Name: diagnosis of hirschsprung's disease by immunostaining rectal suction biopsies for calretinin, s100 protein and protein gene product 9.5
Uploaded: 2019-04-26T12:30:00
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लेखकों को फिल्माने प्रयोगशाला प्रदान करने में उनकी बड़ी मदद के लिए Weibing तांग धंयवाद । इस लेख को सार्वजनिक कल्याण अनुसंधान द्वारा समर्थित है, और विशेष धन चीन के राष्ट्रीय स्वास्थ्य और परिवार नियोजन (अनुदान No. 201402007) से प्राप्त किया गया ।

इस प्रोटोकॉल को हएहांग यूनिवर्सिटी ऑफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी के यूनियन हॉस्पिटल के रिसर्च एथिक्स बोर्ड ने मंजूरी दे दी ।
1. मलाशय सक्शन बायोप्सी
<ol><li>संरक्षक से सूचित सहमति प्राप्त करने के बाद ...

<ol>
	<li>Tam, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hirschsprung's+disease:+A+bridge+for+science+and+surgery.">Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery.</a> Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).</li><li>Heanue, T. A., Pachnis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteric+nervous+system+development+and+Hirschsprung's+disease:+advances+in+genetic+and+stem+cell+studies.">Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advances in genetic and stem cell studies.</a> Nature Reviews Neuroscience. 8 (6), 466-479 (2007).</li><li>Setiadi, J. A., Dwihantoro, A., Iskandar, K., Heriyanto, D. S., Gunadi, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+utility+of+the+hematoxylin+and+eosin+staining+in+patients+with+suspected+Hirschsprung+disease.">The utility of the hematoxylin and eosin staining in patients with suspected Hirschsprung disease.</a> BMC Surgery. 17 (1), 71 (2017).</li><li>Agrawal, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholinesterase+histochemistry+(AChE)+-+A+helpful+technique+in+the+diagnosis+and+in+aiding+the+operative+procedures+of+Hirschsprung+disease.">Acetylcholinesterase histochemistry (AChE) - A helpful technique in the diagnosis and in aiding the operative procedures of Hirschsprung disease.</a> Diagnostic Pathology. 10 (1), 208 (2015).</li><li>Kacar, A., Arikok, A. T., Azili, M. N., Ekberli Agirbas, G., Tiryaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calretinin+immunohistochemistry+in+Hirschsprung's+disease:+An+adjunct+to+formalin-based+diagnosis.">Calretinin immunohistochemistry in Hirschsprung's disease: An adjunct to formalin-based diagnosis.</a> The Turkish Journal of Gastroenterology. 23 (3), 226-233 (2012).</li><li>Bachmann, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+panel+for+the+diagnosis+of+Hirschsprung&#39;s+disease+using+antibodies+to+MAP2,+calretinin,+GLUT1+and+S100.">Immunohistochemical panel for the diagnosis of Hirschsprung&#39;s disease using antibodies to MAP2, calretinin, GLUT1 and S100.</a> Histopathology. 66 (6), 824-835 (2015).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100+and+protein+gene+product+9.5+immunostaining+of+rectal+suction+biopsies+in+the+diagnosis+of+Hirschsprung'+disease.">S100 and protein gene product 9.5 immunostaining of rectal suction biopsies in the diagnosis of Hirschsprung' disease.</a> American Journal of Translational Research. 8 (7), 3159 (2016).</li><li>Takawira, C., D'Agostini, S., Shenouda, S., Persad, R., Sergi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+procedures+update+on+Hirschsprung+disease.">Laboratory procedures update on Hirschsprung disease.</a> Journal of Pediatric Gastroenterology &amp; Nutrition. 60 (5), 598 (2015).</li><li>Meier-Ruge, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetylcholinesterase+activity+in+suction+biopsies+of+the+rectum+in+the+diagnosis+of+Hirschsprung's+disease.">Acetylcholinesterase activity in suction biopsies of the rectum in the diagnosis of Hirschsprung's disease.</a> Journal of Pediatric Surgery. 7 (1), 11-17 (1972).</li><li>Barshack, I., Fridman, E., Goldberg, I., Chowers, Y., Kopolovic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+loss+of+calretinin+expression+indicates+aganglionosis+in+Hirschsprung's+disease.">The loss of calretinin expression indicates aganglionosis in Hirschsprung's disease.</a> Journal of Clinical Pathology. 57 (7), 712-716 (2004).</li><li>Kapur, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+We+Stop+Looking?+Immunohistochemistry+and+the+Diagnosis+of+Hirschsprung+Disease.">Can We Stop Looking? Immunohistochemistry and the Diagnosis of Hirschsprung Disease.</a> American Journal of Clinical Pathology. 126 (1), 9-12 (2006).</li><li>Guinardsamuel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calretinin+immunohistochemistry:+a+simple+and+efficient+tool+to+diagnose+Hirschsprung+disease.">Calretinin immunohistochemistry: a simple and efficient tool to diagnose Hirschsprung disease.</a> Modern Pathology. 22 (10), 1379-1384 (2009).</li><li>Robey, S. S., Kuhajda, F. P., Yardley, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoperoxidase+stains+of+ganglion+cells+and+abnormal+mucosal+nerve+proliferations+in+Hirschsprung's+disease.">Immunoperoxidase stains of ganglion cells and abnormal mucosal nerve proliferations in Hirschsprung's disease.</a> Human Pathology. 19 (4), 432-437 (1988).</li><li>Monforte-Mu&#241;oz, H., Gonzalez-Gomez, I., Rowland, J. M., Landing, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+submucosal+nerve+trunk+caliber+in+aganglionosis:+a+&amp;#34;positive&amp;#34;+and+objective+finding+in+suction+biopsies+and+segmental+resections+in+Hirschsprung's+disease.">Increased submucosal nerve trunk caliber in aganglionosis: a &amp;#34;positive&amp;#34; and objective finding in suction biopsies and segmental resections in Hirschsprung's disease.</a> Archives of Pathology &amp; Laboratory Medicine. 122 (8), 721-725 (1998).</li><li>Bachmann, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+panel+for+the+diagnosis+of+Hirschsprung&#39;s+disease+using+antibodies+to+MAP2,+calretinin,+GLUT1+and+S100.">Immunohistochemical panel for the diagnosis of Hirschsprung&#39;s disease using antibodies to MAP2, calretinin, GLUT1 and S100.</a> Histopathology. 66 (6), 824-835 (2015).</li><li>Sams, V. R., Bobrow, L. G., Happerfield, L., Keeling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+PGP9.5+in+the+diagnosis+of+Hirschsprung's+disease.">Evaluation of PGP9.5 in the diagnosis of Hirschsprung's disease.</a> Journal of Pathology. 168 (1), 55 (1992).</li><li>Huang, Y., Anupama, B., Zheng, S., Xiao, X., Chen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+enteric+nerve+markers+and+nerve+innervation+in+total+colonic+aganglionosis.">The expression of enteric nerve markers and nerve innervation in total colonic aganglionosis.</a> International Journal of Surgical Pathology. 19 (3), 303 (2011).</li></ol>

यहां हम एक प्रक्रिया तीन अलग immunohistochemical एंटीबॉडी का उपयोग करने के लिए HD के निदान के लिए आरबीएस वर्गों दाग बताया । हमारे नैदानिक प्रोटोकॉल की संवेदनशीलता ९६.४९% (९५% CI, 0.88-0.99) था, और विशिष्टता १००% था (९५% CI, 097-1.00) ।
<p c...

Hirschsprung रोग (एच. डी.) एक आम जन्मजात आंत आंत्र विकार बाहरी आंत्र पथ के विभिन्न क्षेत्रों में गुच्छिका कोशिकाओं की कमी की विशेषता है1. भ्रूणीय तंत्रिका कोशिकाओं के आक्रमण के पूरा होने पर मानव आंत्रीय तंत्रिका तंत्र बनता है । अगर इस प्रक्रिया में गड़बड़ी होती है और आक्रमण पूरा नहीं हो पाता है तो नवजात की बाहर की आंत एगलिनिक2हो जाती है । इस संभावित घातक स्थिति को हिर्श्उछला रोग कहा जाता है । प्रसार, गतिशीलता, और आंत विकास सफल colonization के तीन मुख्य घटक हैं ।
पारंपरिक hematoxylin और eosin (एच & ई) एक सीमित सबम्यूकोसल बायोप्सी के धुंधला के रूप में एक परिणाम के रूप में संतोषजनक प्राप्त नहीं कर सकता एच & सर्जरी से प्राप्त एक पूर्ण मोटाई ऊतक के धुंधला । इसके अतिरिक्त, एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ (दर्द) गुदा सक्शन ऊतक के धुंधला सैद्धांतिक रूप से अपनी अपर्याप्त संवेदनशीलता, जो ९१% है, और जमे हुए वर्गों3,4के जटिल प्रसंस्करण के कारण चुनौतीपूर्ण है । कई अन्य immunohistochemical मार्कर की गुच्छिका कोशिकाओं और तंत्रिका तंतुओं कि formalin-फिक्स्ड और पैराफिन एम्बेडेड नमूनों में दाग किया जा सकता है धीरे-धीर मुख्यधारा HD निदान बन रहे हैं. Calretinin एक विटामिन डी पर निर्भर कैल्शियम बाध्यकारी प्रोटीन है कि myenteric और सबम्यूकोसल के जाल में व्यक्त नहीं है HD-प्रभावित खंड5. S100 प्रोटीन तंत्रिका शिखा से व्युत्पन्न कोशिकाओं में व्यक्त किया जाता है, जैसे तंत्रिका तंतुओं और glial कोशिकाओं, जो अक्सर HD के सबम्यूकोसल ऊतक में तंत्रिका अतिवृद्धि प्रभावित खंड6. प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५ (पीजीपी 9.5) मज़बूती से दाग तंत्रिका तंतुओं और गुच्छिका कोशिकाओं; पीजीपी 9.5 धुंधला, विशेष रूप से पृथक hypoganglionosis के मामलों में, एक calretinin धुंधला करने के लिए एक पूरक के रूप में कार्य करता है । S100 और पीजीपी 9.5 के साथ डबल धुंधला गलत नकारात्मक दर को कम करने और संवेदनशीलता में वृद्धि कर सकते हैं । एक पूर्वापेक्षा के रूप में, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य इस उपन्यास नैदानिक पद्धति की पर्याप्त विशिष्टता और उच्च संवेदनशीलता को सुनिश्चित करना है । हमारे उपंयास प्रोटोकॉल aganglionic आंत और hypertrophic तंत्रिका तंतुओं के भेदभाव के लिए सभी तीन मार्कर का इस्तेमाल किया । ३१८ बच्चों का एक संभावित अध्ययन हमारी प्रयोगशाला द्वारा प्रदर्शन किया गया था और पहले एक विस्तृत प्रोटोकॉल के बिना प्रकाशित7। विस्तृत प्रोटोकॉल और सावधानियों इस लेख में चर्चा कर रहे हैं । किसी भी नवजात शिशु जो जंम के बाद से एक गंभीर शौच की समस्या से पीड़ित या अन्य आम रोगों को छोड़कर पुरानी कब्ज के साथ बच्चों को गुदा चूषण बायोप्सी (आरएसबी) के लिए संभावित उंमीदवार हैं । हमारे उपंयास प्रोटोकॉल न केवल RSBs लेकिन यह भी पूर्ण मोटाई बायोप्सी या शल्य नमूनों के लिए एक अंतिम निदान बनाने धुंधला के लिए उपयुक्त है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>calretinin antibody</td>
			<td>MXB Biotechnologies</td>
			<td>MAB-0716 170416405c</td>
			<td>antibody: primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S-100 antibody</td>
			<td>MXB Biotechnologies</td>
			<td>Kit-0007</td>
			<td>antibody: primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGP9.5 antibody</td>
			<td>Shanghai long island antibody Co. Ltd</td>
			<td>R-0457-03</td>
			<td>antibody: primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>enhancer reagent</td>
			<td>MXB Biotechnologies</td>
			<td>KIT-9902-A 170416405a</td>
			<td>antibody: secondary antibody A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit/Mouse IgG Secondary Antibody</td>
			<td>MXB Biotechnologies</td>
			<td>KIT-9902-B</td>
			<td>antibody: secondary antibody B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB staining kit (containing reagent A B and C)</td>
			<td>MXB Biotechnologies</td>
			<td>DAB-0031</td>
			<td>staining kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat incubator</td>
			<td>Shanghai yiheng instrument Co. Ltd</td>
			<td>DHP-9082</td>
			<td>instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rbi2 suction rectal biopsy system</td>
			<td>Aus Systems Pty Ltd, South Australia, Australia</td>
			<td>CP1200 HP1000 SS1000</td>
			<td>instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>leica RM2016</td>
			<td>instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>citric acid sodium citrate buffer(100X)</td>
			<td>MXB Biotechnologies</td>
			<td>MVS-0101</td>
			<td>antigen retrieval buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pathological tissue dehydrator</td>
			<td>wuhan junjie electronic Co. Ltd</td>
			<td>JT-12F</td>
			<td>instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

diagnosis of hirschsprung's disease by immunostaining rectal suction biopsies for calretinin, s100 protein and protein gene product 9.5

Hirschsprung रोग (एच. डी.) एक जन्मजात आंतों की बीमारी है कि चिकित्सकीय शिशुओं में जाविष्ठा पारित करने के लिए या बच्चों में दीर्घकालिक कब्ज के रूप में असमर्थता के रूप में प्रकट होता है । मलाशय सक्शन बायोप्सी (आरएसबी) गुच्छिका कोशिकाओं और तंत्रिका अतिवृद्धि की अनुपस्थिति को निर्धारित करने के लिए वर्तमान में एचडी के निदान के लिए सबसे सटीक परीक्षण है । पारंपरिक hematoxylin-इओसिन धुंधला संवेदनशीलता और विशिष्टता का अभाव है । एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ अभिरंजक व्यापक रूप से अपनी जटिल प्रक्रिया के कारण नहीं किया जा सकता है । हमारे calretinin के लिए immunostaining के उपंयास प्रोटोकॉल, S100 प्रोटीन, और प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५ (पीजीपी 9.5), जो हम RSBs पर आयोजित किया, उच्च संवेदनशीलता और ९६.४९% की विशिष्टता दर दर्शाती है (९५% विश्वास अंतराल, 0.88-0.99) और १००% (९५% विश्वास अंतराल, 097-1.00), क्रमशः । एच. डी. प्रभावित खंडों अक्सर calretinin की अभिव्यक्ति की अनुपस्थिति के रूप में मौजूद, S100 प्रोटीन, और पीजीपी 9.5, जो सबम्यूकोसल ऊतक में तंत्रिका अतिवृद्धि के मार्कर हैं. यह प्रोटोकॉल इस नई नैदानिक पद्धति की विस्तृत प्रचालन प्रक्रिया का वर्णन करता है ।

कुल मिलाकर हमारे अध्ययन में ३१८ मरीजों को नामांकित किया गया । रोगियों के सभी आरएसबी से गुजरना पड़ा, और ऊतकों calretinin, S100, और पीजीपी 9.5 के लिए दाग रहे थे । हमारे उपन्यास प्रोटोकॉल पर आधारित निदान ९७...

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Diagnosis of Hirschsprung's Disease by Immunostaining Rectal Suction Biopsies for Calretinin, S100 Protein and Protein Gene Product 9.5

यह प्रोटोकॉल calretinin, S100 प्रोटीन, और प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५ के लिए immunostaining गुदा चूषण बायोप्सी की प्रक्रिया का वर्णन करता है । इस उपंयास है Hirschsprung रोग के लिए सहायक नैदानिक विधि बेहतर संवेदनशीलता और विशिष्टता दर है ।

Calretinin के लिए Immunostaining गुदा चूषण बायोप्सी द्वारा Hirschsprung रोग का निदान, S100 प्रोटीन और प्रोटीन जीन उत्पाद ९.५

Hirschsprung&#39;s disease (HD) is a congenital intestinal disease that is clinically manifested as an inability to pass meconium in infants or as ...

यह विधि हिर्स्चस्प्रुंग रोग के निदान में सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। इस तकनीक की विधि और कार्य, यदि आप प्रोटोकॉल का पालन करते हैं, तो उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता दरों को प्रदर्शित करता है जो एक ही समय में प्रक्रिया करते हैं। प्रक्रिया का प्रदर्शन Mijing फेंग, मेरी प्रयोगशाला से एक तकनीशियन होगा ।कमरे के तापमान पर छह घंटे के लिए 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में ऊतक की मात्रा पांच गुना में गुदा सक्शन बायोप्सी को ठीक करके शुरू करें। 11 घंटे के लिए एक रोग ऊतक निर्जलीकरण में तय ऊतकों निर्जलित और पैराफिन ब्लॉक में प्रसंस्कृत गुदा सक्शन बायोप्सी ऊतकों एंबेड । ऊतक के एक पूर्ण अनुभाग विमान के उजागर होने तक एक माइक्रोटॉम पर ब्लॉक ट्रिम करें।फिर एम्बेडेड ऊतक के 0.4 माइक्रोमीटर वर्गों को प्राप्त करने के लिए माइक्रोटॉम का उपयोग करें। वर्गों को एक फ्लैट योजना में फैलने की अनुमति देने के लिए 45 से 50 डिग्री सेल्सियस पानी में रखें। चपटे खंडों को ग्लास स्लाइड पर स्थानांतरित करें और उन्हें तीन से पांच घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस ओवन में बेक करें।पांच मिनट के इथेनॉल विसर्जन में उनके जलयोजन के बाद जाइलीन के दो 15 मिनट के परिवर्तनों में डिपैराफिनाइज्ड स्लाइड रखें। फिर स्लाइड्स को रिवर्स ऑस्मोसिस शुद्ध पानी में अतिरिक्त पांच मिनट के लिए कुल्ला करें। एंटीजन पुनर्प्राप्ति के लिए, स्लाइड को पुनर्प्राप्ति समाधान के कॉप्लिन धुंधला जार में रखें और जार को उबलते पानी के पूर्व गरम स्नान में रखें।20 मिनट के बाद, जार को लगभग 10 मिनट तक कमरे के तापमान में ठंडा करने की अनुमति दें और पीबीएस के साथ स्लाइड को धीरे से कुल्ला करें। फिर प्रत्येक ऊतक अनुभाग को घेरने के लिए एक हाइड्रोफोबिक मार्कर का उपयोग करें और स्लाइड को गीले बॉक्स में रखें। किसी भी पेरोक्सिडेट्स को ब्लॉक करने के लिए, प्रत्येक ऊतक पर 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड समाधान की दो या तीन बूंदें जोड़ें और स्लाइड को 20 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर रखें।इनक्यूबेशन के अंत में, ३ ५ मिनट के PBS धोता के साथ स्लाइड कुल्ला ३७ डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए 5% गोजातीय सीरम एल्बुमिन के साथ अवरुद्ध करने के बाद । इसके बाद, अतिरिक्त गोजातीय सीरम एल्बुमिन को त्यागें और रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर ब्याज की प्राथमिक एंटीबॉडी के 50 माइक्रोलीटर के साथ कोशिकाओं को लेबल करें। अगली सुबह, पीबीएस में तीन तीन मिनट की धोती के साथ स्लाइड कुल्ला और प्रत्येक स्लाइड में बहुलक बढ़ाने के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें।37 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के बाद, पीबीएस में तीन बार स्लाइड धोएं और प्रत्येक ऊतक अनुभाग में माध्यमिक एंटीबॉडी बी के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें। ३७ डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के बाद, PBS में ३ ५ मिनट की धुलाई के साथ वर्गों कुल्ला और प्रत्येक स्लाइड के लिए हौसले से तैयार डीएबी काम समाधान की एक बूंद जोड़ें । जब हल्के माइक्रोस्कोपी द्वारा भूरे रंग के धुंधला के उचित स्तर का पता चला है, पांच मिनट के लिए PBS में स्लाइड कुल्ला और काउंटर एक मिनट के लिए हेमटॉक्सीलिन की एक बूंद के साथ नाभिक दाग ।लगभग 30 से 40 सेकंड के लिए पानी की एक मिलने के नीचे अतिरिक्त दाग निकालें ताजा PBS में एक 25 से 30 सेकंड धोने के बाद। ऊतकों को 10 सेकंड के लिए 1% हाइड्रोक्लोरिक एसिड इथेनॉल में अंतर करें और इसके बाद एक मिनट का पीबीएस वॉश करें। हाइड्रेशन के रिवर्स क्रम में पांच मिनट के विसर्जन के साथ स्लाइड्स को डिहाइड्रेट करें और स्लाइड्स को जाइलीन के दो पांच मिनट के बदलावों का पर्दाफाश करें ।फिर अल्ट्रा-क्लीन माउंटिंग का उपयोग करके कवर स्लिप को माउंट करें और स्लाइड को हल्के माइक्रोस्कोप पर उनके विज़ुअलाइज़ेशन से पहले सूखने दें। 318 गुदा खंड बायोप्सी रोगियों के इस प्रतिनिधि अध्ययन में, 99 रोगियों को शुरू में गुदा अनुभाग बायोप्सी द्वारा निदान किया गया। कई गैंगलियन कोशिकाएं जो कैलिरेटिन को व्यक्त करती हैं, सामान्य ऊतक बायोप्सी में देखी गईं।हालांकि, हिर्स्चस्प्रुंग के रोग खंडों से ऊतक के किसी भी क्षेत्र में कोई गैंगलियन कोशिकाओं का पता नहीं चला । एस-100 और पीजीपी9.5 इम्यूनोस्टेटिंग ने रोगग्रस्त ऊतक के उपमुकोसा में हाइपरट्रोफिड तंत्रिका चड्डी का खुलासा किया, जिसमें सामान्य रूप से अंतर्मनित आंत में देखी गई कुछ छोटी तंत्रिका टहनियों के केवल दानेदार धुंधला होता है। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, गुदा सक्शन बायोप्सी के आकार और वर्गों की मोटाई जैसे विवरणों पर ध्यान देना याद रखना महत्वपूर्ण है।के बाद यह defragment है, इस तकनीक बाल चिकित्सा सर्जरी के क्षेत्र में शोध के लिए मार्ग प्रशस्त करने के लिए है Hirschsprung रोग के निदान का समर्थन करेंगे ।

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