Name: evaluation of the interplay between the complement protein c1q and hyaluronic acid in promoting cell adhesion
Uploaded: 2019-06-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion at JoVE.com

אנו מודים איוון Donati על מתן HA, לאונרדו Amadio, גבריאלה Zito (המחלקה של גינקולוגיה של IRCCS "Burlo Garofolo", טריאסטה, איטליה) ו אנדריאה רומנו (יחידת המחקר הקליני של האנטומיה והיסטולוגיה הפתולוגיים, קאטניארה בית החולים, טריאסטה, איטליה ) עבור אוסף דגימת הרקמה. אנו מודים גם ניקולא מורוזיני לעזרה בהכנת וידאו ואלכס קופולה, הקול. עבודה זו היתה נתמכת על ידי מענקים מהמכון לבריאות הילד, IRCCS "Burlo Garofolo", טריאסטה, איטליה (RC20/16) ו Fondazione Cassa די ריספרמיו טריאסטה ל ר. בולה.

דגימות רקמות מחולים נאספו לאחר הסכמה מושכלת בעקבות אישור השיקולים האתיים על ידי הוועד המוסדי של בית החולים האוניברסיטאי של טריאסטה, איטליה.
1. בידוד תא גידול ותרבות (יום 1)
<ol><li>בודד תאים מזותליומה האנושית מ MPM דגימות מוצקות. דק את הרקמה עם חותך להשיג שברים של כ 2-3 מ"מ2 בג?...

<ol>
	<li>Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+hyaluronic+acid+in+immunoprotection+and+immunomodulation:+Chemistry,+processing+and+function.">The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function.</a> Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).</li><li>Lorusso, G., Ruegg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumor+microenvironment+and+its+contribution+to+tumor+evolution+toward+metastasis.">The tumor microenvironment and its contribution to tumor evolution toward metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1091-1103 (2008).</li><li>Ricklin, D., Hajishengallis, G., Yang, K., Lambris, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement:+a+key+system+for+immune+surveillance+and+homeostasis.">Complement: a key system for immune surveillance and homeostasis.</a> Nature Immunology. 11 (9), 785-797 (2010).</li><li>Bulla, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q+acts+in+the+tumour+microenvironment+as+a+cancer-promoting+factor+independently+of+complement+activation.">C1q acts in the tumour microenvironment as a cancer-promoting factor independently of complement activation.</a> Nature Communications. 7, 10346 (2016).</li><li>Winslow, S., Leandersson, K., Edsjo, A., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+stromal+gene+signatures+in+breast+cancer.">Prognostic stromal gene signatures in breast cancer.</a> Breast Cancer Research. 17, 23 (2015).</li><li>Collins, M. N., Birkinshaw, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+solutions:+A+processing+method+for+efficient+chemical+modification.">Hyaluronic acid solutions: A processing method for efficient chemical modification.</a> Journal of Applied Polymer Science. 130 (1), 145-152 (2013).</li><li>Itano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+primary+structure,+complex+turnover+regulation+and+multiple+roles+of+hyaluronan.">Simple primary structure, complex turnover regulation and multiple roles of hyaluronan.</a> Journal of Biochemistry. 144 (2), 131-137 (2008).</li><li>Agostinis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+role+of+C1q+in+cell+migration+and+tissue+remodeling:+contribution+to+trophoblast+invasion+and+placental+development.">An alternative role of C1q in cell migration and tissue remodeling: contribution to trophoblast invasion and placental development.</a> Journal of Immunology. 185 (7), 4420-4429 (2010).</li><li>Agostinis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+Protein+C1q+Binds+to+Hyaluronic+Acid+in+the+Malignant+Pleural+Mesothelioma+Microenvironment+and+Promotes+Tumor+Growth.">Complement Protein C1q Binds to Hyaluronic Acid in the Malignant Pleural Mesothelioma Microenvironment and Promotes Tumor Growth.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1559 (2017).</li><li>Bossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q+as+a+unique+player+in+angiogenesis+with+therapeutic+implication+in+wound+healing.">C1q as a unique player in angiogenesis with therapeutic implication in wound healing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (11), 4209-4214 (2014).</li><li>Hosszu, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+expression+and+function+of+the+macromolecular+c1+complex+on+the+surface+of+human+monocytes.">Cell surface expression and function of the macromolecular c1 complex on the surface of human monocytes.</a> Frontiers in Immunology. 3, 38 (2012).</li><li>Laurent, T. C., Fraser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan.">Hyaluronan.</a> Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 6 (7), 2397-2404 (1992).</li><li>Gaboriaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crystal+structure+of+the+globular+head+of+complement+protein+C1q+provides+a+basis+for+its+versatile+recognition+properties.">The crystal structure of the globular head of complement protein C1q provides a basis for its versatile recognition properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 278 (47), 46974-46982 (2003).</li><li>Lam, J., Truong, N. F., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+cell-matrix+interactions+in+hyaluronic+acid+hydrogel+scaffolds.">Design of cell-matrix interactions in hyaluronic acid hydrogel scaffolds.</a> Acta Biomaterialia. 10 (4), 1571-1580 (2014).</li></ol>

אנו מתארים שיטה קלה לחקור כיצד המשלים רכיב C1q, אינטראקציה עם חומצה יאלורונית, הוא מסוגל לווסת את ההתנהגות של תאים ראשוניים מבודדים מרקמות הגידול האנושי. שניהם HA ו C1q נמצאים בשפע בסביבה מיקרוברקמות הן בתנאים פיסיולוגיים ופתולוגיים, המשתתפים בתהליכים ביולוגיים מספר תאים. למשל, C1q הוכח להיות ?...

מיקרוסביבה הגידול (TME) משפיע על התפתחות הסרטן והתקדמות מאז הוא יכול לספק נישה מתירני עבור הישרדות התא, צמיחה ופלישה. הזיהוי של נגני מפתח חדשים ב-TME עשוי להיות שימושי לגילוי כלים מולקולריים חדשים עבור טיפול היעד. TME כולל רשת מורכבת ודינמית של תאים שאינם ממאירים, כגון תאים אנדותל, פיברותקיעות ותאים של המערכת החיסונית, מוטבע בתוך מטריקס המקיפים (ECM) רכיבים כולל collagens, למינציה, fibronectins, . בסדר. הן הגידול והן תאים שאינם סרטניים לסנתז ולהפריש רכיבי ECM יחד עם ציטוקינים, נוגדנים, גורמי גדילה ושיפוץ מטריצה דלקתיות אנזימים הכולל לשנות את המאפיינים הפיזיים, כימיים, איתות של TME. בין המרכיבים האלה, חומצה יאלורונית (HA) התפתחה להפעיל תפקיד מכריע בביולוגיה הגידול. למרות ההרכב הכימי הפשוט שלה, HA, יחד עם המולקולות שלה הכריכה (היאלודונים), יכול לווסת אנגיוגנזה, תגובתיות המערכת החיסונית ו ECM שיפוץ בגודל וריכוז תלוי באופן1.
מערכת המשלים (C) היא גם חלק של TME המקומי, אשר קיבל לאחרונה את תשומת הלב הגוברת. מערכת C מקיפה סט של חלבונים מסיסים מאוגד קרום מעורב בשורה הראשונה של הגנה מפני תאים לא-עצמאיים, אלמנטים מארחים לא רצויים ופתוגנים. מבחינה פונקציונלית, C מקשרת את הזרועות שני-אפקטור של מערכות מולדת ואדפטיבית כדי לקדם או להרוג את התא הישיר או הרכבה של תגובה דלקתית2. C הפעלה יכול לדכא את צמיחת הגידול, על ידי השמדת תאים סרטניים או עיכוב outgrowth שלהם, אבל זה הפך יותר ויותר ברור כי זה יכול להחזיק הגידול קידום פעילות על ידי קיום דלקת כרונית, קידום הקמתה של מדכאים, הגורם לאנגיוגנזה, והפעלת מסלולים של אותות סרטניים הקשורים לסרטן3. בהקשר זה, C1q, את המולקולה הזיהוי הראשון של המסלול הקלאסי של מערכת C התפתחה להפעיל פונקציות חשובות מיקרוסביבה הגידול באופן עצמאי של הפעלת C4. C1q הוכח להיות מבוטא באופן מקומי על ידי מגוון של גידולים ממאירים האדם, שם הוא יכול לטובת הדבקה תא סרטן, הגירה והתפשטות בנוסף אנגיוגנזה גרורות5. מעניין C1q אינטראקציה עם המרכיבים העיקריים של ECM כגון HA.
פיתחנו טכניקה כדי לבודד את תאי הסרטן העיקריים ממסת הגידול. יתר על כן, יצרנו את המטריצה, אשר יכול לעורר מיקרוסביבה הגידול, במיוחד את האינטראקציה בין C1q ומשקל מולקולרי גבוה חומצה יאלורונית. C1q מאוגד HA היה מסוגל לגרום הדבקה של תאים סרטניים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1447px;" width="1445">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">100&#8201;&#181;m pore filter</td>
			<td style="width:311px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:131px;">352360</td>
			<td style="width:676px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Amphotericin B solution (fungizone)</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">1397-89-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">basic FGF</td>
			<td style="width:311px;">Immunological Sciences</td>
			<td style="width:131px;">GRF-15595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">C-4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase type I</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation, DBA</td>
			<td style="width:131px;">MX1D12644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">DNase I&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Roche</td>
			<td style="width:131px;">10 104 159 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">EDTA</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">60-00-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:330px;">EGF</td>
			<td style="width:311px;">Immunological Sciences</td>
			<td style="width:131px;">GRF-10544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:330px;">FAST DiI</td>
			<td style="width:311px;">Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">D7756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:311px;">Gibco,&#160; Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:311px;">Roche</td>
			<td style="width:131px;">11051407001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Flask for cell culture</td>
			<td style="width:311px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">430639</td>
			<td>Sterile, vented</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Gentamicin solution</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">G1397-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hank&#8217;s Balanced Salt Solution (HBBS)&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">H6648</td>
			<td>Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">High molecular weight hyaluronic acid</td>
			<td style="width:311px;">Kind gift by Prof. Ivan Donati</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Human endothelial serum free medium&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Gibco,&#160; Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">11111-044</td>
			<td>Supplemented with EGF (5&#8201;ng/mL), basic FGF (10&#8201;ng/mL), and&#160; 1% penicillin&#8211;streptomycin (Sigma-Aldrich)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:311px;">Carlo Erba</td>
			<td style="width:131px;">13446-18-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medium 199 with Hank&#8217;s salt</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">M7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:330px;">Time-lapse microscopy&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Nikon&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Imaging System BioStation IM-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Titertek Multiskan ELISA Reader</td>
			<td>Flow Labs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">T4674</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the interplay between the complement protein c1q and hyaluronic acid in promoting cell adhesion

זה הוכח יותר ויותר כי מיקרוסביבה הגידול משחק תפקיד פעיל neoplasia צמיחה גרורות. באמצעות מסלולים שונים, תאים סרטניים יכול ביעילות לגייס סטרומה, תאים חיסוניים ואנדותל על ידי הפרשת גורמים מגירוי, נוגדנים ו ציטוקינים. בתורו, תאים אלה יכולים לשנות את מאפייני האיתות של הסביבה מיקרוידי שחרור הצמיחה-קידום אותות, מטבוליטים מטריקס רכיבים מטריצות כדי לקיים התפשטות גבוהה ויכולת גרורתית. בהקשר זה, אנו מזהים את המרכיב המשלים C1q, ביטוי מאוד באופן מקומי על ידי מגוון של גידולים ממאירים אנושיים, על האינטראקציה עם חומצה יאלורונית מטריצה המומנת, משפיע מאוד על ההתנהגות של תאים ראשוניים מבודדים מהגידול האנושי דגימות. כאן, אנו מתארים שיטה כדי לבדוק כיצד C1q כרוך חומצה יאלורונית (HA) משפיע על הדבקה תא הגידול, בבסיס העובדה המאפיינים הביולוגיים של רכיבי מפתח של מטריצה החילוץ (במקרה זה HA) יכול להיות מעוצב על ידי אותות אקטיביים לקראת הגידול תקדמות.

HA שלילית גבוה-מולקולרית משקל רב-שלילי, אשר מורכב של חוזר (β, 1-4)-D-חומצה גלוקורונית-(β, 1-3)-N-מרחריל-D-גלוקוסמיטין יחידות דיאכראמיד (איור 1B)7. המופע של הכריכה של HA על הצלחת 96-באר, כמו גם את היעילות של השתק שלה נבדקו לנצל את היתרונות של biotinylated HA (ביו-HA). ר...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion at JoVE.com

Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion

המרכיב המשלים C1q היא מולקולה pro-דלקתיות מתבטאת במידה רבה בסביבה מיקרוסביבתית שיכולה לקיים אינטראקציה עם מטריצה החילוץ. כאן, אנו מתארים שיטה כדי לבדוק כיצד C1q הקשורים חומצה יאלורונית השפעות התא הדבקה.

הערכה של הגומלין בין החלבון המשלים C1q וחומצה Hyaluronic בקידום הדבקה תא

It has been increasingly demonstrated that the tumor microenvironment plays an active role in neoplasia growth and metastasis. Through different pathways, ...

הליך מקיף להערכת יחסי הגומלין בין החלבון המשלים C1q לחומצה היאלורונית בקידום הידבקות בתאים. לאחרונהגדרנו כי המרכיב המשלים C1q מולקולה של המערכת החיסונית המולדת באה לידי ביטוי מאוד במיקרו-וירוס הגידול והשליה ומצליחה לקיים אינטראקציה עם רכיב המטריצה החוץ-תאית. במקרה זה, חומצה היאלורונית.אנו מציעים שיטה לחקר הפונקציות הביולוגיות של חלבונים ברחבי הסביבה האקרונומית. על מנת לחקור את היכולת של מולקולות אלה לעצב את תכונות חלוקת התאים של גורמי מטריצה חוץ תאית. על מנת ללמוד כיצד אינטראקציה זו יכולה להיות מושגת על ידי התאים הקיימים ברקמת הסביבה, הגדרנו שיטה קלה זו שבה תאים בינאריים הנגזרים מרקמות אנושיות הורשו לדבוק C1q מאוגד מטריצה חוץ תאית, במקרה זה חומצה היאלורונית.עבור הליך ציפוי הצעד הראשון הוא מחייב של חומצה היאלורונית במשקל מולקולרי גבוה ל 96 מיקרופלסטיק מצופה רקמות היטב. עבור ציפוי, חומצה היאלורונית מדוללת 0.1 חופרת פחמן חיץ PH 9.6 בריכוז של 15 מיקרוגרם למיליליטר. ובעדינות צינורות הוא requited כדי להשיג פתרון הומוגני.100 מיקרוליטרים של הפתרון משמשים לציפוי בארות. לאחר מכן הצלחת מועברת בארבע מעלות צלזיוס במהלך הלילה. למחרת ואקום שאף את הבאר המטופלת.לשטוף פעם אחת עם dPBS. הוסף C1q או BSA בארות המתאימות. C1q זמין כיום מסחרית בריכוז של מיליגרם אחד למיליליטר והוא מדולל בריכוז של 25 מיקרוגרם למיליליטר.ו-dPBS המכיל 0.5%BSA ו-0.7 מילימול סידן ומגנזיום ו- cations חלוקה. BSA LPS חינם משמש בריכוז של 0.5% ותאריך PBF. צלחת מועברת לאחר מכן בארבע מעלות צלזיוס לילה.אינטראקציות תלויות מינון C1q עם חומצה היאלורונית משותקת נקבעת על ידי אנזים מקושר אימונו SA. תאים המתייגים באמצעות DiI מהיר. מעקב lipophilic מהיר DiI משמש כדי לתייג את התאים של עניין. תאים המתווסכלים ב- dPBS משמשים בריכוז של מיליון תאים למיליליטר.ה-DiI המהיר מדולל בין 1 ל-100 ישירות לתוך ההשעיה של התא. ההשעיה התא מעורבב באופן ידני ומועבר ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. לאחר חמש דקות דגירה, מערבבים את ההשעיה התא ולחזור על פעולה זו פעמיים נוספות.כדי להסיר את עודף של DiI מהיר, להוסיף 10 מיליליטר של dPBS. יש לסובב בעדינות למעלה ולמטה ולהפוך לצנטריפוגה במהירות של 250 גרם למשך שבע דקות. תן מחדש את גלולת התא במיליליטר אחד של מדיום אנדופילי אנושי ללא סרום בנוכחות 0.1%BSA.הידבקות בתאים על חומצה היאלורונית C1q מטריסות. ואקום שאף את ה- dPBS מה בארות מצופות. להפיץ 100 microliters של השעיית תא שכותרתו ל בארות מצופה.200 מיקרוליטרים של תאים מסומנים מתפרקים בצינור תליון שישמש ליצרן עקומה סטנדרטי. דגירה את הצלחת במשך 35 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. תוציא את הצלחת מהחמה.שאפו בעדינות את התאים הלא מאוזנים. יש לשטוף פעם אחת עם dPBS המכיל 0.5%BSA ו-0.7 מילימול סידן ומגנזיום. Lys התאים חסידים על ידי הוספת 200 microliters של מאגר תמיסת.במקביל להכין את העקומה הסטנדרטית על אחד עד שניים דילול טורי של התאים המסווים במאגר תזה. בצע את הקריאה של אות florescence ב אינסוף F 200 T-can מכשיר באמצעות 544 ננומטרים כמו אורך גל העירור ו 590 ננומטר כמו אורך גל פליטה. תוצאות מייצגות.כפי שמוצג על ידי התוצאות הייצוגיות, ניכר כי הידבקות התא על חומצה היאלורונית מצא C1q כמו משופרת מאוד בהשוואה HA לבד או HA קשור BSA. אחוז התאים החסידיים בכל מטריצה מחושב על בסיס העקומה הסטנדרטית. מסקנות. בניסויים שלנו קודם כל הערכנו את היכולת של הרכיב המשלים C12 לקשור את המטריצה החוץ תאית במקרה זה חומצה היאלורונית באמצעות מתכת אריסאלית.שנית ניתחנו את היכולת של תאים ראשוניים אנושיים מוכתמים בצבע פלואורסצנטי לרדוף אחר חומצה היאלורונית קשורה. המודל שהצענו במחקר זה הוא שיטה קלה יותר ומהירה יותר וחלופה למודל תלת מימדי של פיגומי מטריצה חוץ-תאיים להערכה על תגובה תאית זו לשילוב של גירויים.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

דלדול של אוכלוסיות תאים ספציפיים על ידי דלדול משלים

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

מדידת משלים Haemolytic 50% (CH 50) פעילות של סרום

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

נדידת תאים דנדריטים ניטור באמצעות<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H דימות תהודה מגנטית

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

סטטי הידבקות Assay לחקר Integrin ההפעלה בT לימפוציטים

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

Assay הדבקה תחת מאמץ גזירה לחקר T לימפוציטים-הדבקה אינטראקציות מולקולה

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

ויבתר חלבון רב מתחמי איתות על ידי טיהור זיקה קומפלמנטציה ריאקציה דו-מולקולרית (BiCAP)

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Dynamic Adhesion Assay for the Functional Analysis of Anti-adhesion Therapies in Inflammatory Bowel Disease

אדהזיה דינמי Assay לניתוח פונקציונלי של טיפולים למניעת הידבקות במחלות מעי דלקתיות

Gut homing of immune cells is important for the pathogenesis of inflammatory bowel diseases (IBD). Integrin-dependent cell adhesion to addressins is a ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

הערכה של פתוגן-פונדקאי תגובות והיעילות החיסון בעכברים

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

הכליות Subcapsular ההשתלה של 2 '-Deoxyguanosine-התייחסו מורין מורנה בתימוס בעכברים ערומים

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...