Name: preparation of prokaryotic and eukaryotic organisms using chemical drying for morphological analysis in scanning electron microscopy (sem)
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM at JoVE.com

이 작품 연구의 사무실 및 중앙 미시간 대학에서 대학원에서 MAK로 MLS와 여름 학술 상 교부 금에 의해 투자 되었다. 남조류는 해안 연구, 텍사스 A & M 대학교 코 퍼스 크리스티에 대 한 Zimba 및 플랑크톤 연구소, 센터의 부분에 의해 공급 되었다. Euglenoids는 Triemer 연구소, 미시간 주립 대학에 의해 공급 되었다.

1. 준비 및 고정
<ol><li>박테리아를 준비 합니다.<ol>
<li>14:10 h에 28 ° C의 온도에 F/2 미디어24,25 unialgal 문화 성장 빛 어두운 주기에. 해결 하기 위해 15 분을 허용, 후 세균 펠 릿 크기에 약 0.05 mL 충분 한 문화 microcentrifuge 1.5 mL 튜브에 전송 합니다. 미디어를 제거 (1.25%도, 0.1 M 인산 버퍼 pH 7.0) 정착 액의 1.5 mL를 바꿉니다, 그리고 부드럽게 여러 번 반전 및 4 °...

<ol>
	<li>Bozzola, J. J., Russell, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Electron microscopy, principles and techniques for biologists. , (1999).</li><li>Goldstein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Scanning electron microscopy and X-ray microanalysis. , (2003).</li><li>Egerton, R. 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(120), (2017).</li><li>Miquel Guennoc, ., C, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Method+for+Qualitative+Multi-scale+Analysis+of+Bacterial+Biofilms+on+Filamentous+Fungal+Colonies+Using+Confocal+and+Electron+Microscopy.">A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy.</a> Journal of visualized experiments. (119), (2017).</li><li>Bucher, T., Kartvelishvily, E., Kolodkin-Gal, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodologies+for+Studying+B.+subtilis+Biofilms+as+a+Model+for+Characterizing+Small+Molecule+Biofilm+Inhibitors.">Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors.</a> Journal of visualized experiments. 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여기 우리는 세 가지 유형의 다른 사람 유기 체 또는 직물의 많은 종류의 기능을 검사에 적용할 수 있는 생물의 외부 형태학 상 특성에 대 한 자세한 정보를 SEM을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 프로토콜의 각 단계에서 발생할 수 있습니다 아래에 자세히 설명 되어 있는 오류의 잠재적인 포인트가 있다.
정착 액 및 세척 여기에서 주어진 볼륨 특정 있지만, 일반적으로 정?...

스캐닝 전자 현미경 (SEM) 이차 전자 형태 및 샘플1의 지형에서에서 이미지를 생성 하 고 에너지 전자의 집중된 광선을 사용 합니다. SEM는 직접 샘플, 표면 구조 및 3 차원 모양 제공 큰 해상도의 실제 크기와 가벼운 현미경 검사 법에 비해 피사계 큰 깊이 결정 하기 위해 사용할 수 있습니다. 전자 현미경 (EM)의 또 다른 형태, 전송 전자 현미경 (TEM) 내부 구조의 정밀한 세부 사항 가진 이미지를 생성 하는 샘플을 통해 전달 하는 집중 된 전자를 사용 합니다. 가장 빛 또는 SEM 보다 더 높은 해상도 작은 단일 원자 구조를 해결 하기 위해 사용할 수 있습니다, 그것은 세 가지 주요 단점: 광범위 한 샘플 준비, 보기의 작은 필드와 필드2,3의 얕은 깊이. 비록 다른 시각 프로토콜 특정 세포, 세포, 또는 조직4,5,6,7,,89, 검사를 SEM을 사용 하 여 존재 10 ,이 프로토콜은 독특한 형태학 평가 대 한 생물의 큰 범위를 광범위 하 게 적용 될 수 있는 방법 설명.
Sem의 지질, 산업, 및 소재 과학14, 나노 입자11,12, 폴리머13및 수많은 응용 프로그램을 포함 하는 무기 재료를 조사 하기 위한 광범위 한 응용 프로그램을 발견 했다 15,16. 생물학, SEM 오래 개별 단백질에서 전체 유기 체17,18에 이르기까지 생물 학적 샘플을 조사 하기 위한 방법으로 사용 되었습니다. Sem의 과학적 발견을 알리기 위하여 형태학 표면 세부 정보를 사용할 수 있으므로 특정 값입니다. SEM 분석은 구조, 크기, 그리고 다양 한 생물 학적 샘플의 표면 특성에 대 한 자세한 정보를 얻기 위해, 저렴 한, 빠르고 간단한 방법입니다.
일반적으로 SEM 고속 전자의 일관 된 빔을 지원 하기 위해 높은 진공 (10-6 Torr 최소) 밑에 운영 한다, 때문에 액체는 진공을 형성 하지 아니 액체 (물, 기름, 알콜) 샘플 챔버에 허용 됩니다. 따라서, 모든 샘플 SEM을 사용 하 여 검사 해야 합니다 탈수 일반적으로 건조 과정 뒤 등급된 에탄올 시리즈를 사용 하 여 에탄올을 제거. 공기 건조, 동결은, 임계점 건조 (일일) 장치, 또는 t-부 틸 알코올 (미정) 또는 hexamethyldisilazane (HMDS)19, 를 사용 하 여 건조 하는 화학 물질의 사용을 포함 하 여 SEM에서 사용 하기 위해 생물 학적 조직의 건조의 여러 방법이 있다 20 , 21 , 22. 가장 자주, 건조 방법의 선택은 경험적 이후 각 생물 학적 샘플 각 건조 방법에 다르게 반응할 수 있습니다. 각각의 장단점을 비교 하는 것은 적절 한 방법을 선택 하는 데 유용 하므로 어떤 주어진된 샘플에 대 한 모든 이러한 방법의 적절 한, 있을 수 있습니다.
실내 온도에 또는 건조 오븐 (60 ° C)에서 샘플을 건조 공기는 가장 간단한 방법은, 대부분의 생물 학적 샘플 건조-손상 shriveling 등을 표시 하 고 축소, 왜곡은 견본에서 결과. 동결은 과정 또한 제거 물 (또는 얼음) 샘플, 하지만 플래시-냉동 수 샘플을 필요로 하 고 승화, 잠재적으로 샘플 손상의 과정을 통해 얼음 제거 진공에서 배치. 또한, 사용자는 lyophilizer에 액세스할 수 있어야 합니다. SEM에 대 한 샘플을 탈수에 대 한 가장 일반적으로 사용 되는 방법 (일일)을 건조 하는 중요 한 포인트입니다. 일일 비용, 액체 이산화탄소 (CO2)와, 특정 온도 압력 조건 함으로써 표면 장력을 만들지 않고 증발 임계점 (31.1 ° C와 1,073 psi), CO2 로 알려진에서 샘플에 에탄올이 대체 됩니다. 샘플의 형태 및 구조 기능을 효과적으로 유지. 일일은 일반적으로 표준 방법, 그것은 몇 가지 단점이 있습니다. 첫째, 과정 뿐만 아니라, 하지만 또한 액체 이산화탄소의 사용을 필요로 하는 중요 한 포인트, 건조 기에 대 한 액세스를 필요 합니다. 둘째, 건조 수 있는 샘플의 크기의 임계점 건조 기 챔버 크기 제한 됩니다. 셋째, 일일 동안 액체의 교류는 샘플을 손상 시킬 수 있는 난 기류를 발생할 수 있습니다.
화학 건조 일일 비용 이상의 많은 장점을 제공 하 고 SEM 샘플 준비에서 널리 이용 되는 적당 한 대안 역할. 미정 및 HMDS와 같은 화학 dehydrants 사용 하 여 샘플의 구조적 무결성 유지 하면서 다른 방법에, 저렴 한, 빠르고 간단한 대안을 제공 합니다. 우리는 최근에 조직 또는 일일 비용 또는 미정 성인 초파리 망막 조직을23건조 방법으로 사용 하는 경우 캡처한 최종 이미지의 품질의 무결성에 차이가 있었다는 것을 보여주었다. 일일, 달리 미정 HMDS 필요 하지 않습니다는 건조 또는 액체 CO2 하 고 건조 하는 샘플의 크기에 제한이 없습니다. 화학 물질을 얻는 이외에 표준 화학 증기 두건 및 적절 한 개인 보호 장비 (장갑, 실험실 외 투, 및 안전 고글) 건조 과정을 완료 하는 데 필요 합니다. 미정 및 HMDS는 가연성, 미정은 적은 독성과 더 저렴 (약 1/3의 HMDS 비용) HMDS 보다.
이 문서에서는, 우리가 해결, 세척, 탈수, 건조, 탑재, 코트, 스퍼터 및 생물의 세 종류를 이미지 하는 방법을 설명: 박테리아 (Toxifilum mysidocida, Golenkina sp., 그리고 알 수 없는 sp.), 2 euglenoids Monomorphina 속에서 (M. aenigmatica, M. pseudopyrum), 그리고 과일 파리 (Drosophila melanogaster). 이러한 생물 대표 다양 한 크기 (4 m m 0.5 µ m)과 세포 다양성 (단 세포 다세포에), 아직 모든 SEM 분석을 쉽게 순종 견본 준비에 필요한 작은 변화만. 이 프로토콜 화학 탈수 및 SEM 분석을 사용 하 여 생물의 세 종류의 형태학 세부 사항을 검사 하는 방법을 설명 합니다 및 많은 organismal 검토에 광범위 하 게 적용 될 것 이라고 및 조직 유형.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1285px;" width="1284">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">&#160;gold&#8211;palladium</td>
			<td style="width:373px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:395px;">91212</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Silver conductive adhesive 503</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>12686-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 8 &#956;m, polycarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA110614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 0.8 &#956;m, polycarbonate, black</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA110659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:351px;">Whatman Nuclepore Track-Etched Membranes; diam. 25 mm, pore size 0.2 &#956;m, polycarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA110606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">aluminum weighing dish&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-732-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">aluminum mounting stubs (12 mm)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>75210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">aluminum mounting stubs (25 mm)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>75186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Adhesive tabs&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>76760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">conductive carbon adhesive tabs</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>77825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">F/2 media</td>
			<td style="width:373px;">Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin</td>
			<td style="width:395px;">https://utex.org/products/f_2-medium</td>
			<td>No Catalog number given - see link&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">AF6 media</td>
			<td style="width:373px;">Bigelow - National Center for Marin Algae and Microbiota</td>
			<td style="width:395px;">https://ncma.bigelow.org/media/wysiwyg/Algal_recipes/NCMA_algal_medium_AF6_1.pdf</td>
			<td>No Catalog number given - see link&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Soil water medium</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>153785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether (Triton X-100)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hummer 6.2 Sputter Coater</td>
			<td>Anatech USA</td>
			<td>http://www.anatechusa.com/hummer-sputter-systems/4</td>
			<td>No Catalog number given - see link&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hitachi 3400N-II SEM&#160;</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td style="width:395px;">https://www.hitachi-hightech.com/us/product_list/?ld=sms2&#38;md=sms2-1&#38;sd=sms2-1-2&#38;gclid=EAIaIQobChMIpq_jtJfj3AIVS7jACh2mdgkPEAAYASAAEgKAnfD_BwE</td>
			<td>The company doesn&#39;t appear to sell this model any longer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of prokaryotic and eukaryotic organisms using chemical drying for morphological analysis in scanning electron microscopy (sem)

스캐닝 전자 현미경 (SEM) 개별 단백질에서 세포, 조직, 세포, 및 전체 유기 체에 이르기까지 생물 표본 연구에 적용 된 널리 사용할 수 있는 기술 이다. 이 프로토콜은 두 개의 화학 건조 방법, hexamethyldisilazane (HMDS) 및 t-부 틸 알코올 (미정), 및 SEM.를 사용 하 여 간결한과 진 핵 생물의 이미지를 그들의 응용 프로그램에 초점을 맞추고합니다 이 문서에서는, 우리가 해결, 세척, 탈수, 건조, 탑재, 코트, 스퍼터 및 생물의 세 종류를 이미지 하는 방법을 설명: 박테리아 (Toxifilum mysidocida, Golenkina sp., 그리고 알 수 없는 sp.), 2 euglenoids Monomorphina 속에서 (M. aenigmatica, M. pseudopyrum), 그리고 과일 파리 (Drosophila melanogaster). 이 프로토콜의 목적은 구조, 크기, 표면 특성에 대 한 생물의 큰 범위를 광범위 하 게 적용 될 수 있는 표본에 대 한 자세한 정보를 얻기 위해, 저렴 한, 빠르고 간단한 방법을 설명 하는 형태소 평가입니다. 이 프로토콜의 성공적인 완료는 그들의 시스템에이 기법을 적용 하 여 샘플을 시각화 하기 위해 SEM을 사용 하는 다른 수 있게 됩니다.

남조류는 글로벌 탄소, 산소, 그리고 질소 사이클28,29에 중요 한 생물의 간결한 그룹. 박테리아30의 예상 6000 종의 가장 커버와 함께 셀을 연결 하는 mucilaginous 칼 집 있고 다른 구조에31, 될 수 있는 모양, 함께 해결 미세32. 셀 크기, 모양, 및 안료 현재 개별 종 구별 그리고 수 ?...

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Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM

스캐닝 전자 현미경 (SEM)에서 형태소 분석에 대 한 화학 건조를 사용 하 여 간결한 진 핵 유기 체의 준비

SEM 분석 또는 phenotypic 종 식별에 원조 하는 효과적인 방법입니다. 이 세 가지 대표적인 유형의 생물의 특정 형태학 정보를 검사 하는 방법을 설명 합니다 프로토콜과 organismal 많은 기능 검사에 광범위 하 게 적용 될 것 이라고 및 조직 유형.

Scanning electron microscopy (SEM) is a widely available technique that has been applied to study biological specimens ranging from individual proteins to ...

이 프로토콜은 두 가지 화학 건조 방법, Hexamethyldisilazane 및 T-butyl 알코올 및 SEM을 사용하여 대핵 및 진핵 생물을 모두 이미징하는 응용 프로그램에 중점을 둡니다. 이 기술의 주요 장점은 분석을 위해 샘플을 준비하기 위해 임계 점 건조기와 같은 특수 건조 장비를 사용할 필요가 없다는 것입니다. 이 프로토콜은 3가지 유형의 유기체에 대한 화학적 탈수 및 SEM 분석을 사용하는 방법을 설명하지만 많은 유기체 및 조직 유형을 검사하는 데 광범위하게 적용 될 것입니다.절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 학부 생인 매디슨 쿤(Madison Koon)이 될 것입니다. 시작하려면, 하룻밤 고정에 의해 시아노 박테리아를 준비합니다. 그런 다음 폴리카보네이트 25mL 필터를 포함하는 10mL 여과 장비로 이송합니다.여과 장비의 사이드암과 깔때기를 고무 스토퍼로 밀봉하여 깔때기의 문화를 억제합니다. 두 스토퍼를 모두 제거한 후 여과 플라스크에서 부드럽게 진공 청소기를 청소하여 고정을 제거합니다. 단일 세포 조류 유글레노이드를 준비하려면 이전에 10 mL 여과 장비로 옮겨진 배양에 직접 4 % osmium 테트옥사이드 3 방울을 추가하여 수정하십시오.30 분 인큐베이션 후, 스토퍼를 모두 제거하고 여과 플라스크에 부드러운 진공 청소기를 제거합니다. 플라스크와 깔때기를 스토퍼로 닫고 세척을 유지하면서 실온에서 0.1 M 인산염 버퍼 pH 7.0의 5mL로 고정 된 유글레노이드를 세 번 세척하십시오. 두 스토퍼를 모두 제거한 후 여과 플라스크에서 부드러운 진공으로 각 세척을 제거합니다.연속 침수를 유지하면서 시료를 탈수하려면 플라스크와 깔때기를 깔때기에 깔때기에서 에탄올을 포함하기 위해 스토퍼로 닫혀 있는 동안 깔때기에서 5mL의 부피로 10분 동안 등급이 매겨진 에탄올 계열을 사용한다. 두 스토퍼를 모두 제거한 후 여과 플라스크에서 부드럽게 진공 청소기를 제거하여 에탄올을 제거합니다. 샘플을 100% 에탄올이 함유한 일회용 알루미늄 계량 접시에 샘플을 전달하여 시료를 덮습니다.TBA를 사용하여 유글레노이드의 화학적 건조를 수행하기 위해 먼저 알루미늄 접시의 100% 에탄올 용액을 TBA 1~1용액과 100% 에탄올로 20분 간 교체하십시오. 그런 다음 1 대 1 솔루션을 100 % TBA로 20 분 동안 교체하고 프로세스를 두 번 반복합니다. TBA를 제거하고 샘플을 덮을 수 있는 충분한 신선한 100% TBA로 교체하십시오.TBA를 동결하기 위해 10분 동안 섭씨 4도에 접시를 놓습니다. 샘플을 냉동 젤 팩을 사용하여 진공 건조기로 옮기면 TBA를 동결하십시오. 로터리 펌프를 사용하여 진공을 대피하고 유지하여 냉동 TBA의 진공 승화로 시료를 3시간 이상 건조시 할 수 있습니다.아페노이드에 시아노박테리아를 장착하려면 25mm 알루미늄 장착 스텁의 바닥에 라벨을 부착하여 위에 놓여있는 것을 나타냅니다. 그런 다음 각 필터를 스텁 상단에 고정된 탄소 접착제 탭에 놓습니다. Drosophila 멜라노가스터를 준비하기 위해, 마취 된 파리를 섭씨 4도에서 2 시간 동안 고정 된 1 mL에 담그고 완전히 물에 잠겼습니다.유리 파이펫을 사용하여 고정을 제거합니다. 고정 드로소필라 샘플을 1.5mL 마이크로센심분리기 튜브에 0.1M 인산염 버퍼 1mL, pH 7.2로 10분 동안 실온에서 3회 세척한다. 유리 파이펫을 사용하여 각 세척을 제거하여 샘플을 제거하지 않도록 주의하십시오.이어서, 각각 10분 동안 등급에 등급이 매겨진 에탄올 계열을 사용하여 1mL의 부피로 마이크로퍼지 튜브내의 샘플을 탈수한다. 유리 파이펫을 사용하여 각 세척을 제거하여 샘플을 제거하지 않도록 주의하십시오. 1.5mL 마이크로센심분리기 튜브에 100%에탄올을 장착하여 샘플을 덮습니다.HMDS를 사용하여 파리의 화학 건조를 수행하기 위해 먼저 100% 에탄올 용액을 HMDS 1~2솔루션과 100% 에탄올로 20분 간 교체합니다. 그런 다음 솔루션을 HMDS 2~1솔루션과 100% 에탄올로 20분 간 교체합니다. 마지막으로 이 솔루션을 100% HMDS로 20분 간 교체한 다음 프로세스를 한 번 반복합니다.1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브 및 HMDS에 있는 시료를 일회용 알루미늄 계량 접시에 옮기십시오. 100% HMDS를 시료를 덮을 수 있는 100%HMDS를 충분히 신선한 100% HMDS로 교체하십시오. 알루미늄 접시 내에 직접 샘플을 화학 연기 후드에 놓고 상자와 같은 느슨한 뚜껑으로 건조하여 이물질이 시료에 떨어지는 것을 방지하고 12~24시간 동안 건조시할 수 있도록 합니다.드로소필라 를 장착하려면 알루미늄 장착 스텁의 바닥에 라벨을 부착하십시오. 정밀 핀셋을 사용하여 말린 파리를 해부 현미경으로 스텁 상단에 고정된 탄소 접착제 탭에 원하는 위치에 배치합니다. 스텁의 바깥쪽 가장자리에 은 전도성 접착제를 적용합니다.이쑤시개를 사용하여 은페인트를 파리에 연결하여 전도도를 보장하여 페인트가 원하는 이미징 영역에 닿지 않도록 합니다. 스텁 홀더 상자에 스텁을 놓은 다음 열린 스텁 홀더 박스를 데시카이터에 넣고 실버 페인트가 3시간 이상 건조되도록 합니다. 스퍼터 코팅 장치를 준비하려면 아르곤 가스의 4 ~5 플러시를 수행하십시오.코팅할 샘플에 따라 타이머를 원고에 설명한 대로 다른 설정으로 설정합니다. 스퍼터는 제조업체의 지시에 따라 스텁을 코팅합니다. 마지막으로, 사용된 샘플에 의존하는 설정이 있는 이차 전자 검출기를 포함하는 스캐닝 전자 현미경을 이용한 이미지 샘플.이 프로토콜을 사용하여 SEM을 위한 시아노박테리아의 성공적인 준비는 세포의 모양과 질감을 포함하여 세포의 세부사항뿐만 아니라 세포에서 점액 및 투영의 칼집을 볼 수 있는 이미지를 산출했습니다. 콜로라도에서 필라멘트 담수 종의 SEM 이미지는 점액의 눈에 보이는 칼집을 보여줍니다. 오하이오에서 담수 박테리아의 SEM 이미지는 때때로 점액의 얇은 층에 의해 함께 개최 식민지를 형성하는 개별 세포를 보여줍니다.필라멘트와 같은 돌출은 개별 세포에서 확장됩니다. 텍사스 연안 해역의 높은 명분 하구에서 알 수없는 필라멘트 종의 이미지는 개인과 분할 세포를 보여줍니다. SEM은 두 개의 다른 유글레노이드 종의 펠리클 스트립을 시각화하는 데 사용되었다.모노모르피나와 아닉마티카를 모노모르피나 의사 피럼과 비교할 때, 후방 끝에서 나오는 펠리클 스트립의 눈에 보이는 발등 배열이 꼬리를 형성하여 종결에 대한 필로겐을 돕습니다. 정상적인 drosophila 눈의 SEM 이미지는 강모와 렌즈의 정렬 된 배열을 보여 주지만 알츠하이머 병과 관련된 단백질의 표현은 거친 눈 표현형을 만듭니다. 거친 눈 표현형을 억제하거나 향상시키는 유전자는 질병 진행에 생리적인 역할을 할 수 있습니다.다음은 이미지 수집 중에 나타나는 부족한 스퍼터 코딩으로부터 부적절한 건조 기술과 전자 충전으로부터 눈의 붕괴 구조의 예를 포함하여 피하기 위해 잠재적 인 구덩이 낙하의 예입니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 존경받는 공모와 매우 크게 생물을 활용하지만, 모든 생물학의 많은 하위 분야에 걸쳐 과학적 발견에 중요한 유용하고 형태학적 정보를 수집하기 위해 SEM 분석에 적합합니다. T-부틸 알코올, Hexamethyldisilazane, 그리고 osmium 테트옥사이드와 함께 일하는 것은 위험할 수 있으며, 적절한 안전 조치는 항상 사용자를 보호하기 위해 관찰되어야한다는 것을 잊지 마세요, 특히 이러한 화학 물질을 취급 할 학생.

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy (SEM)

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

의 전자 현미경을위한 배아의 준비 Drosophila 태아의 심장 관

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

연구

생물학

A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy

주사 전자 현미경으로 간 사인 내피 세포의 분석 및 그들의 Fenestrations위한 표준화 된 방법

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

침연 (macerated) 조직의 전자 현미경을 스캔하면 세포 외 매트릭스를 시각화하기

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Studying the Supramolecular Organization of Photosynthetic Membranes within Freeze-fractured Leaf Tissues by Cryo-scanning Electron Microscopy

알아내는 주사 전자 현미경에 의해 동결 골절 잎 조직 내에서 광합성 멤브레인의 초분자 조직을 공부

Cryo-scanning electron microscopy (SEM) of freeze-fractured samples allows investigation of biological structures at near native conditions. Here, we ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

문제있는 공장, 난균 강 및 곰팡이 샘플에 대한 전자 현미경 (SEM) 프로토콜을 스캔

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

주사 투과 전자 단층 촬영에 의해 준비 및 두꺼운 생물 샘플의 관측

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

샘플 준비 및 전송 전자 현미경 검사 법에 의해 Exosomes의 영상

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

전송 전자 현미경 검사 법에 대 한 소형된 샘플 준비

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

고압 냉동, 전자 레인지를 이용한 콘트라스트 향상, 그리고 볼륨 이미지에 대 한 포함 하는 최소한의 수 지에 의해 생물학 견본 준비

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Array Tomography Workflow for the Targeted Acquisition of Volume Information using Scanning Electron Microscopy

스캐닝 전자 현미경 을 사용하여 대량 정보의 표적 수집을위한 배열 단층 학워크

Electron microscopy is applied in biology and medicine for imaging of cellular and structural details at nanometer resolution. Historically, Transmission ...