Name: evaluation of the interplay between the complement protein c1q and hyaluronic acid in promoting cell adhesion
Uploaded: 2019-06-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion at JoVE.com

نشكر إيفان دوناتي على توفيرها لـ HA وليوناردو أماديو وغابرييلا زيتو (قسم أمراض النساء في المركز الدولي للدراسات الجنائية في المركز الدولي للدراسات الجنائية في مدينة "بيرلو غاروفولو"، في تريستا، إيطاليا) وأندريا رومانو (وحدة العمليات السريرية لعلم التشريح وعلم الأنسجة المرضية، مستشفى كاتينارا، تريست، إيطاليا ) لجمع عينة الأنسجة. كما نشكر نيكولو موروسيني على المساعدة في إعداد الفيديو وأليكس كوبولا، الصوت. وقد دعم هذا العمل منح من معهد صحة الأم والطفل، ومؤسسة "بيرلو غاروفولو"، ومؤسسة ترييستي، إيطاليا (RC20/16)، ومؤسسة كاسا دي ريسابروميو تريستا إلى ر. بولا.

تم جمع عينات الأنسجة من المرضى بعد موافقة مستنيرة بعد موافقة المجلس المؤسسي للمستشفى الجامعي في تريستا، إيطاليا.
1. عزل ة ية الخلية والثقافة (اليوم 1)
<ol><li>عزل خلايا ورم الظهارة المتوسطة البشرية من العينات الصلبة MPM. فرم ناعما الأنسجة مع قطع للحصول على شظايا من حوالي 2-3 مم2 <...

<ol>
	<li>Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+hyaluronic+acid+in+immunoprotection+and+immunomodulation:+Chemistry,+processing+and+function.">The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function.</a> Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).</li><li>Lorusso, G., Ruegg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumor+microenvironment+and+its+contribution+to+tumor+evolution+toward+metastasis.">The tumor microenvironment and its contribution to tumor evolution toward metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1091-1103 (2008).</li><li>Ricklin, D., Hajishengallis, G., Yang, K., Lambris, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement:+a+key+system+for+immune+surveillance+and+homeostasis.">Complement: a key system for immune surveillance and homeostasis.</a> Nature Immunology. 11 (9), 785-797 (2010).</li><li>Bulla, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q+acts+in+the+tumour+microenvironment+as+a+cancer-promoting+factor+independently+of+complement+activation.">C1q acts in the tumour microenvironment as a cancer-promoting factor independently of complement activation.</a> Nature Communications. 7, 10346 (2016).</li><li>Winslow, S., Leandersson, K., Edsjo, A., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+stromal+gene+signatures+in+breast+cancer.">Prognostic stromal gene signatures in breast cancer.</a> Breast Cancer Research. 17, 23 (2015).</li><li>Collins, M. N., Birkinshaw, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+solutions:+A+processing+method+for+efficient+chemical+modification.">Hyaluronic acid solutions: A processing method for efficient chemical modification.</a> Journal of Applied Polymer Science. 130 (1), 145-152 (2013).</li><li>Itano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+primary+structure,+complex+turnover+regulation+and+multiple+roles+of+hyaluronan.">Simple primary structure, complex turnover regulation and multiple roles of hyaluronan.</a> Journal of Biochemistry. 144 (2), 131-137 (2008).</li><li>Agostinis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+role+of+C1q+in+cell+migration+and+tissue+remodeling:+contribution+to+trophoblast+invasion+and+placental+development.">An alternative role of C1q in cell migration and tissue remodeling: contribution to trophoblast invasion and placental development.</a> Journal of Immunology. 185 (7), 4420-4429 (2010).</li><li>Agostinis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+Protein+C1q+Binds+to+Hyaluronic+Acid+in+the+Malignant+Pleural+Mesothelioma+Microenvironment+and+Promotes+Tumor+Growth.">Complement Protein C1q Binds to Hyaluronic Acid in the Malignant Pleural Mesothelioma Microenvironment and Promotes Tumor Growth.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1559 (2017).</li><li>Bossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q+as+a+unique+player+in+angiogenesis+with+therapeutic+implication+in+wound+healing.">C1q as a unique player in angiogenesis with therapeutic implication in wound healing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (11), 4209-4214 (2014).</li><li>Hosszu, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+expression+and+function+of+the+macromolecular+c1+complex+on+the+surface+of+human+monocytes.">Cell surface expression and function of the macromolecular c1 complex on the surface of human monocytes.</a> Frontiers in Immunology. 3, 38 (2012).</li><li>Laurent, T. C., Fraser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan.">Hyaluronan.</a> Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 6 (7), 2397-2404 (1992).</li><li>Gaboriaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crystal+structure+of+the+globular+head+of+complement+protein+C1q+provides+a+basis+for+its+versatile+recognition+properties.">The crystal structure of the globular head of complement protein C1q provides a basis for its versatile recognition properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 278 (47), 46974-46982 (2003).</li><li>Lam, J., Truong, N. F., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+cell-matrix+interactions+in+hyaluronic+acid+hydrogel+scaffolds.">Design of cell-matrix interactions in hyaluronic acid hydrogel scaffolds.</a> Acta Biomaterialia. 10 (4), 1571-1580 (2014).</li></ol>

نحن تصف طريقة سهلة للتحقيق في كيفية تكملة مكون C1q، والتفاعل مع حمض الهيالورونيكس، قادرة على تعديل سلوك الخلايا الأولية المعزولة من أنسجة الورم البشري. كل من HA و C1q موجودة بوفرة في الأنسجة microenvironment سواء في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية، والمشاركة في العديد من العمليات البيولوجية الخلية. ع...

تؤثر البيئة الصغرية للورم (TME) على تطور السرطان وتطوره لأنه يمكن أن يوفر مكانة متساهلة لبقاء الخلايا ونموها وغزوها. قد يكون تحديد اللاعبين الرئيسيين الجدد في TME مفيدًا لاكتشاف أدوات جزيئية جديدة للعلاج المستهدف. TME يتضمن شبكة معقدة وديناميكية من الخلايا غير الخبيثة، مثل الخلايا البطانية، الخلايا الليفية وخلايا الجهاز المناعي، جزءا لا يتجزأ من مكونات المصفوفة خارج الخلية المحيطة (ECM) بما في ذلك الكولاجين، laminins، فيبرونيكتينس، البروتيوغليكانوهيون وهيالورونان. كل من الخلايا الورم ية وغير الورم توليف وإفراز مكونات ECM جنبا إلى جنب مع السيتوكينات, chemokines, عوامل النمو والالتهابات ومصفوفة إعادة عرض الإنزيمات التي تغير عموما الخصائص الفيزيائية, الكيميائية والإشارة من TME. ومن بين هذه المكونات، ظهر حمض الهيالورونيكس (HA) لممارسة دور حاسم في علم الأحياء الورم. على الرغم من تركيبتها الكيميائية البسيطة، يمكن ها، جنبا إلى جنب مع جزيئاتها ملزمة HA (hyaladherins)، تعديل الأوعية، واستجابة الجهاز المناعي وإعادة عرض ECM في حجم والتركيز طريقة تعتمد1.
كما أن نظام التكملة (جيم) هو أيضاً جزء من النظام المحلي للإدارة التكميلية، الذي حظي مؤخراً باهتمام متزايد. ويشمل نظام C مجموعة من البروتينات القابلة للذوبان والأغشية المرتبطة المشاركة في خط الدفاع الأول ضد الخلايا غير الذاتية والعناصر المضيفة غير المرغوب فيها ومسببات الأمراض. وظيفيا، وC يربط الأسلحة ذات تأثيرين من النظم الفطرية والتكيفية لتعزيز إما القتل المباشر للخلايا أو تصاعد استجابة التهابية2. يمكن تفعيل C قمع نمو الورم، عن طريق تدمير الخلايا السرطانية أو تثبيط نموها، ولكن أصبح من الواضح بشكل متزايد أنه يمكن أن تمتلك نشاط تعزيز الورم من خلال الحفاظ على التهاب مزمن، وتعزيز إنشاء وسط كبت المناعة، مما يحفز توليد الأوعية، وتفعيل مسارات الإشارات المتعلقة بالسرطان3. في هذا السياق، C1q، وقد ظهرت أول جزيء الاعتراف من المسار الكلاسيكي للنظام C لممارسة وظائف هامة في microenvironment الورم بشكل مستقل عن C تفعيل4. وقد تبين أن C1q يتم التعبير عنها محليا من قبل مجموعة من الأورام الخبيثة البشرية، حيث يمكن أن تفضل التصاق الخلايا السرطانية والهجرة والانتشار بالإضافة إلى تكوين الأوعية والانبثاث5. ومن المثير للاهتمام C1q يتفاعل مع أحد المكونات الرئيسية لـ ECM مثل HA.
لقد طورنا تقنية لعزل الخلايا السرطانية الأولية عن كتلة الورم. وعلاوة على ذلك، أنشأنا المصفوفة، والتي يمكن أن تحفز الورم microenvironment، وخاصة التفاعل بين C1q وارتفاع حمض الهيالورونيكس الجزيئي. C1q ملزمة إلى HA كان قادرا على الحث على التصاق الخلايا السرطانية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1447px;" width="1445">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">100&#8201;&#181;m pore filter</td>
			<td style="width:311px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:131px;">352360</td>
			<td style="width:676px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Amphotericin B solution (fungizone)</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">1397-89-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">basic FGF</td>
			<td style="width:311px;">Immunological Sciences</td>
			<td style="width:131px;">GRF-15595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">C-4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase type I</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation, DBA</td>
			<td style="width:131px;">MX1D12644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">DNase I&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Roche</td>
			<td style="width:131px;">10 104 159 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">EDTA</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">60-00-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:330px;">EGF</td>
			<td style="width:311px;">Immunological Sciences</td>
			<td style="width:131px;">GRF-10544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:330px;">FAST DiI</td>
			<td style="width:311px;">Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">D7756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:311px;">Gibco,&#160; Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:311px;">Roche</td>
			<td style="width:131px;">11051407001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Flask for cell culture</td>
			<td style="width:311px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">430639</td>
			<td>Sterile, vented</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Gentamicin solution</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">G1397-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hank&#8217;s Balanced Salt Solution (HBBS)&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">H6648</td>
			<td>Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">High molecular weight hyaluronic acid</td>
			<td style="width:311px;">Kind gift by Prof. Ivan Donati</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Human endothelial serum free medium&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Gibco,&#160; Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">11111-044</td>
			<td>Supplemented with EGF (5&#8201;ng/mL), basic FGF (10&#8201;ng/mL), and&#160; 1% penicillin&#8211;streptomycin (Sigma-Aldrich)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:311px;">Carlo Erba</td>
			<td style="width:131px;">13446-18-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medium 199 with Hank&#8217;s salt</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">M7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:330px;">Time-lapse microscopy&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Nikon&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Imaging System BioStation IM-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Titertek Multiskan ELISA Reader</td>
			<td>Flow Labs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">T4674</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the interplay between the complement protein c1q and hyaluronic acid in promoting cell adhesion

وقد ثبت بشكل متزايد أن البيئة الدقيقة الورم يلعب دورا نشطا في نمو الورم والانبثاث. من خلال مسارات مختلفة، يمكن للخلايا السرطانية تجنيد الخلايا الجذعية والمناعية والبطانية بكفاءة عن طريق إفراز العوامل المحفزة، والكيماويات والسيتوكينات. بدوره، يمكن لهذه الخلايا تغيير خصائص الإشارات للبيئة الدقيقة عن طريق الإفراج عن إشارات تعزيز النمو، المستقلبات ومكونات المصفوفة خارج الخلية للحفاظ على الانتشار العالي والكفاءة النقيلية. في هذا السياق، نحدد أن مكون تكملة C1q، الذي يعبر عنه محلياً مجموعة من الأورام الخبيثة البشرية، عند التفاعل مع حمض الهيالورونيكس المصفوفة خارج الخلية، يؤثر بشدة على سلوك الخلايا الأولية المعزولة عن الورم البشري العينات. هنا، ونحن نوصف طريقة لاختبار كيف C1q ملزمة حمض الهيالورونيكس (HA) يؤثر على التصاق الخلايا السرطانية، الكامنة وراء حقيقة أن الخصائص البيولوجية للمكونات الرئيسية للمصفوفة خارج الخلية (في هذه الحالة HA) يمكن أن تشكل ها بإشارات نشطة بيولوجيا نحو الورم التقدم.

HA هو السكاريد عالي الوزن المشحون ة سلبيا، والذي يتكون من تكرار (β، 1-4) - حمض الغلوكورونيك -(β، 1-3) -N-أسيتيل-D-الجلوكوزامين d d d ddisaccharide الوحدات (الشكل1B)7. اختبر البروز من الالتصاق ال [ه] على ال [96-ولّ] لوحة [أس ولّ] الفعالية من [إيمّلّج] ه كان معزّزة من [ب...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion at JoVE.com

Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion

مكون تكملة C1q هو جزيء الموالية للالتهابات أعرب بشدة في الأنسجة microenvironment التي يمكن أن تتفاعل مع مصفوفة خارج الخلية. هنا، ونحن نوصف طريقة لاختبار كيف C1Q ملزمة لحمض الهيالورونيكس يؤثر التصاق الخلية.

تقييم التفاعل بين بروتين C1Q وحمض الهيالورونيكس في تعزيز التصاق الخلايا

It has been increasingly demonstrated that the tumor microenvironment plays an active role in neoplasia growth and metastasis. Through different pathways, ...

إجراء شامل لتقييم التفاعل بين بروتين مكمل C1q وحمض الهيالورونيك في تعزيز التصاق الخلية. لقد حددنا مؤخرا أن مكون مكمل C1q جزيء من الجهاز المناعي الفطري وأعرب عن ذلك بشدة في الورم والمشيمة microenvironment وقادرة على التفاعل مع عنصر من المصفوفة خارج الخلية. في هذه الحالة، حمض الهيالورونيكس.نقترح طريقة لدراسة الوظائف البيولوجية للبروتينات في جميع أنحاء البيئة الأكرونية. من أجل التحقيق في قدرة هذه الجزيئات على تشكيل خصائص انقسام الخلية من عوامل مصفوفة خارج الخلية. من أجل دراسة كيف يمكن أن يكون هذا التفاعل يمكن أن يكون متحسسا من قبل الخلايا الموجودة في أنسجة البيئة، وضعنا هذه الطريقة السهلة التي سمح للخلايا الثنائية المستمدة من الأنسجة البشرية إلى التمسك C1q ملزمة مصفوفة خارج الخلية، في هذه الحالة حمض الهيالوروني.لإجراء الطلاء الخطوة الأولى هي ربط حمض الهيالورونيكس الوزن الجزيئي العالي إلى 96 طلاء الأنسجة جيدا microplate. للطلاء، يتم تخفيف حمض الهيالوروك في 0.1 مول الكربون العازل PH 9.6 بتركيز 15 ميكروغرام لكل ملليلتر. ويتم requited الأنابيب بلطف لتحقيق حل متجانس.وتستخدم 100 ميكروليتر من الحل لمعطف الآبار. ثم يتم نقل اللوحة عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. اليوم التالي فراغ التعرق الآبار المعالجة.غسل مرة واحدة مع dPBS. يضاف إما C1q أو BSA في الآبار المقابلة. C1q هو في الوقت الحاضر متاحة تجاريا بتركيز واحد ملليغرام لكل ملليلتر، ويتم تخفيفه بتركيز 25 ميكروغرام لكل ملليلتر.وdPBS تحتوي على 0.5٪ BSA و 0.7 ملليمول الكالسيوم والمغنيسيوم والكاتيونات المغنية. يستخدم BSA LPS الحرة في تركيز 0.5٪ والتاريخ PBF. ثم يتم نقل لوحة في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها.يتم تحديد التفاعلات C1q تعتمد الجرعة مع حمض الهيالورونيم شل الحركة من قبل إنزيم مرتبط مناعي SA. الخلايا التي تحمل علامات مع DiI سريع. يتم استخدام ديي شفة سريعة لتسمية الخلايا من الفائدة. وتستخدم الخلايا التي يتم إعادة اعتمادها في dPBS بتركيز مليون خلية لكل ملليلتر.يتم تخفيف DiI سريع واحد إلى 100 مباشرة في تعليق الخلية. يتم خلط تعليق الخلية يدويًا ونقله عند درجة 37 مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد خمس دقائق حضانة، مزيج تعليق الخلية وتكرار هذه العملية مرتين أكثر.لإزالة الزائدة من DiI سريع، إضافة 10 ملليلتر من dPBS. محوري بلطف صعودا وهبوطا والطرد المركزي في 250 غرام لمدة سبع دقائق. Resuspend بيليه الخلية في ملليلتر واحد من مصل endophilical الإنسان المتوسطة الحرة في وجود 0.1 ٪BSA.الخلايا التصاق على المصفوفات حمض الهيالوروني C1q. فراغ التعرق DPBS من الآبار المغلفة. توزيع 100 ميكرولترات من تعليق الخلية المسمى على الآبار المغلفة.يتم أخذ 200 ميكرولترات من الخلايا المسماة بعيدا في أنبوب ependure لاستخدامها في توليد منحنى القياسية. احتضان لوحة لمدة 35 دقيقة في 37 درجة مئوية. أخرجي الصحن من الحاضنةpirate بلطف الخلايا غير متوازن. غسل مرة واحدة مع dPBS تحتوي على 0.5٪ BSA و 0.7 ملليمول الكالسيوم والمغنيسيوم. ليس الخلايا المتمسكة بإضافة 200 ميكرولترات من العازلة تحلل.في الوقت نفسه إعداد منحنى القياسية على تخفيف واحد إلى اثنين المسلسل من الخلايا المسمى في العازلة تحلل. قم بقراءة إشارة الفلوريس في جهاز F 200 T-can اللانهائي باستخدام 544 نانومتر كطول موجي مثير و590 نانومتر كطول موجة للانبعاثات. نتائج تمثيلية.كما هو مبين في النتائج التمثيلية، فمن الواضح أن التصاق الخلية على حمض الهيالوروني وجدت C1q كما عززت بقوة بالمقارنة مع HA وحدها أو HA ملزمة BSA. يتم حساب النسبة المئوية للخلايا المنضمة على كل مصفوفة على أساس المنحنى القياسي. الاستنتاجات. في تجاربنا أولا وقبل كل تقييمنا قدرة المكون المكمل C12 لربط مصفوفة خارج الخلية في هذه الحالة حمض الهيالورونيكس باستخدام معدن أريسال.ثانياً قمنا بتحليل قدرة الخلايا الأولية البشرية الملطخة بصبغة الفلورسنت لمتابعة حمض الهيالورونيكس المقيد. النموذج الذي اقترحناه في هذه الدراسة هو طريقة أسهل وأسرع وأرخص في بديل لنموذج 3D من السقالات مصفوفة خارج الخلية لتقييم على هذه الاستجابة الخلوية لمزيج من المحفزات.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

نضوب بالسكان خلية معينة من قبل استنفاد تكملة

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

قياس يكمل 50 ٪ الدم الانحلالي (CH 50) نشاط المصل

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

رصد هجرة الخلايا الجذعية باستخدام<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H التصوير بالرنين المغناطيسي

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

ثابت التصاق الفحص لدراسة إنتغرين تنشيط الخلايا اللمفية تي في

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

فحص من التصاق تحت إجهاد القص لدراسة تي اللمفاويات-التصاق جزيء التفاعلات

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

تشريح مجمعات البروتين متعدد الإشارات بالتكامل Bimolecular انجذاب تطهير (بيكاب)

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Dynamic Adhesion Assay for the Functional Analysis of Anti-adhesion Therapies in Inflammatory Bowel Disease

والرزن التصاق الديناميكي للتحليل الوظيفي من العلاجات المضادة الالتصاق في مرض التهاب الأمعاء

Gut homing of immune cells is important for the pathogenesis of inflammatory bowel diseases (IBD). Integrin-dependent cell adhesion to addressins is a ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

تقييم استجابات المضيف الممرض ونجاعة اللقاح في الفئران

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

زرع تحت القبعات الكلوية من الغدة الصعترية الجنينية Murine المعالجة 2'-ديوكسيغوانوسين في الفئران عارية

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...