Name: preparation of rhythmically-active in vitro neonatal rodent brainstem-spinal cord and thin slice
Uploaded: 2019-03-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice at JoVE.com

S.B.P является получателем Лома Линда университета летом Бакалавриат стипендии для проведения исследований.

Следующий протокол принят и утвержден институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) Лома Линда университета. NIH руководящие принципы этического обращения животных идут в всех животных эксперименты, проведенные в лаборатории. Все этические стандарты были поддержаны ли?...

<ol>
	<li>Hilaire, G., Duron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+the+Mammalian+Respiratory+System.">Maturation of the Mammalian Respiratory System.</a> Physiological Reviews. 79, 325-360 (1999).</li><li>Pinkerton, K. E., Joad, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mammalian+Respiratory+System+and+Critical+Windows+of+Exposure+for+Children's+Health.">The Mammalian Respiratory System and Critical Windows of Exposure for Children's Health.</a> Environmental Health Perspectives. 108, 6 (2000).</li><li>Smith, J. C., Ellenberger, H. H., Ballanyi, K., Richter, D. W., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-B&#246;tzinger+complex:+a+brainstem+region+that+may+generate+respiratory+rhythm+in+mammals.">Pre-B&#246;tzinger complex: a brainstem region that may generate respiratory rhythm in mammals.</a> Science. 254, 726-729 (1991).</li><li>Smith, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+rhythm+generation+in+neonatal+and+adult+mammals:+the+hybrid+pacemaker-network+model.">Respiratory rhythm generation in neonatal and adult mammals: the hybrid pacemaker-network model.</a> Respiration Physiology. 122, 131-147 (2000).</li><li>Ramirez, J. M., Schwarzacher, S. W., Pierrefiche, O., Olivera, B. M., Richter, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+lesioning+of+the+cat+pre-B&#246;tzinger+complex+in+vivo+eliminates+breathing+but+not+gasping.">Selective lesioning of the cat pre-B&#246;tzinger complex in vivo eliminates breathing but not gasping.</a> The Journal of Physiology. 507, 895-907 (2004).</li><li>Butera, R. J., Rinzel, J., Smith, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+Respiratory+Rhythm+Generation+in+the+pre-B&#246;tzinger+Complex:+II.+Populations+of+Coupled+Pacemaker+Neurons.">Models of Respiratory Rhythm Generation in the pre-B&#246;tzinger Complex: II. Populations of Coupled Pacemaker Neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 82, 398-415 (1999).</li><li>Suzue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+rhythm+generation+in+the+in+vitro+brain+stem-spinal+cord+preparation+of+the+neonatal+rat.">Respiratory rhythm generation in the in vitro brain stem-spinal cord preparation of the neonatal rat.</a> Journal of Physiology (London). 354, 173-183 (1984).</li><li>Feldman, J. L., Del Negro, C. A., Gray, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+rhythm+of+breathing:+so+near,+yet+so+far.">Understanding the rhythm of breathing: so near, yet so far.</a> Annual Review of Physiology. 75, 423-452 (2013).</li><li>Rekling, J. C., Shao, X. M., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+Coupling+and+Excitatory+Synaptic+Transmission+between+Rhythmogenic+Respiratory+Neurons+in+the+PreB&#246;tzinger+Complex.">Electrical Coupling and Excitatory Synaptic Transmission between Rhythmogenic Respiratory Neurons in the PreB&#246;tzinger Complex.</a> Journal of Neuroscience. 20, 113 (2000).</li><li>Rousseau, J. -. P., Caravagna, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiology+on+Isolated+Brainstem-spinal+Cord+Preparations+from+Newborn+Rodents+Allows+Neural+Respiratory+Network+Output+Recording.">Electrophysiology on Isolated Brainstem-spinal Cord Preparations from Newborn Rodents Allows Neural Respiratory Network Output Recording.</a> Journal of Visualized Experiments. , e53071 (2015).</li><li>Segev, A., Garcia-Oscos, F., Kourrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+Patch-clamp+Recordings+in+Brain+Slices.">Whole-cell Patch-clamp Recordings in Brain Slices.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54024 (2016).</li><li>Koizumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Imaging,+Spatial+Reconstruction,+and+Biophysical+Analysis+of+a+Respiratory+Motor+Circuit+Isolated+In+Vitro.">Functional Imaging, Spatial Reconstruction, and Biophysical Analysis of a Respiratory Motor Circuit Isolated In Vitro.</a> Journal of Neuroscience. 28, 2353-2365 (2008).</li><li>Danneman, P., Mandrell, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+five+agents/methods+for+anesthesia+of+neonatal+rats.">Evaluation of five agents/methods for anesthesia of neonatal rats.</a> Laboratory Animal Science. 47, 386-395 (1997).</li><li>Umezawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orexin-B+antagonized+respiratory+depression+induced+by+sevoflurane,+propofol,+and+remifentanil+in+isolated+brainstem-spinal+cords+of+neonatal+rats.">Orexin-B antagonized respiratory depression induced by sevoflurane, propofol, and remifentanil in isolated brainstem-spinal cords of neonatal rats.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. 205, 61-65 (2015).</li><li>Bierman, A. M., Tankersley, C. G., Wilson, C. G., Chavez-Valdez, R., Gauda, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+hyperoxic+exposure+reconfigures+the+central+respiratory+network+contributing+to+intolerance+to+anoxia+in+newborn+rat+pups.">Perinatal hyperoxic exposure reconfigures the central respiratory network contributing to intolerance to anoxia in newborn rat pups.</a> Journal of Applied Physiology. 116, 47-53 (2014).</li><li>Formenti, A., Zocchi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Error+signals+as+powerful+stimuli+for+the+operant+conditioning-like+process+of+the+fictive+respiratory+output+in+a+brainstem-spinal+cord+preparation+from+rats.">Error signals as powerful stimuli for the operant conditioning-like process of the fictive respiratory output in a brainstem-spinal cord preparation from rats.</a> Behavioural Brain Research. 272, 8-15 (2014).</li><li>Negro, C. A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+and+Calcium+Current-Mediated+Pacemaker+Neurons+and+Respiratory+Rhythm+Generation.">Sodium and Calcium Current-Mediated Pacemaker Neurons and Respiratory Rhythm Generation.</a> Journal of Neuroscience. 25, 446-453 (2005).</li><li>Johnson, S. M., Koshiya, N., Smith, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+the+Kernel+for+Respiratory+Rhythm+Generation+in+a+Novel+Preparation:+The+Pre-B&#246;tzinger+Complex+"Island".">Isolation of the Kernel for Respiratory Rhythm Generation in a Novel Preparation: The Pre-B&#246;tzinger Complex "Island".</a> Journal of Neurophysiology. 85, 1772-1776 (2001).</li><li>Funk, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+respiratory+rhythm+generating+networks+in+neonatal+mice+lacking+NMDAR1+gene.">Functional respiratory rhythm generating networks in neonatal mice lacking NMDAR1 gene.</a> Journal of Neurophysiology. 78, 1414-1420 (1997).</li><li>Campos, M., Bravo, E., Eugen&#237;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+dysfunctions+induced+by+prenatal+nicotine+exposure.">Respiratory dysfunctions induced by prenatal nicotine exposure.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 36, 1205-1217 (2009).</li><li>Ballanyi, K., Volker, A., Richter, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxia+induced+functional+inactivation+of+neonatal+respiratory+neurones+in+vitro.">Anoxia induced functional inactivation of neonatal respiratory neurones in vitro.</a> NeuroReport. 6, 165-168 (1994).</li><li>Ruangkittisakul, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Sensitivity+to+Neuromodulator-Activated+Signaling+Pathways+at+Physiological+[K+]+of+Confocally+Imaged+Respiratory+Center+Neurons+in+On-Line-Calibrated+Newborn+Rat+Brainstem+Slices.">High Sensitivity to Neuromodulator-Activated Signaling Pathways at Physiological [K+] of Confocally Imaged Respiratory Center Neurons in On-Line-Calibrated Newborn Rat Brainstem Slices.</a> Journal of Neuroscience. 26, 11870-11880 (2006).</li><li>Rybak, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+ponto-medullary+respiratory+network.">Modeling the ponto-medullary respiratory network.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. 143, 307-319 (2004).</li><li>Ruangkittisakul, A., Kottick, A., Picardo, M. C. D., Ballanyi, K., Del Negro, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+pre-B&#246;tzinger+complex+inspiratory+center+in+calibrated+'sandwich'+slices+from+newborn+mice+with+fluorescent+Dbx1+interneurons.">Identification of the pre-B&#246;tzinger complex inspiratory center in calibrated 'sandwich' slices from newborn mice with fluorescent Dbx1 interneurons.</a> Physiological Reports. 2, (2014).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).</li><li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2008).</li></ol>

Адаптация протокола представлены здесь в en блока или ломтик рабочего процесса является выгодным для лабораторий и исследования, которые хотели бы использовать либо комплектно ствола мозга-спинного мозга и/или тонкий ломтик подготовка к записи электрофизиологии. Метод вскрытия и ломт...

Респираторные нейронной сети мозга обеспечивает плодородные домен для понимания общие характеристики художественной нейронных сетей. В частности интерес является в развитие новорожденных грызунов дыхание и понять, как развивается ритм дыхания. Это может быть сделано с использованием многоуровневого подхода, в том числе в vivo весь животных плетизмографии экстракорпорального комплектно нерва записи и in vitro фрагмент записи, которые содержат генератор ритм дыхания. Редукционистской в vitro en блока и фрагмент записи являются выгодным методом для использования при опрашивания механизмы за дыхательной ритмогенеза и нейронные цепи в регионе спинного мозга развивающихся грызунов. Развивающихся дыхательная система включает в себя около 40 типов клеток, характеризуется стрельбы шаблон, в том числе из Центральной дыхательных1,2. Центральный дыхательных сеть включает в себя группу ритмично активных нейронов, расположенный в ростральной вентролатеральные продолговатого1,3. Млекопитающих дыхательных ритмогенеза генерируется из autorhythmic межнейронного сети называли preBötzinger комплекс (КПБ), которая была экспериментально локализован через срез и en блока подготовки новорожденных млекопитающих спинного мозга шнуры3,4,5,6,,78. Этот регион служит аналогичную функцию в синоатриальном узле (SA) в самом сердце и создает систему вдоха сроков для привода дыхания. От КПБ вдоха ритм осуществляется в других регионах мозга (включая ядро подъязычного двигатель) и позвоночника мотор бассейнов (например, диафрагмальный двигательных нейронов, которые привод диафрагмы)9.
Ритмической активности может быть получен с помощью спинного мозга en блока препаратов или фрагментов из различных клеточных популяций, в том числе С3-С5 нервных корешков, XII нервных корешков, ядро подъязычного двигатель (XII MN), подъязычного премоторной нейронов (XII ПМН), и КПБ3,10,,1112. Хотя эти методы сбора данных успешно через несколько лабораторий, многие из протоколов не представлены таким образом, чтобы полностью воспроизводимый для новых исследователей, входящие в область. Получения жизнеспособных и ритмично активных en блока и ломтик препаратов требует острого внимания к деталям через все шаги диссекции и ломтик резки протокола. Предыдущих протоколов подробно описывают различные процедуры записи и электрофизиологии, но не хватает деталей в наиболее важной частью получения подготовки жизнеспособных ткани: выполнение процедуры вскрытия и ломтик спинного мозга.
Эффективно получение ритмично активных и жизнеспособной en блока или ломтик подготовка спинного мозга электрофизиологии записей требует все действия правильно, тщательно и быстро (как правило, вся процедура связанных здесь может быть выступал в приблизительно 30 мин.) Критические точки протокола электрофизиологии спинного мозга, которые не были ранее хорошо описаны относятся рассечение нервных корешков и нарезки процедуры на vibratome. Этот протокол является первым поэтапного визуально общаться рассечение спинного мозга для новых исследователей и экспертов в области. Этот протокол также тщательно объясняет хирургические методы, достопримечательности и другие процедуры для оказания помощи будущих исследователей в стандартизации ломтиками и комплектно препараты содержат точные схемы, желательно в каждом эксперименте. Процедуры, представленные здесь могут использоваться в крысы и мыши новорожденных щенков.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1159px;" width="1158">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">NaCl</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:320px;">S271-500</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaHCO3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP328-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaH2PO4 &#8226;H2O</td>
			<td>Sigma Aldrch</td>
			<td>S9638-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2&#8226;2H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7774-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cold-Light source Halogen lamp 150W</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>H2L50-AY</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vibratome 1000 Plus</td>
			<td>Vibratome</td>
			<td>W3 69-0353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnetic Base</td>
			<td>Kanetic</td>
			<td>MB-B-DG6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane, USP</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>NDC 14043-704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sword Classic Double Edge Blades</td>
			<td>Wilkinson</td>
			<td>97573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Histoclear</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont #5 Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont #5/45 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel Blades #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel Handel #3</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spring Scissors Straight&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Narrow Pattern Forcep Serrated/straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Castroviejo Micro Dissecting Spring Scissors; Straight</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors 3&#34; Curved</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 0</td>
			<td>Fine Science Tools/8840604</td>
			<td>26000-35&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 0, SS</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 00</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26000-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 00, SS</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 000</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26000-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 000, SS</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minutien pins, 0.10 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minutien pins, 0.15 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minutien pins, 0.2 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fisher Tissue prep Parafin&#160;</td>
			<td>fisher</td>
			<td>T56-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Graphite&#160;</td>
			<td>fisher&#160;</td>
			<td>G67-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delrin Plastic&#160;</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>3HMT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">18 Gauge Hypodermic Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of rhythmically-active in vitro neonatal rodent brainstem-spinal cord and thin slice

У млекопитающих вдоха ритм генерируется из нейронной сети в регионе мозга называется preBötzinger комплекс (КПБ), которая производит сигнал вождения Ритмичное сокращение мышц вдоха. Ритмические нейронной активности в КПБ и в других нейронов бассейны диск мускулатура дыхания могут быть изучены с использованием различных подходов, включая комплектно нерва и поперечный срез записей. Однако опубликованных ранее методы не описал подробно процесс вскрытия спинного мозга на основе прозрачной и воспроизводимость для будущих исследований. Здесь мы представляем всеобъемлющий обзор метод, используемый для герметизации нарезать ломтиками ритмично активные ствола мозга, содержащий необходимые и достаточные нейрональных схемотехника для генерации и передачи вдоха диск. Эта работа опирается на предыдущие протоколы электрофизиологии спинного мозга для повышения вероятности надежно получения жизнеспособных и ритмично активные фрагменты записи нейронов выходного от КПБ, подъязычного премоторной нейронов (XII ПМН), и подъязычный двигательных нейронов (XII MN). Работы, представленные расширяет предыдущий опубликованные методы, предоставляя подробный, шаг за шагом иллюстрации рассечения, от всего крыса щенка, в пробирке фрагмент, содержащий XII корешков.

Представленные здесь метод позволяет исследователь заинтересован в получении ритмично активные срезы мозга можно воспроизвести и надежно отрезать кусочек жизнеспособной, надежный, которые позволят запись фиктивных мощность двигателя для многих часов. Все элементо...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice at JoVE.com

Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice

Этот протокол как визуально общается спинного мозга подготовки и разъясняет подготовку ствола мозга поперечных срезов всеобъемлющим образом шаг за шагом. Он был разработан для увеличения воспроизводимость и повысить вероятность получения жизнеспособных, длительное, ритмично активные фрагменты для записи нейронной вывода из дыхательных регионов мозга.

Подготовка ритмично активные в Vitro неонатальной грызунов ствола мозга-спинного мозга и тонкий ломтик

Mammalian inspiratory rhythm is generated from a neuronal network in a region of the medulla called the preB&#246;tzinger complex (pBC), which produces a ...

Этот метод облегчает воспроизводимое вскрытие и нарезку стволов мозга грызунов для захвата анализа Мириан Медуллярной дыхательной сети. Этот метод предлагает большую экспериментальную гибкость, что позволяет подготовить либо в пробирке разблокировать или срез подготовки к записи. Этот метод может быть использован для электрофизиологических экспериментов для изучения нейронной цепи управления, которая генерирует дыхательные ритмы и для понимания патологии и дисрегуляции дыхания у генетически модифицированных грызунов.После вскрытия невраксиса, быстро перенесите изолированный ствол животного в аэрированную камеру вскрытия под микроскопом вскрытия и поместите спинную сторону ткани вверх, с ростральным концом, обращенным к передней части камеры. Прикрепите ткани на плечах и наиболее caudal конце спинного мозга и сделать мидзагиттальный разрез через череп после теменной шва, чтобы избежать повреждения коры и ствола мозга, лежащего в основе черепа. Начиная с сагиттального шва и работая с боковой стороны, отрежь затылочной швы черепа, чтобы создать лоскуты кости, которые могут быть отражены и закреплены на якорь и стабилизировать ростральной части черепа.После отражения обоих заслонки черепа, акциз оставшуюся часть коры головного мозга, в результате чего хвостовой части мозжечка относительно нетронутыми для выполнения спинной ламинэктомии. Используйте микро пружинные ножницы и типсы для удаления мускулатуры, окружающей череп и позвоночник. Удалить ткани вдоль спинной стороны грудной клетки, оставляя ребра нетронутыми и тщательно отрезать боковые процессы позвонков ламины.После отрезания любой ткани, перенавешив поны и медуллу, вермида, мозжечок, понс и начало спинного мозга, будут хорошо видны. Для выполнения брюшной ламинэктомии, место ткани спинной стороне вниз и контактный на грудной клетке и наиболее caudal конце позвоночника. Используйте заслонки черепа, чтобы приколоть ростральной стороне ткани и удалить брюшной половины грудной клетки, в том числе грудины и всех органов брюшной полости.Рассекаете мягкую ткань, прикрепленную к грудной клетке, чтобы разоблачить ребра и спинной мозг и удалить язык, пищевод, трахею, гортань и все другие мягкие ткани и мускулатуру, перекрывая основание черепа и позвоночника. Для того, чтобы определить жесткий поддон, вскрыть ткани над этой прямоугольной пластины кости у основания черепа, который включает в себя V-образный отступ. Затем вырезать вдоль средней линии поддона, тщательно поднимая ткани вверх и выполнить поперечный разрез, чтобы удалить его.Чтобы начать вентрал ламинэктомию, удалите ламина, подвергая брюшной поверхности ствола мозга и спинного мозга от первого шейного позвонка примерно грудного позвонка семь и фрагмент от пяти до 10 миллиметров по обе стороны позвоночника на ламина. Когда спинной мозг был выставлен, фрагмент корней примерно от 20 до 25 миллиметров на двусторонней основе, вдоль позвоночника примерно T7 и осторожно поднимите ростральный край C1, C2 и C3 с крючковатыми или изогнутыми силами, чтобы позволить snipping под костью для удаления трех позвонков. Когда желаемая длина спинного мозга была выделена из позвоночного столба, сделать поперечный разрез, чтобы удалить ткани спинного мозга.После удаления дуры, поместите ствол мозга в центре парафиновой платформы на пластиковый режущей блок и используйте тонкие булавки насекомых, обрезанные до не более одного сантиметра в длину, чтобы закрепить хвостовой конец ствола мозга через дистальный спинной мозг. Затем выровнять парафин покрыты резки блока с закрепленным стволом мозга в держатель блока Vibratone, так что лезвие будет сократить перпендикулярно ростральной лицо ствола мозга. Затем сделайте начальный срез, чтобы удалить от 200 до 300 микрометров неравномерной посторонних тканей на ростральном самом конце ткани, внося небольшие коррективы по мере необходимости для обеспечения линейности PARP и небольших разрезов для удаления любой неравномерной ткани.Корени глоссофаринги станут видны на боковом краю ствола мозга, вырежьте 300-500 микрометровый кусочек ствола мозга из этих ростральных нейроанатотических маркеров, чтобы захватить комплекс до Ботцингера и связанные с ним схемы передачи. Все этапы процедуры нарезки имеют решающее значение для создания воспроизводимого, жизнеспособного среза, со всеми необходимыми нейрональными схемами в правильной ориентации для получения надежного ритма. Все минимально необходимые элементы нейронной цепи для генерации и передачи иваторного ритма могут быть захвачены тонким ломтиком с помощью этого метода.В том числе доботцингерный комплекс, предмоторные нейроны, проецирующиеся на гипоглоссальные моторные нейроны и гипоглоссальные нервные корешки. До-Ботцингер комплекс, гипоглоссальный или 12-й черепных нервных корней и корню нерва C4 могут быть использованы для испираторной записи. Ключевым аспектом этой процедуры является тщательная изоляция корней и подтверждение того, что ствол мозга не поврежден перед резки окончательного ломтика.После этой процедуры, электрофизиологические записи могут быть сделаны с использованием методов зажима патч, дополнительные клеточные записи или всасывающие электроды для записи электрической активности, производимой сетью. Ранее опубликованные протоколы предоставили мало шаг за шагом подробно, что затрудняет для новых исследователей, чтобы использовать этот метод, не путешествуя в другую лабораторию и проводить время с опытный исследователь.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Cell Recording from an Organotypic Slice Preparation of Neocortex

Всего Запись сотовый от органотипической Подготовка Кусочек Неокортекс

We have been studying the expression and functional roles of voltage-gated potassium channels in pyramidal neurons from rat neocortex.  Because of the ...

Imaging Pheromone Sensing in a Mouse Vomeronasal Acute Tissue Slice Preparation

Изображениями феромонов зондирования в мышь вомероназального острого Подготовка фрагментов тканей

Peter Karlson and Martin L&uuml;scher used the term pheromone for the first time in 19591 to describe chemicals used for intra-species communication. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Куриных эмбрионов спинного мозга Slice Культура протокола

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Nucleofection of Rodent Neuroblasts to Study Neuroblast Migration In vitro

Nucleofection of Rodent Neuroblasts to Study Neuroblast Migration In vitro

Nucleofection из грызунов нейробласты по изучению нейробласта миграции<em&gt; В пробирке</em

The subventricular zone (SVZ) located in the lateral wall of the lateral ventricles plays a fundamental role in adult neurogenesis. In this restricted ...

Electrophysiology on Isolated Brainstem-spinal Cord Preparations from Newborn Rodents Allows Neural Respiratory Network Output Recording

Электрофизиологии на изолированные ствола мозга-спинного мозга Препараты из новорожденных Грызуны Позволяет нейронной сети Output дыхания запись

While it is well known that the central respiratory drive is located in the brainstem, several aspects of its basic function, development, and response to ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Изоляция и культура нейронов спинного мозга от неонатальных мышей

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Подготовка и иммуноокрашивания Myelinating Organotypic мозжечка ломтик культур

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

In Vitro Клин Фрагмент Подготовка для имитации In Vivo Нейрональной цепи подключения

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...

Uptake of Fluorescent Labeled Small Extracellular Vesicles In Vitro and in Spinal Cord

Uptake of Fluorescent Labeled Small Extracellular Vesicles In Vitro and in Spinal Cord

Поглощение флуоресцентных меченых малых внеклеточных везикул in vitro и в спинном мозге

Small extracellular vesicles (sEVs) are 50-150 nm vesicles secreted by all cells and present in bodily fluids. sEVs transfer biomolecules such as RNA, ...

Whole Neonatal Cochlear Explants as an In vitro Model

Whole Neonatal Cochlear Explants as an In vitro Model

Цельные неонатальные кохлеарные экспланты как модель in vitro

Untreated hearing loss imposes significant costs on the global healthcare system and impairs individuals' quality of life. Sensorineural hearing loss is ...