Name: nerve stem cell differentiation by a one-step cold atmospheric plasma treatment in vitro
Uploaded: 2019-01-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nerve Stem Cell Differentiation by a One-step Cold Atmospheric Plasma Treatment In Vitro at JoVE.com

Bu eser Huazhong Akademik Program, Huazhong Üniversitesi bilim ve teknoloji (No. 2018KFYYXJJ071) ve Ulusal Doğa Bilimleri Foundation of China (NOS 31501099 ve 51707012) bağımsız yenilik Fonu tarafından desteklenmiştir.

1. hücre kültürleri ve Predifferentiation
<ol><li>
Nöral kök hücre kültür ve predifferentiation
	<ol>
<li>Poli-D-lizin-kaplı coverslips hazırlayın. Steril coverslip (20 mm çapında) 12-şey plaka koymak. Poli-D-lizin, % 0,1 w/v, su (Malzemeler tablo) ile kapak cam coverslips üzerinde daha iyi hücre adezyon için sonraki adımları izleyerek kat. Not: Her hücre kültürünü ve uygulama için en uygun koşulları belirlenmelidir.<ol>
<li>Aseptik poli-D-lizin, % 0,1 w/v...

<ol>
	<li>Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+neural+stem+cells.">The development of neural stem cells.</a> Nature. 414 (6859), 112-117 (2001).</li><li>Rossi, F., Cattaneo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cell+therapy+for+neurological+diseases:+dreams+and+reality.">Neural stem cell therapy for neurological diseases: dreams and reality.</a> Nature Reviews Neuroscience. 3 (5), 401-409 (2002).</li><li>Graves, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+redox+biology+and+some+implications+for+plasma+applications+to+medicine+and+biology.">The emerging role of reactive oxygen and nitrogen species in redox biology and some implications for plasma applications to medicine and biology.</a> Journal of Physics D: Applied Physics. 45 (26), 263001 (2012).</li><li>Weltmann, K. D., von Woedtke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+medicine-current+state+of+research+and+medical+application.">Plasma medicine-current state of research and medical application.</a> Plasma Physics and Controlled Fusion. 59 (1), 014031 (2017).</li><li>Lloyd, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas+Plasma:+Medical+Uses+and+Developments+in+Wound+Care.">Gas Plasma: Medical Uses and Developments in Wound Care.</a> Plasma Processes and Polymers. 7 (3-4), 194-211 (2010).</li><li>Yousfi, M., Merbahi, N., Pathak, A., Eichwald, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+plasmas+at+atmospheric+pressure:+toward+new+pharmaceutical+treatments+in+medicine.">Low-temperature plasmas at atmospheric pressure: toward new pharmaceutical treatments in medicine.</a> Fundamental &amp; Clinical Pharmacology. 28 (2), 123-135 (2014).</li><li>Xiong, Z., Roe, J., Grammer, T. C., Graves, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+Treatment+of+Onychomycosis.">Plasma Treatment of Onychomycosis.</a> Plasma Processes and Polymers. 13 (6), 588-597 (2016).</li><li>Xiong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+neuronal+differentiation+of+neural+stem+cells+induced+by+nanosecond+microplasma+agitation.">Selective neuronal differentiation of neural stem cells induced by nanosecond microplasma agitation.</a> Stem Cell Research. 12 (2), 387-399 (2014).</li><li>Xie, Z., Zheng, Q., Guo, X., Yi, C., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+Culture+and+Identification+of+Neural+Stem+Cells+in+New-born+Rats.">Isolation, Culture and Identification of Neural Stem Cells in New-born Rats.</a> Journal of Huazhong University of Science and Technology. [Med Sci]. 23 (2), 75-78 (2003).</li><li>Ryder, E. F., Snyder, E. Y., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+multipotent+neural+cell+lines+using+retrovirus+vector-mediated+oncogene+transfer.">Establishment and characterization of multipotent neural cell lines using retrovirus vector-mediated oncogene transfer.</a> Journal of Neurobiology. 21 (2), 356-375 (1990).</li><li>Snyder, E. Y., Taylor, R. M., Wolfe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitor+cell+engraftment+corrects+lysosomal+storage+throughout+the+MRS+VII+mouse+brain.">Neural progenitor cell engraftment corrects lysosomal storage throughout the MRS VII mouse brain.</a> Nature. 374 (6520), 367-370 (1995).</li><li>Snyder, E. Y., Yoon, C., Flax, J. D., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+neural+precursors+can+differentiate+toward+replacement+of+neurons+undergoing+targeted+apoptotic+degeneration+in+adult+mouse+neocortex.">Multipotent neural precursors can differentiate toward replacement of neurons undergoing targeted apoptotic degeneration in adult mouse neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94 (21), 11663-11668 (1997).</li><li>Jamur, M. C., Oliver, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Fixatives+for+Immunostaining.">Cell Fixatives for Immunostaining.</a> Methods in Molecular Biology. 588, 55-61 (2010).</li><li>Jamur, M. C., Oliver, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+Cell+Membranes.">Permeabilization of Cell Membranes.</a> Methods in Molecular Biology. 588, 63-66 (2010).</li></ol>

C17.2-NSCs olan bir tür ölümsüzleştirdi nöral kök hücre satırı yenidoğan fare serebellar taneli katman hücrelerden, Snyder ve diğerleri tarafından geliştirilen10,11. C17.2-NSCs nöronlar, astrocytes ve oligodendrocytes ayırabilir ve nörolojik12' yaygın olarak kullanılmaktadır. Bizim önceki çalışmada, CAPs C17.2-NSCs farklılaşma nöronların içine geliştirmek. Bir kanıt prensibi çalışma da birincil fare NSCs ...

NSCs yönlendirilmiş farklılaşma doku ulaşım için belirli bir soy içine nörodejeneratif ve neurotraumatic hastalıkları1için en umut verici tedavilerin biri olarak kabul edilir. Örneğin, catecholaminergic dopaminerjik nöron özellikle Parkinson hastalığı (PD) tedavisinde istenen. Ancak, istediğiniz hücreleri taşıma için hazırlamak için geleneksel yöntemlerle kimyasal toksisitesi, yara oluşumu veya büyük ölçüde engellemektedir rejeneratif tıp2NSCs uygulamalarda diğerleri gibi birçok sakıncaları vardır. Bu nedenle, bir roman ve güvenli bir şekilde NSC farklılaşma için bulmak çok gereklidir.
Plazma konularda, aşağıdaki katı, sıvı ve gaz dördüncü durumudur ve bu konularda tüm evrenin % 95'den fazla teşkil eder. Plazma ilişkisiz pozitif/negatif ve tarafsız parçacıkları ile elektriksel olarak nötr ve genellikle yüksek gerilim deşarj Lab tarafından oluşturulur. Son yirmi yılda, biyomedikal plazmada uygulanması soğuk atmosferik basınç plazma teknoloji geliştirme dünya çapında büyük dikkat çekti. Bu teknik sayesinde istikrarlı düşük sıcaklık plazma ark oluşumu olmadan atmosferi çevreleyen havasında oluşturulacak ve reaktif nitrojen türler (RNS), reaktif oksijen türleri (ROS), ultraviyole (UV) gibi çeşitli reaktif türler oluşur radyasyon, elektronlar, iyonlar ve elektrik alanı3. Kapaklar mikro-organizma inactivation, kanser tedavisi, yara iyileşmesi, cilt hastalıkları, hücre çoğalması ve hücre farklılaşması4,5,6,7tedavisi için benzersiz avantajları vardır. Önceki çalışmalarda, biz soğuk atmosferik plazma jet NSCs farklılaşma fare nöral kök hücre C17.2 (C17.2-NSCs) ve birincil sıçan nöral kök hücrelerin, geliştirebilirsiniz yönettiği için güçlü bir araç olmak için büyük bir potansiyele sergilenmesi gösterdi NSCs8farklılaşma. CAP geliştirme NSC farklılaşma mekanizması henüz tam olarak anlaşılmaktadır değil, ancak Hayır kapaklar tarafından oluşturulan sürecinde önemli bir faktör olduğu ortaya çıktı. Bu çalışmada, biz bir atmosfer basıncı helyum/oksijen plazma jeti NSCs vitro, hücre hazırlık ve Önarıtma, morfoloji gözlem tarafından ters mikroskop, tedavisi için kullanmanın ayrıntılı bir deneysel protokol sağlamayı amaçlamaktadır ve floresans mikroskobu gözlem ayirt boyama.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Coverslip</td>
			<td style="width:123px;">NEST</td>
			<td style="width:344px;">801008</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Poly-D-lysine</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM medium</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30022.01B</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM/F12 medium</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30023.01B</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">N2 supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td>stored at -20 &#176;C and protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">B27 supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td>stored at -20 &#176;C and protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30084.03</td>
			<td>stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Donor Horse serum</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30074.03</td>
			<td>tored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>25300054</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PBS solution</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30256.01B</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">4% paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0098</td>
			<td>stored at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">TritonX-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Normal Goat Serum Blocking Solution</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>S-1000-20</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">anti-Nestin</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>AF2215</td>
			<td>stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">anti-&#946;-Tubulin III</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T2200</td>
			<td>stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">anti-O4</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB1326</td>
			<td>stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">anti-NF200</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">anti-ChAT</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">anti- LHX3</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">anti-GABA</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">anti-Serotonin</td>
			<td style="width:123px;">Abcam, Cambridge, MA</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">anti-TH</td>
			<td style="width:123px;">Abcam, Cambridge, MA</td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">stored at -20 &#176;C, avoid repeated freezing and thawing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immunol Staining Primary Antibody Dilution Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0103</td>
			<td>stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cy3 Labeled Goat Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>A0516</td>
			<td>stored at -20 &#176;C and protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 488- Labeled Goat</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>A0428</td>
			<td>stored at -20 &#176;C and protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Mouse IgG&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well plate</td>
			<td>corning</td>
			<td>3512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 cm2 flask</td>
			<td>corning</td>
			<td>430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechst 33258</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1018</td>
			<td>stored at -20 &#176;C and protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mounting medium</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0128</td>
			<td>stored at -20 &#176;C and protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light microscope</td>
			<td>Nanjing Jiangnan Novel Optics Company</td>
			<td>XD-202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluorescence microscopy</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>80i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">High &#8211; voltage Power Amplifier</td>
			<td>Directed Energy</td>
			<td>PVX-4110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DC power supply</td>
			<td>Spellman</td>
			<td>SL1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Function Generator</td>
			<td>Aligent&#160;</td>
			<td>33521A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oscilloscope</td>
			<td style="width:123px;">Tektronix</td>
			<td style="width:344px;">DPO3034</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">High voltage probe</td>
			<td style="width:123px;">Tektronix</td>
			<td style="width:344px;">P6015A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nerve stem cell differentiation by a one-step cold atmospheric plasma treatment in vitro

Fiziksel plazma teknoloji, soğuk atmosferik plazmasının (CAP) yaygın olarak araştırdık gibi dekontaminasyon, kanser tedavisi, yara iyileşmesi, kök kanal tedavisi, vb, yeni bir araştırma alanı oluşturan plazma tıp adında. Elektrik, kimyasal ve biyolojik reaktif türlerin bir karışımı olarak, kapaklar her iki vitro sinir kök hücre farklılaşması geliştirmek için yeteneklerini göstermiştir ve vivo içinde ve are olma nörolojik hastalık tedavisi için umut verici bir yol gelecekte. Çok daha heyecan verici haber büyük harfler kullanarak tek adımlı farkında olmayabilir ve güvenli bir şekilde yönettiği, sinir kök hücreleri (NSCs) ayrımında doku ulaşım için olduğunu. Biz burada detaylı Deneysel protokol NSC farklılaşma C17.2-NSCs ve birincil sıçan nöral kök hücrelerin, geliştirmek için kendini yetiştirmiş bir kap jet aygıtı kullanarak hem de hücre kaderi ile ters gözlemleyerek ve floresan mikroskopi göstermek. Teknoloji boyama ayirt yardımıyla daha işlenmemiş grubu hızlandırılmış bir Diferansiyel oranı gösterdi her iki NSCs bulduk ve ~ %75-in NSCs seçmeli olarak esas olarak Olgun, kolinerjik ve motor nöronların farklı nöronlar.

Hücre morfolojisi ters mikroskop altında her gün kap tedavi sonrasında görülmüştür. Şekil 2 , her iki hücre hatlarında sıradan ters faz kontrastlı ışık mikroskobu görüntüler hücre farklılaşma göstermektedir. Plazma tedavi grubu bir hızlandırılmış farklılaşma oranı ve denetim ve gaz akışı grubuna kıyasla yüksek farklılaşma oranı sergiler.
C17....

Watch this Scientific Journal Video about Nerve Stem Cell Differentiation by a One-step Cold Atmospheric Plasma Treatment In Vitro at JoVE.com

Nerve Stem Cell Differentiation by a One-step Cold Atmospheric Plasma Treatment In Vitro

Sinir kök hücre farklılaşması bir tek adımlı soğuk atmosferik plazma tedavi Vitro tarafından

Bu iletişim kuralı bir soğuk atmosferik plazma tedavisinin ayrıntılı deneysel adımlar sinir kök hücreleri ve farklılaşma Geliştirme için ayirt algılama sunmayı amaçlamaktadır.

As the development of physical plasma technology, cold atmospheric plasmas (CAPs) have been widely investigated in decontamination, cancer treatment, ...

Bu yöntem in vitro nöral kök hücrelerin farklılaşmasını artırmak ve Parkinson hastalığı gibi nörolojik hastalıkların tedavisine katkıda bulunma potansiyeline sahiptir. Bu tekniğin en önemli avantajları, doku nakli için nöral kök hücrelerin güvenli yönlendirilmiş farklılaşması için soğuk atmosferik plazmaların tek adımda uygulanabiliyor olmasıdır. Soğuk atmosferik plazma kısa bir tedavi süresi içinde nöral kök hücre farklılaşmasını artırabilir.Ve hücrelere daha fazla hasar ihtiyacı ile, transplantasyon için istenilen hücreleri sağlayan. 25 santimetre karelik bir şişede beşinci murine nöral kök hücreleri yaklaşık beş kez on tohumlama ile başlayın. 37 santigrat derece ve yüzde beş karbondioksit 2-3 gün boyunca tam DMEM beş mililitre içerir.Hücreler %85'lik biraraya geldiğinde, kültürü bir mililitre PBS ile yıkayın. Tedaviden önce, bir dakika için yüzde 25 tripsin bir mililitre ile. Hücreler ayrıldığında, bir mililitre kültür ortamıyla reaksiyonu durdurun.Ve pipet birkaç kez tek bir hücre süspansiyon oluşturmak için. Saydıktan sonra, mililitre konsantrasyonu başına dördüncü hücrelere iki kez on hücreleri seyreltin. 12 hücreli kültür plakasının dokuz kuyuda bir poli-D-lizin kaplı kapak üzerine bir mililitre kök hücre tohumu.Hücre yoğunluğunu mikroskop altında kontrol edin. Ve hücreleri 12 saat boyunca kuvöze geri ver. Hücreler bağlandığında, kapak fişlerini yıkama başına bir mililitre PBS ile iki kez yıkayın ve hücreleri 48 saat boyunca farklılaşma ortamıyla tedavi edin.Jet alımı için, önce güç kaynağının çıkış kablosunu plazma jet cihazına bağlayın. Ve gerilimi tespit etmek için çıkış teli ile yüksek gerilim sondasının ucu. Daha sonra çıkış geriliminden gelen bilgileri kaydetmek için yüksek gerilim probunun diğer ucunu osiloskopa bağlayın.Güç kaynağının, osiloskopun ve yüksek gerilim sondasının topraklı olduğundan emin olmak için tüm devreyi kontrol edin. Ve gaz tüpünü plazma jet cihazına bağlı olduğundan emin olmak için gaz hattını kontrol edin. Daha sonra, helyum ve oksijen gaz vanaları açın ve oksijen helyum dakikada 01 litre bir litre gaz akışını ayarlayın.Devreyi tekrar kontrol edin ve plazma jeti oluşturmak için çıkış düğmesine basın. Plazma nöral kök hücreleri tedavi etmek için, şırınga meme ve hücrelerin ilk kuyu arasındaki mesafeyi ayarlamak 15 milimetre. Nöral kök hücre kültürlerinde supernatants taze farklılaşma ortamı 800 mikrolitre değiştirin.Ve tabağı plazma jetlerin altına yerleştirin. Şırınga nozulunun her kuyunun ortasına sabitolduğundan emin olun. Tedavi başına 60 saniye plazma ile üç kuyu ve tedavi başına 60 saniye için yüzde helyum ve oksijen gazı ile üç kuyu oluşturun.Kontrol olarak üç kuyuyu tedavi edilmezse bırakmak. Daha sonra süpernatantları bir mililitre taze farklılaşma ortamıile değiştirin. Ve hücreleri altı gün boyunca kuvöze geri ver.Ters faz kontrast ışık mikroskobu altında, her gün farklı grupların farklılaşma durumunu kontrol edin. Tedaviden sonra, hücrelerin taze farklılaşma ortamı ile supernatant değiştirmeden önce yaklaşık bir saat boyunca durum orta tam olarak dengelemek için izin verin. İmmünofloresan analizi için, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca her kuyu başına %4 paraformaldehitin 500 mikrolitresi ile kültürleri düzeltin.Ardından yıkama başına bir mililitre PBS ile üç hafif beş dakikalık durulama. Daha sonra, sabit numuneleri PBS'de yüzde 2 Triton X-100 ile oda sıcaklığında 10 dakika geçirin. Gösterildiği gibi nazik durulama izledi.Son yıkamadan sonra, oda sıcaklığında bir saat boyunca pbs başına pbs yüzde 10 keçi serumu bir mililitre ile herhangi bir nonspesifik bağlama blok. Kuluçka sonunda, her kuyudaki hücreleri bir gecede 4 derece lik bir ilgi antikorunun 300 mikrolitresiyle etiketle. PBS'de gösterildiği gibi üç yıkıntı takip etti.Son yıkamadan sonra, hücreleri uygun ikincil antikorların 300 mikrolitresi ile etiketlendirin. Oda sıcaklığında iki saat kuluçka, ışıktan korunmaktadır. Daha sonra hücreleri oda sıcaklığında on dakika boyunca her kuyubaşına bir mililitre PBS ile hafifçe durulayın.Uygun filtrelerle donatılmış bir floresan mikroskobundaki hücreleri görüntüleyin. Plazma da tedavi edilen nöral kök hücreler, işlenmemiş kontrole ve gaz akışına göre hızlandırılmış bir farklılaşma hızı ve daha yüksek bir farklılaşma oranı sergilerler. Plazma tedavisinden sonra Nestin azalır.Beta-Tubulin III önemli ölçüde artar. Ve O4 biraz artar, kontrol tedavi ve gaz akışı tedavi kök hücreleri ile karşılaştırıldığında. Ayrıca, plazma tedavisi nin 60 saniye sonra, olgun nöron sağlam bir ifade, kolinerjik nöron, ve motor nöron belirteçleri gözlenir.Çok az GABAerjik ve serotonerjik nöronlar ile, ve hiçbir dopaminerjik nöronlar tespit. Uzun ve yoğun bir plazma tedavi süresi hücre apoptosis veya nekroz neden olur, çünkü bu prosedürleri çalışırken, hatırlamak önemlidir, uygun plazma dozu ile hücreleri tedavi. Ayrıca downstream uygulamadan önce hücre canlılığını önceden test etmeyi unutmayın.

Research

JoVE Journal

Engineering

Nerve Stem Cell Differentiation by a One-step Cold Atmospheric Plasma Treatment In Vitro

Investigation of Early Plasma Evolution Induced by Ultrashort Laser Pulses

Erken Plazma Evrim Araştırılması ultrashort Lazer Bakliyat Bağlı

Early plasma is generated owing to high intensity laser irradiation of target and the subsequent target material ionization. Its dynamics plays a ...

Mühendislik

Measurement of Coherence Decay in GaMnAs Using Femtosecond Four-wave Mixing

The application of femtosecond four-wave mixing to the study of fundamental properties of diluted magnetic semiconductors ((s,p)-d hybridization, ...

How to Ignite an Atmospheric Pressure Microwave Plasma Torch without Any Additional Igniters

Nasıl herhangi bir ilave Ateşleyici olmadan bir Atmosferik Basınç Mikrodalga Plazma Torch tutuşturmak için

This movie shows how an atmospheric pressure plasma torch can be ignited by microwave power with no additional igniters. After ignition of the plasma, a ...

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

Fare Embriyonik From The Heart Epikardiyal Hücrelerinin Vitro Kültür

During embryogenesis, the epicardial contribution to coronary vasculature development has been very well established. Cells derived from the epicardium ...

Applying X-ray Imaging Crystal Spectroscopy for Use as a High Temperature Plasma Diagnostic

Yüksek Sıcaklık Plazma Tanı olarak Kullanım için X-ışını Görüntüleme Kristal Spektroskopisi Uygulanması

X-ray spectra provide a wealth of information on high temperature plasmas; for example electron temperature and density can be inferred from line ...

An Atmospheric Pressure Plasma Setup to Investigate the Reactive Species Formation

Bir Atmosfer Basıncı Plazma Kurulum Reaktif Türler Oluşumu Araştırma

Non-thermal atmospheric pressure (&#39;cold&#39;) plasmas have received increased attention in recent years due to their significant biomedical potential. ...

Ice Generation and the Heat and Mass Transfer Phenomena of Introducing Water to a Cold Bath of Brine

Buz Üretimi ve tuzlu su bir soğuk Bath Tanıtımı Su Isı ve Kütle Transferi

We demonstrate a method for the study of the heat and mass transfer and of the freezing phenomena in a subcooled brine environment. Our experiment showed ...

Spark Plasma Sintering Apparatus Used for the Formation of Strontium Titanate Bicrystals

Stronsiyum Titanate Bicrystals Oluşumunda Kullanılan Plazma Sinterleme Aparatı Spark

A spark plasma sintering apparatus was used as a novel method for diffusion bonding of two single crystals of strontium titanate to form bicrystals with ...

New Application of an Atmospheric Pressure Plasma Jet as a Neuro-protective Agent Against Glucose Deprivation-induced Injury of SH-SY5Y Cells

Bir atmosferik basınç plazma Jet yeni uygulama SH-SY5Y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak

The atmospheric pressure plasma jet (APPJ) has attracted the attention of many researchers from multiple disciplines in recent years because its emissions ...

Atmospheric Pressure Fabrication of Large-Sized Single-Layer Rectangular SnSe Flakes

Tek katmanlı dikdörtgen SnSe büyük ölçekli pul imalatı atmosfer basıncı

Tin selenide (SnSe) belongs to the family of layered metal chalcogenide materials with a buckled structure like phosphorene, and has shown potential for ...