Name: establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis
Uploaded: 2019-09-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Эта работа была поддержана Национальным институтом здравоохранения грант R24OD018546 (в L.Y.P. и S.G.). Авторы хотели бы поблагодарить Вайчжэ Ли, доктор философии, за помощь в хирургических процедурах, Аманда Бранч Вудс, B.S., Ян Ченг для иммуногистологии, UNMC потока цитометрии членов научно-исследовательского центра директор Филипп Хексли, доктор философии, Виктория Б. Смит, B.S., и Саманта Уолл, B.S., UNMC передовые микроскопии основных членов объекта Дженис А. Тейлор, B.S., и Джеймс Р. Таласка, B.S., для технической поддержки. Авторы признают д-ра Мамору Ито и Хироси Суамидзу из CIEA за предоставление мышей ТК-НОГ и д-ра Иоахима Баумгарта за предоставление треосульфана. Авторы благодарят д-ра Адриана Кестерса, UNMC, за ее редакционный вклад в рукопись.

Этот протокол был одобрен Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию (IACUC) при Медицинском центре Университета штата Небраска.
ПРИМЕЧАНИЕ: Получить одобрение от местного IACUC перед проведением экспериментов на животных.
1. Об?...

<ol>
	<li>Smith, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+specific+causes+of+death+amongst+HIV-positive+individuals+in+the+D:A:D+Study.">Factors associated with specific causes of death amongst HIV-positive individuals in the D:A:D Study.</a> AIDS. 24 (10), 1537-1548 (2010).</li><li>Puoti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+for+liver+disease+in+patients+with+HIV+infection:+a+cohort+study.">Mortality for liver disease in patients with HIV infection: a cohort study.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 24 (3), 211-217 (2000).</li><li>Rodriguez-Mendez, M. L., Gonzalez-Quintela, A., Aguilera, A., Barrio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence,+patterns,+and+course+of+past+hepatitis+B+virus+infection+in+intravenous+drug+users+with+HIV-1+infection.">Prevalence, patterns, and course of past hepatitis B virus infection in intravenous drug users with HIV-1 infection.</a> The American Journal of Gastroenterology. 95 (5), 1316-1322 (2000).</li><li>Scharschmidt, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+in+patients+with+HIV+infection:+relationship+to+AIDS+and+patient+survival.">Hepatitis B in patients with HIV infection: relationship to AIDS and patient survival.</a> Annals of Internal Medicine. 117 (10), 837-838 (1992).</li><li>Lacombe, K., Rockstroh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+and+viral+hepatitis+coinfections:+advances+and+challenges.">HIV and viral hepatitis coinfections: advances and challenges.</a> Gut. 61, 47-58 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Jouvet, N., Greiner, D. L., Shultz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+the+study+of+infectious+diseases.">Humanized mice for the study of infectious diseases.</a> Current Opinion in Immunology. 25 (4), 428-435 (2013).</li><li>Billerbeck, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+efficiently+engrafted+with+fetal+hepatoblasts+and+syngeneic+immune+cells+develop+human+monocytes+and+NK+cells.">Humanized mice efficiently engrafted with fetal hepatoblasts and syngeneic immune cells develop human monocytes and NK cells.</a> The Journal of Hepatology. 65 (2), 334-343 (2016).</li><li>Dagur, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocyte+depletion+in+the+presence+of+HIV-1+infection+in+dual+reconstituted+humanized+mice.">Human hepatocyte depletion in the presence of HIV-1 infection in dual reconstituted humanized mice.</a> Biology Open. 7 (2), (2018).</li><li>Gaska, J. M., Ploss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+viral+pathogenesis+in+humanized+mice.">Study of viral pathogenesis in humanized mice.</a> Current Opinion in Virology. 11, 14-20 (2015).</li><li>Gorantla, S., Poluektova, L., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+HIV-associated+neurocognitive+disorders.">Rodent models for HIV-associated neurocognitive disorders.</a> Trends in Neurosciences. 35 (3), 197-208 (2012).</li><li>Xu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+TK-NOG+mice:+a+predictive+model+for+cholestatic+human+liver+toxicity.">Chimeric TK-NOG mice: a predictive model for cholestatic human liver toxicity.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 352 (2), 274-280 (2015).</li><li>Washburn, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+humanized+mouse+model+to+study+hepatitis+C+virus+infection,+immune+response,+and+liver+disease.">A humanized mouse model to study hepatitis C virus infection, immune response, and liver disease.</a> Gastroenterology. 140 (4), 1334-1344 (2011).</li><li>Gutti, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+and+hematolymphoid+dual+reconstitution+in+treosulfan-conditioned+uPA-NOG+mice.">Human hepatocytes and hematolymphoid dual reconstitution in treosulfan-conditioned uPA-NOG mice.</a> The American Journal of Pathology. 184 (1), 101-109 (2014).</li><li>Strick-Marchand, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+stable+engraftment+of+a+human+immune+system+and+human+hepatocytes.">A novel mouse model for stable engraftment of a human immune system and human hepatocytes.</a> PLoS One. 10 (3), 0119820 (2015).</li><li>Keng, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+liver+pathogenesis,+human+immune+responses+and+drug+testing+in+a+humanised+mouse+model+of+HCV+infection.">Characterisation of liver pathogenesis, human immune responses and drug testing in a humanised mouse model of HCV infection.</a> Gut. 65 (10), 1744-1753 (2016).</li><li>Li, F., Nio, K., Yasui, F., Murphy, C. M., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+HBV+Infection+and+Therapy+in+Immune-Deficient+NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null+(NRG)+Fumarylacetoacetate+Hydrolase+(Fah)+Knockout+Mice+Transplanted+with+Human+Hepatocytes.">Studying HBV Infection and Therapy in Immune-Deficient NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null (NRG) Fumarylacetoacetate Hydrolase (Fah) Knockout Mice Transplanted with Human Hepatocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 1540, 267-276 (2017).</li><li>Poluektova, L. Y., Garcia, J. V., Koyanagi, Y., Manz, M. G., Tager, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Humanized Mice for HIV Research. , (2014).</li><li>Cheng, L., Ma, J., Li, G., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+Engrafted+With+Human+HSC+Only+or+HSC+and+Thymus+Support+Comparable+HIV-1+Replication,+Immunopathology,+and+Responses+to+ART+and+Immune+Therapy.">Humanized Mice Engrafted With Human HSC Only or HSC and Thymus Support Comparable HIV-1 Replication, Immunopathology, and Responses to ART and Immune Therapy.</a> Frontiers in Immunology. 9, 817 (2018).</li><li>Zhang, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+immunopathogenesis+in+humanized+mouse+models.">HIV-1 immunopathogenesis in humanized mouse models.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 9 (3), 237-244 (2012).</li><li>Nunoya, J., Washburn, M. L., Kovalev, G. I., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+prevent+liver+fibrosis+during+HIV+type+1+infection+in+a+humanized+mouse+model.">Regulatory T cells prevent liver fibrosis during HIV type 1 infection in a humanized mouse model.</a> The Journal of Infectious Diseases. 209 (7), 1039-1044 (2014).</li><li>Hasegawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reconstituted+'humanized+liver'+in+TK-NOG+mice+is+mature+and+functional.">The reconstituted 'humanized liver' in TK-NOG mice is mature and functional.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 405 (3), 405-410 (2011).</li><li>Higuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatic+cell+line+HepaRG+as+a+possible+cell+source+for+the+generation+of+humanized+liver+TK-NOG+mice.">The human hepatic cell line HepaRG as a possible cell source for the generation of humanized liver TK-NOG mice.</a> Xenobiotica. 44 (2), 146-153 (2014).</li><li>Kosaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+TK-NOG+based+humanized+mouse+model+for+the+study+of+HBV+and+HCV+infections.">A novel TK-NOG based humanized mouse model for the study of HBV and HCV infections.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 441 (1), 230-235 (2013).</li><li>Crane, M., Iser, D., Lewin, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+infection+and+the+liver.">Human immunodeficiency virus infection and the liver.</a> World Journal of Hepatology. 4 (3), 91-98 (2012).</li><li>Bility, M. T., Li, F., Cheng, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+immune-pathogenesis+and+therapy+of+human+liver+tropic+virus+infection+in+humanized+mouse+models.">Liver immune-pathogenesis and therapy of human liver tropic virus infection in humanized mouse models.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28, 120-124 (2013).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+HIV+infection+of+hepatocytes.">Low-level HIV infection of hepatocytes.</a> Virology Journal. 9, 1-7 (2012).</li><li>Dash, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-acting+nanoformulated+antiretroviral+therapy+elicits+potent+antiretroviral+and+neuroprotective+responses+in+HIV-1-infected+humanized+mice.">Long-acting nanoformulated antiretroviral therapy elicits potent antiretroviral and neuroprotective responses in HIV-1-infected humanized mice.</a> AIDS. 26 (17), 2135-2144 (2012).</li><li>Sun, S., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+chimeric+mouse+models+of+hepatitis+B+virus+infection.">Humanized chimeric mouse models of hepatitis B virus infection.</a> International Journal of Infectious Diseases. 59, 131-136 (2017).</li><li>Shafritz, D. A., Oertel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+and+experimental+conditions+that+lead+to+effective+repopulation+of+the+liver+by+transplanted+cells.">Model systems and experimental conditions that lead to effective repopulation of the liver by transplanted cells.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 43 (2), 198-213 (2011).</li><li>Almeida-Porada, G., Porada, C. D., Chamberlain, J., Torabi, A., Zanjani, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+hepatocytes+by+human+hematopoietic+stem+cells+in+sheep.">Formation of human hepatocytes by human hematopoietic stem cells in sheep.</a> Blood. 104 (8), 2582-2590 (2004).</li><li>Streetz, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+parenchymal+replacement+in+mice+by+transplanted+allogeneic+hepatocytes+is+facilitated+by+bone+marrow+transplantation+and+mediated+by+CD4+cells.">Hepatic parenchymal replacement in mice by transplanted allogeneic hepatocytes is facilitated by bone marrow transplantation and mediated by CD4 cells.</a> Hepatology. 47 (2), 706-718 (2008).</li></ol>

Печень скомпрометирована и повреждена у ВИЧ-инфицированных пациентов24. Экспериментальные модели малых животных для изучения заболеваний печени человека в присутствии ВИЧ-1 крайне ограничены, несмотря на наличие нескольких скотрансажированных моделей животных с CD34и</s...

С момента появления антиретровирусной терапии произошло значительное снижение смертности от моноинфекции ВИЧ-1. Тем не менее, заболевания печени стала распространенной причиной заболеваемости у ВИЧ-инфицированных пациентов1,2. Инфекции вирусов гепатита с ВИЧ-1 встречаются чаще, на долю 10% - 30% ВИЧ-инфицированных в США3,4,5.
Специфика вирусов ВИЧ-1 и гепатита ограничивает полезность малых моделей животных для изучения специфических инфекционных заболеваний человека или для изучения многочисленных аспектов патогенеза печени, связанного с ВИЧ-1. Иммунодефицитные мыши, которые позволяют прививать человеческие клетки и / или ткани (так называют гуманизированных моделей мыши) являются приемлемыми животными модели для доклинических исследований6,7,8. С момента появления гуманизированных мышей в начале 2000-х годов, многочисленные доклинические исследования токсичности холестатической печени человека, специфических для человека патогенов, включая ВИЧ-1 и ВИЧ-ассоциированные нейрокогнитивные расстройства, вирус Эпштейна Барра, гепатит и другие инфекционных заболеваний, были исследованы в этих мышей6,9,10,11. Несколько моделей мыши для CD34и HSPCs и / или трансплантации гепатоцитов человека уже давно разработаны и улучшились с течением времени для изучения болезни патогенеза вируса гепатита В (HBV)-связанных заболеваний печени12, 13 Год , 14. Несколько моделей для трансплантации гепатоцитов и человека (HEP) основаны на штаммах, известных как NOG (NOD). CG-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac)8,13, NSG (NOD. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)15, Balb/C-Rag2-/- кк-/- (Rag2tm1.1Flv Il2rgtm1.1Flv/J)12, и fah-/- NOD rag1-/- il2r null мышь16. Однако каждая модель имеет свои преимущества и ограничения; например, AFC8 двойных гуманизированных мышей для HEPs и стволовых клеток человека (HSCs) на Balb/C-Rag2-/- Кк-/- фон позволяет успешно привить иммунных клеток и HSCs, но есть отсутствие антигена конкретных Т- и В-клеток ответ в этой модели12. Основные проблемы в восстановлении двойной гуманизированных мышей включают субоптимальный прививок, отсутствие подходящих моделей для поддержки различных тканей, несовпадающие условия, иммунный отторженный, или трансплантат -по сравнениюс -хост болезни (GVHD), и технические трудности, такие как рискованные манипуляции с новорожденными и высокие показатели смертности из-за метаболических нарушений13.
Хотя гуманизированные мыши были использованы для исследования ВИЧ в течение многих лет17,18,19, использование гуманизированных мышей для изучения повреждения печени, вызванные ВИЧ-1 была ограничена20. Ранее мы сообщали о создании двойной гуманизированной модели мыши TK-NOG и ее применении при ВИЧ-ассоциированном заболевании печени8. Эта модель показывает надежное прививочение печени и иммунных клеток и резюмирует патогенез ВИЧ-инфекции. В ходе этой дискуссии представлен подробный протокол, включав в себя наиболее важные шаги в области трансплантации гепатоцитов человека. Представлено также описание HSPCs, необходимых для успешного прививки От hePs и создания функциональной иммунной системы у мышей ТК-NOG. Использование этих мышей для изучения ВИЧ-ассоциированного иммунопатогенеза печени подробно. TK-NOG мышей, перевозящих печени конкретных вирус простого герпеса типа 1 тимидин киназы (HSV-TK) трансгениспользуютиспользуются. Клетки печени мыши выражая этот transgene можно легко ablated после краткого подвержения к nontoxic дозе GCV. Пересаженные клетки печени человека устойчиво поддерживаются в печени мыши без экзогенных препаратов21. Мышей также предусловные с nonmyeloablative дозы треосульфана для создания ниши в костном мозге мыши для человеческих клеток8. Иммунодефицитные мыши ТК-НОГ интраспленически вводятся с помощью HePs и многопотентных HSPCs. Затем мышей регулярно контролируют на наличие в крови и печени восстановления с помощью иммунофенотипирования крови и измерений уровня сыворотки человека и альбумина, соответственно. Мыши с успешной реконституцией более 15% как для иммунных клеток человека, так и для HEPs интраперитоно вводят ВИЧ-1. Влияние ВИЧ на печень можно оценить уже через 4 - 5 недель после инфицирования. Важно отметить, что, поскольку ВИЧ-1 используется, все необходимые меры предосторожности должны быть приняты при обработке вируса и инъекционных его на мышей.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">27G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305109</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="72">
			<td height="72" style="height:72px;width:125px;">30G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">5 mL polystyrene&#160; round-bottom tube 12 x 75 mm style</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:127px;">352054</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">BD 1 mL Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS array bioanalyzer&#160;</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">For purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">BD FACS array software</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Software to analysis acquired CD34+ cell on FACS array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS lysing solution</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">349202</td>
			<td style="width:167px;">To lyse red blood cells</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD LSR II</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument for acquisiton of flow cytometry samples</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD&#160;Vacutainer Plastic Blood Collection Tube</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">BD 367874</td>
			<td style="width:167px;">To collect Cord blood</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Bovine Serum Albumin&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">A9576</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Controlled substance and pain-killer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD14-PE</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555398</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD19-BV605</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562653</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:125px;">CD34 MicroBead Kit, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-046-702</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; CD34+ HSPC</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">CD34-PE, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-081-002</td>
			<td style="width:167px;">Antibody used for purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD3-AF700</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">557943</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD45-PerCPCy5.5</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">564105</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD4-APC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555349</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD8-BV421</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562428</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cell counting slides</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">ChargeSwitch gDNA Mini Tissue Kit</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">CS11204</td>
			<td style="width:167px;">for extraction of genomic DNA from ear piece</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cobas Amplicor system v1.5&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Roche Molecular Diagnostics</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">bioanalyzer to measure viral load</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cotton-tipped applicators&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;McKesson</td>
			<td style="width:127px;">24-106-2S</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cytokeratin-18 (CK18)</td>
			<td style="width:135px;">DAKO</td>
			<td style="width:127px;">M7010</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">D2650-5X5ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:125px;">Extension set Microbore Slide Clamp(s) Fixed Male Luer Lock. L: 60 in L: 152 cm PV: 0.55 mL Fluid Path Sterile</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">30914</td>
			<td style="width:167px;">Attached to dispensing pippet and to load with HSPC and HEP suspesion</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FACS Diva version 6</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometer software required for&#160; acqusition of sample</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">10438026</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FLOWJO analysis software 
			v10.2</td>
			<td style="width:135px;">FLOWJO, LLC</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometry analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Ganciclovir</td>
			<td style="width:135px;">APP Pharmaceuticals, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">315110</td>
			<td style="width:167px;">Prescripition drug</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Greiner MiniCollect EDTA Tubes</td>
			<td style="width:135px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:127px;">450475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Hepatocytes thawing medium&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">MCHT50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Horizon Open Ligating Clip Appliers</td>
			<td style="width:135px;">Teleflex</td>
			<td style="width:127px;">537061</td>
			<td style="width:167px;">To hold the ligating clips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Hospira Sterile Water for Injection</td>
			<td style="width:135px;">ACE surgical supply co. Inc.</td>
			<td style="width:127px;">001-1187</td>
			<td style="width:167px;">For dilution of Buprenorphine (pain-killer)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human Albumin ELISA Quantitation Set</td>
			<td style="width:135px;">Bethyl laboratories</td>
			<td style="width:127px;">E80-129</td>
			<td style="width:167px;">For assesing human albumin levels in mouse serum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human hepatocyte</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">HUCP1</td>
			<td style="width:167px;">&#160;Cryopreserved human hepatocytes, induction qualified&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Iris Scissors, Straight</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">13295</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Lancet</td>
			<td style="width:135px;">MEDIpoint</td>
			<td style="width:127px;">Goldenrod 5 mm</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">LS columns&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-401</td>
			<td style="width:167px;">Used to entrap CD34+ microbeads (positive selection)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Lymphocyte Separation Medium (LSM)</td>
			<td style="width:135px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:127px;">50494</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; lymphocytes from peripheral blood</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-303</td>
			<td style="width:167px;">holds Qudro MACS seperator and LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5605</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Micro Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5157&#160;</td>
			<td style="width:167px;">to hold and pull out spleen from peritoneal cavity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">mouse CD45-FITC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">553080</td>
			<td style="width:167px;">mouse-specific</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">PBS (Phosphate Buffered Saline)</td>
			<td style="width:135px;">Hyclone</td>
			<td style="width:127px;">SH30256.02</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Qudro MACS separator&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-090-976</td>
			<td style="width:167px;">holds four LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">11875093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">StepOne Plus Real Time PCR&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument used&#160; to&#160; genotype</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Stepper Series Repetitive Dispensing Pipette 1ml</td>
			<td style="width:135px;">DYMAX CORP</td>
			<td style="width:127px;">T15469</td>
			<td style="width:167px;">Used to&#160; dispense&#160; HSPC and HEP supension in controlled manner</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Suturevet PGA synthetic absorbale suture</td>
			<td style="width:135px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:127px;">41178</td>
			<td style="width:167px;">Suturing of skin and peritoneum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">TaqMan Gene Expression Master Mix</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">4369016</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">TC20 automated cell counter</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450102</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:125px;">TK-NOG mice&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by the Central Institute for Experimental Animals (CIEA, Japan; Drs. Mamoru Ito and Hiroshi Suemizu)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Treosulfan</td>
			<td style="width:135px;">Medac GmbH</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by &#160;Dr. Joachim Baumgart (medac GmbH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450022</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Vannas-type Micro Scissors, Straight, 80mm L</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">1346</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Weck hemoclip traditional titanium ligating clips</td>
			<td style="width:135px;">Esutures</td>
			<td style="width:127px;">523700</td>
			<td style="width:167px;">To ligate the spleen post-injection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis

Несмотря на увеличение продолжительности жизни пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1), заболевание печени стало распространенной причиной их заболеваемости. Иммунопатология печени, вызванная ВИЧ-1, остается неуловимой. Малые модели животных ксенотрансплантата с гепатоцитами человека и иммунной системой человека могут резюмировать биологию человека патогенеза болезни. При этом описывается протокол для создания двойной гуманизированной модели мыши с помощью человеческих гепатоцитов и CD34 гематопоиетических стволовых /клеток-прародителей (HSPCs) трансплантации, для изучения иммунопатологии печени, как наблюдается у ВИЧ-инфицированных пациентов. Для достижения двойной реконституции, мужчины ТЗ-НОГ (NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Tg (Alb-TK)7-2/ShiJic) мышей интраперитоно вводят с ганциклозир (GCV) дозы для устранения мыши трансгенных клеток печени, и с treosulfan для немиелоаблятивного кондиционирования, оба из которых из которых оба из которых облегчить гепатоциты человека (HEP) прививок и иммунной системы человека (HIS) развития. Уровень альбумина человека (ALB) оценивается для прививок печени, а наличие иммунных клеток человека в крови, обнаруженных цитометрией потока, подтверждает установление иммунной системы человека. Модель, разработанная с использованием описанного здесь протокола, напоминает несколько компонентов повреждения печени от ВИЧ-1. Его создание может оказаться необходимым для исследований совместной инфекции вируса гепатита и для оценки противовирусных и антиретровирусных препаратов.

Создание двойной гуманизированной мыши модели с человеческой печени и иммунных клеток можно легко контролировать на каждом шагу с очень простой ELISA и поток цитометрии, соответственно. Цитометрия потока регулярно выполняется для оценки развития функциональной иммун?...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Этот протокол обеспечивает надежный метод для создания гуманизированных мышей с иммунной системой человека и клетками печени. Двойной восстановленный иммунодефицитных мышей, достигнутых с помощью интраспелинической инъекции человеческих гепатоцитов и CD34 гематопоиетических стволовых клеток восприимчивы к вирусу иммунодефицита человека-1 инфекции и повторение повреждения печени, как наблюдается в ВИЧ-инфицированных пациентов.

Создание двойной гуманизированной модели мыши TK-NOG для ВИЧ-ассоциированного патогенеза печени

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Общая цель протокола заключается в создании гуманизированной модели мыши с функциональной иммунной системой человека и печенью с использованием человеческих гематопоэтических стволовых клеток и гепато сайта. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в генетической печени гуманизированных мышей. Этот метод является мощным инструментом для изучения иммунопатологии, вызванной ВИЧ, как наблюдается у людей.Демонстрацией процесса будет Имин Сун, руководитель отдела патологии и микробиологии, а также Ваймин Ван и Эдврд Макаров, научный технолог. Для начала перенесите пуповинную кровь, собранную в гепаринизированных трубках, в стерильный ламинарный шкаф. Добавьте PBS до тех пор, пока объем не будет увеличен до 35 миллилитров.Слой образца на вершине лимфоцитов разделения среды и центрифуги его 400 раз G и при четырех градусах по Цельсию в течение 35 минут без перерывов. Далее, тщательно удалите верхний плазменный слой и используйте передачу пипетки для передачи белого баффи пальто интерфейс на новую трубку. Повторно приостанавливать баффи пальто в 30 до 40 миллилитров ледяного буфера.Используя пипетки, смешайте 20 микролитров клеточной подвески с 20 микролитров 0,4%трипан синий. Pipette 10 микролитров этой смеси во внешнее отверстие любой из двух камер подсчета слайда, и вставить слайд в автоматизированный счетчик ячейки для подсчета клеток. Центрифуга клетки в 300 раз G и при четырех градусах по Цельсию в течение 10 минут.Тщательно аспирировать супернатант и добавить 300 микролитров ледяного буфера. Добавьте 100 микролитров рецепторов ФК человека, блокирующих реагент, и 100 микролитров моноклональных мышей анти-человеческих антител CD34, спряженных MicroBeads для до 100 миллионов клеток. Инкубировать в течение 30 минут при четырех градусах по Цельсию.Добавьте 10 миллилитров ледяного буфера для мытья клеток и центрифуги его 300 раз G и четыре градуса по Цельсию в течение 10 минут. Аккуратно удалите супернатант и повторно приостановите гранулы в 500 микролитров ледяного буфера. После этого поместите положительный отбор колонки LS в магнитное активированное поле сортировки клеток и пройдите его с тремя миллилитров ледяного буфера.Загрузите образец в колонку LS, которая может заманить MicroBeads, связанных с положительными клетками человека CD34 в образцах, и позволить ему течь под воздействием гравитации в трубку сбора. Вымойте колонку три раза с ледяным буфером и соберите элюент в той же трубке сбора. Затем окунитесь в колонку с пятью миллилитров ледяного буфера, чтобы узнать CD34 положительные клетки в новую трубку сбора.Повторите процедуру для достижения чистоты более 90% Далее, используйте трипан синий краситель и гемоцитометр, чтобы подсчитать ускользать CD34 положительных клеток. После подсчета, центрифуга клеток на 300 раз G в течение пяти минут. Отбросьте супернатант и повторно приостановьте клетки в 125 микролитров PBS для инъекции, которая будет использоваться немедленно в трансплантации.Чтобы проверить чистоту положительного элюента CD34, возьмите 50 микролитров подвески и инкубировать его с 10 микролитров PE конъюгированных анти-человеческих антител CD34 при четырех градусах цельсия в течение 30 минут. После этого, мыть и повторно приостановить клетки в PBS и приступить к выполнять поток цитометрии. После приобретения проанализируйте данные, изложенные в текстовом протоколе.Во-первых, извлекать и оттаивать криоконсервированные гепатоциты, как указано в текстовом протоколе. Затем удалите биокамерку и вылейте размороженые гепатоциты в 50-миллилитровую коническую трубку, содержащую разогретую оттаивание среды. Рок трубки вручную в течение нескольких секунд, чтобы приостановить клетки.Пеллет клетки в 100 раз G и при комнатной температуре в течение восьми минут. Вымойте гранулы клеток в PBS с 0,1%BSA и объединить их либо со свежими или оттаяли ГЦП в PBS до конечного объема 80 микролитров на мышь. Во-первых, прикрепите один конец стерильной удлинительной трубки к игле 30 калибра, а другой конец к одному миллилитровому шприцу.Заполните шприц с подвеской объединили HEPs и HSPCs. Fit шприц в паз повторяющихся дозатора и настроить дозатор для дозирования 10 микролитров в каждом прессе. Бритье каждой мыши, как указано в текстовом протоколе и скраб левой стороне тела каждой мыши с 10%povidone йода следуют 70%изопропил алкоголя.Используя ножницы типа Vannas, сделайте небольшой разрез в коже, мышцах и брюшной полости слева от брюшной стенки, чтобы войти в брюшную полость примерно на 5 миллиметров ниже нижнего края грудной клетки. Найдите селезенку и используйте миппы, чтобы слегка вытащить ее в операционную зону для легкого доступа и вставить 30 калибровочных игл в нижний полюс селезенки. Затем разблокировать поршень дозатора пипетки и обойтись 10 микролитров объема в то время, с ограничением от 60 до 80 микролитров на селезенку.Убирайте иглу медленно и клип селезенки с лигатирование клипы с помощью перевязки applier. Затем используйте хлопчатобумажные аппликаторы, смоченные стерильным PBS, чтобы подтолкнуть селезенку обратно в полость тела. Используйте прерванный узор шва, чтобы закрыть мышечный слой брюшной стенки.Выполнить закрытие кожи с прерванной шов шаблон с использованием неаспасаемых швов. Перенесите все необходимые материалы на назначенный объект Уровня биобезопасности Two Plus. Носите личное защитное оборудование, включая одноразовую крышку все платья, бахилы, маску для лица и двойные перчатки, в том числе вырезать устойчивые перчатки, во все времена во время работы с вирусом.Выберите мышей с восстановлением более 15% положительных клеток человека CD45 и с наличием человеческого альбумин в сыворотке крови для ВИЧ-1 инфекции. Интраперитонально вводят мышам от 1000 до 10 000 тканей культуры инфекционных доз 50 ВИЧ-1 ADA в объеме от 100 до 200 микролитров на мышь. После усыпания мышей, акциз печени с каждой мыши, как указано в текстовом протоколе.Соберите и исправить печени в 4%paraformaldehyde ночь. Создание двойной гуманизированной модели мыши с человеческой печенью и иммунными клетками можно легко контролировать на каждом шагу с помощью очень простой цитометрии потока и потока, соответственно. Цитометрия потока регулярно проводится для оценки развития функциональной иммунной системы и для того, чтобы увидеть влияние ВИЧ-инфекции на иммунные клетки.У двух гуманизированных мышей развитие функциональных иммунных клеток может варьироваться от 15 до 90% лимфоцитов. Для оценки engraftment человеческих гепатоцитов, ЭЛИЗА для человека конкретных уровней альбумин выполняется ежемесячно на сыворотке мыши. Мыши, притязаемые как ГСП, так и HEPs, показывают уровни альбулина, специфичные для человека, варья от примерно семи микрограмм на миллилитр до 377 микрограмм на миллилитр в течение одного месяца, продолжая расти с течением времени наблюдения.Влияние ВИЧ-инфекции на иммунные клетки человека в крови двух гуманизированных мышей контролируется цитометрией потока и на HEPs в печени человеком-специфическим альбумином ELIZA. К пяти неделям ВИЧ-1 вызывает снижение уровня альбумин человека в сыворотке крови и истощение человека CK18 положительных гепатоцитов в печени разделов двойной гуманизированных мышей. Более низкое соотношение CD4 к CD8 обычно наблюдается в крови и печени ВИЧ-инфицированных мышей, по сравнению с уровнями, отмеченными в той же мыши перед инфекцией.Кровь должна быть слоистых тщательно на верхней части лимфоцитов разделения среды для изоляции баффи пальто. Для операции осторожно удерживайте селезенку и вставьте иглу в нижний полюс селезенки. После изоляции гематопоэтических стволовых клеток, очень важно проверить чистоту CD34 положительных гематопоэтических стволовых клеток, чтобы избежать CD3 положительных клеток и острых инъекций гепатоцитов от различных доноров.Как гуманизированных мышей показать физиологический аспект иммунной системы человека и печени, развитых мышей могут быть использованы для изучения физиопатогенеза ВИЧ и физических инфекций и цирроза печени.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

В пробирке образование биопленки в 8-и палаты слайдов

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Использование BLT Humanized мышь в качестве стволовых клеток на основе модели генной терапии опухолей

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Насекомые<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Как мощная модель инфекции по расследованию бактериального патогенеза

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Выделение, очистка и маркировки Мышь нейтрофилов костного мозга для функциональных исследований и приемных Эксперименты Трансфер

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Создание<em&gt; В пробирке</em&gt; Система по изучению внутриклеточных Поведение<em&gt; Candida glabrata</em&gt; В человека ТНР-1 макрофагов

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humanized мышь моделью для изучения Бактериальные инфекции Ориентация микрососудов

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Прижизненные изображения двух Фотон лейкоцитов во время иммунный ответ в мыши Липополисахарид лечение печени

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Гуманизированные NOD/SCID/IL2rγзначение null (hu ГЯП) мыши модель репликации ВИЧ и задержка исследований

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Ex Vivo курица первичной Bursal клеточной культуры модель для изучения патогенеза вирус инфекционного Bursal

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Оценки вирулентности и патогенез Aeromonas инфекции в Caenorhabditis elegans модели

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...