Name: preparation of prokaryotic and eukaryotic organisms using chemical drying for morphological analysis in scanning electron microscopy (sem)
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM at JoVE.com

この作品は研究局、セントラル ミシガン大学大学院研究から MAK に MLS と夏学者賞の助成金によって賄われていた。シアノ バクテリアは、沿岸域、テキサス A & M 大学コーパスクリスティの Zimba とプランクトン研究室、センターの一部によって供給されました。Euglenoids は、Triemer の実験室、ミシガン州立大学によって供給されました。

1. 準備と固定
<ol><li>シアノ バクテリアを準備します。<ol>
<li>14:10 h に 28 ° C の温度で F/2 メディア24,25 unialgal 文化を成長ライト暗い周期。後 15 分を解決するを許可すると、細菌のペレットがサイズで約 0.05 mL、1.5 mL 遠心チューブに十分な文化を転送します。メディアを取り出し、1.5 ml (1.25% グルタルアルデヒド、0.1 M のリン酸バッファー pH 7.0) は?...

<ol>
	<li>Bozzola, J. J., Russell, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Electron microscopy, principles and techniques for biologists. , (1999).</li><li>Goldstein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Scanning electron microscopy and X-ray microanalysis. , (2003).</li><li>Egerton, R. 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(120), (2017).</li><li>Miquel Guennoc, ., C, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Method+for+Qualitative+Multi-scale+Analysis+of+Bacterial+Biofilms+on+Filamentous+Fungal+Colonies+Using+Confocal+and+Electron+Microscopy.">A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy.</a> Journal of visualized experiments. (119), (2017).</li><li>Bucher, T., Kartvelishvily, E., Kolodkin-Gal, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodologies+for+Studying+B.+subtilis+Biofilms+as+a+Model+for+Characterizing+Small+Molecule+Biofilm+Inhibitors.">Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors.</a> Journal of visualized experiments. (116), (2016).</li><li>Thompson, Z. S., Rijal, N. P., Jarvis, D., Edwards, A., Bhattarai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Keratin-based+Nanofiber+for+Biomedical+Engineering.">Synthesis of Keratin-based Nanofiber for Biomedical Engineering.</a> Journal of visualized experiments. (108), e53381 (2016).</li><li>Ponce, A., Mejia-Rosales, S., Jose-Yacaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+transmission+electron+microscopy+methods+for+the+analysis+of+nanoparticles.">Scanning transmission electron microscopy methods for the analysis of nanoparticles.</a> Methods in Molecular Biology. , 453-471 (2012).</li><li>Wang, X. S., Tang, H. P., Li, X. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+the+evolution+of+the+euglenid+pellicle.">Trends in the evolution of the euglenid pellicle.</a> Evolution. 55 (11), 2215-2235 (2001).</li><li>Shulman, J. M., Feany, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+modifiers+of+tauopathy+in+Drosophila.">Genetic modifiers of tauopathy in Drosophila.</a> Genetics. 165 (3), 1233-1242 (2003).</li><li>Reinecke, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implicating+calpain+in+tau-mediated+toxicity+in+vivo.">Implicating calpain in tau-mediated toxicity in vivo.</a> PLoS One. 6 (8), e23865 (2011).</li></ol>

ここで我々 は生物や組織の多くの種類の機能に適用できる他の有機体の 3 種類の外部形態的特性について詳細な情報を取得する SEM を使用してプロトコルを記述しました。プロトコルの各ステップ内では、潜在的なエラーで発生する可能性があり、詳細は以下で説明している点があります。
定着剤と洗浄ここに与えられたボリュームが特定は一般に定着剤と洗浄が試料?...

走査型電子顕微鏡 (SEM) は、サンプル1の地形と形態を示す二次電子から画像を生成するのに高エネルギー電子の集束ビームを使用します。SEM は、直接サンプル、提供のより高い解像度と表面構造三次元形状の物理サイズと光学顕微鏡と比較してフィールドの大きい深さを決定する使用できます。電子顕微鏡検査 (EM) の別のフォーム、透過型電子顕微鏡 (TEM) は、内部構造の細部のイメージを生成するサンプルを通過集中電子を使用します。TEM 光または SEM より高い解像度があり単一原子のような小さな構造を解決する使用ことができます、それは 3 つの主要な不利な点: 広範なサンプル準備、小さな視野とフィールド2,3の浅い深さ。その他可視化プロトコルが SEM を使用して特定の細胞、細胞小器官や組織4,5,6,7,8,9,を調べる存在する10 、このプロトコルは、固有生物形態学的評価のための大規模な範囲に広く適用することができる方法について述べる。
SEM は、地質、産業、科学、材料14,のナノ粒子11,12, ポリマー13, と多数のアプリケーションを含む無機材料を検査するための広範なアプリケーションを発見した15,16。生物学で、SEM は長い個々 の蛋白質から全体生物17,18に至るまで生物学的サンプルを調べるための方法として使用されています。SEM は、科学的発見を知らせるため表面の形態学的詳細を使用できるため、特定の値が。SEM 解析は、構造、サイズ、および幅広い生体試料の表面特性について詳細な情報を取得する高速、安価で、簡単な方法です。
SEM は、一貫した高速電子ビームをサポートする高真空 (10-6 Torr の最小) の下で通常動作するため液体 (水、油、アルコール) は許可されません試料室の真空が形成するを防ぐ液体として。したがって、SEM を用いてすべてのサンプルは、通常乾燥プロセスによって続く傾斜エタノール シリーズを使用したエタノールを削除、脱水される必要があります。乾燥空気乾燥、凍結乾燥、臨界点乾燥 (CPD) デバイス、または化学 t-ブチル アルコール (未定) またはヘキサメチルジシラザン (HMDS)19、を使用して乾燥の使用など、SEM で使用するため生体組織のいくつかの方法があります。20,21,22. 各生物学的サンプルが異なるそれぞれの乾燥方法に反応するのでほとんどの場合、乾燥方法の選択は経験的。任意の指定されたサンプルのすべてのこれらのメソッドがあります適切な長所とそれぞれの短所を比較することは適切な方法を選択する際に便利ですので。
部屋の温度や乾燥炉 (60 ° C) 試料の乾燥空気は、最も簡単な方法は、ほとんどの生物学的サンプル shriveling など乾燥によるダメージを表示する、折りたたむには、供試体の歪みの結果します。凍結乾燥のプロセスも水 (または氷)、サンプルから削除しますが、フラッシュ凍結サンプルを必要として有害なサンプル、昇華のプロセスを介して氷を削除する真空下に置かれます。さらに、ユーザーは、エアカーテンへのアクセスに必要です。SEM のためのサンプルをステータス退避に最も一般的に使用されるメソッドは、臨界点乾燥 (CPD) です。液体の二酸化炭素 (CO2) と、特定の温度と臨界点 (31.1 ° C、1,073 psi) CO2気化により表面張力を作成せずとして知られている圧力条件の下で、CPD のサンプルでエタノールが置き換えられますサンプルの形態や構造の特徴を効果的に維持します。CPD は、標準的な方法では一般的に、いくつかの欠点があります。最初に、プロセスでは、臨界点乾燥機は高価なだけでなく、また液体の二酸化炭素の使用が必要になりますへのアクセスが必要です。第二に、乾燥することができますサンプルのサイズは、臨界点乾燥機のチャンバー サイズに制限されます。第三に、CPD の中に液体の交換は、サンプルを傷つけることができる乱流を可能性があります。
化学乾燥 CPD に比べて多くの利点を提供しています、SEM 試料の普及に伴い、適切な代替として機能します。未定、HMD など化学の dehydrants の使用は、サンプルの構造の整合性を維持しながら他の方法を高速、安価で、シンプルな代替を提供しています。我々 は最近、組織または大人のショウジョウバエ網膜組織23の乾燥方法として CPD または未定を使用する場合に、最終的な画像品質の整合性の違いがなかったことを示した。CPD とは異なり乾燥器や液体 CO2未定と HMD は必要ありません、乾燥試料のサイズに制限はありません。化学物質を取得、に加えて標準の化学発煙のフードと適切な個人用保護具 (手袋、白衣、安全メガネ) だけは乾燥のプロセスを完了する必要があります。TBA は毒性の少ないより少なく高価な未定と HMD は可燃性ですが、(約 1/3 HMD のコスト) HMD より。
この記事で述べる修正、洗浄、脱水、乾燥、マウント、スパッタ コート、およびイメージの 3 つのタイプの菌する方法: シアノ バクテリア (Toxifilum mysidocida、 Golenkina sp、不明な sp)、2 つの euglenoids 属Monomorphina から(M. aenigmatica と m. pseudopyrum) とフルーツ フライ (ショウジョウバエ)。これらの生物は、サイズ (4 mm 0.5 μ m) と (単細胞多細胞に) 細胞の多様性の広い範囲を表すまだすべては、だけ小さな変化が切片作製に必要な SEM 解析へ簡単に従う義務があります。このプロトコルは 3 つのタイプの菌の形態学的詳細を調べます化学脱水と SEM 分析を使用する方法について説明し、多くの生物を調べることに広く適用されると組織型。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1285px;" width="1284">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">&#160;gold&#8211;palladium</td>
			<td style="width:373px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:395px;">91212</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silver conductive adhesive 503</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>12686-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 8 &#956;m, polycarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA110614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 0.8 &#956;m, polycarbonate, black</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA110659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 0.2 &#956;m, polycarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA110606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">aluminum weighing dish&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-732-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">aluminum mounting stubs (12 mm)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>75210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">aluminum mounting stubs (25 mm)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>75186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Adhesive tabs&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>76760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">conductive carbon adhesive tabs</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>77825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">F/2 media</td>
			<td style="width:373px;">Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin</td>
			<td style="width:395px;">https://utex.org/products/f_2-medium</td>
			<td>No Catalog number given - see link&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AF6 media</td>
			<td style="width:373px;">Bigelow - National Center for Marin Algae and Microbiota</td>
			<td style="width:395px;">https://ncma.bigelow.org/media/wysiwyg/Algal_recipes/NCMA_algal_medium_AF6_1.pdf</td>
			<td>No Catalog number given - see link&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Soil water medium</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>153785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether (Triton X-100)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hummer 6.2 Sputter Coater</td>
			<td>Anatech USA</td>
			<td>http://www.anatechusa.com/hummer-sputter-systems/4</td>
			<td>No Catalog number given - see link&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hitachi 3400N-II SEM&#160;</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td style="width:395px;">https://www.hitachi-hightech.com/us/product_list/?ld=sms2&#38;md=sms2-1&#38;sd=sms2-1-2&#38;gclid=EAIaIQobChMIpq_jtJfj3AIVS7jACh2mdgkPEAAYASAAEgKAnfD_BwE</td>
			<td>The company doesn&#39;t appear to sell this model any longer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of prokaryotic and eukaryotic organisms using chemical drying for morphological analysis in scanning electron microscopy (sem)

走査電子顕微鏡 (SEM) は、個々 のタンパク質から細胞、組織、器官、でも全体の有機体に至るまでの生物的標本を研究に適用されている広く利用可能な技術です。このプロトコルが SEM. を用いた原核生物と真核生物のイメージングへの応用と t-ブチル アルコール (TBA) ヘキサメチルジシラザン (HMDS) 2 つの化学的乾燥方法に焦点を当ててください。この記事で述べる修正、洗浄、脱水、乾燥、マウント、スパッタ コート、およびイメージの 3 つのタイプの菌する方法: シアノ バクテリア (Toxifilum mysidocida、 Golenkina sp、不明な sp)、2 つの euglenoids 属Monomorphina から(M. aenigmatica と m. pseudopyrum) とフルーツ フライ (ショウジョウバエ)。このプロトコルの目的は、高速、安価で、シンプルな構造、サイズ、および有機体のための大規模な範囲に広く適用できる標本の表面特性について詳細な情報を取得するメソッドを記述する形態評価。このプロトコルを正常に完了は、他の SEM を使用して彼らのシステムにこれらの技術を適用することによってサンプルを視覚化することができます。

シアノ バクテリアは原核生物地球規模の炭素、酸素、および窒素サイクル28,29に重要な生物群が。シアノ バクテリア30推定 6000 種のほとんどをカバーし、セルを一緒に接続する粘液質の鞘があるし、他の構造に31、図形と一緒にすることができます解決顕微鏡32。セルの?...

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Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM

原核生物と真核生物の化学形態分析走査電子顕微鏡 (SEM) での乾燥の準備

SEM 解析、種の同定や表現型差別を支援する効果的な方法です。このプロトコルは 3 つの代表的なタイプの菌の形態学的詳細を調べる方法について説明し、多くの個体の特徴を調べることに広く適用されると組織型。

Scanning electron microscopy (SEM) is a widely available technique that has been applied to study biological specimens ranging from individual proteins to ...

このプロトコルは、2つの化学乾燥法、ヘキサメチルジシラザンとTブチルアルコールとSEMを使用して原核生物と真核生物の両方をイメージングするそれらのアプリケーションに焦点を当てています。この技術の主な利点は、分析用のサンプルを調製するために、臨界点乾燥機などの特殊な乾燥装置を使用する必要がなされないことです。このプロトコルは、3種類の生物の化学脱水およびSEM分析を使用する方法を記述するが、多くの生物および組織タイプを調べるのに広く適用されるであろう。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の学部生であるマディソン・クーンです。開始するには、一晩固定することによってシアノバクテリアを調製します。次に、ポリカーボネート25mLフィルタを含む10mL濾過リグに移します。ゴムストッパーでろ過リグのサイドアームと漏斗をシールして、漏斗の中の培養物を封じ込める。両方のストッパーを取り外した後、濾過フラスコに優しい掃除機をかけることによって固定剤を取り除きます。単細胞藻類のユーグレノイドを調製するには、4%オスミウム四酸化膜の3滴を、以前に10mL濾過リグに移された培養物に直接加えて固定します。30分間のインキュベーションの後、両方のストッパーを取り外し、濾過フラスコに優しい掃除機をかけることによって固定剤を取り除きます。固定ユーグレノイドを0.1 Mリン酸緩衝液pH 7.0の5 mLで10分間、フラスコと漏斗をストッパーで閉じて洗浄を保持したまま3回洗浄します。両方のストッパーを取り外した後、濾過フラスコ上の穏やかな真空によって各洗浄を除去する。連続浸漬を維持しながらサンプルを脱水するには、フラスコと漏斗をストッパーで閉じたまま、漏斗中の5mLの体積で10分間のグレードエタノールシリーズを使用して、漏斗にエタノールを含めます。両方のストッパーを取り除いた後、濾過フラスコの真空を穏やかに除去し、エタノールを除去する。サンプルをサンプルをカバーするのに十分な100%エタノールを含む使い捨て可能なアルミニウム計量皿にサンプルを移します。TBAを用いてユーグレノイドの化学乾燥を行う場合は、まずアルミニウム皿中の100%エタノール溶液をTBAの1~1溶液、100%エタノールに20分間交換します。その後、1~1溶液を100%TBAに20分間交換し、この処理を2回繰り返します。TBAを取り外し、サンプルをカバーするのに十分な新鮮な100%TBAと交換してください。TBAを凍らせるには、10分間摂氏4度で皿を置きます。試料を冷凍ゲルパック付きの真空デシケーターに移し、TBAを凍結状態に保ちます。ロータリーポンプを使用して真空を排気し、維持し、凍結したTBAの真空昇華によってサンプルを少なくとも3時間乾燥させます。ユーグレノイドにシアノバクテリアを取り付けるには、25mmのアルミニウム実装スタブの底にラベルを付けて、上に置かれているものを示します。次に、各フィルターをスタブの上部に固定したカーボン接着剤タブに置きます。ショウジョウバエメラノガスターを調製するには、麻酔付きハエを摂氏4度で2時間固定化して麻酔を行い、完全に水没していることを確認します。ガラスピペットを使用して固定剤を取り除きます。固定ショウジョウバエサンプルを1.5 mLマイクロ遠心分離チューブで1.1Mリン酸緩衝液1 mL、pH 7.2を室温で10分間洗浄します。ガラスピペットを使用して各洗浄物を取り除き、サンプルを取り外さないと注意してください。次いで、グレードエタノール系列をそれぞれ10分間用いて、マイクロフュージチューブ内のサンプルを1mLの体積で脱水する。ガラスピペットを使用して各洗浄物を取り除き、サンプルを取り外さないと注意してください。サンプルをカバーするのに十分な100%エタノールで1.5 mLマイクロ遠心チューブに保管してください。HMDSを用いてハエの化学乾燥を行う場合は、まず100%エタノール溶液をHMDSの1~2溶液に、100%エタノールを20分間交換します。その後、溶液をHMDSの2~1溶液と100%エタノールで20分間交換します。最後に、このソリューションを100%HMDSに20分間交換してから、このプロセスを1回繰り返します。1.5 mLマイクロ遠心分離チューブとHMDS内のサンプルを使い捨てアルミニウム計量皿に移します。サンプルをカバーするのに十分な新鮮な100%HMDSと100%HMDSを交換してください。アルミニウム皿の中に直接サンプルを化学発煙フードに入れ、箱などの緩い蓋で乾燥させ、破片がサンプルに落ちるのを防ぎ、12〜24時間乾燥させます。ショウジョウバエを取り付けるには、アルミニウム製の取り付けスタブの底にラベルを付けます。精密ピンセットを使用して、乾燥したハエを、解剖顕微鏡の下でスタブの上部に固定されたカーボン接着タブの所望の位置に置きます。銀の導電性接着剤をスタブの外縁に貼ります。爪楊枝を使って銀色の塗料をハエに接続し、導電性を確保し、塗料が目的のイメージング領域に触れないようにします。スタブをスタブホルダーボックスに入れ、開いたスタブホルダーボックスをデシケータに入れ、銀色の塗料を少なくとも3時間乾燥させます。スパッタ塗布装置を準備するために、アルゴンガスの4〜5フラッシュを行う。コーティングするサンプルに応じて、原稿に記載されているようにタイマーを異なる設定に設定します。スパッタは、メーカーの指示に従ってスタブをコーティングします。最後に、使用するサンプルに依存する設定を持つ二次電子検出器を含む走査型電子顕微鏡を用いた画像サンプル。このプロトコルを用いたSEM用シアノバクテリアの調製に成功し、表面の形状や質感を含む細胞の詳細、細胞からの粘液および突起の鞘が見える画像が得られた。コロラド州の糸状淡水種のSEM画像は、粘液の目に見える鞘を示しています。オハイオ州の淡水細菌のSEM画像は、時には粘液の薄い層によって一緒に保持されたコロニーを形成する個々の細胞を明らかにします。フィラメント状突起は、個々の細胞から伸びる。テキサス州沿岸海域の高い堆積物からの未知の糸状種の画像は、個々の細胞と分裂細胞を示しています。SEMは、2つの異なるユーグレノイド種のペリクルストリップを視覚化するために使用された。モノモルフィナとアイニグマティカをモノモルフィナ擬ピルムと比較すると、後端に出現するペリクルストリップの可視的なヘリカル配置が尾を形成し、フィロジナリを終結に補助する。正常なショウジョウバエの目のSEM画像は、剛毛とレンズの順序付けられた配列を示していますが、アルツハイマー病に関連するタンパク質の発現は、荒い目の表現型を作成します。眼の荒い表現型を抑制または増強する遺伝子は、疾患進行において生理学的役割を果たす可能性がある。ここでは、不適切な乾燥技術から眼の崩壊した構造の例や、画像取得時に出現する不十分なスパッタコーディングからの電子帯電の例を含む、避けるべき潜在的なピットフォールの例を示す。ここで説明するプロトコルは、尊敬される共犯と非常に大きく使用される生物を利用しましたが、生物学の多くのサブ分野にまたがる科学的発見に不可欠な有用な形態学的情報を収集するためにSEM分析に適しています。T-ブチルアルコール、ヘキサメチルジシラザン、および四酸化オスミウムとの作業は危険であり、適切な安全対策は常にユーザー、特にこれらの化学物質を取り扱う学生を保護するために守られるべきであることを忘れないでください。

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy (SEM)

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

の電子顕微鏡のための胚の調製ショウジョウバエ胎児心臓の管

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy

走査型電子顕微鏡による肝類洞内皮細胞およびそれらの開窓の分析のための標準化された方法

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

細胞外マトリックスを視覚化するために浸軟組織の電子顕微鏡をスキャンします

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Studying the Supramolecular Organization of Photosynthetic Membranes within Freeze-fractured Leaf Tissues by Cryo-scanning Electron Microscopy

クライオ走査電子顕微鏡により凍結破砕葉組織内の光合成膜の超分子組織を学びます

Cryo-scanning electron microscopy (SEM) of freeze-fractured samples allows investigation of biological structures at near native conditions. Here, we ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

問題のあるプラント、卵菌類、および真菌サンプルのための電子顕微鏡（SEM）プロトコルをスキャン

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

走査型透過電子トモグラフィーにより太い生物学的サンプルの調製と観察

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

サンプル準備および透過電子顕微鏡によるエクソソームのイメージ投射

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

透過電子顕微鏡用小型サンプル準備

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

高圧急速凍結、マイクロ波を用いたコントラスト強調、およびボリューム イメージングのために埋め込む最小限の樹脂による生体試料作製

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Array Tomography Workflow for the Targeted Acquisition of Volume Information using Scanning Electron Microscopy

走査型電子顕微鏡を用いたボリューム情報の標的取得のためのアレイ断層化ワークフロー

Electron microscopy is applied in biology and medicine for imaging of cellular and structural details at nanometer resolution. Historically, Transmission ...