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•
07:50 min
November 21st, 2018
DOI :
10.3791/58682-v
Chapters
0:04
Title
0:34
Dissection and Preparation of BAT for Chromatin Immunoprecipitation
3:29
Immune Complexes Collection and DNA Recovery
5:51
Results: ChIP Validation by qPCR
7:17
Conclusion
Transcript
计量用于对从小鼠分离的棕色脂质组织中酯蛋白和非酯蛋白进行有效的 ChIP 测序。该技术的主要优点是,该方案已经优化,从脂质组织中对染色质相关复合物进行有效的免疫沉淀。切口前,用70%乙醇喷洒安乐死小鼠。
将鼠标的背部朝上放置,然后沿着颈部进行切口。接下来,将BAT直接放在肩部之间的皮肤下,小心地去除薄薄的白脂肪层。在室温下150 RPM下,将每个 BAT 垫在 10 毫升 PBS 中交叉链接,含有 1% 甲醛 15 分钟。
15分钟后,淬火通过加入2.5摩尔甘氨酸到
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Summary
在这里, 我们描述了有效染色质免疫沉淀 (chip) 的协议, 然后是从小鼠身上分离出的棕色脂肪组织 (bat) 的高通量 dna 测序 (chip-seq)。该方案既适用于组蛋白修饰的映射, 也适用于研究感兴趣的非组蛋白在体内的全基因组定位。
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