Name: probing nicotinic acetylcholine receptor function in mouse brain slices via laser flash photolysis of photoactivatable nicotine
Uploaded: 2019-01-25T13:00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Probing Nicotinic Acetylcholine Receptor Function in Mouse Brain Slices via Laser Flash Photolysis of Photoactivatable Nicotine at JoVE.com

Laboratuvar üyeleri aşağıdaki Kuzeybatı asıl araştırmacılar, yazarlar teşekkür: Ryan Drenan, ö. James Surmeier, Yevgenia Kozorovitskiy ve ANIS müteahhit. Bu eser bize ulusal kurumları sağlık (NIH) (hibe DA035942 ve DA040626 R.M.D. için), ilaç Vakfı (arkadaşlık M.C.A. için) ve HHMI tarafından desteklenmiştir.

<ol>
	<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+tone+in+ventral+tegmental+area:+Functional+organization+and+behavioral+implications.">Cholinergic tone in ventral tegmental area: Functional organization and behavioral implications.</a> Neurochemistry International. 114, 127-133 (2018).</li><li>Sarter, M., Parikh, V., Howe, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phasic+acetylcholine+release+and+the+volume+transmission+hypothesis:+time+to+move+on.">Phasic acetylcholine release and the volume transmission hypothesis: time to move on.</a> Nature Reviews Neuroscience. 10 (5), 383-390 (2009).</li><li>Coyle, J. T., Price, D. L., DeLong, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+disease:+a+disorder+of+cortical+cholinergic+innervation.">Alzheimer's disease: a disorder of cortical cholinergic innervation.</a> Science. 219 (4589), 1184-1190 (1983).</li><li>Katz, B., Thesleff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+the+desensitization+produced+by+acetylcholine+at+the+motor+end-plate.">A study of the desensitization produced by acetylcholine at the motor end-plate.</a> Journal of Physiology. 138 (1), 63-80 (1957).</li><li>Banala, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+drugs+for+nicotinic+optopharmacology.">Photoactivatable drugs for nicotinic optopharmacology.</a> Nature Methods. 15 (5), 347-350 (2018).</li><li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotinic+Cholinergic+Receptors+in+VTA+Glutamate+Neurons+Modulate+Excitatory+Transmission.">Nicotinic Cholinergic Receptors in VTA Glutamate Neurons Modulate Excitatory Transmission.</a> Cell Reports. 23 (8), 2236-2244 (2018).</li><li>Engle, S. E., Shih, P. Y., McIntosh, J. M., Drenan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;4&#945;6&#946;2*+nicotinic+acetylcholine+receptor+activation+on+ventral+tegmental+area+dopamine+neurons+is+sufficient+to+stimulate+a+depolarizing+conductance+and+enhance+surface+AMPA+receptor+function.">&#945;4&#945;6&#946;2* nicotinic acetylcholine receptor activation on ventral tegmental area dopamine neurons is sufficient to stimulate a depolarizing conductance and enhance surface AMPA receptor function.</a> Molecular Pharmacology. 84 (3), 393-406 (2013).</li><li>Engle, S. E., Broderick, H. J., Drenan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+application+of+drugs+to+study+nicotinic+acetylcholine+receptor+function+in+mouse+brain+slices.">Local application of drugs to study nicotinic acetylcholine receptor function in mouse brain slices.</a> Journal of Visualized Experiments. (68), (2012).</li><li>Ren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Habenula+&amp;#34;cholinergic&amp;#34;+neurons+co-release+glutamate+and+acetylcholine+and+activate+postsynaptic+neurons+via+distinct+transmission+modes.">Habenula &amp;#34;cholinergic&amp;#34; neurons co-release glutamate and acetylcholine and activate postsynaptic neurons via distinct transmission modes.</a> Neuron. 69 (3), 445-452 (2011).</li><li>Koppensteiner, P., Melani, R., Ninan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Cooperative+Mechanism+Involving+Ca(2+)-Permeable+AMPA+Receptors+and+Retrograde+Activation+of+GABAB+Receptors+in+Interpeduncular+Nucleus+Plasticity.">A Cooperative Mechanism Involving Ca(2+)-Permeable AMPA Receptors and Retrograde Activation of GABAB Receptors in Interpeduncular Nucleus Plasticity.</a> Cell Reports. 20 (5), 1111-1122 (2017).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+Excitation+via+GABAB+Receptors+in+Habenula+Cholinergic+Neurons+Regulates+Fear+Memory+Expression.">Presynaptic Excitation via GABAB Receptors in Habenula Cholinergic Neurons Regulates Fear Memory Expression.</a> Cell. 166 (3), 716-728 (2016).</li><li>Chen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Baseline+and+Nicotine-Mediated+Behavioral+and+Cholinergic+Profiles+in+ChAT-Cre+Mouse+Lines.">Altered Baseline and Nicotine-Mediated Behavioral and Cholinergic Profiles in ChAT-Cre Mouse Lines.</a> The Journal of Neuroscience. 38 (9), 2177-2188 (2018).</li><li>Nagy, P. M., Aubert, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+vesicular+acetylcholine+transporter+increased+acetylcholine+release+in+the+hippocampus.">Overexpression of the vesicular acetylcholine transporter increased acetylcholine release in the hippocampus.</a> Neuroscience. 218, 1-11 (2012).</li><li>Ting, J. T., Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombineering+strategies+for+developing+next+generation+BAC+transgenic+tools+for+optogenetics+and+beyond.">Recombineering strategies for developing next generation BAC transgenic tools for optogenetics and beyond.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 111 (2014).</li><li>Crittenden, J. R., Lacey, C. J., Lee, T., Bowden, H. A., Graybiel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+drug-induced+repetitive+behaviors+and+striatal+overexpression+of+VAChT+in+ChAT-ChR2-EYFP+BAC+transgenic+mice.">Severe drug-induced repetitive behaviors and striatal overexpression of VAChT in ChAT-ChR2-EYFP BAC transgenic mice.</a> Frontiers in Neural Circuits. 8, 57 (2014).</li><li>Kolisnyk, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ChAT-ChR2-EYFP+mice+have+enhanced+motor+endurance+but+show+deficits+in+attention+and+several+additional+cognitive+domains.">ChAT-ChR2-EYFP mice have enhanced motor endurance but show deficits in attention and several additional cognitive domains.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (25), 10427-10438 (2013).</li><li>Nagy, P. M., Aubert, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+vesicular+acetylcholine+transporter+enhances+dendritic+complexity+of+adult-born+hippocampal+neurons+and+improves+acquisition+of+spatial+memory+during+aging.">Overexpression of the vesicular acetylcholine transporter enhances dendritic complexity of adult-born hippocampal neurons and improves acquisition of spatial memory during aging.</a> Neurobiology of Aging. 36 (5), 1881-1889 (2015).</li><li>Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+scanning+photochemical+microscopy:+mapping+ligand-gated+ion+channel+distributions.">Two-photon scanning photochemical microscopy: mapping ligand-gated ion channel distributions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (14), 6629-6633 (1994).</li><li>Khiroug, L., Giniatullin, R., Klein, R. C., Fayuk, D., Yakel, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mapping+and+Ca2++regulation+of+nicotinic+acetylcholine+receptor+channels+in+rat+hippocampal+CA1+neurons.">Functional mapping and Ca2+ regulation of nicotinic acetylcholine receptor channels in rat hippocampal CA1 neurons.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (27), 9024-9031 (2003).</li><li>Filevich, O., Salierno, M., Etchenique, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+caged+nicotine+with+nanosecond+range+kinetics+and+visible+light+sensitivity.">A caged nicotine with nanosecond range kinetics and visible light sensitivity.</a> Journal of Inorganic Biochemistry. 104 (12), 1248-1251 (2010).</li><li>Tochitsky, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optochemical+control+of+genetically+engineered+neuronal+nicotinic+acetylcholine+receptors.">Optochemical control of genetically engineered neuronal nicotinic acetylcholine receptors.</a> Nature Chemistry. 4 (2), 105-111 (2012).</li><li>Wokosin, D. L., Squirrell, J. M., Eliceiri, K. W., White, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+workstation+with+concurrent,+independent+multiphoton+imaging+and+experimental+laser+microbeam+capabilities.">Optical workstation with concurrent, independent multiphoton imaging and experimental laser microbeam capabilities.</a> Review of Scientific Instruments. 74 (1), 193-201 (2003).</li><li>Plotkin, J. L., Day, M., Surmeier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptically+driven+state+transitions+in+distal+dendrites+of+striatal+spiny+neurons.">Synaptically driven state transitions in distal dendrites of striatal spiny neurons.</a> Nature Neuroscience. 14 (7), 881-888 (2011).</li><li>Galtieri, D. J., Estep, C. M., Wokosin, D. L., Traynelis, S., Surmeier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pedunculopontine+glutamatergic+neurons+control+spike+patterning+in+substantia+nigra+dopaminergic+neurons.">Pedunculopontine glutamatergic neurons control spike patterning in substantia nigra dopaminergic neurons.</a> Elife. 6, (2017).</li><li>Yasuda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+calcium+concentration+dynamics+in+small+neuronal+compartments.">Imaging calcium concentration dynamics in small neuronal compartments.</a> Science STKE. (219), pl5 (2004).</li><li>Inoue, S., Spring, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Video microscopy: The fundamentals. , 163-186 (1997).</li><li>Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+magic:+multiphoton+microscopy+in+the+biosciences.">Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences.</a> Nature Biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).</li><li>Maravall, M., Mainen, Z. F., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+intracellular+calcium+concentrations+and+buffering+without+wavelength+ratioing.">Estimating intracellular calcium concentrations and buffering without wavelength ratioing.</a> Biophysical Journal. 78 (5), 2655-2667 (2000).</li><li>Wathey, J. C., Nass, M. M., Lester, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numerical+reconstruction+of+the+quantal+event+at+nicotinic+synapses.">Numerical reconstruction of the quantal event at nicotinic synapses.</a> Biophysical Journal. 27 (1), 145-164 (1979).</li><li>Shih, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+and+function+of+nicotinic+acetylcholine+receptors+in+subdivisions+of+medial+habenula.">Differential expression and function of nicotinic acetylcholine receptors in subdivisions of medial habenula.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (29), 9789-9802 (2014).</li><li>Verhoog, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Layer-specific+cholinergic+control+of+human+and+mouse+cortical+synaptic+plasticity.">Layer-specific cholinergic control of human and mouse cortical synaptic plasticity.</a> Nature Communications. 7, 12826 (2016).</li><li>Koukouli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotine+reverses+hypofrontality+in+animal+models+of+addiction+and+schizophrenia.">Nicotine reverses hypofrontality in animal models of addiction and schizophrenia.</a> Nature Medicine. 23 (3), 347-354 (2017).</li><li>Xiao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+nicotine+selectively+enhances+&#945;4&#946;2*+nicotinic+acetylcholine+receptors+in+the+nigrostriatal+dopamine+pathway.">Chronic nicotine selectively enhances &#945;4&#946;2* nicotinic acetylcholine receptors in the nigrostriatal dopamine pathway.</a> The Journal of Neuroscience. 29 (40), 12428-12439 (2009).</li><li>Peng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Editing+Vectors+for+Studying+Nicotinic+Acetylcholine+Receptors+in+Cholinergic+Transmission.">Gene Editing Vectors for Studying Nicotinic Acetylcholine Receptors in Cholinergic Transmission.</a> European Journal of Neuroscience. , (2018).</li></ol>

D.L.W. Bruker Nano floresans mikroskobu ücretli danışman olarak hizmet vermektedir.

PA-NIC uygulama/Teslimat yöntemi bu yerelleştirilmiş fotoğraf-stimülasyon tekniği en kritik adımda seçimdir. İki yöntem, banyo uygulama ve yerel perfüzyon, her teklif farklı avantajlar ve sınırlamalar. Seçim ilgi hücre tipi nAChR fonksiyonel ifade kademede tarafından büyük ölçüde etkilenir. Sık sık banyo uygulama verileri yorumlama kolaylaştırmak kaydedilen hücre çevreleyen bir üniforma sonda konsantrasyon için izin verdiği fonksiyonel ifade düzeyleri yüksek, ne zaman banyo uygulamayı kullanmak için tercih edilir. Banyo uygulama aynı zamanda ikinci bir perfüzyon pipet dokusunda tüm süreci daha kolay yapma gereksinimini ortadan kaldırır. Ancak, banyo uygulanması pahalı maliyeti daha fazla deney başına bileşikleri.
Genellikle, sorun giderme Hayır nAChR harekete geçirmek görülen aşağıdaki flash photolysis neden olduğunu anlamaya çalışan içerir. PA-NIC ile daha önce araştırılmamıştır bir hücre tipi ile çalışırken, araştırmacı ACH yerel puf-uygulama yapmak gerekir veya nikotin yeterli reseptörleri işlevsel olup olmadığını belirlemek için5dile getirdi. Sistem photolysis yanıt algılama kapasitesine sahip olduğunu doğrulamak için denetim deneyler reseptör30büyük miktarlarda hızlı medial habenula nöronlarda yapılmalıdır. Bu beyin alanında PA-NIC banyo uygulama hangi doğrulama denemeleri için tercih edilir, mümkündür. Sadece bu doğrulama deneyler gerçekleştirdikten sonra bir bir doğaçlama hücre tipine devam etmeliyiz. Eğer deneysel sistem doğrulandı ve çok küçük veya belirlenemeyen yanıt kalır, bu garanti kapsamında PA-NIC konsantrasyonu artırmak, flash yoğunluğu veya darbe süresi, artırmak için bir nAChR olumlu allosteric modülatör nAChR geliştirmek için eklemek Etkinlik6veya bunların bir kombinasyonu.
Zaman zaman, uncaging yanıt-e doğru çok büyük, kapılı Na+ Kanal harekete geçirmek ve zavallı uzay kelepçe nedeniyle unclamped içe akımları ile dolaylı gerilim kaynaklanan önemli nAChR harekete geçirmek. Tamamen nAChR içe akımları karanlık ve veri yorumu imkansız yapmak, bu eserler, QX-314 (2 mM), kayıt pipet eklenmek üzere ortadan kaldırılabilir. Onlar da PA-NIC konsantrasyonu azaltarak veya flash yoğunluğu veya darbe süresi azaltarak ortadan. Tüm görünür ışık fotoğraf-stimülasyon deneylerde bakım istenmeyen stimülasyon/photolysis istenen odak düzlemi altında veya üstünde önlemek için stimülasyon siteleri seçerken uygulanmalıdır. Ayrıca ve ne zaman uygun lazer güç her zaman fizyolojik yanıt çoğaltmak titre gerekir. Yukarıdakini/aşağıdakini odak nokta aktif ligandlar hala diffüz ve biyolojik sistemi (yani, reseptörleri) altında eğitim ile etkileşim gibi kafesli ligandlar ile çalışırken z ekseni photostimulation haberdar olmak özellikle önemlidir.
Çeşitli sınırlamalar var gibi PA-NIC lazer flash photolysis bütün müfettişler için uygun olmayabilir. İlk nispeten yüksek maliyetli uygun bir tuzak olduğunu. Dendrites gerektirir gibi 2 fotonlu mikroskop gibi sofistike görüntüleme sistemi olduğu gibi beyin dilimlerle çalışırken, küçük çaplı yapıları uncaging. Bir Ti:sapphire, lazer için performans gösteren 2-foton mikroskobu, akort IR yüksek maliyet dışında bağımsız olarak iki lazer ışınları daha fazla konumlandırma özelliğine sahip bir çift-galvanometre sistemi sistem maliyeti artırır. Toplam sistem maliyeti araştırmacı yeterli uzmanlığı ve inşa, sorun giderme ve böyle bir sistemi korumak için zaman varsa bir ev inşa sistemi kullanılarak azaltılabilir. Yukarıda da belirtildiği gibi adımları alarak kısmen azaltılabilir, düşük nAChR fonksiyonel ifade kez ikinci bir sınırlama içerir ancak bu başarı garanti. Eğer bir ligand-harekete geçirmek akımları puf-agonistler uygulanması takip ölçemezsiniz, genellikle, PA-NIC flash photolysis gerilim kıskacı altında kabul edilebilir sonuçlar verebilir değil. Üçüncü bir sınırlama içsel içerir floresans PA-NIC PA-NIC ~ 405 nm ışık emer ve yeşil flüoresan protein (GFP) veya Alexa 4885benzer bir aralıkta yayar. PA-NIC konsantrasyonları ~ 1 mM aştığında, bu floresans özellik aynı anda nöronal yapıları görselleştirmek için zorlu yapabilirsiniz. Bu etkisini azaltmak için kolayca PA-NIC akışından perfüzyon pipet kontrol edebilmek için önemlidir. Periyodik olarak, PA-NIC akışı uzak diffüz floresan moleküllerin izin vermek için durduruldu. Bu nöron uncaging ışını spot konumunu kontrol etmek için yeniden görüntüleme izin. Dördüncü bir potansiyel sınırlama söz 405 nm ışık kullanımı için photolysis içerir. 405 gibi daha kısa dalga boyları nm saçılma için daha fazla eğilimli bir beyin dilim gibi karmaşık bir doku. Böylece, bir verilen flash şiddeti ve süresi, uncaging yanıt genlikleri ve çürüme kinetik differentially dilimi içinde uncaging odak derinliği tarafından etkilenebilir. NAChRs hakkında biyolojik açıdan sonuçları bu önemli uyarı dikkate almak zorundayım.
Bu yerelleştirilmiş lazer flash photolysis teknik nAChR Nörobiyoloji ilgili yeni ayrıntıları ortaya çıkarmak için son zamanlarda kullanılmış. Örneğin, kronik nikotin pozlama perisomatic ve medial habenula nöronlar5dendritik nAChR işlevinde geliştirir. Ayrıca, ilk kez, ventral tegmental alan glutamat nöronlar fonksiyonel nAChRs kendi perisomatic ve dendritik hücresel kompartmanlarda6hızlı göstermeye yardımcı olmak için kullanıldı. Orada birçok potansiyel gelecek bu tekniği kullanır ve yaklaşım striatum33 kortikal piramidal nöronların31 veya serebral korteks32, interneurons gibi hızlı nAChRs bilinen diğer anahtar nöron türlerine uygulanabilir ve hipokampus19. Bu teknik aynı zamanda Farmakoloji ve/veya nAChR gen belirli reseptör alt türlerinden farklı nöronal bölmeleri için yerelleştirmek için34 düzenleme ile birlikte. Yaklaşım dahil, ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere, bu PA-NIC5ile paralel olarak geliştirilen diğer coumarin kafesli bileşikler kolayca adapte olabilir. Son olarak, PA-NIC flash photolysis bir gün uyanık/davranıyor hayvan roman davranış Farmakoloji paradigmalar nikotin eylem eğitim için kullanılabilir.

Kolinerjik sinyal dikkatte kontrolü, istemli hareketi ve ödül1,2de dahil olmak üzere çok sayıda beyin süreçleri modüle. Asetilkolin (ACh) iletim artıran ilaçlar Alzheimer Hastaligi, biliş3kolinerjik sistemleri için önemli bir rol ima ile ilişkili kognitif bozukluk tedavi etmek için kullanılır. Kolinerjik reseptörler ve sağlıklı ve hastalıklı Birleşik devre geliştirilmiş bir anlayış daha iyi tedavi yaklaşımları çeşitli nörolojik hastalıklar/bozuklukları için neden olabilir.
Nikotinik ACh reseptör (nAChRs) veya yanıt olarak endojen ACh eksojen nikotin tütün ürünleri katyonlar akı ligand kapılı iyon kanalları bir aileyiz. Açıklanan4olmak ilk nörotransmitter reseptörleri arasında olduğu gerçeğini göz önüne alındığında, nAChR Farmakoloji ve kas lifleri konumda kas tipi reseptörler için iyi anlaşılmış. Buna karşılık, nispeten az Farmakoloji ve yerel nAChRs beyinde hücre altı dağıtım hakkında bilinir. Bilgi serisindeki bu boşluğun son dağınık şekilde sınırlı ve hızlı harekete geçirmek-in nAChRs beyin dokusunda hücresel görüntüleme ve elektrofizyolojik kayıt5sırasında için izin veren bir roman kimyasal sondası geliştirme tarafından ele alındı. Burada, anahtar metodolojik adımlar bu yaklaşımda, nöronal yapısıyla nAChR işlevi bağlanma olanağı geliştirme genel amacı ile açıklanır.
Photoactivatable nikotin (PA-NIC; kimyasal adı: 1-[7-[bis(carboxymethyl)-amino] coumarin-4-yl] metil-nikotin) ~ 405 nm lazer flaşlar verimli bir şekilde nikotin5,6serbest bırakmak ile photolyzed olabilir. Uncaging önce PA-NIC çözümde kararlı ve hiçbir uygunsuz farmakolojik veya fotokimyasal özellikleri5sergiler. Photolysis sonra serbest bırakılan nikotin tahmin edilebileceği gibi nAChRs etkinleştirir ve farmakolojik etkisiz5uncaging yan vardır. Sürekli bir lazer bir çıkış gücü ile photolysis ışık kaynağı olarak kullanılan > 1 mW ölçülen örneği '. Ne zaman lokalize, hedeflenen fotoğraf-stimülasyon hücresel zarları mikroskobu (2PLSM) tarama 2-foton lazer ile bulmak için yeteneği ile birlikte ve iki önemli avantajı olan bu yaklaşım tamamen gerçekleştirilmektedir: photolysis hız ve kayma kesinlik.
Çoğu bakımdan photolysis PA-NIC nAChR ligandlar reseptörleri Beyin dilimleri içinde teslim etmek diğer yöntemleri üstündür. Böyle bir yaklaşım banyo uygulama7 ve yerel uyuşturucu teslim yolu ile bir kirpi pipet8içerir. Eski yaklaşım uygulanan ilacın uzun vadeli etkileri aşırı vurgulamak eğilimindedir ise ikinci yaklaşımı yanıt kinetik hücreleri ve denemeler arasında değişkenlik muzdarip. Bu alternatif yaklaşımlardan hiçbiri yeterince aynı nöron farklı hücresel konumlardan faaliyetlerine reseptör ayırt edebilirsiniz. Optogenetically-harekete geçirmek yayın ACH yerli nAChRs9,10,11soruşturma için kullanılan, ancak eşleme hücre altı nAChR mekanlar için yararlı olmuştur değil. Ayrıca, çoğu çalışmalar bu yaklaşımı kullanan bir ChR2 ifade bakteriyel yapay kromozomu transgenik fare ile anormal kolinerjik iletim12,13,14, dayanıyordu 15 , 16 , 17.
PA-Nic photolysis kolinerjik reseptörler eğitim için sadece optik yaklaşım değildir. Kafese kapatılmış bir carbachol işlevsel olarak ACh reseptör faaliyetleri kültürlü hücreleri18 ve beyin dilimleri19eşleştirmek için kullanılan, ancak PA-NIC geliştirilmesi sırasında karşılaştırmalı çalışmalar için ticari olarak mevcut değildi Rutenyum BIS (bipyridine)-nikotin karmaşık (RuBi-nikotin) nikotin uncaging20için izin vermek için rapor ama RuBi-nikotin kafa kafaya karşılaştırmada PA-NIC için aşağı kanıtladı ticari hazırlıklar çalışma5. Ticari olmayan ile karşılaştırmalı tür deneyler tekrarlamak yararlı olabilir son derece saf RuBi-nikotin, onun görünür emme PA-Nic's Özellikler kolinerjik çalışmaları için iltifat gibi. Son olarak, nAChRs aynı zamanda optik fotoğraf değiştirilebilir ligandlar ve genetiği değiştirilmiş reseptörleri21' in birleşimiyle manipüle. PA-Nic photolysis görülen bir avantaj ve bir dezavantaj değiştirilmiş nAChR genetik hedefleme yeteneği/şartı ile beyin dokusu içinde için tamamlayıcı bir yaklaşımdır.
Bu yaklaşımın birkaç anahtar gereksinimleri olması gerekmektedir. İlk olarak, uygun görselleştirme yöntemi doğru nöronal membran bulmak için gereklidir. Kültürlü hücreleri okurken geleneksel epi-floresans mikroskobu ile görüntülemede yeterli olabilir ama beyin dilimler veya diğer kalın doku hazırlıklar nöronlarda kayıt için 2PLSM veya confocal mikroskobu bir gereksinimdir. İkinci olarak, uygun bir yöntem photolysis lazer ışını konumlandırmak için gereklidir. Bu yaklaşım bir çift-galvanometre tarama kafa raster görüntüleme kiriş ve nokta photoactivation uncaging lazer ışını22,23,24kullanarak tarama için iki bağımsız x-y aynalar ile kullanır. Diğer, daha sınırlı çözümleri alternatif olarak raster görüntüleme ışın ve uncaging ışını veya hücre getirdiği için öyle ki (2) sadece uncaging ışını görüş alanı ortasına yönetmenlik inceden inceye gözden geçirmek olduğunu (1) bir tek-galvanometre tarama kafa gibi mümkün Bu pozisyon için flash photolysis. Üçüncü olarak, Eğer bir fizyolojik sinyalleri deneyler sırasında toplamak dilek eşzamanlı elektrofizyolojik kayıt için gerekli bir sistemdir. Yukarıdaki şartları uygun bir all-optik görüntüleme tekniği ile son zamanlarda açıklanan5olarak karşılanabilir. Aşağıda, detaylı bir iletişim kuralı eklenir Yani bu yaklaşımın temel adımları açıklar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Instruments, Consumables, and Miscellaneous Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiclamp 700B</td>
			<td>Molecular Devices Corp.</td>
			<td></td>
			<td>Patch clamp amplifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pneumatic Picopump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PV820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>TC-324C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrating blade microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>VT1200S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrafree-MC Centrifugal Filter</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>UFC30GV0S</td>
			<td>internal solution filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>1B150F-4</td>
			<td>patch and local application pipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(-)-Nicotine hydrogen tartrate salt</td>
			<td>Glentham</td>
			<td>GL9693</td>
			<td>nicotine salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-carboxymethylamino-4-methyl coumarin</td>
			<td>Janelia Research Campus</td>
			<td></td>
			<td>PA-Nic by-product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-[7-[bis(carboxymethyl)- amino]coumarin-4-yl]methyl-nicotine</td>
			<td>Janelia Research Campus</td>
			<td></td>
			<td>PA-Nic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Euthasol (Pentobarbital Sodium and Phenytoin Sodium)</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>ANADA #200-071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa FluorTM 488 Hydrazide</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A10436</td>
			<td>green fill dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa FluorTM 568 Hydrazide</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A10437</td>
			<td>red fill dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-carboxy-AF594 (Alexa Fluor 594)</td>
			<td>Janelia Research Campus</td>
			<td></td>
			<td>red fill dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QX 314 chloride</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2313</td>
			<td>voltage-gated sodium channel blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Meter&#160;</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>S120C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals for Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Methyl-D-glucamine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(+)-Sodium L-ascorbate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiourea</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>230391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8242;,N&#8242;-tetraacetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate magnesium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine 5&#8242;-triphosphate sodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Components of 2-Photon Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Ultima Laser Scanner for Olympus BX51 Microscope</td>
			<td>Bruker Nano, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>imaging software and galvos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; Imaging X-Y galvanometers</td>
			<td>Cambridge Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Mai Tai HP1040</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td></td>
			<td>Tuneable IR laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#160;&#160;&#160;&#160;&#160;Pockels cell M350-80-02-BK with M302RM Driver</td>
			<td>Conoptics, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>for IR laser attenuation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Integrating Sphere Photodiode Power Sensor</td>
			<td>Thorlabs, Inc</td>
			<td></td>
			<td>laser power pick-off photodiode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; Uncaging X-Y galvanometers</td>
			<td>Cambridge Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Helios 2-Line Laser Launch</td>
			<td>Bruker Nano, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>uncaging laser components</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; OBIS LX/LS 405 nm (100 mW)</td>
			<td>Coherent, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; OBIS LX/LS 473 nm (75 mW)</td>
			<td>Coherent, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#160;Point-Photoactivation / Fiber Input Module for Limo Sidecar - Uncaging</td>
			<td>Bruker Nano, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright Microscope</td>
			<td>&#160;Olympus</td>
			<td>BX51WIF</td>
			<td>Upright microscope chasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; Objective: Olympus M Plan FL 10x; NA 0.3 WD 11 mm</td>
			<td>&#160;Olympus</td>
			<td></td>
			<td>10x objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; Objective: Olympus M Plan Fluorite 60x/1.0 WD=2mm NIR</td>
			<td>&#160;Olympus</td>
			<td></td>
			<td>60x water-dipping objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; X-Cite 110, four-LED LLG coupled epi-fluorescence light source</td>
			<td>Excelitas Technologies</td>
			<td></td>
			<td>LED Light Source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Epi-Fluorescence Filter: ET-GFP (FITC/CY2) for Epi-Turret</td>
			<td>Chroma Technologies</td>
			<td></td>
			<td>LED Filter for blue light excitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Epi-Fluorescence Filter: ET-DsRed (TRITC/CY3) for Epi-Turret</td>
			<td>Chroma Technologies</td>
			<td></td>
			<td>LED Filter for green light excitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; B&#38;W CCD camera; Watec, 0.5in B/W CCD</td>
			<td>Watec Co., LTD.</td>
			<td></td>
			<td>CCD camera for patch clamp recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>External Detectors - Dual Reflected Emission - Olympus Upright (Multi-Alkali, GaAsP)</td>
			<td>Bruker Nano, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; Multi-alkali side-on PMT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>R3896</td>
			<td>red channel PMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 595/50m</td>
			<td>Chroma Technologies</td>
			<td></td>
			<td>red channel emission filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 565lpxr</td>
			<td>Chroma Technologies</td>
			<td></td>
			<td>dichroic beam splitter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; GaAsP end-on PMT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>7422PA-40</td>
			<td>green channel PMT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 525/70m</td>
			<td>Chroma Technologies</td>
			<td></td>
			<td>green channel emission filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; High-Speed Shutter for Hamamatsu H7422 PMT</td>
			<td>Vincent Associates / Bruker</td>
			<td>517329</td>
			<td>PMT shutter mount</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodt Gradient Contrast Transmission Detection Module</td>
			<td>Bruker Nano, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160; Multi-alkali side-on PMT</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>R3896</td>
			<td>Dodt PMT</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

probing nicotinic acetylcholine receptor function in mouse brain slices via laser flash photolysis of photoactivatable nicotine

Asetilkolin (ACh) reseptörleri nöronal işlemler çeşitli modüle davranır, ancak ACh reseptör işlev nerede bu işlev yürütülür hücrelerde hücre altı konumu ile bağlamak için zor oldu. Nikotinik ACh reseptör (nAChRs) yerel beyin dokusu içinde hücre altı konumunu çalışmaya, optik bir yöntem nikotin nöronal membranların yakınındaki ayrı yerlerde kesin sürülmesi elektrofizyolojik kayıtları sırasında geliştirilmiştir. 2-foton lazer tarama mikroskobu sırasında onların morfolojisi görselleştirmek için yama klempe nöronlarda dilimleri ile dolu beyin boya ve nikotin uncaging hafif bir flash ile 405 nm lazer ışını bir veya daha fazla hücre zarları yakınındaki odaklanarak tarafından yürütülür. Hücresel geçerli deplasmanlar ölçülür ve bir yüksek çözünürlüklü üç boyutlu (3D) görüntüsünü kaydedilmiş nöron nAChR yanıt-e doğru hücresel morfoloji ile mutabakatı sağlamak için yapılır. Bu yöntemi karmaşık doku müstahzarları, kolinerjik neurotransmission anlayışı geliştirmek için umut verici nAChR fonksiyonel dağılımın detaylı analiz olanak sağlar.

Photolysis için stimülasyon, maruz kalma doz (yoğunluk ve saat), pozlama konumunu ve ışın geometri önemli değişkenlerdir. Bu makalede açıklanan sistem iki farklı photostimulation demeti, galvanometre sistem ışın girmeden önce photostimulation ışık yolunu bir lens ın/out hareketli ayarlanabilir üzerinden yeteneğine sahiptir. Bu lens photostimulation eni 60 x giriş öğrenci doldurur / 1.0 NA su daldırma-[60 x WD] Amaç, bir yakınındaki kırınım-sınırlı, alt-µm buluşma noktasında örnek içinde odak düzlemi üreten. Bu photostimulation üstündeki ve altındaki odak nokta ile optik eksen simetrik uzanan bir kum saati şekli ile ışık ile ilişkilidir. Yola eklenen lens ile photostimulation lazer ışığı objektif lens giriş öğrenci odaklanmıştır ve bir kaleme benzer ışın çıkar. ~ 10 µm çapı 60 x amaç için olması bekleniyor, bu ışın düzgün/dikey örnek boyunca gösterilir. Bu modda, stimülasyon nokta içinde verilen herhangi bir yerde ışık şiddeti kırınım sınırlı yakınındaki küçük nokta yoğunluğu % ~ 1 olacaktır. Böylece, daha yüksek lazer gücü ~ 10 µm spot stimülasyon kullanırken genellikle gereklidir. Bu makalesinde bildirilen tüm deneyler için bir kum saati-tipi photostimulation ışını kullanıldı.
Teslim edilen örnek güç karşı bir güç ölçeri kullanmayı örnek lazer güç ölçme sonra giriş voltaj ayarı çizilebilir. Bu çalışmalar bir 60 WD amaç x 2 mm ile bir çalışma mesafesi kullanın ama dedektörü öğesi olabilecek hasarları önlemek güç ölçümler için suda Batık değil. Ne zaman hedefleri ile NA listelenen > 0,95 hava (olmadan daldırma sıvı) cinsinden ölçülür, objektif ön yüz element alt dizin (hava) nedeniyle toplam iç yansıma kayıp olabilir. (Toplam iç yansıma kayıpları için düzeltmek için) Bu durumda, bir daha doğru örnek güç ölçüm için havada ölçülen 1.0 NA objektif (1.0/0,95)2 tarafından ölçülen gücünü artırmak. Şekil 1a gösteren tipik bir giriş/çıkış arsa için 405 nm lazer dahil edilmiştir 473 nm görünür lazerler denize indirmek ve bu çalışma sisteminde. Bu lazer sistemleri aşağıdaki nedenlerden dolayı fotoğraf-stimülasyon maruz kalma doz kontrolü için idealdir: (1) giriş voltajı göre doğrudan Lineer güç çıkışı sağlamak için önceden ayarlanmış (0-5 V), (2) (hiçbir lazer ile bir sessiz çekim işlemi sağladıkları çıkış), ve (3) onlar-si olmak hızlı, alt-ms yoğunluğu darbe süresi kontrolü (0.1 ms yanıt). Spot fotoğraf-uyarılması lazer/galvo sistemle kullanırken, MarkPoints noktalar rutin kalibrasyon gerekli bir görevdir. Şekil 1b (sol kapı aynası) kalibrasyon dışında olan bir sisteme gösterir (fotoğraf uyarmak için istenen nokta değil neden bu noktaya doğru uyarılması yanık delikli konumu tarafından belirtildiği gibi), doğru nokta kalibrasyon ( sonra konumlandırma için dönüş ile Şekil 1b, doğru kapı aynası). 
PA-NIC alçakgönüllülükle Floresan (emisyon zirvesinde ~ 510 nm), 350-450 nm (1-foton uyarma) veya 700-900 nm (2-foton uyarma)5arasında etkili uyarma sergilenmesi. PA-NIC sırasında yerel uygulama görselleştirmek için PA-NIC (1 mM) (1) beyin doku optik kesitli iletim bağlam eşzamanlı görüntüleme tarafından Dodt kontrast ve (2 verilmiş floresans uyarma takip beyin dokusu yakınındaki uygulandı (900 nm), PA-NIC PA-Nic 2PE floresan bir yerel uygulama pipet (Şekil 2a) gelen basınç fırlatma sırasında kolayca algılanabilir. Nikotin ve bir monoalkylcoumarin, 7-carboxymethylamino-4-metil coumarin, ana PA-Nic photolysis reaksiyon5fotokimyasal ürünlerdir. PA-NIC için Imaging kullanılan ayarları/parametreleri Imaging kullanarak, doku nikotin (1 mM) veya 7-carboxymethylamino-4-metil coumarin (1 mM) teslim sırasında görüntüsü. Floresan sinyal algılandı (Şekil 2a, orta ve alt paneller), PA-NIC sonuçları özgüllük gösteren. Son olarak, PA-NIC beyin dokusu içinde uygulandığı ve PA-NIC floresans emisyon görüntüsü (Şekil 2b). Bu yaklaşım PA-NIC yerel uygulama pipet 100-200 µm içinde mevcut olduğunu onaylar. Birlikte, bu veriler PA-NIC beyin dokusu ile yerel uygulama için etkili bir şekilde teslim onaylamak.
Elektrofizyoloji kayıtları görüntüleme hücresel yapıları için aynı anda 2PLSM ile denge hakkında önemli noktalar için her iki bileşenin deneme için araştırmacı gerektirir ve genellikle bir dar zaman penceresi (~ 20 dk) için kullanılabilir geçerli örnek veri toplama yamalı bir hücreden. Hücresel görselleştirme dikkate almadan, bu zorla girme istikrar kayıt çünkü zamanla düşüş eğilimi sonra en kısa zamanda kaydetmeye başlamak için en iyi yöntemdir. Ancak, düşsel bir gereksinimi olduğunda, elektrofizyolojik dikkat edilmesi gereken noktalar küçük/uzaktan yapılarda floresans konsantrasyonu artar için yeterli zaman izin vermelidir. Bu eğri28, bazen ne zaman yeni bir hücre tipi görüntüleme türetmek yararlı olan doldurma bir boya konsantrasyon inceleyerek örneklenir. Şekil 3 Z-yığınlar 2PLSM görüntülü ve maksimum yoğunluk projeksiyon tanıtımı amacıyla içine çökmüş birkaç örnek nöronlar gösterir. Şekil 3a nerede nöronal morfoloji tam olarak düşünülür, gürültü en aza indirilir ve enkaz hücresel morfoloji yorumu ile müdahale değil yüksek kaliteli görüntüleri gösterir. Şekil 3b daha düşük kalite, düşük sinyal arka plan oranı ve önemli enkaz görüntüleri gösterir. Bu enkaz kez hücre yaklaşırken boya yama pipet üzerinden görüntüleme fırlatma kaynaklanan yoğun floresans küresel cepler olarak görünür. Özellikle 100 µM eklenmesi PA-Nic banyoda (banyo uygulama yapılırken) sinyal arka plan oranı azaltmak eğilimindedir ve alt-optimal görüntü kontrastı için yol açar. Alexa Fluor 568 veya 594 kez yerel uygulama deneyler oldukça yararlı bir bulucu boya veya normalize 2PE başvuru/normalleştirme sinyal olarak. Bu boyalar iki fotonlu uyarma için etkili bir dalga boyu hangi bırakmak PA-NIC eş zamanlı görselleştirme ve hücresel kompartmanlarda tanımlaması ~ 780 nm27, var. Bu dalga boyu, ancak, tam olarak iki fotonlu photolysis PA-NIC5kaçınamazlar. Alexa Fluor 488 PA-NIC banyo-uygulama deneylerde avantajlıdır; uygun dalga boyu ≥900 nm ile heyecanlı zaman iki fotonlu photolysis PA-NIC5 hala hücresel kompartmanlarda uygun görselleştirme koruyarak önlenebilir.
Şekil 4 Beyin dilimleri nöronlarda MHb yerelleştirilmiş PA-NIC lazer flash photolysis için örnek verileri gösterir. Şekil 4a bir ekran yakalama ile belgili tanımlık fotoğraf-stimülasyon spot yer paylaşımlı MarkPoints Protokolü çalıştırılmadan önce çekilen son 2PLSM görüntünün bir "referans" görüntü örneği (üst panelleri) gösterir. Şekil 4a (alt resim panelleri) hücresel morfoloji overlaid fotoğraf stimülasyon yakınlaştırılmış bir görünümünü spot gösterir. PA-Nic photolysis için karşılık gelen ilişkili süre elektrofizyolojik yanıt Şekil 4aalt panelleri gösterilir. Önceki çalışma bu akımlar nAChR antagonistleri5' e duyarlı olduğunu göstermiştir. Şekil 4b gösterir nerede tek nokta photolysis ya 1 bir aralıkta yapılır farklı hücrelerden temsilcisi veri s veya 10 s. 10 s aralığı verilen geçerli tutan temel yeterli kurtarma süre ise, daha kısa bir 1 s aralığı yol açtı bir holding iletişim kuralı olarak geçerli dereceli artışı devam etti. Geçerli artan nikotin sistemi 1 Hz aralığı29ile diffüz için yeterli zaman sahip olmadığını gösteriyor. NAChRs neuropharmacology hücre tipleri arasında farklı olabilir olarak zamansal böyle tepki analizleri olmalıdır okudu, herhangi bir yeni hücre tipi de novo gerçekleştirilen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58873/58873fig1.jpg"> Şekil 1: Photostimulation lazer kalibrasyon. (bir) fotoğraf-uyarılması lazer güç çıkışı. Örnek uçak güç (60 x aracılığıyla / 1.0 NA su daldırma amaç) 405 için ölçüldü nm ve 473 nm fotoğraf-stimülasyon lazerler, belirtilen çıkış ayarında. (b) fotoğraf-uyarılması lazer kalibrasyon. Ekran yakalama görüntüleri göstermek amaçlanan fotoğraf-stimülasyon nokta ve fotoğraf-stimülasyon (sol) önce (yanık delikli) oluştuğu ilgili alana kayma ilişkisi ve sonra (sağda) çalışan ayarı'nda MarkPoints. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58873/58873fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58873/58873fig2.jpg"> Şekil 2: PA-NIC yerel uygulama. (bir) algılama PA-NIC üzerinden bir yerel uygulama pipet. 1 mM PA-NIC, photolysis yan ürün veya nikotin ACSF içinde çözünmüş, bir yerel uygulama pipet yüklenen ve beyin dokusu 2PLSM sırasında reçete (900 nm uyarma) her ilaç için aynı görüntüleme ayarları kullanarak görüntüleme. Devresel_ödeme GaAsP katot floresan emisyon yakalamak için kullanıldı ise lazer Dodt kontrast iletim resmi taramak doku/pipet gösterir. (b) PA-NIC (1 mM) beyin dokusu içine derin ve PA-NIC kendi içsel floresans kullanarak yanal yayılmasını göstermek için yolu ile olduğu gibi (bir) 2PLSM görüntüsü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58873/58873fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58873/58873fig3.jpg"> Şekil 3: 2-foton lazer mikroskobu görüntüleri taramak edinimi. (bir) en iyi 2PLSM Z-yığınlar. İki 2PLSM Z-yığın maksimum yoğunluk projeksiyon iyi çözülmüş dendrites ile MHb nöronlar için gösterilen ve biraz daha müdahaleci enkaz örnekleridir. (b) alt-optimal 2PLSM Z-yığınlar. İki 2PLSM Z-yığın maksimum yoğunluk projeksiyon örnekleri enkaz (hücre yaklaşım sırasında pipet ihraç boya) çevrili MHb nöronlar için gösterilir. Böyle görüntüleri görüntüler (bir) gösterilenlerle gibi daha yorumlamak daha zordur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58873/58873fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58873/58873fig4.jpg"> Şekil 4: lazer flash photolysis PA-NIC, (bir) MarkPoints referans görüntüler ve içe akımları PA-Nic photolysis tarafından uyarılmış. Bir MHb neuron için ham referans fotoğraf MarkPoints fotoğraf-stimülasyon denemeler bir tek (gösterilen) hücresel yeri için gösterilir. Bazı fotoğraf-stimülasyon konumları (Bu serinin en sağdaki resimde), odakta dendritik yapıdır fakat soma ve proksimal dendrite değildir unutmayın. Her başvuru görüntünün altında nikotin uncaging uyarılmış içe geçerli çizilir. (b) arası uyarıcı aralıkları için PA-Nic photolysis. Suret kayıtları nerede nikotin aynı perisomatic konumda 1 arası uyarıcı aralığı ile Art arda kokulum MHb nöronlar için gösterilir s veya 10 s. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58873/58873fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Probing Nicotinic Acetylcholine Receptor Function in Mouse Brain Slices via Laser Flash Photolysis of Photoactivatable Nicotine at JoVE.com

Probing Nicotinic Acetylcholine Receptor Function in Mouse Brain Slices via Laser Flash Photolysis of Photoactivatable Nicotine

Bu makalede nikotin uncaging tarafından fare Beyin dilimleri nikotinik asetilkolin reseptörü (nAChRs) çalışmak için bir yöntem sunar. Eşzamanlı yama kelepçe kayıt ve mikroskobu tarama 2-foton lazer ile birleştiğinde nikotin uncaging nikotinik reseptör işlevi kolinerjik Nörobiyoloji daha derin bir anlayış sağlayan hücresel morfoloji ile bağlanır.

Fare beyin dilim Photoactivatable nikotin lazer Flash Photolysis üzerinden nikotinik asetilkolin reseptör işlevinde sondalama

Acetylcholine (ACh) acts through receptors to modulate a variety of neuronal processes, but it has been challenging to link ACh receptor function with ...

Bu teknik, fotoaktibl nikotin molekülünün lazer-flaş fotolizi ile birlikte multi-foton lazer tarama mikroskobu kullanır. Nikotinik kolinerjik reseptörlerin hassas aktivasyonuna izin. Bu teknik nikotinik reseptör agonist uygulaması üzerinde ince spatiotemporal kontrol sağlar, reseptör fonksiyonel ekspresyon desenleri ve kolinerjik sinaptik veya hacim iletimi çalışması için güçlü bir araç sağlayan.İşleme başlamadan önce, 20 ila 40 mikrometre lik açma çapına sahip cam bir mikro pipet çekmek için programlanabilir bir pipet çekmecesi kullanın. 0,22 mikronluk bir filtre den yaklaşık bir mililitre kayıt çözeltisi süzün. Ve filtreli kayıt çözeltisinde iki milimolar son konsantrasyon elde etmek için yeterli lyophilized fotoaktivize nikotin resuspend.Çekilen yerel uygulama mikropipeti fotoaktibl ilacın 50 mikrolitresi ile doldurun ve pipeti bir mikromanipülatöre monte edilmiş bir pipet tutucuya sabitle. Pipet tutucuyu uygun bir boru uzunluğu yla sürekli düşük basınçlı uygulama yapabilen bir basınç fırlatma sistemine bağlayın. Ve ekstrasellüler kayıt çözeltisi içine yerel uygulama pipet manevra için mikromanipülatör kullanın.Pipet ucunu, ilgi çeken hücreden yaklaşık 50 mikrometre uzaklıktaki bir fare beyin dokusu örneğinin biraz üzerine yerleştirin. Ve kısaca pipet basınç inç kare başına 1-2 kilo uygulayın. İlgi hücresinin yer değiştirmesi çok az olmalıdır.Kararlı bir bütün hücre yama kıskaç elde ettikten sonra, basınç ejeksiyon cihazı üzerinde düşük uygulama açın ve fotoaktiz nikotin ile hücre çevreleyen doku doygunluk bir ila iki dakika. Yerel uygulama deneme için ek karmaşıklık tanıtır. Ama bileşik yedekler ve PA-Nic yüksek konsantrasyonlarda kullanılmasını sağlar.Fotoaktibl nikotinbanyo uygulaması için, ilk 100 mikromolar son konsantrasyonsürekli sirkülasyon için uygun kayıt çözeltisi hacminde lyophilized ilaç yeterli çözünür. Ve elde edilen karışımı bir perfüzyon sistemine yükleyin. Daha sonra fotoaktibl nikotin çözeltisinin dakikada 1,5 ila 2 milimetre lik bir hızda, gerekli sirkülasyon hacmini en aza indirmek için en az iç çapı ve genel uzunluğu ile tüp kullanarak sirkülasyon başlar.Sirkülasyon sırasında, sürekli karbogen ile çözelti kabarcık, ve düşük ışık koşullarında 32 santigrat derece banyo sıcaklığını korumak. Banyo uygulaması, dokunun PA-Nic permeasyonunun basitliğinden ve tekdüzeliğinden yararlanır. Ama mutlaka düşük mikromolar PA-Nic konsantrasyonları kullanır, ve bileşik yüksek toplam miktarda harcar.Medial habenula nöronun canlı görselleştirmesi için, kararlı, tam hücreli yama kelepçesi kaydı oluşturmak için iletilen ışık veya kızılötesi diferansiyel girişim kontrast optik ve video kamera kullanın. Yüksek dirençli hücre bağlı yapılandırmasını kurduktan sonra, ancak zorla girmeden önce, kurulum ve yazılımı lazer tarama moduna geçin. Zorla girdikten sonra, ilgi görüntüleme boyasının difüzyon la nöronu pasif olarak doldurduğunu doğrulamak için lazer taramasını kullanın.Boyanın, canlı tazyimi kullanmadan önce en az 20 ila 30 dakika boyunca hücresel bölmeleri doldurmasına izin verin. Nöronal özelliklerin doğru canlı görüntülenmesine olanak tanıyan görüntüleme parametrelerini seçin, uygun ayarları değiştirerek ekran görselleştirmesini, çözünürlüğünü, sinyal-gürültü oranını ve görüntü çerçevesi edinme süresini gerektiği gibi değiştirin. Sinyal kontrastını artırmak için, arama masası penceresini açın ve arama masası zemin ve tavan ayarlarını ayarlayın.Doku içinde ilgi alanı bulmak için, 1X optik zum seçin ve kaydırma kontrolleri kullanın. İlgi çekici hücreyi içeren bir başlangıç ve durdurma konumu seçmek için Z serisi aracını kullanın. Bir mikrometrenin adım boyutunu ayarlayın ve en yüksek çözünürlüklü görüntü verecek bir görüntü boyutu seçin.Genellikle 1, 024 satır başına 1, 024 piksel. Sonra hücreyi içeren her Z düzlemindeki nöronu ardışık olarak görüntüle. Lazer stimülasyonunu kalibre etmek için, sistemi minimumdan daha büyük bir görüntüleme lazer gücüyle taramaya başlayın ve objektif odak noktasını ince kırmızı marker floresan tabakasına ince ayarlayın.Floresan alanı içinde enkaz dan temiz ve eşit marker ile kaplı bir alan seçin ve uncaging galvocalibration işlevini seçmek için araçları, kalibrasyon ve hizalama menüsünü açın. 405 nanometre lazer, 400 lazer stimülasyon gücü ve 20 milisaniye lik bir uyarılma süresi seçerek, ikinci galvanometre ayna çiftinin mekansal kalibrasyonu için yanık lekeleri öğretici izleyin. Kırmızı işaretleyicide bir ila beş mikrometre çapında delikler açmak için.Merkezi nokta yandıktan sonra görüntüyü uyarmak ve yenilemek için güncelleştirmeyi seçin ve yuvarlak kırmızı göstergeyi dokuz noktadan oluşan bir ızgara elde etmek için merkezin, sağ ortanın ve alt orta noktaların gerçek nokta konumuna taşıyın. Kalibrasyonu test etmek için işaret noktaları penceresini açın ve doğru son kalibrasyon dosyasının işaret noktaları penceresine yüklendiğine dikkat edin, numunenin yeni bir alanında tanımlanan noktaların uyarım parametrelerini el ile etkinleştirin. Ardından doğru kalibrasyonu doğrulamak için bir test darbesi uygulayın.Kısaca görüntü ve ilgi alt hücresel alanı bulmak için, canlı tarama seçin ve gerektiğinde herhangi bir küçük yapıları görselleştirmek için optik zoom artırmak kullanın. İşaret noktası tek noktalı crosshairs hemen hücre zarına bitişik yerleştirin ve bir-50 milisaniyelik süre, bir-dört miliwatt lazer gücü ve en az bir deneme için fotostimülasyon parametreleri ayarlayın. Ardından işaret noktaları protokolünü başlatmak için çalışma işareti noktalarını seçin ve elektrofizyoloji veri alımını gerçek zamanlı olarak gözlemleyin.Bir milimolar PA-Nic fotoaktiz nikotin 2PE floresans kolayca gösterildiği gibi yerel bir uygulama pipet basınç ejeksiyon sırasında tespit edilir. Fotoaktipabl nikotin fotoliz reaksiyonunun ana fotokimyasal ürünlerinin teslimi ise aynı konsantrasyonda floresan sinyal üretmez, uyarma gücü ve dalga boyu. Fotoaktipabl nikotin sonuçlarının özgüllüğünü gösteren.Gösterildiği gibi beyin dokusuna uygulanan fotoaktibl nikotinin görüntülenmesi, ilacın lokal uygulama pipetinin 100 ila 200 mikrometre içinde varlığını ortaya koymaktadır. Fotoaktipabl nikotinin lokal uygulama ile beyin dokusuna etkili bir şekilde iletilebildiği doğrulanabilir. Burada nöronal morfolojinin tamamlandığı, gürültünün en aza indirildiği ve enkazın hücresel morfolojinin yorumlanmasına engel olmadığı yüksek kaliteli görüntüler gösterilmiştir.Ancak bu görüntüler daha düşük kalitededir. Daha düşük bir sinyal-arka plan oranı ve önemli enkaz sayesinde. Beyin dilimlerinde medial habenula nöronların iki foton lazer tarama mikroskobu ile PA-Nic lazer flaş fotolizi ile eşleştirme, hücresel morfoloji ile elektrofizyolojik yanıtların uzlaştırılması için izin verir.10 saniyelik aralıklarla gerçekleştirilen tek noktalı fotolİz, taban çizgisi tutma akımı için yeterli bir kurtarma süresi sağlar. Daha kısa bir saniyelik aralık, protokol ilerledikçe tutma akımında kademeli bir artışa yol açarken. Nikotinin daha kısa aralıklarla sistemden uzaklaşmak için yeterli zamanı olmadığını düşündürüyor.Fotoaktibl molekülleri kullanan deneyler tasarlanırken, floresan göstergeleri seçmeyi ve uyumlu uyarma emisyon spektrumları ile floroforları rapor etmeyi unutmamak önemlidir. PA-Nic kısa dalga boyu fotolik tepe nedeniyle en yaygın florofores ile uyumludur. En uygun PA-Nic uygulama tekniği seçerken, dikkatle fonksiyonel ifade, ilgi nöronlarda nikotinik reseptörlerin fizyolojik aktivitesi dikkate almak önemlidir.Bu tekniğin yetenekli kullanımı nikotin uygulamasıince spatiotemporal kontrol sağlar, hangi yerli nikotinik reseptör nişan kinetik çalışma için heyecan verici yeni olanaklar sağlar, subsellüler lokalizasyon, ve nikotinik reseptör aktivasyonu ile nöronal aktivite modülasyonu.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Koku Duyu Nöronlar Cilia Kafesli Bileşiklerin Flash Fotoliz

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

Kronik Nikotin İdaresi fareler Knock-in içinde floresan etiketli Nikotinik Reseptör Spektral Konfokal Görüntüleme

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

Hipotalamik Fare Beyin Dilimleri GFP etiketli Nöronlar in Görüntüleme Kalsiyum Cevapları

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Local Application of Drugs to Study Nicotinic Acetylcholine Receptor Function in Mouse Brain Slices

Fare Beyin dilimleri içinde Nikotinik Asetilkolin Reseptör Fonksiyon Okumak Uyuşturucu Yerel Uygulama

Tobacco use leads to numerous health problems, including cancer, heart disease, emphysema, and stroke. Addiction to cigarette smoking is a prevalent ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

Fare Akut Beyin Dilimleri Neuroblast Göç vivo Doğum Sonrası Elektroporasyonla ve Time-lapse Görüntüleme

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Laser-guided Neuronal Tracing In Brain Explants

Lazer güdümlü Nöronal İzleme Beyin Eksplantlarındaki

We present a technique which combines an in vitro tracer injection protocol, which uses a series of electrical and pressure pulses to increase dye uptake ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Kullanımı Netlik Fare Omurilik içinde Serotonerjik Elyaf Görüntüleme / KÜBİK Tekniği

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Studying Brain Function in Children Using Magnetoencephalography

Beyin fonksiyonları çocuklarda Magnetoencephalography kullanarak eğitim

Magnetoencephalography (MEG) is a non-invasive neuroimaging technique which directly measures magnetic fields produced by the electrical activity of the ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Kronik yaygın Marmoset bütün kortikal Electrocorticographic dizide implantasyonu

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...