rør til en steril laminær strømningskabinett. Legg til PBS til volumet økes til 35 milliliter.Lag prøven på toppen av lymfocytt separasjonsmedium og sentrifuge det 400 ganger G og ved fire grader celsius i 35 minutter uten pauser. Deretter fjerner du forsiktig det øverste plasmalaget og bruker en overføringspipette til å overføre det hvite buffy coat-grensesnittet til et nytt rør. Re-suspendere buffy pels i 30 til 40 milliliter iskald buffer.Bruk en pipette til å kombinere 20 mikroliter av cellefjæringen med 20 mikroliter på 0,4% trypan blå. Pipette 10 mikroliter av denne blandingen inn i den ytre åpningen av et av de to kamrene i et tellelysbilde, og sett lysbildet inn i en automatisert celleteller for å telle cellene. Sentrifuger cellene ved 300 ganger G og ved fire grader celsius i 10 minutter.Aspirer forsiktig overnatanten og tilsett 300 mikroliter iskald buffer. Tilsett 100 mikroliter av humane FC reseptor blokkerer reagens og 100 mikroliter monoklonal mus anti-menneskelige CD34 antistoff konjugert MicroBeads for opptil 100 millioner celler. Inkuber i 30 minutter ved fire grader celsius.Tilsett 10 milliliter iskald buffer for å vaske cellene og sentrifuge den 300 ganger G og fire grader celsius i 10 minutter. Fjern forsiktig det overnaturlige og re-suspendere pellet i 500 mikroliter iskald buffer. Etter dette plasserer du en positiv utvalg LS-kolonne i det magnetiske aktiverte cellesorteringsfeltet og sender den gjennom med tre milliliter iskald buffer.Last prøven inn i LS-kolonnen som kan fange MicroBeads bundet til menneskelige CD34 positive celler i prøver, og la den strømme under tyngdekraftens påvirkning inn i oppsamlingsrøret. Vask kolonnen tre ganger med iskald buffer og samle eluent i samme oppsamlingsrør. Deretter stuper kolonnen med fem milliliter iskald buffer for å henfalle CD34-positive celler inn i et nytt oppsamlingsrør.Gjenta prosedyren for å oppnå en renhet på over 90%Neste, bruk trypan blå fargestoff og et hemocytometer for å telle de unnsluppede CD34 positive cellene. Etter telling, sentrifuger cellene ved 300 ganger G i fem minutter. Kast de supernatante og re-suspendere cellene i 125 mikroliter pbs for en injeksjon som skal brukes umiddelbart i transplantasjon.For å kontrollere renheten til CD34-positive eluent, ta 50 mikroliter av suspensjonen og inkubere den med 10 mikroliter PE konjugert anti-menneskelig CD34 antistoff ved fire grader celsius i 30 minutter. Etter dette, vask og re-suspendere cellene i PBS og fortsette å utføre flyt cytometri. Analyser dataene som beskrevet i tekstprotokollen etter anskaffelsen.Først hente og tine de kryoserverte hepatocytter som beskrevet i tekstprotokollen. Fjern deretter biohetten og hell de tinte hepatocytter i et 50 milliliter konisk rør som inneholder oppvarmet tiningsmedium. Rock røret for hånd i noen sekunder for å suspendere cellene.Pellet cellene ved 100 ganger G og ved romtemperatur i åtte minutter. Vask pelleted cellene i PBS med 0,1% BSA og pool dem med enten friske eller tinte HSPCer i PBS til et endelig volum på 80 mikroliter per mus. Først feste den ene enden av et sterilt forlengelsesrør til en 30 gauge nål og den andre enden til en en milliliter sprøyte.Fyll sprøyten med suspensjon av samlede HEPer og HSPCer. Monter sprøyten i hakket på en repeterende dispenseringspipette og juster dispenseren for å dispensere 10 mikroliter i hvert trykk. Barber hver mus som beskrevet i tekstprotokollen og skrubb venstre side av kroppen til hver mus med 10% povidone jod fulgt 70% isopropylalkohol.Ved hjelp av Vannas type saks, lage et lite snitt i huden, muskel og bukhinnen til venstre for bukhinnen veggen for å gå inn i bukhinnen ca 5 millimeter under den nedre kanten av ribbeburet. Finn milten og bruk tang til å trekke den litt til operasjonsområdet for enkel tilgang og sett 30 gauge nålen inn i den nedre polen av milten. Deretter låser du opp stempelet på dispenseringspipetten og dispenserer 10 mikroliter av volumet om gangen, med en grense på 60 til 80 mikroliter per milt.Trekk nålen langsomt tilbake og klip milten med ligating klips ved hjelp av en ligation applier. Deretter bruker du bomullstippede applikatorer fuktet med steril PBS for å skyve milten tilbake i kroppshulen. Bruk et avbrutt suturmønster for å lukke muskellaget i bukveggen.Oppnå hudlukking med et avbrutt suturmønster ved hjelp av ikke-absorberbare suturer. Overfør alt nødvendig materiale til et utpekt Biosafety Level Two Plus-anlegg. Bruk personlig beskyttelsesutstyr, inkludert et engangsdeksel alle kjole, skodeksler, en ansiktsmaske og doble hansker, inkludert kuttbestandige hansker, til enhver tid mens du arbeider med viruset.Velg mus med en rekonstituering av mer enn 15 % av humane CD45-positive celler og med tilstedeværelse av humant albumin i serumet for HIV-1-infeksjon. Injiser musene intraperitoneally musene med 1000 til 10 000 vevskulturfeksiøse doser på 50 HIV-1 ADA i et volum på 100 til 200 mikroliter per mus. Etter euthanizing musene, avgiftsdirektoratet leveren fra hver mus som beskrevet i tekstprotokollen.Samle og fikse leverene i 4% paraformaldehyd over natten. Etableringen av en dobbel humanisert musemodell med menneskelig lever og immunceller kan lett overvåkes på hvert trinn med svært enkle ELIZA og flytcytometri, henholdsvis. Flow cytometri utføres regelmessig for å evaluere utviklingen av et funksjonelt immunsystem og for å se effekten av HIV-infeksjon på immunceller.I to humaniserte mus kan utviklingen av funksjonelle immunceller variere fra 15 til 90% av lymfocyttporten. For evalueringen av engraftment av menneskelige hepatocytter utføres ELIZA for menneskespesifikke albuminnivåer månedlig på museserum. Mus som er grafted med både HSPCer og HEPs viser menneskespesifikke albuminnivåer fra omtrent syv mikrogram per milliliter til 377 mikrogram per milliliter på en måned, og fortsetter å vokse over observasjonstiden.Effekten av HIV-infeksjon på humane immunceller i blodet av to humaniserte mus overvåkes av strømningscytometri og på HEPs i leveren av menneskespesifikt albumin ELIZA. Etter fem uker forårsaker HIV-1 en reduksjon i humane albuminnivåer i serumet, og det er en uttømming av humane CK18 positive hepatocytter i leverdelene av to humaniserte mus. En lavere andel av forholdet mellom CD4 og CD8 er vanligvis observert i blodet og leveren av HIV-infiserte mus, sammenlignet med nivåer som er nevnt i samme mus før infeksjon.Blod bør lagvises forsiktig på toppen av lymfocytt separasjonsmedium for isolasjoner av buffy pels. For operasjonen, hold milten forsiktig og sett nålen i nedre stang av milten. Etter isolering av hematopoetiske stamceller, er det avgjørende å sjekke renheten av CD34 positive hematopoetiske stamceller for å unngå CD3 positive celler og akutte injeksjoner av hepatocytter fra forskjellige donor.Som humaniserte mus viser fysiologisk aspekt av humant immunsystem og lever, de utviklede musene kan benyttes til å studere fysipatogenese av HIV og fysiske infeksjoner og skrumplever.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Bruke BLT humanisert Mouse som en stamcelle basert Gene Therapy Tumor Model

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Insektet<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftig infeksjon Model for å etterforske Bakteriell Patogenese

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Isolering, rensing og merking av benmarg fra mus Nøytrofiler for funksjonelle studier og adoptivforeldre Transfer Eksperimenter

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humanisert mus modell for å studere bakterieinfeksjoner Targeting microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

To-fotonet Intravital Imaging av leukocytter under immunrespons i lipopolysakkarid-behandlet musen leveren

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized hilsen/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) mus modell for HIV replikering og ventetid studier

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

En Ex Vivo kylling primære Bursal-celle kultur modell å studere Bursal infeksjonssykdommer Virus patogenesen

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Evaluere virulens og patogenesen av Aeromonas i en Caenorhabditis elegans modell

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...