Name: establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis
Uploaded: 2019-09-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Institute of Health Grant R24OD018546 (till L.Y.P. och S.G.). Författarna vill tacka Weizhe Li, Ph.D., för hjälpen i kirurgiska ingrepp, Amanda Branch Woods, BS, Yan Cheng för immunohistology, UNMC Flow flödescytometrianalys forskningsanläggning medlemmar regissören Phillip Hexley, Ph.D., Victoria B. Smith, BS, och Samantha Wall, BS, UNMC avancerad mikroskopi Core facility medlemmar Janice A. Taylor, BS, och James R. Talaska, BS, för teknisk support. Författarna erkänner DRS. Mamoru Ito och Hiroshi Suemizu från CIEA för att tillhandahålla TK-NOG möss och Dr Joachim Baumgart för att ge treosulfläkt. Författarna tackar Dr Adrian Koesters, UNMC, för hennes redaktionella bidrag till manuskriptet.

Detta protokoll har godkänts av den institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) vid University of Nebraska Medical Center.
Anmärkning: Inhämta godkännande från den lokala IACUC innan djurförsök utförs.
1. behandling av navelsträngsblod och isolering av mänskliga HSPCs
<ol><li>Utför alla steg i protokollet under sterila förhållanden i laminärt flödes skåp.</li>
	<li>Ta navelsträngsblod (CB) samlas i hepariniserad ...

<ol>
	<li>Smith, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+specific+causes+of+death+amongst+HIV-positive+individuals+in+the+D:A:D+Study.">Factors associated with specific causes of death amongst HIV-positive individuals in the D:A:D Study.</a> AIDS. 24 (10), 1537-1548 (2010).</li><li>Puoti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+for+liver+disease+in+patients+with+HIV+infection:+a+cohort+study.">Mortality for liver disease in patients with HIV infection: a cohort study.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes. 24 (3), 211-217 (2000).</li><li>Rodriguez-Mendez, M. L., Gonzalez-Quintela, A., Aguilera, A., Barrio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence,+patterns,+and+course+of+past+hepatitis+B+virus+infection+in+intravenous+drug+users+with+HIV-1+infection.">Prevalence, patterns, and course of past hepatitis B virus infection in intravenous drug users with HIV-1 infection.</a> The American Journal of Gastroenterology. 95 (5), 1316-1322 (2000).</li><li>Scharschmidt, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+in+patients+with+HIV+infection:+relationship+to+AIDS+and+patient+survival.">Hepatitis B in patients with HIV infection: relationship to AIDS and patient survival.</a> Annals of Internal Medicine. 117 (10), 837-838 (1992).</li><li>Lacombe, K., Rockstroh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+and+viral+hepatitis+coinfections:+advances+and+challenges.">HIV and viral hepatitis coinfections: advances and challenges.</a> Gut. 61, 47-58 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Jouvet, N., Greiner, D. L., Shultz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+the+study+of+infectious+diseases.">Humanized mice for the study of infectious diseases.</a> Current Opinion in Immunology. 25 (4), 428-435 (2013).</li><li>Billerbeck, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+efficiently+engrafted+with+fetal+hepatoblasts+and+syngeneic+immune+cells+develop+human+monocytes+and+NK+cells.">Humanized mice efficiently engrafted with fetal hepatoblasts and syngeneic immune cells develop human monocytes and NK cells.</a> The Journal of Hepatology. 65 (2), 334-343 (2016).</li><li>Dagur, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocyte+depletion+in+the+presence+of+HIV-1+infection+in+dual+reconstituted+humanized+mice.">Human hepatocyte depletion in the presence of HIV-1 infection in dual reconstituted humanized mice.</a> Biology Open. 7 (2), (2018).</li><li>Gaska, J. M., Ploss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+viral+pathogenesis+in+humanized+mice.">Study of viral pathogenesis in humanized mice.</a> Current Opinion in Virology. 11, 14-20 (2015).</li><li>Gorantla, S., Poluektova, L., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+HIV-associated+neurocognitive+disorders.">Rodent models for HIV-associated neurocognitive disorders.</a> Trends in Neurosciences. 35 (3), 197-208 (2012).</li><li>Xu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+TK-NOG+mice:+a+predictive+model+for+cholestatic+human+liver+toxicity.">Chimeric TK-NOG mice: a predictive model for cholestatic human liver toxicity.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 352 (2), 274-280 (2015).</li><li>Washburn, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+humanized+mouse+model+to+study+hepatitis+C+virus+infection,+immune+response,+and+liver+disease.">A humanized mouse model to study hepatitis C virus infection, immune response, and liver disease.</a> Gastroenterology. 140 (4), 1334-1344 (2011).</li><li>Gutti, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatocytes+and+hematolymphoid+dual+reconstitution+in+treosulfan-conditioned+uPA-NOG+mice.">Human hepatocytes and hematolymphoid dual reconstitution in treosulfan-conditioned uPA-NOG mice.</a> The American Journal of Pathology. 184 (1), 101-109 (2014).</li><li>Strick-Marchand, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+stable+engraftment+of+a+human+immune+system+and+human+hepatocytes.">A novel mouse model for stable engraftment of a human immune system and human hepatocytes.</a> PLoS One. 10 (3), 0119820 (2015).</li><li>Keng, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+liver+pathogenesis,+human+immune+responses+and+drug+testing+in+a+humanised+mouse+model+of+HCV+infection.">Characterisation of liver pathogenesis, human immune responses and drug testing in a humanised mouse model of HCV infection.</a> Gut. 65 (10), 1744-1753 (2016).</li><li>Li, F., Nio, K., Yasui, F., Murphy, C. M., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+HBV+Infection+and+Therapy+in+Immune-Deficient+NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null+(NRG)+Fumarylacetoacetate+Hydrolase+(Fah)+Knockout+Mice+Transplanted+with+Human+Hepatocytes.">Studying HBV Infection and Therapy in Immune-Deficient NOD-Rag1-/-IL2RgammaC-null (NRG) Fumarylacetoacetate Hydrolase (Fah) Knockout Mice Transplanted with Human Hepatocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 1540, 267-276 (2017).</li><li>Poluektova, L. Y., Garcia, J. V., Koyanagi, Y., Manz, M. G., Tager, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Humanized Mice for HIV Research. , (2014).</li><li>Cheng, L., Ma, J., Li, G., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+Engrafted+With+Human+HSC+Only+or+HSC+and+Thymus+Support+Comparable+HIV-1+Replication,+Immunopathology,+and+Responses+to+ART+and+Immune+Therapy.">Humanized Mice Engrafted With Human HSC Only or HSC and Thymus Support Comparable HIV-1 Replication, Immunopathology, and Responses to ART and Immune Therapy.</a> Frontiers in Immunology. 9, 817 (2018).</li><li>Zhang, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+immunopathogenesis+in+humanized+mouse+models.">HIV-1 immunopathogenesis in humanized mouse models.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 9 (3), 237-244 (2012).</li><li>Nunoya, J., Washburn, M. L., Kovalev, G. I., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+prevent+liver+fibrosis+during+HIV+type+1+infection+in+a+humanized+mouse+model.">Regulatory T cells prevent liver fibrosis during HIV type 1 infection in a humanized mouse model.</a> The Journal of Infectious Diseases. 209 (7), 1039-1044 (2014).</li><li>Hasegawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reconstituted+'humanized+liver'+in+TK-NOG+mice+is+mature+and+functional.">The reconstituted 'humanized liver' in TK-NOG mice is mature and functional.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 405 (3), 405-410 (2011).</li><li>Higuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+hepatic+cell+line+HepaRG+as+a+possible+cell+source+for+the+generation+of+humanized+liver+TK-NOG+mice.">The human hepatic cell line HepaRG as a possible cell source for the generation of humanized liver TK-NOG mice.</a> Xenobiotica. 44 (2), 146-153 (2014).</li><li>Kosaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+TK-NOG+based+humanized+mouse+model+for+the+study+of+HBV+and+HCV+infections.">A novel TK-NOG based humanized mouse model for the study of HBV and HCV infections.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 441 (1), 230-235 (2013).</li><li>Crane, M., Iser, D., Lewin, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immunodeficiency+virus+infection+and+the+liver.">Human immunodeficiency virus infection and the liver.</a> World Journal of Hepatology. 4 (3), 91-98 (2012).</li><li>Bility, M. T., Li, F., Cheng, L., Su, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+immune-pathogenesis+and+therapy+of+human+liver+tropic+virus+infection+in+humanized+mouse+models.">Liver immune-pathogenesis and therapy of human liver tropic virus infection in humanized mouse models.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28, 120-124 (2013).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+HIV+infection+of+hepatocytes.">Low-level HIV infection of hepatocytes.</a> Virology Journal. 9, 1-7 (2012).</li><li>Dash, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-acting+nanoformulated+antiretroviral+therapy+elicits+potent+antiretroviral+and+neuroprotective+responses+in+HIV-1-infected+humanized+mice.">Long-acting nanoformulated antiretroviral therapy elicits potent antiretroviral and neuroprotective responses in HIV-1-infected humanized mice.</a> AIDS. 26 (17), 2135-2144 (2012).</li><li>Sun, S., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+chimeric+mouse+models+of+hepatitis+B+virus+infection.">Humanized chimeric mouse models of hepatitis B virus infection.</a> International Journal of Infectious Diseases. 59, 131-136 (2017).</li><li>Shafritz, D. A., Oertel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+and+experimental+conditions+that+lead+to+effective+repopulation+of+the+liver+by+transplanted+cells.">Model systems and experimental conditions that lead to effective repopulation of the liver by transplanted cells.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 43 (2), 198-213 (2011).</li><li>Almeida-Porada, G., Porada, C. D., Chamberlain, J., Torabi, A., Zanjani, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+human+hepatocytes+by+human+hematopoietic+stem+cells+in+sheep.">Formation of human hepatocytes by human hematopoietic stem cells in sheep.</a> Blood. 104 (8), 2582-2590 (2004).</li><li>Streetz, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+parenchymal+replacement+in+mice+by+transplanted+allogeneic+hepatocytes+is+facilitated+by+bone+marrow+transplantation+and+mediated+by+CD4+cells.">Hepatic parenchymal replacement in mice by transplanted allogeneic hepatocytes is facilitated by bone marrow transplantation and mediated by CD4 cells.</a> Hepatology. 47 (2), 706-718 (2008).</li></ol>

Levern äventyras och skadas hos HIV-infekterade patienter24. Experimentella små djurmodeller för att studera mänskliga leversjukdomar i närvaro av HIV-1 är extremt begränsad, trots tillgängligheten av några cotransplanted djurmodeller med CD34+ hspcs och hepatocyter7,12, 25. I in vitro-experiment, hepatocyter visas ha låg nivå HIV-1-infektion26. Humaniserade ...

Sedan tillkomsten av antiretroviral terapi, det har skett en betydande minskning av dödsfall i samband med HIV-1-monoinfektion. Emellertid, leversjukdom har uppstått som en vanlig orsak till sjuklighet hos hiv-infekterade patienter1,2. Infektioner av hepatitvirus med hiv-1-infektion är vanligare, står för 10%-30% av hiv-infekterade personer i USA3,4,5.
Värd-specificiteten av HIV-1 och hepatitvirus begränsar nyttan av små djurmodeller för att studera människospecifika infektionssjukdomar eller för att undersöka flera aspekter av HIV-1-associerad leverpatogenes. Möss med nedsatt immunförsvar som möjliggör en inympelse av mänskliga celler och/eller vävnader (s.k. humaniserade musmodeller) är acceptabla djurmodeller för prekliniska studier6,7,8. Sedan introduktionen av humaniserade möss i början av 2000-talet, flera prekliniska studier av kolestatisk Human levertoxicitet, Human-specifika patogener, inklusive HIV-1 och HIV-associerade neurokognitiva störningar, Epstein Barr-virus, hepatit och andra infektionssjukdomar, har undersökts i dessa möss6,9,10,11. Flera musmodeller för CD34+ hspcs och/eller Human hepatocyte transplantation har länge utvecklats och har förbättrats med tiden för att studera sjukdomens patogenes av hepatit B-virus (HBV)-associerad leversjukdom12, 13 , 14. flera modeller för HSPC och Human hepatocyte (HEP) transplantation baseras på stammar, känd som nog (nod. CG-prkdcscid Il2rgtm1Sug/jictac)8,13, NSG (nod. CG-prkdcscid Il2rgtm1Wjl/szj)15, Balb/C-Rag2-/- c-/- (Rag2TM 1.1 FLV Il2rgTM 1.1 FLV/j)12, och Fah-/- nod rag1-/- il2rγnull mus16. Men varje modell har sina egna fördelar och begränsningar; till exempel AFC8 dubbla humaniserade möss för heps och mänskliga stamceller (hscs) på en Balb/C-Rag2-/- c-/- bakgrund möjliggör en lyckad inympelse av immunceller och hscs, men det finns en avsaknad av en antigen-specifik T-och B-cell svar i denna modell12. Den stora oro för beredning av dubbla humaniserade möss inkluderar suboptimala engrafations, en brist på lämpliga modeller för att stödja olika vävnader, avvikande villkor, immun avvisande, eller graft-Versus-host sjukdom (GVHD), och tekniska svårigheter, såsom riskfyllda manipulationer med nyfödda och hög dödlighet på grund av metabola avvikelser13.
Även humaniserade möss har använts för hiv-forskning för många år17,18,19, användning av humaniserade möss för att studera leverskador orsakade av hiv-1 har varit begränsad20. Vi rapporterade tidigare inrättandet av en dubbel humaniserad TK-NOG musmodell och dess tillämpning i HIV-associerad leversjukdom8. Denna modell visar robust inympelse av lever och immunceller och recapitulates HIV-infektion patogenes. Denna diskussion presenterar ett detaljerat protokoll, inklusive de mest kritiska stegen i transplantation av humana hepatocyter. En beskrivning av HSPCs krävs för en lyckad inympningen av HEPs och inrättandet av ett funktionellt immunförsvar i TK-NOG möss presenteras också. Användningen av dessa möss för att studera HIV-associerad lever immunopathogenes är detaljerad. TK-nog manliga möss som transporterar en leverspecifik herpes simplex virus typ 1 tymidin Kinas (HSV-tk) transgenens används. Mus leverceller som uttrycker denna transgenens kan lätt ableras efter en kort exponering för en giftfri dos av GCV. Transplanterade humana leverceller upprätthålls stabilt inom musen levern utan EXOGEN droger21. Mössen är också konditionerade med nonmyeloablativa doser av treosulfläkt att skapa en nisch i musen benmärg för mänskliga celler8. Immunobristfällig TK-NOG möss är intrasplenically injiceras med HEPs och multipotenta HSPCs. Mössen övervakas sedan regelbundet för blod-och lever beredning genom immunophenotypning av blod och mätningar av Human-albuminnivåer i serum. Möss med en lyckad beredning av mer än 15% för både humana immunceller och HEPs är intraperitonealt injiceras med HIV-1. Effekten av HIV på levern kan bedömas så tidigt som 4-5 veckor efter infektion. Det är viktigt att notera att, eftersom HIV-1 används, alla nödvändiga försiktighetsåtgärder måste vidtas vid hantering av viruset och injicera det i möss.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:553px;" width="552">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">27G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305109</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="72">
			<td height="72" style="height:72px;width:125px;">30G1/2&#34; needles</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">5 mL polystyrene&#160; round-bottom tube 12 x 75 mm style</td>
			<td style="width:135px;">Corning</td>
			<td style="width:127px;">352054</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">BD 1 mL Tuberculin Syringe Without Needle</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS array bioanalyzer&#160;</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">For purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">BD FACS array software</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Software to analysis acquired CD34+ cell on FACS array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">BD FACS lysing solution</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">349202</td>
			<td style="width:167px;">To lyse red blood cells</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD LSR II</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument for acquisiton of flow cytometry samples</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">BD&#160;Vacutainer Plastic Blood Collection Tube</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">BD 367874</td>
			<td style="width:167px;">To collect Cord blood</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Bovine Serum Albumin&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">A9576</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Controlled substance and pain-killer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD14-PE</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555398</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD19-BV605</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562653</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:125px;">CD34 MicroBead Kit, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-046-702</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; CD34+ HSPC</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">CD34-PE, human</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-081-002</td>
			<td style="width:167px;">Antibody used for purity check of eluted CD34+ cells&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD3-AF700</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">557943</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD45-PerCPCy5.5</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">564105</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD4-APC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">555349</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">CD8-BV421</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">562428</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cell counting slides</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">ChargeSwitch gDNA Mini Tissue Kit</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">CS11204</td>
			<td style="width:167px;">for extraction of genomic DNA from ear piece</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cobas Amplicor system v1.5&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Roche Molecular Diagnostics</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">bioanalyzer to measure viral load</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cotton-tipped applicators&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;McKesson</td>
			<td style="width:127px;">24-106-2S</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Cytokeratin-18 (CK18)</td>
			<td style="width:135px;">DAKO</td>
			<td style="width:127px;">M7010</td>
			<td style="width:167px;">Specific to human</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td>
			<td style="width:135px;">Sigma-aldrich</td>
			<td style="width:127px;">D2650-5X5ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:125px;">Extension set Microbore Slide Clamp(s) Fixed Male Luer Lock. L: 60 in L: 152 cm PV: 0.55 mL Fluid Path Sterile</td>
			<td style="width:135px;">BD biosciences</td>
			<td style="width:127px;">30914</td>
			<td style="width:167px;">Attached to dispensing pippet and to load with HSPC and HEP suspesion</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FACS Diva version 6</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometer software required for&#160; acqusition of sample</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">10438026</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">FLOWJO analysis software 
			v10.2</td>
			<td style="width:135px;">FLOWJO, LLC</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">flow cytometry analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Ganciclovir</td>
			<td style="width:135px;">APP Pharmaceuticals, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">315110</td>
			<td style="width:167px;">Prescripition drug</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Greiner MiniCollect EDTA Tubes</td>
			<td style="width:135px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:127px;">450475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Hepatocytes thawing medium&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">MCHT50</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Horizon Open Ligating Clip Appliers</td>
			<td style="width:135px;">Teleflex</td>
			<td style="width:127px;">537061</td>
			<td style="width:167px;">To hold the ligating clips</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Hospira Sterile Water for Injection</td>
			<td style="width:135px;">ACE surgical supply co. Inc.</td>
			<td style="width:127px;">001-1187</td>
			<td style="width:167px;">For dilution of Buprenorphine (pain-killer)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human Albumin ELISA Quantitation Set</td>
			<td style="width:135px;">Bethyl laboratories</td>
			<td style="width:127px;">E80-129</td>
			<td style="width:167px;">For assesing human albumin levels in mouse serum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Human hepatocyte</td>
			<td style="width:135px;">Triangle Research Labs&#160;</td>
			<td style="width:127px;">HUCP1</td>
			<td style="width:167px;">&#160;Cryopreserved human hepatocytes, induction qualified&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Iris Scissors, Straight</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">13295</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Lancet</td>
			<td style="width:135px;">MEDIpoint</td>
			<td style="width:127px;">Goldenrod 5 mm</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:125px;">LS columns&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-401</td>
			<td style="width:167px;">Used to entrap CD34+ microbeads (positive selection)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Lymphocyte Separation Medium (LSM)</td>
			<td style="width:135px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:127px;">50494</td>
			<td style="width:167px;">For isoation of&#160;&#160; lymphocytes from peripheral blood</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-042-303</td>
			<td style="width:167px;">holds Qudro MACS seperator and LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">McPherson-Vannas Micro Dissecting Spring Scissors</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5605</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Micro Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:135px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:127px;">RS-5157&#160;</td>
			<td style="width:167px;">to hold and pull out spleen from peritoneal cavity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">mouse CD45-FITC</td>
			<td style="width:135px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">553080</td>
			<td style="width:167px;">mouse-specific</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">PBS (Phosphate Buffered Saline)</td>
			<td style="width:135px;">Hyclone</td>
			<td style="width:127px;">SH30256.02</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">Qudro MACS separator&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Miltenyi Biotec</td>
			<td style="width:127px;">130-090-976</td>
			<td style="width:167px;">holds four LS columns</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:135px;">Gibco</td>
			<td style="width:127px;">11875093</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">StepOne Plus Real Time PCR&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Instrument used&#160; to&#160; genotype</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Stepper Series Repetitive Dispensing Pipette 1ml</td>
			<td style="width:135px;">DYMAX CORP</td>
			<td style="width:127px;">T15469</td>
			<td style="width:167px;">Used to&#160; dispense&#160; HSPC and HEP supension in controlled manner</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Suturevet PGA synthetic absorbale suture</td>
			<td style="width:135px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:127px;">41178</td>
			<td style="width:167px;">Suturing of skin and peritoneum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">TaqMan Gene Expression Master Mix</td>
			<td style="width:135px;">Thermofisher scientific</td>
			<td style="width:127px;">4369016</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:125px;">TC20 automated cell counter</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450102</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:125px;">TK-NOG mice&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by the Central Institute for Experimental Animals (CIEA, Japan; Drs. Mamoru Ito and Hiroshi Suemizu)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Treosulfan</td>
			<td style="width:135px;">Medac GmbH</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:167px;">Provided by &#160;Dr. Joachim Baumgart (medac GmbH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:125px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:135px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:127px;">1450022</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:125px;">Vannas-type Micro Scissors, Straight, 80mm L</td>
			<td style="width:135px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:127px;">1346</td>
			<td style="width:167px;">Used to make an incision on skin to expose spleen</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:125px;">Weck hemoclip traditional titanium ligating clips</td>
			<td style="width:135px;">Esutures</td>
			<td style="width:127px;">523700</td>
			<td style="width:167px;">To ligate the spleen post-injection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of the dual humanized tk-nog mouse model for hiv-associated liver pathogenesis

Trots den ökade livslängden hos patienter infekterade med humant immunbristvirus-1 (HIV-1), leversjukdom har uppstått som en vanlig orsak till deras sjuklighet. Levern immunopatologi orsakad av HIV-1 förblir svårfångade. Små xenograft djurmodeller med mänskliga hepatocyter och humant immunförsvar kan recapitulate människans biologi av sjukdomens patogenes. Häri, ett protokoll beskrivs för att etablera en dubbel humaniserad musmodell genom mänskliga hepatocyter och CD34+ hematopoietiska Stem/progenitorceller (HSPCs) transplantation, att studera leverimmunopatologi som OBSERVERATS hos hiv-infekterade patienter. För att uppnå dubbel beredning, manliga TK-NOG (NOD. CG-Prkdcscid Il2rgtm1Sug TG (ALB-tk) 7-2/shijic) möss injiceras intraperitonealt med ganciklovir (GCV) doser för att eliminera mus transgena leverceller, och med treosulfläkt för nonmyeloablativ konditionering, som båda underlätta humana hepatocyte (HEP) inympningoch människans immunsystem (hans) utveckling. Humant albumin (ALB) nivåer utvärderas för levertransplantation, och närvaron av mänskliga immunceller i blodet upptäcks av flödescytometri bekräftar inrättandet av människans immunsystem. Den modell som utvecklats med hjälp av det protokoll som beskrivs här liknar flera komponenter av leverskador från HIV-1-infektion. Dess etablering kan visa sig vara avgörande för studier av samtidig hepatitvirus-infektion och för utvärdering av antivirala och antiretrovirala läkemedel.

Inrättandet av en dubbel humaniserad musmodell med mänskliga levern och immunceller kan lätt övervakas vid varje steg med mycket enkel ELISA och flödescytometri, respektive. Flödescytometri utförs regelbundet för att utvärdera utvecklingen av ett funktionellt immunsystem och för att se effekten av HIV-infektion på immunceller. I dubbla humaniserade möss, utveckling av funktionella immunceller kan variera från 15% till 90% av lymfocytgrinden. Representativa undergrupper av imm...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis at JoVE.com

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Detta protokoll ger en tillförlitlig metod för att etablera humaniserade möss med både människans immunsystem och leverceller. Dubbla, rekonstituerade, immunotillräckliga möss som erhålls via intrasplenic injektion av humana hepatocyter och CD34+ hematopoietiska stamceller är mottagliga för humant immunbristvirus-1 infektion och recapitulate leverskada som observerats i HIV-infekterade patienter.

Inrättande av Dual humanized TK-NOG musmodell för HIV-associerad lever patogenes

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Det övergripande syftet med protokollet är att generera en humaniserad musmodell med funktionellt humant immunsystem och lever med hjälp av mänskliga hematopoetiska stamceller och hepatoplats. Denna metod kan hjälpa till att svara på viktiga frågor i genetisk lever humaniserade möss. Denna metod ger ett kraftfullt verktyg för att studera immunopathology orsakas av HIV som observerats hos människor.Demonstrera processen kommer att vara av Yimin Sun, en handledare från patologi och mikrobiologi avdelning, tillsammans med Weimin Wang och Edwrd Makarov, forskningsteknolog. Till att börja, överföra navelsträngsblod som samlats i hepariniserade rör till ett sterilt laminär flödesskåp. Lägg till PBS tills volymen ökas till 35 milliliter.Skikt provet ovanpå lymfocytseparation medium och centrifug det 400 gånger G och vid fyra grader celsius i 35 minuter utan raster. Därefter försiktigt bort det översta plasmaskiktet och använd en överföringspipett för att överföra det vita buffy coat-gränssnittet till ett nytt rör. Återuppstäng buffy pälsen i 30 till 40 milliliter iskall buffert.Med hjälp av en pipett, kombinera 20 mikroliter av cellen suspension med 20 mikroliter av 0,4%trypan blå. Pipett 10 mikroliter av denna blandning i den yttre öppningen av någon av de två kamrarna i en räknande bild, och sätt in bilden i en automatiserad cellräknare för att räkna cellerna. Centrifugera cellerna vid 300 gånger G och vid fyra grader celsius i 10 minuter.Aspirera försiktigt supernatanten och tillsätt 300 mikroliter iskall buffert. Lägg till 100 mikroliter av humant FC-receptorn blockerande reagens och 100 mikroliter av monoklonala mus anti-mänskliga CD34 antikropp konjugerade MicroBeads för upp till 100 miljoner celler. Inkubera i 30 minuter vid fyra grader celsius.Tillsätt 10 milliliter iskall buffert för att tvätta cellerna och centrifug det 300 gånger G och fyra grader celsius i 10 minuter. Ta försiktigt bort supernatanten och dra upp pelleten på ny tid i 500 mikroliter iskall buffert. Efter detta, placera en positiv markering LS kolumn i den magnetiska aktiverade cell sortering fält och passera den igenom med tre milliliter iskall buffert.Ladda provet i LS-kolonnen som kan snärja MicroBeads bundna till mänskliga CD34 positiva celler i prover, och låt det flöda under påverkan av gravitationen i uppsamlingsröret. Tvätta kolonnen tre gånger med iskall buffert och samla eluenten i samma uppsamlingsrör. Sedan, störta kolumnen med fem milliliter iskall buffert för att anspela på CD34 positiva celler i en ny samling röret.Upprepa proceduren för att uppnå en renhet på över 90%Nästa, använd trypan blå färgämne och en hemocytometer för att räkna de gäckade CD34 positiva cellerna. Efter räkning centrifug cellerna vid 300 gånger G i fem minuter. Kassera supernatanten och åter upphäva cellerna i 125 mikroliter pbs för en injektion som ska användas omedelbart vid transplantation.För att kontrollera renheten hos CD34-positiva eluent, ta 50 mikroliter av suspensionen och inkubera den med 10 mikroliter pe konjugerad anti-human CD34 antikropp vid fyra grader celsius i 30 minuter. Efter detta, tvätta och åter avbryta cellerna i PBS och fortsätta att utföra flödescytometri. Efter förvärvet analyserar du data som beskrivs i textprotokollet.Först hämta och tina cryopreserved hepatocyterna som beskrivs i textprotokollet. Sedan, ta bort bio locket och häll tinade hepatocyter i en 50 milliliter koniska röret som innehåller värms upptining medium. Rocka röret för hand i några sekunder för att upphäva cellerna.Pellet cellerna på 100 gånger G och vid rumstemperatur i åtta minuter. Tvätta de pelleterade cellerna i PBS med 0,1%BSA och poola dem med antingen färska eller upptinade HSPCs i PBS till en slutlig volym på 80 mikroliter per mus. Först, fäst ena änden av ett sterilt förlängningsrör till en 30 gauge nål och den andra änden till en milliliter spruta.Fyll sprutan med suspensionen av poolade HEPs och HSPCs. Montera sprutan i skåran på en repetitiv dispenseringspipett och justera dispenseraren så att den doserar 10 mikroliter i varje tryck. Raka varje mus som beskrivs i textprotokollet och skrubba den vänstra sidan av kroppen av varje mus med 10%povidone jod följt 70%isopropyl alkohol.Använda Vannas typ sax, göra ett litet snitt i huden, muskel och bukhinnan till vänster om peritonealväggen för att komma in i bukhinnan håligheten cirka 5 millimeter under den nedre kanten av bröstkorgen. Lokalisera mjälten och använd forceps för att dra den en aning till driftområdet för enkel åtkomst och sätt in 30 gauge-nålen i den nedre polen på mjälten. Därefter låser du upp kolven på dispenseringspipetten och doserar 10 mikroliter av volymen åt gången, med en gräns på 60 till 80 mikroliter per mjälte.Dra tillbaka nålen långsamt och klipp fast mjälten med ligerande clips med hjälp av en ligatur applier. Använd sedan bomullsspetsade applikatorer som fuktats med steril PBS för att trycka tillbaka mjälten i kroppshålan. Använd ett avbrutet suturmönster för att stänga muskellagret i bukväggen.Åstadkomma hudförslutning med ett avbrutet suturmönster med hjälp av icke-resorberbara suturer. Överför allt material som behövs till en utsedd Biosafety Level Two Plus-anläggning. Använd personlig skyddsutrustning inklusive en engångsomslag till alla klänningar, skoskydd, en ansiktsmask och dubbla handskar, inklusive skärresistenta handskar, hela tiden när du arbetar med viruset.Välj möss med en rekonstitution av mer än 15%av mänskliga CD45 positiva celler och med en närvaro av mänskliga albumin i serumet för HIV-1 infektion. Intraperitoneally injicera mössen med 1, 000 till 10, 000 vävnadskultur infektiösa doser av 50 HIV-1 ADA i en volym av 100 till 200 mikroliter per mus. Efter att ha avlivat mössen, punktskatt levern från varje mus som beskrivs i textprotokollet.Samla in och fixa lever i 4%paraformaldehyd över natten. Upprättandet av en dubbel humaniserad musmodell med human lever och immunceller kan enkelt övervakas vid varje steg med mycket enkel ELIZA respektive flödescytometri. Flödescytometri utförs regelbundet för att utvärdera utvecklingen av ett funktionellt immunsystem och för att se effekten av HIV-infektion på immunceller.I dubbla humaniserade möss kan utvecklingen av funktionella immunceller variera från 15 till 90%av lymfocytporten. För utvärdering av engraftment av mänskliga hepatocyter, ELIZA för human-specifika albumin nivåer utförs varje månad på mus serum. Möss engrafted med både HSPCs och HEPs visar mänskliga-specifika albumin nivåer som sträcker sig från cirka sju mikrogram per milliliter till 377 mikrogram per milliliter på en månad, fortsätter växa under tiden för observation.Hiv-infektionens effekt på humana immunceller i blodet hos dubbla humaniserade möss övervakas av flödescytometri och på HEPs i levern av humanspecifikt albumin ELIZA. Genom fem veckor, hiv-1 orsakar en minskning av mänskliga albumin nivåer i serum och det finns en utarmning av mänskliga CK18 positiva hepatocyter i levern avsnitten av dubbla humaniserade möss. En lägre ratio av CD4 till CD8 observeras vanligtvis i blod och lever av HIV-infekterade möss, jämfört med nivåer som noterats i samma mus före infektion.Blod bör skiktas försiktigt ovanpå lymfocytseparationsmedel för isoleringar av buffy coat. För operationen, håll mjälten försiktigt och sätt in nålen i nedre polen av mjälten. Efter isoleringen av hematopoitiska stamceller är det avgörande att kontrollera renheten hos CD34 positiva hematopoitiska stamceller för att undvika CD3 positiva celler och akuta injektioner av hepatocyter från olika givare.Som humaniserade möss visar fysiologiska aspekten av människans immunförsvar och lever, de utvecklade mössen skulle kunna utnyttjas för att studera physiopathogenesis av HIV och fysiska infektioner och cirros.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro biofilm bildning i en 8-brunnars avdelningen Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Använda BLT Humaniserad Pigg som en stamcell baserad genterapi tumörmodell

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Insekten<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftfull infektion modell för att undersöka bakteriell patogenes

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Isolering, rening och märkning av benmärg hos möss Neutrofiler för funktionella studier och adoptivföräldrar Experimentera Transfer

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Inrättande av en<em&gt; In vitro</em&gt; System för att studera intracellulära Beteende<em&gt; Candida glabrata</em&gt; I Human THP-1 makrofager

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humaniserad musmodell för att studera bakterieinfektioner Inriktning mikrovaskulaturen

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Två-foton Intravital avbildning av leukocyter under immunsvaret i lipopolysackarid-behandlade mus lever

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humaniserad nicka/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) mus modell för hivreplikation och latens studier

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

En Ex Vivo kyckling primära Bursal-cellkultur modell att studera Bursal infektionssjukdom Virus patogenes

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Utvärderande virulens och patogenesen av Aeromonas infektion i Caenorhabditis elegans modell

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...