이 방법은 폭발 외상성 뇌 손상이 뇌 혈관 손상의 결과인지 여부를 대답하는 데 도움이 효과의 범위가 손상된 심근 혈관 반응으로 확장되는 경우. 고립 된 가압 동맥 준비는 우리가 뇌에 폭발 노출로 인한 간접적인 효과에서 대뇌 동맥에 폭발 노출의 직접적인 영향을 분리 할 수 있습니다. 고립되고 가압된 동맥 제제는 뇌졸중, 고혈압 및 당뇨병을 포함한 다양한 질병 또는 조건에서 혈관 기능을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.
우리의 연구 결과의 목표는 출혈의 해로운 효력에서 두뇌를 보호하기 위하여 대뇌 순환의 능력을 유지하는 치료를 확인하는 것입니다. 오늘 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실의 보조 이사 인 Maggie Parsley와 우리의 수석 연구 기술자 인 Yaping Zeng이 될 것입니다. 고급 폭발 시뮬레이터 또는 ABS를 준비하려면 2.54센티미터 크기의 마스킹 테이프를 사용하여 4개의 적층 된 미리 절단 된 Mylar 시트의 상단 가장자리를 따라 테이프를 붙입니다.
테이프의 두 번째 조각을 사용하여, 드라이버와 확장 챔버 사이의 개구부 의 중심을 통해 확장 챔버의 상단에 마일라 멤브레인의 상단 가장자리를 확보. 챔버 상단에있는 두 개의 모든 스레드 막대를 교체하고 챔버를 둘러싼 캡 너트를 모두 손으로 조여 마일라 멤브레인에 대한 드라이버 챔버를 확보하십시오. 유압 손 펌프 노브를 조이고 유압 게이지의 일정한 압력 임계값을 관찰하여 드라이버 챔버가 누출 없이 가압상태로 유지되는지 확인합니다.
그런 다음 ABS 블라스트 장치 컴퓨터에서 ABS 폭발 장치 압력 추적을 기록하는 트리거 획득 파일을 엽니다. 부상에 대한 마취 쥐를 준비하려면 긴 픽업 핀셋을 사용하여 혀를 측면에 배치하고 리도카인에 젖은 면 봉봉 끝으로 목 안쪽을 따라 닦은 후 기관내에 내트라큐어 튜브가 들어있는 스타일렛을 부드럽게 삽입하십시오. 일단 삽관되면, 내원관의 외부 끝에 인공호흡기 호스의 끝을 삽입하고 쥐가 꾸준히 그리고 어려움없이 호흡하고 있는지 관찰하고 확인한다.
다음으로, 표본 챔버에서 ABS 표본 트레이를 제거하고 열 램프 아래에서 트레이를 따뜻하게합니다. 트레이가 따뜻해지는 동안 두피 의 상단을 눈 위에서 귀 사이로 면도하고 가위를 사용하여 기본에서 둥근 팁까지 표준 크기의 폼 이어 플러그를 동일한 수직 반으로 자른다. 그런 다음 반으로 된 조각을 각 이어팁에 먼저 외이도를 따라 타일로 처리하여 접점막을 장착합니다.
엔타락힐 튜브에서 인공호흡기 호스를 제거하고 쥐를 표본 트레이의 맨 위 쪽 끝으로 빠르고 부드럽게 밀어 넣어 헤드 홀더 개구부와 고무 칼라를 통해 머리를 조심스럽게 안내합니다. 쥐가 제자리에 있을 때, 인공호흡기 호스를 다시 엔트라셔 튜브에 다시 삽입하고 고무 칼라가 단단히 고정되어 있는지 확인하고 목 주위는 단단히 고정되지 않고 쥐가 측면 경향이 있는 위치에 누워 있는지 확인합니다. 그런 다음 ABS 표본 챔버에 마취 된 쥐를 포함하는 ABS 표본 트레이를 잠그고 고정하고 철수 반사 반응이 유도 될 때까지 3 초마다 긴 핀셋으로 뒷발 발가락을 부드럽게 꼬집습니다.
ABS 블라스트 장치 컴퓨터의 열린 획득 페이지에서 시작을 클릭하고 폭발이 꺼지고 마일라 멤브레인을 파열하고 ABS 폭발 부상을 관리할 때까지 인수 창에서 ABS 폭발 장치 트리거를 누르고 누릅니다. 폭발이 터진 직후, 두 번째 타이머를 시작하여 쥐의 권리 자체가 손상 후, 블루 패드의 척추 위치에 쥐를 배치하고 등급 반사 억제의 평가를 위해 온난화까지 몇 분 및 몇 초 만에 경과하는 시간을 추적합니다. 중간 대뇌 동맥을 추출하려면 10번 메스 블레이드를 사용하여 면도된 두피 의 상단에서 후두 콘딜까지 중앙 1인치 반 인치 수직 뼈 깊은 절개를 만들고 작은 뼈 로거를 사용하여 두개골 뼈에서 두피 피부를 열고 분리합니다.
큰 뼈 rongeurs를 사용 하 여, 절단 하 고 뇌를 감싸 는 전두엽 뼈의 하반신, 그리고 뇌를 감싸고 외과 주걱을 사용 하 여 주의 하 게 두개골에서 뇌를 발굴 하는 경우 주위 뼈에서 해방 되었습니다. 수확한 뇌를 차가운 생리적 소금 용액 또는 PSS를 함유한 작은 유리 페트리 접시에 해부 현미경 으로 고체 얼음 블록에 넣고, 윌리스의 원에서 시작하여 약 4~5밀리미터 동안 좌우 뇌동맥 또는 MCA를 조심스럽게 제거합니다. 마이크로 집게를 사용하여 수집된 MCA 세그먼트를 부드럽게 청소하고 동맥을 동맥에 장착합니다.
유리, 70 마이크로 미터 직경 마이크로 파이펫각 세그먼트의 근위 쪽 끝을 캔누레이하고 10-O 나일론 봉합사로 파이펫을 고정합니다. 어떤 잔류 혈액을 제거하고 동맥 조직을 스트레칭하지 않고 두 번째 마이크로 파이프로 각 세그먼트의 말단 끝을 수거PSS와 루미나를 부드럽게 perfuse. 10-O 나일론 봉합사의 두 번째 세트로 마이크로 파이프를 확보하고 카메라와 모니터가 장착 된 반전 된 현미경의 무대에 arteriograph을 배치합니다.
마이크로파이펫에 연결된 저수지 병을 세그먼트 위의 적절한 높이로 올려 60분 동안 50밀리미터의 수은 압력으로 MCA 세그먼트를 평형화합니다. 평형 기간이 끝나면 병을 서로 다른 높이로 설정하여 선박 의 확장 반응을 검사하고, 저수지 병을 낮추어 혈관 압력을 80mm의 수은으로 줄이고 세그먼트가 10 분 동안 평형화 할 수 있도록합니다. 그런 다음 인트라바스내 압력을 60, 40 및 20mm의 수은으로 줄여 각 압력 변화 후에 세그먼트가 평형화할 수 있도록 합니다.
이 대표적인 그래프에서 동맥 직경은 100mm의 수은의 기준 압력에서 직경의 백분율 변화로 Y축에 묘사됩니다. X축에서는 동맥 확장 반응을 테스트한 다양한 내트라바스내 압력이 표시됩니다. 가짜 부상 군의 경우 MCA 직경이 기준선 이상으로 증가하고 장내 압력이 100mm에서 20밀리미터로 감소함에 따라 정상적으로 팽창했습니다.
대조적으로, 관찰된 30 분 및 60 분 폭발 유발 외상성 뇌 손상 그룹에서 지속적인 부과 된 감소에 대한 MCA 확장 반응은 폭발 노출 후 팽창하는 능력에서 현저히 감소되어 감소 된 압력에 대한 뇌 혈관 확장 반응의 상당한 손상을 나타냅니다. 선박 추출, 복구, 장착 및 풍부 기술은 엄청나게 복잡하며 이러한 절차를 수행 할 때 정밀한 주의를 기울여야합니다.
