Name: preparation of poly(pentafluorophenyl acrylate) functionalized sio2 beads for protein purification
Uploaded: 2018-11-19T14:00:00
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이 작품 국방 개발 (부여 번호에 대 한 기관에 의해 지원 되었다 UD170039ID)입니다.

1입니다. Poly(PFPA) 단일 중합체의 준비
<ol><li>AIBN의 recrystallization<ol>
<li>2,2'-azobis(2-methylpropionitrile) (AIBN)의 5 g을 250ml 비 커에 메탄올 25 mL 결합. 60 ° C 기름 목욕에서 비 커를 담가 다음 적극적으로 AIBN 완전히 녹아 때까지 저 어 바 혼합물을 저 어.</li>
		<li>필터 종이 (5-8 μ m 입자 보존)를 통해 따뜻한 해결책을 필터링 하 고 천천히 형태를 결정 수 있도록 4 ° C에서 여과 액을 저장.</li>
		<li>여과 의해 ?...

<ol>
	<li>Johnsson, B., L&#246;f&#229;s, S., Lindquist, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immobilization+of+proteins+to+a+carboxymethyldextran-modified+gold+surface+for+biospecific+interaction+analysis+in+surface+plasmon+resonance+sensors.">Immobilization of proteins to a carboxymethyldextran-modified gold surface for biospecific interaction analysis in surface plasmon resonance sensors.</a> Analytical Biochemistry. 198 (2), 268-277 (1991).</li><li>Kurzawa, C., Hengstenberg, A., Schuhmann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immobilization+method+for+the+preparation+of+biosensors+based+on+pH+shift-induced+deposition+of+biomolecule-containing+polymer+films.">Immobilization method for the preparation of biosensors based on pH shift-induced deposition of biomolecule-containing polymer films.</a> Analytical Chemistry. 74 (2), 355-361 (2002).</li><li>You, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+identification+of+proteins+using+nanoparticle-fluorescent+polymer+'chemical+nose'+sensors.">Detection and identification of proteins using nanoparticle-fluorescent polymer 'chemical nose' sensors.</a> Nature Nanotechnology. 2 (5), 318-323 (2007).</li><li>Roberts, M. W., Ongkudon, C. M., Forde, G. M., Danquah, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatility+of+polymethacrylate+monoliths+for+chromatographic+purification+of+biomolecules.">Versatility of polymethacrylate monoliths for chromatographic purification of biomolecules.</a> Journal of Separation Science. 32 (15-16), 2485-2494 (2009).</li><li>Sandison, M. E., Cumming, S. A., Kolch, W., Pitt, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-chip+immunoprecipitation+for+protein+purification.">On-chip immunoprecipitation for protein purification.</a> Lab on a Chip. 10 (20), 2805-2813 (2010).</li><li>Das, A., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+Ester+Containing+Polymers:+Opportunities+and+Challenges+for+the+Design+of+Functional+Macromolecules.">Activated Ester Containing Polymers: Opportunities and Challenges for the Design of Functional Macromolecules.</a> Chemical Reviews. 116 (3), 1434-1495 (2016).</li><li>Choi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionalization+and+patterning+of+reactive+polymer+brushes+based+on+surface+reversible+addition+and+fragmentation+chain+transfer+polymerization.">Functionalization and patterning of reactive polymer brushes based on surface reversible addition and fragmentation chain transfer polymerization.</a> Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. 50 (19), 4010-4018 (2012).</li><li>Kessler, D., Jochum, F. D., Choi, J., Char, K., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+surface+coatings+based+on+polysilsesquioxanes:+universal+method+toward+light-responsive+surfaces.">Reactive surface coatings based on polysilsesquioxanes: universal method toward light-responsive surfaces.</a> ACS Applied Materials &amp; Interfaces. 3 (2), 124-128 (2011).</li><li>Son, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penetration+and+exchange+kinetics+of+primary+alkyl+amines+applied+to+reactive+poly(pentafluorophenyl+acrylate)+thin+films.">Penetration and exchange kinetics of primary alkyl amines applied to reactive poly(pentafluorophenyl acrylate) thin films.</a> Polymer Journal. 48 (4), 487-495 (2016).</li><li>Kessler, D., Roth, P. J., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+surface+coatings+based+on+polysilsesquioxanes:+controlled+functionalization+for+specific+protein+immobilization.">Reactive surface coatings based on polysilsesquioxanes: controlled functionalization for specific protein immobilization.</a> Langmuir. 25 (17), 10068-10076 (2009).</li><li>Kessler, D., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+surface+coatings+based+on+polysilsesquioxanes:+defined+adjustment+of+surface+wettability.">Reactive surface coatings based on polysilsesquioxanes: defined adjustment of surface wettability.</a> Langmuir. 25 (24), 14200-14206 (2009).</li><li>Kessler, D., Nilles, K., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular+approach+towards+multi-functional+surfaces+with+adjustable+and+dual-responsive+wettability+using+a+hybrid+polymer+toolbox.">Modular approach towards multi-functional surfaces with adjustable and dual-responsive wettability using a hybrid polymer toolbox.</a> Journal of Materials Chemistry. 19 (43), 8184-8189 (2009).</li><li>Eberhardt, M., Mruk, R., Zentel, R., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+pentafluorophenyl(meth)acrylate+polymers:+new+precursor+polymers+for+the+synthesis+of+multifunctional+materials.">Synthesis of pentafluorophenyl(meth)acrylate polymers: new precursor polymers for the synthesis of multifunctional materials.</a> European Polymer Journal. 41 (7), 1569-1575 (2005).</li><li>Jochum, F. D., Forst, F. R., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PNIPAM+copolymers+containing+light-responsive+chromophores:+a+method+toward+molecular+logic+gates.">PNIPAM copolymers containing light-responsive chromophores: a method toward molecular logic gates.</a> Macromolecular Rapid Communications. 31 (16), 1456-1461 (2010).</li><li>Schattling, P., Pollmann, I., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+CO2-responsive+polymers+by+post-polymerization+modification.">Synthesis of CO2-responsive polymers by post-polymerization modification.</a> Reactive &amp; Functional Polymers. 75, 16-21 (2014).</li><li>He, L., Szameit, K., Zhao, H., Hahn, U., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postpolymerization+modification+using+less+cytotoxic+activated+ester+polymers+for+the+synthesis+of+biological+active+polymers.">Postpolymerization modification using less cytotoxic activated ester polymers for the synthesis of biological active polymers.</a> Biomacromolecules. 15 (8), 3197-3205 (2014).</li><li>Arnold, R. M., McNitt, C. D., Popik, V. V., Locklin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+grafting+of+poly(pentafluorophenyl+acrylate)+onto+oxides:+versatile+substrates+for+reactive+microcapillary+printing+and+self-sorting+modification.">Direct grafting of poly(pentafluorophenyl acrylate) onto oxides: versatile substrates for reactive microcapillary printing and self-sorting modification.</a> Chemical Communications. 50 (40), 5307-5309 (2014).</li><li>Son, H., Ku, J., Kim, Y., Li, S., Char, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amine-Reactive+Poly(pentafluorophenyl+acrylate)+Brush+Platforms+for+Cleaner+Protein+Purification.">Amine-Reactive Poly(pentafluorophenyl acrylate) Brush Platforms for Cleaner Protein Purification.</a> Biomacromolecules. 19 (3), 951-961 (2018).</li><li>Cullen, S. E., Schwartz, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+H-2+and+Ia+alloantigens+with+immunoprecipitation+induced+by+protein+A-bearing+staphylococci.">An improved method for isolation of H-2 and Ia alloantigens with immunoprecipitation induced by protein A-bearing staphylococci.</a> The Journal of Immunology. 117 (1), 136-142 (1976).</li><li>Sisson, T. H., Castor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+immobilizing+IgG+antibodies+on+protein+A-agarose.">An improved method for immobilizing IgG antibodies on protein A-agarose.</a> Journal of Immunology Methods. 127 (2), 215-220 (1990).</li><li>Peritz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoprecipitation+of+mRNA-protein+complexes.">Immunoprecipitation of mRNA-protein complexes.</a> Nature Protocols. 1 (2), 577-580 (2006).</li><li>Zhang, Z., Chen, S., Jiang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-functional+biomimetic+materials:+nonfouling+poly+(carboxybetaine)+with+active+functional+groups+for+protein+immobilization.">Dual-functional biomimetic materials: nonfouling poly (carboxybetaine) with active functional groups for protein immobilization.</a> Biomacromolecules. 7 (12), 3311-3315 (2006).</li><li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NHS-ester+functionalized+poly(PEGMA)+brushes+on+silicon+surface+for+covalent+protein+immobilization.">NHS-ester functionalized poly(PEGMA) brushes on silicon surface for covalent protein immobilization.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 66 (2), 233-239 (2008).</li><li>Ma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facile+fabrication+of+microsphere-polymer+brush+hierarchically+three-dimensional+(3D)+substrates+for+immunoassays.">Facile fabrication of microsphere-polymer brush hierarchically three-dimensional (3D) substrates for immunoassays.</a> Chemical Communications. 51 (31), 6749-6752 (2015).</li><li>Chong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiocarbonylthio+compounds+[SC+(Ph)+S&#8722;+R]+in+free+radical+polymerization+with+reversible+addition-fragmentation+chain+transfer+(RAFT+Polymerization).+Role+of+the+free-radical+leaving+group+(R).">Thiocarbonylthio compounds [SC (Ph) S&#8722; R] in free radical polymerization with reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT Polymerization). Role of the free-radical leaving group (R).</a> Macromolecules. 36 (7), 2256-2272 (2003).</li><li>Jochum, F. D., Theato, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-+and+Light-Responsive+Polyacrylamides+Prepared+by+a+Double+Polymer+Analogous+Reaction+of+Activated+Ester+Polymers.">Temperature- and Light-Responsive Polyacrylamides Prepared by a Double Polymer Analogous Reaction of Activated Ester Polymers.</a> Macromolecules. 42 (16), 5941-5945 (2009).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology.+The+Western+Blot.">Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. The Western Blot.</a> JoVE. , (2018).</li><li>Chua, G. B. H., Roth, P. J., Duong, H. T. T., Davis, T. P., Lowe, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+Thermoresponsive+Solution+Properties+of+Poly[oligo(ethylene+glycol)+(meth)acrylamide]s:+Biocompatible+PEG+Analogues.">Synthesis and Thermoresponsive Solution Properties of Poly[oligo(ethylene glycol) (meth)acrylamide]s: Biocompatible PEG Analogues.</a> Macromolecules. 45 (3), 1362-1374 (2012).</li></ol>

Poly(PFPA)의 합성 SiO2 구슬은 그림 1에 나와 있는 투입. 채용 함으로써 항으로 링커 분자, poly(PFPA) 브러쉬 covalently SiO2 기판에 투입 간단한 2 단계 프로세스를 통해 준비 될 수 있습니다. PFP 단위 중 일부 항에 대 한 반응에 대 한 희생은, 비록 많은 PFP 단위 아미노 말뚝 또는 항 체 이상 반응에 대 한 사용할 수 있는 예상 된다. PFP 그룹 poly(PFPA) 브러쉬 할 물<sup class=...

반응성 폴리머 브러쉬 최근 몇 년 동안에 많은 관심을 받았습니다. 활성화 된 표면 탐지 및 분리1,2,3,4,등의 분야에서 응용 프로그램과 함께 만드는 유기 또는 무기 재료에 기능성 분자를 고정을 사용할 수 있습니다. 5. 보고 반응 고분자 중 pentafluorophenyl 에스테 르 단위를 포함 하는 아민 및 가수분해6향해 저항 그들의 높은 반응성 때문에 특히 유용 합니다. 이러한 한 폴리머 poly(PFPA), 이며 1 차 또는 2 차 아민7,8,,910를 포함 하는 분자와 쉽게 기능성된 후 중 합 될 수 있습니다. 한 예로, poly(PFPA) 브러쉬 빛 반응 표면7만들려고 아미노 spiropyrans로 반응 했다.
Poly(PFPA)와 그 응용 프로그램의 준비 이전 간행물6,7,,89,10,11,12의 숫자에 설명 되었습니다. ,13,,1415,,1617. 특히, Theato와 동료 보고 "에 접목"와 "에서" 방법7,,810,,1112 접목을 통해 poly(PFPA) 브러쉬의 합성 . "접목 에" 접근 방식, 폴 리 (methylsilsesquioxane)에서-폴 리 (pentafluorophenyl 아크릴) (poly(MSSQ-PFPA)) 하이브리드 폴리머 합성된8,10,,1112했다. Poly(MSSQ) 구성 요소 형태로 강한 접착 코팅된 소재 표면에 브러시 레이어를 형성 하는 poly(PFPA) 구성 요소 되므로 다른 유기 및 무기 표면 수가 있었습니다. "접목 에서" 접근에서 표면 가역 추가 시작 하 고 조각화 체인 전송 (SI-뗏목) 중 합 poly(PFPA) 브러쉬7을 준비 하기 위해 고용 되었다. 이 경우에, 표면 고정된 체인 전송 에이전트 (SI-CTA) covalently silane 실리 카 반응을 통해 기판에 첨부를 먼저 되었다. 고정된 시 CTA 다음 기판에 안정적인 공유를 밀도가 포장된 poly(PFPA) 브러쉬 생성 PFPA 단위체의 뗏목 시 합에 참가 했다.
시-뗏목 중 합을 통해 합성 poly(PFPA) 브러쉬를 이용 하 여 우리는 최근 poly(PFPA) 융합 실리 카 입자와 단백질 정화18에서 그들의 후속 응용 프로그램에 항 체의 동원 정지를 시연. 항 체의 동원 정지에 대 한 poly(PFPA) 브러쉬를 사용 하 여 다양 한 IP 통해 현재 단백질 분리와 관련 된 문제를 해결 하기 위해 발견 되었다. 기존의 IP 항 체 immobilization19,,2021단백질 A/G는 링커로의 사용에 의존합니다. 이후 단백질 A/G를 사용 하 여 항 체를 특정 방향으로 장착할 수, 높은 대상 항 원 복구 효율성 달성 된다. 그러나, 단백질 A/G를 사용 하 여 단백질 복구, 둘 중 배경 잡음의 높은 수준에 기여 하는 동안 일반적인 단백질 상호 작용 뿐만 아니라 항 체의 손실에서 겪고 있다. 이러한 단점을 해결 하려면 고체 지원에 항 체의 직접 가교 탐험된22,,2324되었습니다. 이러한 기술의 효율은 일반적으로 낮은 가교 된 항 체의 임의의 방향으로. Poly(PFPA) 투입 기판에 대 한 항 체의 동원 정지는 영구적, PFP 단위 및 항 체에 아민 기능 사이 교환 반응을 통해 달성입니다. 비록 항 체 오리엔테이션은 여전히 무작위, 시스템 많은 반응 PFP 사이트, 중 합도 의해 제어 하는 데에서 혜택. 또한, 우리 아미노-말뚝와 PFP 단위의 부분 대체 하 여 보여주는 표면 화란 수 수 조정, 추가 시스템18의 단백질 복구 효율성을 향상. 전반적으로, poly(PFPA) 융합 실리 카 입자 합리적인 효율성 뿐만 아니라 많은 청소기 배경 전통적인 ip 효과적인 대안이 될를 표시 했다.
이 기여에 우리는 poly(PFPA) 이식할된 표면 항 체 동원 정지 및 IP 응용 프로그램에 대 한 준비 하는 다른 방법을 보고 합니다. 간단한 2 단계 프로세스에 그림 1에서 볼 수 있듯이 항 링커 분자는 먼저 입금 실리 카 표면에 그 후에 poly(PFPA) 폴리머 covalently에 PFP 단위 사이 반응을 통해 링커 분자에 연결 된 고분자 고 항에 아민 기능입니다. 이 준비 방법은 기판 표면에 poly(PFPA)의 영구 가교에 대 한 수 있지만 시 CTA 합성 및 poly(PFPA) 브러쉬의 중 합 시-뗏목과 관련 된 많은 합병증을 피 한다. 아미노 페그와 PFP 단위의 부분 대체 여전히 수행할 수 있습니다, 고분자 브러쉬 표면 특성의 미세 조정 허용. 우리는 따라서 준비 poly(PFPA) 융합 실리 카 구슬 항 체와 함께 움직일 수 및 IP 통해 단백질 농축 사용할 수 보여줍니다. 자세한 비드 준비 절차, 항 체 immobilization, 그리고 IP 테스트이 문서에 설명 되어 있습니다, 그리고 추구에 관심이 있는 독자에 대 한 기존의 단백질 A/G 대신 IP 기반.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,2-Azobisisobutyronitrile, 99%</td>
			<td>Daejung Chemicals</td>
			<td>1102-4405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl alcohol for HPLC, 99.9%</td>
			<td>Duksan Pure Chemicals</td>
			<td>d62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmagnesium bromide solution 1.0&#160;M in THF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>331376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon disulfide anhydrous, &#8805;99%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>335266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl bromide, 98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B17905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petroleum ether, 90%</td>
			<td>Samchun Chemicals</td>
			<td>P0220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl ether, 99%</td>
			<td>Daejung Chemicals</td>
			<td>4025-4404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate anhydrous, powder,&#160;99%</td>
			<td>Daejung Chemicals</td>
			<td>5514-4405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentafluorophenyl acrylate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-264001</td>
			<td>contains inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium oxide, activated, basic, Brockmann I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>199443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Daejung Chemicals</td>
			<td>7548-4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anisole anhydrous, 99.7%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>296295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica nanoparticle</td>
			<td>Microparticles GmbH</td>
			<td>SiO2-R-0.7</td>
			<td>5% w/v aqueous suspension</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Aminopropyltrimethoxysilane, &#62;96.0%</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>T1255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide for HPLC, &#8805;99.7%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amino-terminated poly(ethylene glycol) methyl ether</td>
			<td>Polymer Source</td>
			<td>P16082-EGOCH3NH2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline tablet</td>
			<td>Takara</td>
			<td>T9181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>9480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl (pH 8.0)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9855G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9640G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP-40</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E109-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15514-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>Biosesang</td>
			<td>D1037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor</td>
			<td>Merck</td>
			<td>535140-1MLCN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromo phenol blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5525-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl (pH 6.8)</td>
			<td>Biosolution</td>
			<td>BT033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td>Biosolution</td>
			<td>BS003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKR Antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>12297S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-32233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Rabbit IgG</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>2729S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeLa</td>
			<td>Korea Cell Line Bank</td>
			<td>10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator</td>
			<td>DAIHAN Scientific</td>
			<td>WUC-D10H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonicator</td>
			<td>BMBio</td>
			<td>BR2006A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge I</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424 R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge II</td>
			<td>LABOGENE</td>
			<td>1736R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotator</td>
			<td>FINEPCR</td>
			<td>ROTATOR/AG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum oven</td>
			<td>DAIHAN Scientific</td>
			<td>ThermoStable OV-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel permeation chromatography (THF)</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>1260 Infinity II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray photoelectron spectrometer</td>
			<td>Thermo VG Scientific</td>
			<td>Sigma Probe</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynamic light scattering</td>
			<td>Malvern Instruments</td>
			<td>ZEN 3690</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of poly(pentafluorophenyl acrylate) functionalized sio2 beads for protein purification

폴 리 (pentafluorophenyl 아크릴)을 준비 하는 간단한 방법을 보여 줍니다 (poly(PFPA)) 융합 항 체 동원 정지 및 후속 immunoprecipitation (IP) 응용 프로그램에 대 한 실리 카 구슬. 간단한 2 단계 프로세스를 통해 poly(PFPA) 이식할된 표면 준비 된다. 첫 번째 단계에서 3-aminopropyltriethoxysilane (항)으로 링커 분자 실리 카 표면에 입금 됩니다. 두 번째 단계에서 poly(PFPA) 단일 중합체, 가역 추가 및 조각화 체인 전송 (뗏목) 중 합을 통해 합성에 pentafluorophenyl (PFP) 단위 사이 교환 반응을 통해 링커 분자에 투입 되는 폴리머와 항에 아민 그룹입니다. 항 및 실리 카 입자는 엑스레이 광전자 분광학 (XPS)에 의해 확인으로 입자 크기 변화에 의해 감시에 poly(PFPA)의 증 착 동적 산란 (DL)을 통해 측정. 구슬, 아민 기능성된 poly(ethylene glycol)와 poly(PFPA)의 부분 대체의 표면 화란 개선 (아미노 PEG)도 수행 됩니다. 못 대체 poly(PFPA) 실리 카 구슬 다음 IP 응용 프로그램에 대 한 항 체와 함께 움직일 수 투입. 데모, 단백질 키 니 아 제 RNA 활성화 (PKR)에 대 한 항 체, 고용 및 IP 효율 서쪽 blotting에 의해 결정 됩니다. 분석 결과 항 체 움직일 구슬 실제로 일반적인 단백질 상호 작용은 최소 PKR을 풍부 하 게 사용 될 수 있다는 것을 보여준다.

Poly(PFPA)의 준비에 대 한 회로도와 SiO2 구슬, 투입 하거나 못 없이 대체 그림 1에 표시 됩니다. 항와 접목 과정, 맨 손으로 SiO2 구슬, poly(PFPA) 항 기능성 SiO2 구슬, 그리고 poly(PFPA) 융합 SiO2 구슬 DL (그림 2)와 XPS (그림 3)에 의해 특징입니다. 구슬의 IP 효율성 서쪽 blotting에 의해 ?...

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Preparation of Polypentafluorophenyl acrylate Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

폴 리 (pentafluorophenyl 아크릴)의 준비에 대 한 프로토콜 (poly(PFPA)) 융합 실리 카 비즈 제공 됩니다. Poly(PFPA) 기능성된 표면 다음 항 체와 함께 움직일 하 고 immunoprecipitation 통해 단백질 분리에 대 한 성공적으로 사용.

단백질 정화에 대 한 Poly(pentafluorophenyl acrylate) 기능성 SiO2 구슬의 준비

We demonstrate a simple method to prepare poly(pentafluorophenyl acrylate) (poly(PFPA)) grafted silica beads for antibody immobilization and subsequent ...

이 방법은 약물 전달, 생물학적 표적 검출 및 바이오 분리와 같은 분야에서 응용 이면이 있는 생체 분자 활성화 표면을 준비하는 데 사용될 수 있다. 이 기술의 주요 장점은 폴리 PFPA 브러시가 아민으로 반응성이 높고, 항체의 고정화가 몇 시간 동안 완충액의 배양에 의해 달성된다는 것입니다. 이 기술의 의미는 고정된 항체가 표적 항원과 성공적으로 결합할 수 있기 때문에 면역 정화를 통해 단백질 정제를 향해 확장됩니다.이 방법은 항체 동원 및 단백질 정화를 위해 입증되지만, 생체 분자 동원을 요구하는 다른 시스템에도 적용될 수 있다. APTES로 이산화규소 구슬을 처리하려면 먼저 5%의 중량 부피 수성 현탁액의 형태로 이산화규입자를 얻습니다. 0.8 밀리리터의 이산화소및 40밀리그램의 APTES, 8밀리리터의 메탄올을 교반 바가 장착된 20밀리리터 신자극 바이알에 결합합니다.격렬한 교반으로 5 시간 동안 실온에서 반응을 진행할 수 있습니다. 5시간 후 솔루션을 원문 튜브로 전송합니다. APTES 기능성 실리콘 이산화규구슬을 분리하려면 용액을 10, 000 G에서 5분간 원심분리합니다.그런 다음 상체를 제거합니다. 이제 신선한 메탄올 의 세 밀리리터에 그들을 다시 박차하여 구슬을 씻어. 혼합을 위해 손으로 튜브를 흔들어만 필요한 경우 몇 초 동안 수조에서 초음파 처리로 분산을 개선하십시오.원심 분리기는 이전과 같이, 한 번 더 세척 단계를 반복합니다. 메탄올 세척 이산화실리콘 구슬을 디메틸 설프리산화물 3밀리리터 또는 DMSO와 결합합니다. 혼합물을 손으로 흔들거나 필요한 경우 비드가 DMSO에 완전히 분산될 때까지 몇 초 동안 초음파 처리합니다.이전의 원심 분리에 따라 상체를 제거하십시오. 원심분리 단계를 마지막 시간으로 반복하여 메탄올에서 DMSO로의 완전한 용매 교환을 보장합니다. 폴리 PFPA 용액을 준비하려면 20 밀리리터 신자극유리병에 2밀리리터의 DMSO 2밀리리터에 폴리 PFPA 20밀리그램을 녹입니다.PEG 솔루션을 준비하려면 AMSO의 1밀리리터에 아민 기능화된 PEG를 용해하십시오. 이제 PEG 솔루션을 폴리 PFPA 솔루션으로 전송합니다. 격렬한 교반으로 실온에서 1 시간 동안 반응하십시오.DMSO에서 중단된 APTES 기능성 실리콘 이산화규꺼비 1밀리리터를 PEG 대체 폴리 PFPA 용액으로 옮킨다. 폴리 PFPA와 APTES 기능화 실리콘 이산화규물 구슬 사이의 이식이 격렬한 교반으로 실온에서 1시간 동안 진행되도록 합니다. 그런 다음 구슬을 원심분리로 5분간 10, 000G로 분리한 다음 상퍼를 제거합니다.비드 3밀리리터를 추가하여 씻어내고, 손으로 또는 몇 초의 초음파 처리로 섞는다. 구슬을 이전과 같이 원심 분리합니다. 그리고 DMSO 세척을 두 번 반복하기 전에 상체를 제거하십시오.3밀리리터의 3밀리리터로 구슬을 두 번 더 씻으시다. 그런 다음 손으로 또는 초음파 처리의 몇 초와 혼합. 구슬을 이전과 같이 원심분리하고 상체부를 제거합니다.마지막으로 밤새 진공 오븐에서 40도에서 구슬을 건조시. 폴리 PFPA 이식 실리콘 이산화규구5밀리그램을 1.5밀리리터 마이크로센심분리기 튜브에 추가합니다. PBS의 800 마이크로 리터를 추가하여 구슬을 씻고, 소용돌이에 의해 잘 섞습니다.1 분 동안 실온에서 10, 000 G에서 구슬을 원심 분리합니다. 상체를 제거하고 세워 단계를 세 번 반복합니다. 이제 신선한 PBS 350 마이크로리터, 0.1%PBST의 50마이크로리터, 항체의 6.67 마이크로그램을 추가합니다.섭씨 4도에서 회전에 약 20 시간 배양. 다음 날, 구슬과 원심분리기를 400G, 섭씨 4도에서 1분간 씻습니다. 그런 다음 상체를 제거하고 조심스럽게 400 개의 리시스 버퍼를 추가합니다.구슬을 5번 위아래로 피펫팅하여 부드럽게 재연합니다. 이 워시 단계를 세 번 반복하십시오. 마지막 세척 후, 가능한 한 많은 상체를 제거하십시오.텍스트 프로토콜에 설명된 대로 셀 및 리시스 버퍼를 준비합니다. 그런 다음 리시스 버퍼의 400 마이크로 리터로 세포 펠릿을 다시 일시 중단합니다. 초음파 초음파 처리기로 세포를 초음파 처리합니다.초음파 처리 후, 소용돌이가 간단히. 그런 다음 10 분 동안 섭씨 4도에서 20, 000 G에서 lysate을 원심 분리합니다. 새로운 1.5 밀리리터 원심분리기 튜브로 상체를 옮기.면역 침전을 수행하기 위해, 이전에 준비된 항체 고정 폴리 PFPA 이식 된 실리콘 이산화구슬로 세포 용액 300 마이크로 리터를 전송합니다. 새로운 마이크로센심분리기 튜브에 입력 샘플로서 세포 리세이트 30마이크로리터를 유지한다. 용액 구슬 혼합물을 섭씨 4도의 회전기에서 3시간 동안 배양합니다.인큐베이션에 따라 혼합물을 섭씨 400G에서 1분간 원심분리합니다. 상체를 제거하고 400 마이크로리터의 세척 버퍼를 조심스럽게 추가하십시오. 구슬을 약 5회 위아래로 피펫으로 부드럽게 재보선다.세 번의 세정 후에 가능한 한 많은 상체를 제거하십시오. 구슬과 입력 샘플에 2x SDS 로딩 염료30 마이크로리터를 추가합니다. 그런 다음 섭씨 95도에서 10 분 동안 가열합니다.가열 후, 서쪽 블로팅을 사용하여 샘플을 분석하거나 샘플을 영하 20도에서 저장합니다. 기능화된 실리카 구슬은 표면 조성물을 결정하기 위해 엑스레이 광전자 분광법 또는 XPS에 의해 검사됩니다. 대표적인 XPS 데이터는 여기에 표시됩니다.APTES 처리 후, 아민 군 영역 APTES와 관련된 질소 1s 피크가 검출된다. 폴리 PFPA 처리에 이어, 폴리머의 PFP 유닛과 관련된 불소 1s 피크가 검출된다. 단백질 키나아제 RNA 활성화, 또는 면역 침전을 통한 PKR 농축이 수행되고, 발성 단백질 샘플은 서양 블로팅을 사용하여 분석된다.예상대로, 항체가 없는 비구슬, 또는 비특이적 항체 혼합은 PKR 회수를 나타내지 않는다. 안티 PKR로 인큐베이션된 구슬은 PKR 밴드의 존재와 GAPDH 밴드의 부재로 표시된 대로 PKR을 성공적으로 풍부하게 할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 시스템을 비교할 때 IP 실험과 후속 서부 블로팅 분석을 동시에 수행해야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.개발 후, 이 기술은 상이한 생체 분자 또는 물질 기판의 고정화를 위해 사용될 수 있다. 또한 이 메서드는 각 응용 프로그램의 요구에 맞게 조정할 수 있는 표면 속성만 튜닝하는 추가이 있습니다.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparation of Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

기능화의 합성 및 특성 금속 - 유기 프레임 워크

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

연구

화학

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오목 다공성 PDMS 비즈의 마이크로 버블 제작

Microbubble fabrication (by use of a fine emulsion) provides a means of increasing the surface-area-to-volume (SAV) ratio of polymer materials, which is ...

Immobilization of Multi-biocatalysts in Alginate Beads for Cofactor Regeneration and Improved Reusability

공동 인자 재생 및 개선 재사용에 대한 알긴산 구슬의 다중 생체 촉매의 고정화

We have recently developed a simple, reusable and coupled whole-cell biocatalytic system with the capability of cofactor regeneration and biocatalyst ...

Preparation of a Corannulene-functionalized Hexahelicene by Copper(I)-catalyzed Alkyne-azide Cycloaddition of Nonplanar Polyaromatic Units

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구리 (I)에 의해 Corannulene 기능화 Hexahelicene의 제조 비평 아로마틱 유닛 알킨 지드의 고리 화를 촉매 반응

The main purpose of this video is to show 6 reaction steps of a convergent synthesis and prepare a complex molecule containing up to three nonplanar ...

The Effect of Interfacial Chemical Bonding in TiO2-SiO2 Composites on Their Photocatalytic NOx Abatement Performance

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TiO에서의 계면 화학 결합의 효과<sub&gt; 2</sub&gt; -SiO<sub&gt; 2</sub&gt; 광촉매 NOx 저감 성능 복합 재료

The chemical bonding of particulate photocatalysts to supporting material surfaces is of great importance in engineering more efficient and practical ...

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Efficient Synthesis of All-Carbon Quaternary Centers via the Conjugate Addition of Functionalized Monoorganozinc Bromides

관 능 적 모노 아연 브로 미 데스의 결합체 첨가를 통한 전 탄소 4 급 센터의 효율적인 합성

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Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end ...

Porphyrin-Modified Beads in Flow Cytometry

Porphyrin-Modified Beads for Use as Compensation Controls in Flow Cytometry

Porphyrin-Modified Beads for Use as Compensation Controls in Flow Cytometry (Video) | JoVE 

유세포 분석에서 보상 대조군으로 사용하기 위한 포르피린 변형 비드

Flow cytometry can rapidly characterize and quantify diverse cell populations based on fluorescence measurements. The cells are first stained with one or ...