Name: evaluation of the interplay between the complement protein c1q and hyaluronic acid in promoting cell adhesion
Uploaded: 2019-06-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion at JoVE.com

Ivan Donati 'ye, HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (ıRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italya) ve Andrea Romano (operatif klinik anatomisi ve patolojik Histoloji Anabilim Dalı, Cattinara Hastanesi, Trieste, Italya ) doku numune toplama için. Biz video hazırlama ve Alex Coppola, ses yardım için de Nicolò Morosini teşekkür ederiz. Bu çalışma anne ve Çocuk Sağlığı Enstitüsü, ıRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italya (RC20/16) ve Fondazione Cassa di risparmio Trieste 'den R. bulla 'dan hibe tarafından destekleniyordu.

Hastadan gelen doku örnekleri, Italya 'nın Trieste Üniversitesi Hastanesi kurumsal Kurulu tarafından etik hususları onayladıktan sonra bilgilendirilmiş onay sonrasında toplandı.
1. tümör hücre yalıtımı ve Kültür (gün 1)
<ol><li>İnsan mezotelyoma hücrelerini MPM katı örneklerden yalıtın. Yaklaşık 2-3 mm2 boyutunda parçalar elde etmek ve 0,5 mm CA2 +/mg2 +, 0,5% tripsin ve 50 μg/ml ile desteklenen Hanks ' dengeli tuz çözeltisi (HBS...

<ol>
	<li>Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+hyaluronic+acid+in+immunoprotection+and+immunomodulation:+Chemistry,+processing+and+function.">The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function.</a> Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).</li><li>Lorusso, G., Ruegg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumor+microenvironment+and+its+contribution+to+tumor+evolution+toward+metastasis.">The tumor microenvironment and its contribution to tumor evolution toward metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1091-1103 (2008).</li><li>Ricklin, D., Hajishengallis, G., Yang, K., Lambris, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement:+a+key+system+for+immune+surveillance+and+homeostasis.">Complement: a key system for immune surveillance and homeostasis.</a> Nature Immunology. 11 (9), 785-797 (2010).</li><li>Bulla, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q+acts+in+the+tumour+microenvironment+as+a+cancer-promoting+factor+independently+of+complement+activation.">C1q acts in the tumour microenvironment as a cancer-promoting factor independently of complement activation.</a> Nature Communications. 7, 10346 (2016).</li><li>Winslow, S., Leandersson, K., Edsjo, A., Larsson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+stromal+gene+signatures+in+breast+cancer.">Prognostic stromal gene signatures in breast cancer.</a> Breast Cancer Research. 17, 23 (2015).</li><li>Collins, M. N., Birkinshaw, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+solutions:+A+processing+method+for+efficient+chemical+modification.">Hyaluronic acid solutions: A processing method for efficient chemical modification.</a> Journal of Applied Polymer Science. 130 (1), 145-152 (2013).</li><li>Itano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+primary+structure,+complex+turnover+regulation+and+multiple+roles+of+hyaluronan.">Simple primary structure, complex turnover regulation and multiple roles of hyaluronan.</a> Journal of Biochemistry. 144 (2), 131-137 (2008).</li><li>Agostinis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+role+of+C1q+in+cell+migration+and+tissue+remodeling:+contribution+to+trophoblast+invasion+and+placental+development.">An alternative role of C1q in cell migration and tissue remodeling: contribution to trophoblast invasion and placental development.</a> Journal of Immunology. 185 (7), 4420-4429 (2010).</li><li>Agostinis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+Protein+C1q+Binds+to+Hyaluronic+Acid+in+the+Malignant+Pleural+Mesothelioma+Microenvironment+and+Promotes+Tumor+Growth.">Complement Protein C1q Binds to Hyaluronic Acid in the Malignant Pleural Mesothelioma Microenvironment and Promotes Tumor Growth.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1559 (2017).</li><li>Bossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1q+as+a+unique+player+in+angiogenesis+with+therapeutic+implication+in+wound+healing.">C1q as a unique player in angiogenesis with therapeutic implication in wound healing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (11), 4209-4214 (2014).</li><li>Hosszu, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+expression+and+function+of+the+macromolecular+c1+complex+on+the+surface+of+human+monocytes.">Cell surface expression and function of the macromolecular c1 complex on the surface of human monocytes.</a> Frontiers in Immunology. 3, 38 (2012).</li><li>Laurent, T. C., Fraser, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronan.">Hyaluronan.</a> Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 6 (7), 2397-2404 (1992).</li><li>Gaboriaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crystal+structure+of+the+globular+head+of+complement+protein+C1q+provides+a+basis+for+its+versatile+recognition+properties.">The crystal structure of the globular head of complement protein C1q provides a basis for its versatile recognition properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 278 (47), 46974-46982 (2003).</li><li>Lam, J., Truong, N. F., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+cell-matrix+interactions+in+hyaluronic+acid+hydrogel+scaffolds.">Design of cell-matrix interactions in hyaluronic acid hydrogel scaffolds.</a> Acta Biomaterialia. 10 (4), 1571-1580 (2014).</li></ol>

Biz nasıl tamamlayıcı bileşen C1q, hyaluronik asit ile etkileşim, insan tümörü dokularından izole primer hücrelerin davranışını modüle edebiliyoruz araştırmak için kolay bir yöntem açıklanmaktadır. Hem HA hem de C1q, hem fizyolojik hem de patolojik koşullarda, çeşitli hücre biyolojik süreçlerine katılan doku mikroortamında oldukça mevcuttur. Örneğin, C1q plasentanın mikroortamında mevcut olduğu görüldüğü için, plasentasyon8' de maternal decidua 'nın ekstr...

Tümör mikroçevre (TME), hücre hayatta kalma, büyüme ve istilası için karşı bir niş sağlayabilmesi için kanser gelişimini ve ilerlemesini etkiler. TME 'deki yeni anahtar oyuncularının tanımlanması, hedef terapi için yeni moleküler araçların keşfi için yararlı olabilir. TME, endotel hücreler, fibroblastlar ve bağışıklık sisteminin hücreleri gibi Malign olmayan hücrelerin karmaşık ve dinamik ağını içerir ve bu da collagens, Laminins, fibronektinler dahil olmak üzere çevredeki ekstrelüler matris (ECM) bileşenlerine gömülür. Proteoglikanlar ve hyaluronans. Hem tümör hem de tümör içermeyen hücreler, TME 'nin fiziksel, kimyasal ve sinyalizasyon özelliklerini genel olarak değiştiren sitokinler, kemokinler, büyüme faktörleri ve inflamatuar ve matris remodeling enzimleriyle ECM bileşenlerini sentezleyen ve salgılar. Bu bileşenler arasında, hyaluronik asit (HA) tümör biyolojisinde önemli bir rol oynadığı ortaya çıkmıştır. Basit kimyasal bileşimine rağmen, HA, onun HA-bağlayıcı molekülleri ile birlikte (hyalyapışlar), anjiyogenezi modüle edebilir, bağışıklık sistemi yanıt ve ECM bir boyut ve konsantrasyon bağımlı şekilde yeniden modelleme1.
Tamamlayıcı (C) sistemi de yakın zamanda artan ilgi aldı yerel TME, bir parçasıdır. C sistemi, non-Self-hücrelere, istenmeyen konak elemanları ve patojenlere karşı savunma ilk satırında yer alan çözünür ve membran bağlı proteinleri bir dizi kapsar. İşlevsel olarak, C, doğal ve adaptif sistemlerin iki efektör kollarını doğrudan hücre öldürme ya da bir inflamatuar yanıt2montaj teşvik etmek bağlar. C aktivasyon kanser hücrelerini yok ederek veya onların büyüme inhibe ederek, tümör büyümesini bastırmak, ama giderek bu kronik inflamasyon sürdürülmesi tarafından bir tümör teşvik aktivitesi sahip olabilir açık hale gelmiştir, bir kurulması teşvik immünosupresif çevre, anjiyogenez inducing, ve kansere bağlı sinyalizasyon yolları aktive3. Bu bağlamda, C1q, c sisteminin klasik yolunun ilk tanıma molekülü, C aktivasyonu4' ten bağımsız olarak tümör mikroortamındaki önemli fonksiyonları ortaya çıkartmıştır. C1q, anjiyogenezi ve metasjen5' e ek olarak kanser hücresi yapışma, göç ve proliferasyon lehine olabilir insan malign tümörlerin bir dizi yerel olarak ifade edilmesi gösterilmiştir. İlginçtir C1q ECM gibi büyük bir kurucu ile etkileşime girer.
Primer kanser hücrelerini tümör kütlesine izole etmek için bir teknik geliştirdik. Ayrıca, biz, özellikle C1q ve yüksek moleküler ağırlık hyaluronik asit arasındaki etkileşimi tümör mikroçevre teşvik edebilir matris oluşturdu. C1q bağlı HA tümör hücrelerinin yapışmasını ikna edebildi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1447px;" width="1445">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">100&#8201;&#181;m pore filter</td>
			<td style="width:311px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:131px;">352360</td>
			<td style="width:676px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Amphotericin B solution (fungizone)</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">1397-89-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">basic FGF</td>
			<td style="width:311px;">Immunological Sciences</td>
			<td style="width:131px;">GRF-15595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">C-4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase type I</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation, DBA</td>
			<td style="width:131px;">MX1D12644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">DNase I&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Roche</td>
			<td style="width:131px;">10 104 159 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">EDTA</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">60-00-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:330px;">EGF</td>
			<td style="width:311px;">Immunological Sciences</td>
			<td style="width:131px;">GRF-10544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:330px;">FAST DiI</td>
			<td style="width:311px;">Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">D7756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:311px;">Gibco,&#160; Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:311px;">Roche</td>
			<td style="width:131px;">11051407001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Flask for cell culture</td>
			<td style="width:311px;">Corning</td>
			<td style="width:131px;">430639</td>
			<td>Sterile, vented</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Gentamicin solution</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">G1397-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hank&#8217;s Balanced Salt Solution (HBBS)&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">H6648</td>
			<td>Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">High molecular weight hyaluronic acid</td>
			<td style="width:311px;">Kind gift by Prof. Ivan Donati</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Human endothelial serum free medium&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Gibco,&#160; Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:131px;">11111-044</td>
			<td>Supplemented with EGF (5&#8201;ng/mL), basic FGF (10&#8201;ng/mL), and&#160; 1% penicillin&#8211;streptomycin (Sigma-Aldrich)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:311px;">Carlo Erba</td>
			<td style="width:131px;">13446-18-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medium 199 with Hank&#8217;s salt</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">M7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:330px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:330px;">Time-lapse microscopy&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Nikon&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Imaging System BioStation IM-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Titertek Multiskan ELISA Reader</td>
			<td>Flow Labs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin</td>
			<td style="width:311px;">Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:131px;">T4674</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the interplay between the complement protein c1q and hyaluronic acid in promoting cell adhesion

Tümör mikroortamın neoplazi büyümesi ve metasrat içinde aktif rol oynadığını giderek ortaya koymuştur. Farklı yollar sayesinde, tümör hücreleri etkili bir şekilde stromal, bağışıklık ve endotel hücreleri uyarıcı faktörler, kemokinler ve sitokinlerin salgılar tarafından işe. Buna göre, bu hücreler, yüksek proliferasyonu ve metastatik yetkinliği sürdürmek için büyüme teşvik sinyalleri, metabolitleri ve ekstrasellüler matris bileşenlerini serbest bırakarak mikroortamın sinyalizasyon özelliklerini değiştirebilir. Bu bağlamda, biz tamamlayıcı bileşen C1q, yüksek ölçüde insan malign tümörlerin bir dizi tarafından yerel olarak ifade, ekstraküler matris hyaluronik asit ile etkileşim üzerine, güçlü insan tümöründen izole primer hücrelerin davranışını etkiler tespit Örnek. Burada, biz nasıl C1q hyaluronik asit (HA) etkileri tümör hücre yapışması bağlı test etmek için bir yöntem açıklamak, gerçekte temel bileşenlerin biyolojik özellikleri (Bu durumda HA) ekstrasellüler matrisin temel bileşenlerinin tümör doğru biyoaktif sinyaller şeklinde olabilir Ilerleme.

HA, tekrarlayan (β, 1-4)-D-glukuronik asit-(β, 1-3)-N-asetil-D-glukolin disakkarid üniteler (Şekil 1B)7' den oluşan, negatif olarak şarj edilmiş yüksek molekül ağırlığı polizakkaridin. 96-Well plaka üzerinde ha bağlayıcı oluşumu yanı sıra onun immobilizasyon verimliliği biyotinlenmiş ha yararlanarak test edildi (Bio-ha). 10 μg/mL 'den 1 mg/mL 'ye kadar farklı biyo-HA konsantrasyonları, 100 mM karbonat/bikarbon...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion at JoVE.com

Evaluation of the Interplay Between the Complement Protein C1q and Hyaluronic Acid in Promoting Cell Adhesion

Tamamlayıcı bileşen C1q, doku mikroortamında yüksek derecede ifade edilen, hücre dışı matriks ile etkileşimde bulunan, Pro-inflamatuar bir molekül. Burada, biz nasıl C1q hyaluronik asit etkileri hücre yapışma bağlı test etmek için bir yöntem tarif.

Hücre yapışma teşvik içinde tamamlayıcı protein C1q ve Hyalüronik asit arasındaki Interplay değerlendirilmesi

It has been increasingly demonstrated that the tumor microenvironment plays an active role in neoplasia growth and metastasis. Through different pathways, ...

Hücre adezyonunu teşvik etmek için kompleman protein C1q ve hyaluronik asit arasındaki etkileşimi değerlendirmek için kapsamlı bir prosedür. Yakın zamanda doğuştan gelen bağışıklık sisteminin kompleman bileşeni C1q bir molekülün yüksek tümör ve plasenta mikroortamda ifade ve ekstrasellüler matriks bileşeni ile etkileşim edebildiğini tanımlanmıştır. Bu durumda, hyaluronik asit.Ekronomik ortamda proteinlerin biyolojik fonksiyonlarını incelemek için bir yöntem öneriyoruz. Bu moleküllerin hücre dışı matriks faktörlerinin hücre bölünmesi özelliklerini şekillendirme yeteneğini araştırmak için. Bu etkileşimin çevre dokusunda bulunan hücreler tarafından nasıl hissedildiğini incelemek için, insan dokularından elde edilen ikili hücrelerin hücre dışı matrikse bağlı C1q'a yapışmasına izin verilen bu kolay yöntemi, bu durumda hyaluronik asit.Kaplama işlemi için ilk adım, yüksek molekül ağırlıklı hyaluronik asitin 96 iyi doku kaplı mikroplakaya bağlanmasıdır. Kaplama için, hyaluronik asit mililitre başına 15 mikrogram konsantrasyonda 0,1 mol karbon tampon PH 9.6 seyreltilir. Ve yavaşça borulama homojen bir çözüm elde etmek için requited olduğunu.Kuyuları kaplamak için çözeltinin 100 mikrolitresi kullanılır. Plaka daha sonra bir gecede dört santigrat derece ye aktarılır. Ertesi gün vakum tedavi kuyuları aspire.DPBS ile bir kez yıkayın. İlgili kuyulara C1q veya BSA ekleyin. C1q günümüzde ticari olarak mililitre başına bir miligram konsantrasyonda mevcuttur ve mililitre başına 25 mikrogram konsantrasyonda seyreltilir.Ve dPBS içeren 0.5% BSA ve 0.7 milimols kalsiyum ve magnezyum ve divalent katyonlar. BSA LPS ücretsiz% 0.5 konsantrasyonda kullanılır ve tarih PBF. Plaka daha sonra bir gecede dört santigrat derece ye aktarılır.Immobilize hyaluronik asit ile C1q doz bağımlı etkileşimleri enzim bağlı immün SA tarafından belirlenir. Hızlı DiI ile etiketleme hücreleri. Lipophilic tracer hızlı DiI ilgi hücreleri etiketlemek için kullanılır. DPBS'de yeniden askıya alınan hücreler mililitre başına bir milyon hücre konsantrasyonunda kullanılır.Hızlı DiI doğrudan hücre süspansiyon içine 1-100 seyreltilir. Hücre süspansiyonu elle karıştırılır ve 37 derecede 15 dakika aktarılır. Beş dakika kuluçkadan sonra, hücre süspansiyonunu karıştırın ve bu işlemi iki kez daha tekrarlayın.Hızlı DiI fazlalığı kaldırmak için, dPBS 10 mililitre ekleyin. Yavaşça yukarı ve aşağı pivot ve yedi dakika boyunca 250 g santrifüj. 0.1% BSA varlığında insan endophilical serum serbest ortamda bir mililitre hücre pelet resuspend.Hyaluronik asit C1q matrisler üzerinde hücre yapışma. Vakum kaplı kuyulardan dPBS aspire. 100 mikrolitre etiketli hücre süspansiyonu kaplamalı kuyulara dağıtın.Standart eğri üretimi için kullanılmak üzere ependure tüpünde 200 mikrolitre etiketli hücre parçalanır. Plakayı 37 derecede 35 dakika kuluçkaya yatırın. Kuvözdeki tabağı çıkar.Dengesiz hücreleri yavaşça aspire edin. %0,5 BSA ve 0,7 milimol kalsiyum ve magnezyum içeren dPBS ile bir kez yıkayın. Lys yapışık hücreleri 200 mikrolitre lysis tampon ekleyerek.Aynı zamanda lysis tampon etiketli hücrelerin bir ila iki seri seyreltme üzerine standart eğri hazırlamak. Floresan sinyalinin sonsuz F 200 T-can cihazında uyarma dalga boyu olarak 544 nanometre ve emisyon dalga boyu olarak 590 nanometre kullanarak okunmasını gerçekleştirin. Temsili sonuçlar.Temsili sonuçlardan da anlaşıldığı gibi, hyaluronik asit üzerindeki hücre adezyonunun C1q'u tek başına HA veya HA'ya bağlı BSA ile karşılaştırıldığında güçlü bir şekilde geliştirilmiş olduğu açıktır. Her matristeki yapışık hücrelerin yüzdesi standart eğriye göre hesaplanır. Sonuç. Deneylerimizde öncelikle kompleman bileşeni C12'nin bu durumda hyaluronik asidi arisal bir metal kullanarak ekstrasellüler matriks bağlama yeteneğini değerlendirdik.İkinci olarak, floresan boya ile boyanmış insan birincil hücrelerinin bağlı hyaluronik asit takibini yapmak için yeteneğini analiz ettik. Bu çalışmada önerdiğimiz model, bu hücresel yanıtın uyaranların bir kombinasyonuna karşı değerlendirilmesi için hücre dışı matris iskelelerin 3Boyutlu modeline alternatif olarak daha kolay ve daha ucuz bir yöntemdir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Kompleman tükenmesi Özel Hücre Populasyonlarının tükenmesi

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

Ölçüm% 50 Hemolitik Kompleman (CH 50</subSerum) Faaliyet

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Manyetik Rezonans Görüntüleme

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

T Lenfositlerindeki Integrin Aktivasyonunun Çalışması için statik Adezyon Deneyi

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

T Lenfosit-Yapışma Molekülü Etkileşimleri Çalışmaları Yapışma Altında Kesme Stres Testi

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

Bimolecular tamamlayıcı benzeşme arıtma (BiCAP) tarafından parçalanmış çok protein sinyal kompleksleri

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Dynamic Adhesion Assay for the Functional Analysis of Anti-adhesion Therapies in Inflammatory Bowel Disease

Dinamik yapışma tahlil için anti-yapışma tedaviler iltihabi bağırsak hastalığı fonksiyonel analiz

Gut homing of immune cells is important for the pathogenesis of inflammatory bowel diseases (IBD). Integrin-dependent cell adhesion to addressins is a ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Ana bilgisayar-patojen yanıt ve aşı etkinliği farelerde değerlendirilmesi

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Çıplak farelerde 2 '-Deoxyguanosine tedavi Murine embriyonik Thymus renal subkapsüler nakli

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...