Bu yöntem, patlama travmatik beyin hasarının serebral vasküler yaralanmaya yol açıp açmadığını ve etkilerin kapsamının miyojenik vasküler yanıtın bozulmasına kadar uzanıp genişlemediğinin cevaplanamadığının cevaplandırılmaya yardımcı olur. İzole basınçlı arteriyel hazırlık bize beyne patlama maruz kalma neden dolaylı etkileri serebral arterler üzerinde patlama maruziyeti doğrudan etkilerini ayırmak için izin verir. İzole ve basınçlı arteriyel preparatlar inme, hipertansiyon ve daha sonra diyabet de dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar veya koşullar, vasküler fonksiyon çalışması için kullanılabilir.
Çalışmalarımızın amacı, beyin dolaşımının beyni kanamanın zararlı etkilerinden koruma yeteneğini koruyan tedavileri belirlemektir. Bugün prosedürleri gösteren Maggie Parsley, laboratuvarımızın müdür yardımcısı ve baş araştırma teknisyenimiz Yaping Zeng olacak. Gelişmiş patlama simülatörü veya ABS hazırlamak için, dört yığılmış önceden kesilmiş Mylar yaprak üst kenarı boyunca bant maskeleme bandı 2,54 santimetrelik bir parça kullanın.
İkinci bir bant parçasını kullanarak, Mylar membranın üst kenarını sürücü ve genleşme odaları arasındaki açıklığın merkezi nin üzerindeki genleşme odasının üst kısmından emniyete alayın. Odanın üst kısmındaki iki tüm iplik çubuklarını değiştirin ve sürücü odasını Mylar membrana karşı sabitlemek için odayı çevreleyen tüm kapak somunlarını elle sıkın. Hidrolik el pompası bileğini sıkın ve sürücü odasının hiçbir sızıntı olmadan basınçlı kaldığını doğrulamak için hidrolik göstergeüzerinde sabit bir basınç eşiğini gözlemleyin.
Ardından ABS blast cihazının bilgisayarındaki ABS patlama cihazı basınç izlerini kaydeden tetikleme alma dosyasını açın. Yaralanma için anestezili sıçan hazırlamak için, yan dil konumlandırmak için uzun pick-up cımbız kullanın ve hafifçe trakea içine bir endotrakeal tüp içeren bir stylette eklemeden önce bir lidokain batırılmış pamuk lu bez ucu ile boğazın iç boyunca silin. Entübe edildikten sonra ventilatör hortumunun ucunu endotrakeal tüpün dış ucuna yerleştirin ve farenin sürekli ve zorlanmadan nefes alıp verdiğini gözlemleyin ve doğrulayın.
Daha sonra ABS numune tepsisini numune odasından çıkarın ve tepsiyi bir ısı lambasının altında ısıtın. Tepsi ısınırken, kafa derisinin üst kısmını gözlerin üstünden kulakların arasına kadar tıraş edin ve tabandan yuvarlak ucuna kadar standart boyutta bir köpük kulak fişini aynı dikey yarıya indirmek için makas kullanın. Daha sonra her kulak ucuna yarıya kadar bir parça yerleştirin, ilk kulak kanalı boyunca, temas timpanik membran ile yapılana kadar.
Endotrakeal tüpten ventilatör hortumu çıkararak, fareyi numune tepsisinin üst ucuna doğru hızlı bir şekilde kaydırın, baş tutucu nun açılması ve kauçuk yakaile dikkatlice yönlendirin. Sıçan yerinde olduğunda, ventilatör hortumunu endotrakeal tüpe geri yerleştirin ve kauçuk tasmanın sıkıca sabitlendiğinden, ancak boyun anına sıkıca bağlı olmadığını ve farenin lateral eğilimli bir pozisyonda yattığını doğrulayın. Daha sonra, anestezi altındaki fareyi içeren ABS numune tepsisini ABS numune odasına kilitleyin ve sabitleyin ve geri çekilme refleksi verilene kadar arka pati ayak parmaklarını her üç saniyede bir uzun cımbızla hafifçe çimdikleyin.
ABS blast cihazı bilgisayarında açılan satın alma sayfasında Başlat'ı tıklatın ve patlama patlayana kadar satın alma penceresinde ABS patlama aygıtı tetiğine basın ve basılı tutun, Mylar membranı yırtılma ve ABS patlama yaralanmasını uygulayın. Patlama nın patlamasından hemen sonra, farenin kendisi, yaralanma sonrası, dakikalar ve saniyeler içinde ne kadar zaman geçtisintakip etmek için ikinci bir zamanlayıcı başlatın ve sıçanı mavi ped üzerindeki supine pozisyonuna yerleştirin ve derecelendirme refleks baskısını değerlendirmek için ısınmayı bekleyin. Orta serebral arter ayıklamak için, merkezi bir buçuk inç dikey kemik derin kesi oksipital condyle için tıraş kafa derisi üstünden yapmak ve kafatası kemik kafa derisi açmak ve ayırmak için küçük kemik rongeurs kullanmak için bir sayı 10 neşter bıçak kullanın.
Büyük kemik rongeurs kullanarak, kesmek ve oksipital ayıklamak, interparietal, ve frontal kemiklerin alt yarısı beyni çevreleyen kemik serbest bırakıldıktan sonra dikkatle kafatasından beyin kazmak için cerrahi bir spatula kullanın. Soğutulmuş fizyolojik tuz çözeltisi veya PSS içeren küçük bir cam Petri çanak içine hasat beyin mevduat, bir diseksiyon mikroskop altında katı bir buz bloğu, ve dikkatle hem sol ve sağ orta serebral arterler kaldırmak, ya da MCAs, Willis daire başlayan ve yanal ve yaklaşık dört ila beş milimetre için dorsally devam. Toplanan MCA segmentlerini nazikçe temizlemek ve arterleri bir arteriyografüzerine monte etmek için mikro çömetler kullanın.
Her segmentin proksimal ucunu bir cam, 70 mikrometre çapında mikropipet ile kanüle edin ve pipetleri 10-O naylon dikişlerle sabitlayın. Yavaşça herhangi bir kalıntı kan kaldırmak ve arteriyel doku germe olmadan ikinci bir mikropipet ile her segmentin distal ucunu kanüle pss ile lumina perfuse. Mikropipetleri ikinci bir 10-O naylon dikiş seti ile sabitle ve arteriyografı kamera ve monitörle donatılmış ters bir mikroskopun sahnesine yerleştirin.
Mikropipetlere bağlı rezervuar şişelerini, MCA segmentlerini 50 milimetrelik cıva basıncında 60 dakika boyunca dengelemek için segmentlerin üzerinde uygun bir yüksekliğe yükseltin. Denge süresinin sonunda, damar dilatasyon yanıtlarını incelemek için şişeleri birbirine farklı yüksekliklerde ayarlayın, damar içi basıncı 80 milimetrecicıya düşürmek için rezervuar şişelerini düşürün ve segmentlerin 10 dakika boyunca dengede durmasını bekleyin. Daha sonra, 60, 40 ve cıva 20 milimetre intravasküler basıncı azaltmak, segmentleri her basınç değişikliği nden sonra dengelemek için izin.
Bu temsili grafikte, arteriyel çap 100 milimetrecı cıva bir temel basınç çapı yüzde değişimi olarak Y-ekseni üzerinde gösterilmiştir. X ekseninde arteriyel dilaterasyon yanıtlarının test edildiği farklı intravasküler basınçlar gösterilmiştir. Sham yaralanma grubu için, MCA çapları taban çizgisinin üzerinde arttı ve intraluminal basınç cıva 100 ila 20 milimetre düşürüldü olarak normal olarak dilate devam etti.
Buna karşılık, gözlemlenen 30 ve 60 dakikalık patlamaya bağlı travmatik beyin hasarı gruplarında intravasküler basınçta sürekli olarak uygulanan azalmaya karşı MCA dilator tepkileri, patlamaya maruz kaldıktan sonra genişleme kabiliyetlerinde önemli ölçüde azalmış, bu da serebral vazodilatör yanıtların azalmaya karşı önemli bir bozukluğu nu göstermektedir. Damar çıkarma, kurtarma, montaj ve profüzyon teknikleri son derece karmaşık, ve hassas bakım her türlü çaba bu prosedürleri gerçekleştirirken alınmalıdır.
