Name: evaluating virulence and pathogenesis of aeromonas infection in a caenorhabditis elegans model
Uploaded: 2018-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model at JoVE.com

Agradecemos o apoio da instalação de núcleo de c. elegans em Taiwan e para o diagnóstico de Microbiologia e antimicrobiana resistência laboratório de Nacional Cheng Kung University Hospital para fornecer a Aeromonas Isola. Reconhecemos também o centro de genética de Caenorhabditis (CGC) e o WormBase. Agradecemos também a Savana Moore para editar o manuscrito.
Este estudo foi parcialmente suportado por concessões do Ministério da ciência e tecnologia de Taiwan (mais 105-2628-B-006-017-MY3) e o Hospital da Universidade Nacional Cheng Kung (NCKUH-10705001) a paixao Chen.

1. preparação do meio de cultura
Nota: Consulte a tabela 1 para preparação da solução.
<ol><li>Para preparar o M9 médio12, dissolva 1,5 g de KH2PO4, 5,66 g de Na2HPO4e 2,5 g de NaCl em 500 mL de água desionizada. Autoclave a 121 ° C por 20 min. espere até a temperatura de refrigeração e em seguida, adicionar 0,5 mL de 1 M MgSO4 antes da primeira utilização.</li>
	<li>Para preparar o nematódeo cresci...

<ol>
	<li>Parker, J. L., Shaw, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aeromonas+spp.+clinical+microbiology+and+disease.">Aeromonas spp. clinical microbiology and disease.</a> Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+and+soft-tissue+infections+caused+by+Aeromonas+species.">Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+tract+infections+caused+by+Aeromonas+species.">Biliary tract infections caused by Aeromonas species.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).</li><li>Chuang, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+clinical+characteristics+among+Aeromonas+hydrophila,+Aeromonas+veronii+biovar+sobria+and+Aeromonas+caviae+monomicrobial+bacteremia.">Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia.</a> Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+and+soft+tissue+infection+caused+by+Aeromonas+species+in+cancer+patients.">Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients.</a> Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).</li><li>Chen, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Disease+Model+of+Muscle+necrosis+caused+by+Aeromonas+dhakensis+infection+in+Caenorhabditis+elegans.">A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).</li><li>Chen, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+diversity+among+bacteremic+Aeromonas+isolates:+ex+vivo,+animal,+and+clinical+evidences.">Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences.</a> PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).</li><li>Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+infection+models+in+zebrafish+larvae+(Danio+rerio)+to+study+the+pathogenesis+of+Aeromonas+hydrophila.">Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).</li><li>Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RIOK-1+Is+a+Suppressor+of+the+p38+MAPK+Innate+Immune+Pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).</li><li>Powell, J. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+Caenorhabditis+elegans+infection+by+bacterial+and+fungal+pathogens.">Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens.</a> Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).</li><li>Chou, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enterohaemorrhagic+Escherichia+coli+O157:H7+Shiga-like+toxin+1+is+required+for+full+pathogenicity+and+activation+of+the+p38+mitogen-activated+protein+kinase+pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Engelmann, I., Pujol, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+in+C.+elegans.">Innate immunity in C. elegans.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).</li><li>Feinbaum, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+identification+of+Pseudomonas+aeruginosa+virulence-related+genes+using+a+Caenorhabditis+elegans+infection+model.">Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model.</a> PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).</li></ol>

C. elegans é um nematódeo bacterivorous que naturalmente bactérias aportes como alimento e desenvolveu uma complicado imunidade inata às bactérias durante o seu processo evolutivo. Dois dos principais órgãos manter e apoiar a imunidade são a epiderme e o intestino9,13. A epiderme e bandas do músculo de c. elegans assemelham-se as estruturas de tecidos moles em mamíferos e humanos6. Por causa destas característi...

O patógeno humano, Aeromonas, tem demonstrado clinicamente causar gastroenterite, infecções de ferida, septicemia e infecções de aparelho urinário1,2. Doenças humanas mais associadas foram relatadas para ser associado com quatro espécies bacterianas: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniie Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. entre as doenças infecciosas Aeromonas , infecções de tecidos moles podem causar grave morbidade e mortalidade em seres humanos. De nota, necrose muscular é a forma mais grave da infecção de tecidos moles6. Observação da sobrevivência e necrose muscular de Caenorhabditis elegans após a infecção são um método conveniente especular a toxicidade de Aeromonas.
Cientistas já desenvolveram numerosos organismos modelo para estudar a infecções bacterianas. Em estudos anteriores, nematoides, zebrafishes e ratos foram usados como modelos animais para estudar a patogênese e a virulência de Aeromonas6,7,8. Cada modelo animal tem suas ' vantagens e aplicações. O organismo modelo, Caenorhabditis elegans, é um nematódeo bacterivorous bactérias que aportes como foodnaturally. C. elegansdesenvolveu um complexo sistema imune inato contra infecção bacteriana ao longo de sua evolução. Sob o estresse da infecção bacteriana, c. elegans tem provado para ser um modelo de infecção excelente para estudar a patogênese bacteriana de Aeromonas6,7,9 e outros patógenos como o fungo10 e enterohemorrágicas Escherichia coli O157: H711. No entanto, não há ainda nenhuma publicação que enfoca a metodologia em usando o c. elegans como modelo para o estudo da virulência de Aeromonas.
Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção usando c. elegans como modelo animal: ensaios para a sobrevivência, toxicidade líquida e necrose muscular. Esses métodos são uma maneira conveniente para avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas e melhorar a compreensão da patogênese de Aeromonas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:660px;" width="661">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaker incubator</td>
			<td style="width:119px;">YIH DER</td>
			<td style="width:119px;">LM-570R</td>
			<td style="width:207px;">Bacteria incubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">K2HPO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td>MP021519455</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:119px;">3246-05</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:119px;">MP021914405</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">31434</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MgSO4</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">M7506</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">agar</td>
			<td style="width:119px;">Difco</td>
			<td style="width:119px;">214530</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C1016</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">cholesterol</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C8503</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ethanol</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">32205</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KOH</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">P5958</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">6 cm petri plate</td>
			<td style="width:119px;">ALPHA PLUS</td>
			<td style="width:119px;">46</td>
			<td>agar plate preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">96-well plate</td>
			<td style="width:119px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">353072</td>
			<td>liquid assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bacterial peptone</td>
			<td style="width:119px;">Affymetrix/USB</td>
			<td style="width:119px;">AAJ20048P2</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">yeast extract</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">92144</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">citric acid&#8226;H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C1909</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tri-potassium citrate&#8226;H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">104956</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FudR&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">1271008</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">disodium EDTA</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">E1644</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FeSO4&#8226;7 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">215422</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MnCl2&#8226;4 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">221279</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ZnSO4&#8226;7 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">204986</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CuSO4&#8226;5 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C8027</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tryptone</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">16922</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microscope system</td>
			<td style="width:119px;">Nikon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Eclipase Ti inverted&#160;</td>
			<td>microscope imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scientific CCD Camera</td>
			<td style="width:119px;">QImaging&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Retiga-2000R Fast 1394&#160;</td>
			<td>microscope imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating virulence and pathogenesis of aeromonas infection in a caenorhabditis elegans model

O patógeno humano Aeromonas tem demonstrado clinicamente para causar gastroenterite, infecções de ferida, septicemia e infecções do trato urinário. Doenças humanas mais foram relatadas para ser associado com quatro espécies de bactérias: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniie Aeromonas caviae. O organismo modelo Caenorhabditis elegans é um bacterivore que fornece um modelo de infecção excelente por que estudar a patogênese bacteriana de Aeromonas. Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção usando um modelo de c. elegans , incluindo ensaios de necrose muscular, toxicidade líquida e sobrevivência. Os resultados dos três métodos de determinar a virulência de Aeromonas foram consistentes. A. dhakensis foi mostrado para ser o mais tóxico entre as 4 espécies de Aeromonas principais causando infecções clínicas. Esses métodos são mostrados para ser uma maneira conveniente para avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas e contribuir para a nossa compreensão da patogênese da infecção por Aeromonas .

Seguindo os protocolos descritos acima, é fácil diferenciar entre as toxicidades das quatro cepas de Aeromonas . O ensaio de sobrevivência de c. elegans é mostrado na Figura 1. Foram as taxas de sobrevivência de c. elegans infectados com espécies de Aeromonas , mostrados na ordem de cima para baixo: a. caviae, a. veronii, a. hydrophila e a. dhakensis. Embora haja diversidade em termos de toxicidade e...

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Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Aqui, apresentamos três experimentos diferentes para estudar Aeromonas infecção em c. elegans. Usando estes métodos convenientes, é fácil avaliar a toxicidade entre e dentro de espécies de Aeromonas .

Avaliando virulência e patogênese da infecção por Aeromonas em um modelo de Caenorhabditis elegans

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de interação hospedeiro-patógeno, como a patogenicidade e virulência da infecção bacteriana. A principal vantagem dessa técnica é que podemos avaliar a toxicidade entre e dentro das espécies aeromonas e contribuir para a nossa compreensão da patogênese da infecção por Aeromonas. Para começar a lavar aproximadamente 2.000 vermes adultos gravid com água deionizada estéril.Repita a lavagem três vezes mantendo os vermes na parte inferior do tubo. Depois de centrifugar os vermes remover o supernasce e manter os vermes em 3,5 mililitros de água deionizada. Adicione um mililitro de hipoclorito de sódio e 0,5 mililitros de hidróxido de potássio ao tubo.Em seguida, agite o tubo por seis minutos para lise os corpos dos vermes. Depois que os ovos forem liberados, adicione 10 mililitros de água deionizada para parar a lise. Em seguida, centrifugar o tubo para puxar para baixo os ovos e remover o máximo possível do supernante.Lave os ovos com 15 mililitros de M9 médio pelo menos três vezes. Transfira os ovos para um prato de 3,5 centímetros e incuba-os a 20 graus Celsius por uma noite. Depois disso remova 10 microliters de vermes L1 e meio M9 da placa.Conte os vermes e obtenha a concentração de vermes L1 no meio M9. Usando uma pipeta pegue 0,5 mililitros de caldo E.coli OP50 LB e espalhe-o em uma placa ENGM. Em seguida, incubar a placa a 37 graus Celsius por 16 a 18 horas.Esfrie o ENGM à temperatura ambiente. Em seguida, a semente incubava vermes L1 em uma placa ENGM com E.coli OP50. Incubar os vermes a 20 graus Celsius até chegarem ao estágio L4.Primeiro, selecione uma única colônia de cada uma das quatro cepas aeromonas e culta-as de acordo com o protocolo de texto. Em seguida, meça a absorvância OD 600 do caldo bacteriano e ajuste-o até que a absorção seja igual a 2.0. Próximo ponto e espalhar 30 microliters de caldo bacteriano de cada cepa em placas de NGM.Selecione aleatoriamente e transfira os worms L4 previamente preparados para as placas de NGM com as cepas de Aeromonas. Em seguida, incubar as placas a 20 graus Celsius até que o ensaio esteja completo. Todos os dias transfere todos os vermes vivos para uma nova placa de NGM com bactérias.Conte o número de vermes vivos, mortos e sensores todos os dias até que o último verme esteja morto. Depois de esculpir cepas de Aeromonas e medir sua absorvância como descrito anteriormente, centrifugar o caldo bacteriano a 3.500 g's por 15 minutos. Ajuste o caldo bacteriano com S Medium.E adicione 195 microliters de caldo bacteriano no meio S a oito poços de uma placa de 96 poços. Lave os vermes da placa ENGM com eles meio M9. Em seguida, ajuste a concentração da solução de vermes para cinco vermes por microliter.Adicione cinco microliters da solução de vermes para cada um dos poços da placa de 96 poços. Incubar a placa em um shaker, e contar o número de vermes vivos em 24, 48 e 72 horas. Depois de esculpir cepas aeromonas e ajustar a absorvência de acordo com a mancha do protocolo de texto e espalhar o caldo bacteriano nas placas de NGM.Depois disso, transfira 50 worms L4 para cada placa NGM. A cada 24 horas transfira os vermes para novas placas de GNM. Selecione aleatoriamente 10 worms e transfira-os para um gel de 2%agarose no meio M9 em um slide.Por fim, posicione uma mancha no gel e capture imagens musculares com um filtro de proteína fluorescente verde em um microscópio fluorescente equipado com uma câmera. Neste protocolo foram avaliadas as toxicidades de quatro cepas aeromonas. A taxa de sobrevivência de C.elegans infectados com espécies de Aeromonas foi mais alta em ensaios usando A.caviae, e menor em ensaios usando A.dhakensis.Em um ensaio de toxicidade líquida, a sobrevivência de C.elegans diminuiu significativamente quando infectada com A.d.a.escrifez ou A.hidrofilia. No ensaio da necrose muscular os graus de dano muscular variaram entre as espécies de Aeromonas. A.caviae causou o menor dano muscular, enquanto a A.dhakensis produziu a maior dano muscular.Os métodos descritos neste vídeo oferecem uma maneira conveniente de diferenciar a diversidade de virulência entre e dentro das espécies de Aeromonas. Além disso, é também um modelo confiável para estudar a interação entre um patógeno e um hospedeiro.

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Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Geração de mutantes de deleção de genes no quadro em Pseudomonas aeruginosa e testes para atenuação de virulência em um modelo simples de infecção por camundongos

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...