Name: isolation and culture of embryonic mouse neural stem cells
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells at JoVE.com

وأيد هذا العمل المعهد Royan.

جميع العمليات الجراحية والإجراءات على الحيوان بموافقة لجنة الأخلاقيات الحيوان من معهد Royan، طهران، إيران.
1-إعداد الأدوات الجراحية، غسل العازلة (حبيس-الفنزويلية) وخلية ثقافة الإعلام ولوحات ثقافة الخلية
<ol><li>تعقيم الأدوات الجراحية (مقص والتعامل مع شفرة مشرط وملقط) بالتعقيم ...

<ol>
	<li>Navarro Quiroz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Signaling+in+Neuronal+Stem+Cells.">Cell Signaling in Neuronal Stem Cells.</a> Cells. 7 (7), (2018).</li><li>Choi, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Thrombin+Receptor+Restricts+Subventricular+Zone+Neural+Stem+Cell+Expansion+and+Differentiation.">The Thrombin Receptor Restricts Subventricular Zone Neural Stem Cell Expansion and Differentiation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9360 (2018).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+novel+rat+neural+progenitor+clone+that+expresses+Dlx+family+transcription+factors+and+gives+rise+to+functional+GABAergic+neurons+in+culture.">Isolation of a novel rat neural progenitor clone that expresses Dlx family transcription factors and gives rise to functional GABAergic neurons in culture.</a> Developmental Neurobiology. 72 (6), 805-820 (2012).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+phenotypically+diverse+neural+culture+from+hESC+by+combining+adherent+and+dissociation+methods.">Derivation of phenotypically diverse neural culture from hESC by combining adherent and dissociation methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2018).</li><li>Dhara, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+progenitor+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+cultures.">Human neural progenitor cells derived from embryonic stem cells in feeder-free cultures.</a> Differentiation. 76 (5), 454-464 (2008).</li><li>Aligholi, H., Hassanzadeh, G., Gorji, A., Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Biopsy+Method+for+Isolating+Neural+Stem+Cells+from+the+Subventricular+Zone+of+the+Adult+Rat+Brain+for+Autologous+Transplantation+in+CNS+Injuries.">A Novel Biopsy Method for Isolating Neural Stem Cells from the Subventricular Zone of the Adult Rat Brain for Autologous Transplantation in CNS Injuries.</a> Methods in Molecular Biology. 1462, 711-731 (2016).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+embryonic+mouse+neural+stem+cell+culture+using+the+neurosphere+assay.">Establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), (2011).</li><li>Ferrari, D., Binda, E., De Filippis, L., Vescovi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neural+stem+cells+from+neural+tissues+using+the+neurosphere+technique.">Isolation of neural stem cells from neural tissues using the neurosphere technique.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. , (2010).</li><li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse.">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nature Protocols. 7 (2012), (2005).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passage+Number+is+a+Major+Contributor+to+Genomic+Structural+Variations+in+Mouse+iPSCs.">Passage Number is a Major Contributor to Genomic Structural Variations in Mouse iPSCs.</a> Stem Cells and Development. 32 (10), 2657-2667 (2014).</li><li>Diaferia, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Chromosomal+Analysis+of+Cultured+Mouse+Neural+Stem+Cell+Lines.">Systematic Chromosomal Analysis of Cultured Mouse Neural Stem Cell Lines.</a> Stem Cells and Development. 20 (8), 1411-1423 (2011).</li><li>Hemmer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Neural+Stem+Cells+Achieve+Long-Term+Survival+and+Functional+Integration+in+the+Adult+Mouse+Brain.">Induced Neural Stem Cells Achieve Long-Term Survival and Functional Integration in the Adult Mouse Brain.</a> Stem Cell Reports. 3 (3), 423-431 (2014).</li><li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+Cytometry+Protocols+for+Surface+and+Intracellular+Antigen+Analyses+of+Neural+Cell+Types.">Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), 52241 (2014).</li><li>Zhang, Z., Wang, Z., Rui, W., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnesium+lithospermate+B+promotes+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+in+vitro+and+enhances+neurogenesis+in+vivo.">Magnesium lithospermate B promotes proliferation and differentiation of neural stem cells in vitro and enhances neurogenesis in vivo.</a> Tissue and Cell. 53, 8-14 (2018).</li><li>Zilkha-Falb, R., Gurevich, M., Hanael, E., Achiron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prickle1+as+positive+regulator+of+oligodendrocyte+differentiation.">Prickle1 as positive regulator of oligodendrocyte differentiation.</a> Neuroscience. 364, 107-121 (2017).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte+differentiation+from+human+neural+stem+cells:+A+novel+role+for+c-Src.">Oligodendrocyte differentiation from human neural stem cells: A novel role for c-Src.</a> Neurochemistry International. 120, 21-32 (2018).</li><li>Palanisamy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+alters+cell+fate+selection+of+rat+neural+progenitor+cells+in+vitro.">Oxytocin alters cell fate selection of rat neural progenitor cells in vitro.</a> PLoS ONE. 13 (1), e0191160 (2018).</li><li>Llewellyn-Smith, I. J., Basbaum, A. I., Braz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+dynamic+synaptic+reorganization+after+GABAergic+precursor+cell+transplantation+into+adult+mouse+spinal+cord.">Long-term, dynamic synaptic reorganization after GABAergic precursor cell transplantation into adult mouse spinal cord.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (3), 480-495 (2018).</li><li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation.">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li></ol>

استخدام مصدر مناسب للخلايا الجذعية العصبية مهم جداً لعلماء الأعصاب. يمكن حصاد الخلايا الجذعية العصبية من مناطق مختلفة في الدماغ الجنين وأنها يمكن أن تولد أنواع محددة من الخلايا العصبية والخلايا الدبقية. هناك عدة طرق لتحريض تمايز الخلايا الجذعية العصبية حملها على توليد الخلايا الدبقية و?...

تتواجد الخلايا الجذعية العصبية (الود) في مناطق مختلفة من الدماغ الكبار والأجنة، ولديهم ميل لإنشاء أنواع مختلفة من الخلايا العصبية والخلايا الدبقية1. مناطق سوبفينتريكولار في المخ الثدييات الكبار2 ونيافة ganglionic في الدماغ الجنين بمجلس الأمن القومي المناطق الغنية3. في الدماغ، يسلم نيافة ganglionic معظم إينتيرنيورونس القشرية وخاصة جابايرجيك إينتيرنيورونس3. وهناك أيضا أساليب أقل الغازية لتوليد الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا الجذعية الجنينية (بتوليدا) أو استخدام الخلايا الجذعية المستحثة pluripotent (إيبسكس) التي تقلل من الطلب على الحيوانات. وعلى الرغم من حقيقة أن توليد الود من بتوليدا أو إيبسكس هو ممكن4،5، له بعض المزايا والعيوب مقارنة بعزل الخلايا الجذعية العصبية من الكبار أو الجنين الدماغ6،7، 8. البروتوكولات من أجل حفز التفريق بين بتوليدا وإيبسكس تجاه الخلايا العصبية تعمل دائماً الوقت والتكلفة المستهلكة ومعدل النجاح (70-80% نيستين الخلايا إيجابية)5 هو أقل مقارنة مع العزل مباشرة من الود من (الدماغ الحيواني أكثر من 99% نيستين الخلايا إيجابية)9. وعلاوة على ذلك، تفقد الخلايا الجذعية ميلها الاستقرار والتمايز الوراثي بعد عدة ممرات10،11. على الرغم من أن هناك تقارير أخرى جديدة حول التحويل المباشر للخلايا الجسدية في الود، هذه الخلايا هي المهندسة وراثيا ولا يمكن الوصول إليها بسهولة في كل مختبر12. ولذلك، لا يزال هناك طلب كبير لعزل الخلايا الجذعية العصبية من الدماغ الحيواني؛ فمن الممكن للحد من كمية الاستخدام الحيواني عن طريق تحسين التقنيات الجراحية. تقليل وقت الجراحية وتحسين التقنيات، فمن الممكن للحفاظ على الخلايا بعيداً عن الأضرار والحصول على أعلى معدل للود من كل الحيوانات.
نقدم لك هنا، أسلوب مبسط واستنساخه لعزل الخلايا الجذعية العصبية من الدماغ الجنين13 الماوس ه.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:942px;" width="941">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">15 mL tubes</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">352097</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">50 mL tubes</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Adson Forceps, 12 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">14226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">B27</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">17504-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">bFGF</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">F0291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">dish 10cm&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Dressing Forceps, 12.5 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">15908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Dumont Tweezers, 11 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">500342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">EGF</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Merck</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">100983&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Glutamate</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">G3291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Glutamax</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">goat anti rabbit FITC conjugated secondary antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">AP307F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">goat serum</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Heparin&#160;&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">h3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">HEPES</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">83264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">HEPES</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR">90909C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">insulinsyringe with 25-27 gauge Needle&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">SUPA medical</td>
			<td dir="LTR">A1SNL127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">laminin</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">sigma&#160;&#160;&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td dir="LTR" height="26" style="height:26px;width:389px;">MEM</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">M2279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td dir="LTR" height="26" style="height:26px;width:389px;">N2 supplement</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">NB medium</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">21103-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Non-essential amino acid (NEAA)</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">PBS without Ca and Mg</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR">20012050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Penicilin/ Streptomycin</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">5140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Poly-L-ornithine</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">&#160;P4957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse beta tubulin-III antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">T2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse GFAP antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">G4546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse Nestin antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">N5413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Scalpel Handle #3</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">500236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Scissors curve</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">14396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Scissors sharp straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">14192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Soybean trypsin inhibitor</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Roche</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">10109886001&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Tissue culture flasks, T25</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">BD</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Tissue culture flasks, T75</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">BD</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">Tween 20</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors,&#160; 8 cm, Straight&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td>14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR">M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of embryonic mouse neural stem cells

هي multipotent الخلايا الجذعية العصبية (الود) ويمكن أن تؤدي إلى ثلاثة أنواع الخلية الرئيسية للجهاز العصبي المركزي (CNS). الثقافة في المختبر ، والتوسع في الود توفير مصدر مناسب للخلايا لعلماء الأعصاب لدراسة وظيفة الخلايا العصبية والخلايا الدبقية جنبا إلى جنب مع التفاعلات الخاصة بها. وهناك عدة تقنيات الإبلاغ عنها لعزل الخلايا الجذعية العصبية من أدمغة الثدييات الكبار أو الجنين. أثناء عملية ميكروسورجيكال لعزل الود من مناطق مختلفة من الجهاز العصبي المركزي الأجنة، من المهم جداً للحد من الضرر لخلايا الدماغ للحصول على أعلى نسبة من الخلايا الجذعية حية وقابلة للتوسيع. تقنية ممكنة للحد من التوتر خلال عزل هذه الخلايا من المخ الجنين الماوس هو الحد وقت الجراحة. هنا، نحن إظهار تقنية المتقدمة لعزل السريع لهذه الخلايا من الماوس الجنين ه13 ganglionic نيافة. وتشمل الإجراءات الجراحية حصاد الأجنة الماوس13 ه من الرحم، وقطع fontanelle أمامي للجنين مع تلميح إبرة بنت، استخراج المخ من الجمجمة، ميكروديسيكشن الدماغ معزولة لحصاد نيافة جانجليونيك، تفكك الأنسجة المقطوع في المتوسط القومي للحصول على تعليق خلية مفردة، وأخيراً طلاء الخلايا في ثقافة تعليق لتوليد نيوروسفيريس.

الصغير-تشريح وعزل الخلية والثقافة نيوروسفيري- وهنا، قدمنا طريقة سريعة وفعالة للماوس ه13 الدماغ الجراحة الدقيقة وعزل الخلايا الجذعية العصبية. يوضح هذا المقال أنه من الممكن إزالة الدماغ كله من جمجمة جنين ماوس ه13 من خلال تمزق الجميلة في فونتانيلي أمامي...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

هنا، نحن نقدم تقنية microsurgical رواية لعزل الخلايا الجذعية العصبية من الماوس الجنين ه13 ganglionic نيافة.

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

الهدف من هذا البروتوكول الفيديو هو إنشاء بروتوكول المصدر وفعالة لجنينية ماوس العصبية الجذعية العزل والثقافة. مرحباً، أنا مريم صادقي زاده. أنا طالب ماجستير في علم الأحياء الخلوية والجزيئية في معهد رويان.اليوم أنا وزميلي نريد أن تظهر لك كيفية حصاد الخلايا الجذعية العصبية من 13 الجنين الماوس الماوس سماحة العقد. مرحباً، أنا "بهارير عليزاده-شورجستان". أنا طالب ماجستير في علم الأحياء الخلوية والجزيئية في قسم الخلايا الجذعية في معهد رويان للتكنولوجيا الحيوية.مرحباً، أنا رضا دهقاني- فارنامخاستي. كما أنني أدرس البيولوجيا الخلوية والجزيئية في معهد رويان. وتشمل العمليات الجراحية حصاد كل 13 جنين فأر من الرحم.قطع الجزء الأمامي من فونتانيل من الجنين مع طرف إبرة عازمة استخراج الدماغ من الجمجمة. تشريح الدماغ المعزول لجني الهجنة. تفكك الأنسجة المحصودة في خلية جذعية عصبية متوسطة للحصول على تعليق خلية واحدة.وأخيرا، خلايا الطلاء في ثقافة تعليق لتوليد الخلايا العصبية. تنظيف وتطهير الجلد من منطقة البطن عن طريق الرش مع 70٪ الإيثانول. السيطرة على الجلد إلى أعلى البطن ومن ثم قطع الجلد و تحتها الوجه مع مقص للكشف عن تجويف البطن وقرون الرحم.إزالة قرون الرحم التي تحتوي على الأجنة عن طريق مقص ونقلها إلى أنبوب مخروطي 50 مل تحتوي على 25 مل الباردة HEPES MEM العازلة. ضع الأنبوب المخروطي تحت غطاء تدفق اللامين. افتح الغطاء تحت غطاء السيارة.جلب قرون الرحم من الأنبوب، وشطف ثلاث مرات مع حجم كاف من الباردة الطازجة HEPES MEM العازلة للقضاء على الحطام والدم. نقل أنسجة الرحم إلى طبق بتري 10 سم تحتوي على 7 إلى 10 مل الباردة HEPES MEM العازلة. فتح قرون الرحم باستخدام مقص غرامة ونقل الأجنة إلى طبق جديد يحتوي على 7 إلى 10 مل من الباردة HEPES MEM العازلة.الآن ضع طبق 10 سم مع الأجنة تحت المجهر تشريح لعملية تشريح الدقيقة. ثني غيض من إبرة حقنة عن طريق دفع طرفها على مقبض شفرة مشرط الصلب. ثني طرف الإبرة حتى يتم عازمة على طرف في زاوية من 70 إلى 90 درجة.تحقق من طرف الإبرة تحت المجهر تشريح لرؤية الانحناء في طرف الإبرة. وبطبيعة الحال الأجنة لها موقف الجانبي في هذا. دون تغيير موقفهم، عقد الرقبة والجسم من الجنين مع ملقط غرامة ومن ثم إدراج الجزء عازمة من الإبرة في عمق الجزء الأمامي من fontanel من رأس الجنين.سيكون هناك نزيف صغير أو جلطة دموية هناك. حرك طرف الإبرة بشكل سطحي بينما الجزء المنحني داخل الانتفاخ نحو الجبهة ثم نحو مؤخرة الرأس. تأكد من قطع الجلد والجمجمة، وعدم تلف الدماغ الكامنة.دفع الجلد مع طرف إبرة بشكلٍ مُنَمَرِيًا لكشف الدماغ. أدخل الإبرة من الجانب الجانبي للجلد إلى أسفل الإطار من الجانب الجانبي للجلد إلى المنطقة الواقعة تحت الدماغ. ثم قم بإزالة الدماغ من فروة الرأس هذه عن طريق دفعه للخروج من الجمجمة المتشَقِخة.تظهر سماحة العقد بوضوح في الفيديو مع أجزائها الوسيطة والمئيمة. عقد الدماغ ثابت باستخدام ملقط الرعاية ومن ثم استخدام microscissors لقطع قشرة كل نصف الكرة الأرضية لفضح سماحة العقدة. عقد الدماغ والمكان تشريح سماحة العقدية في أنبوب الطرد المركزي 15 مل التي تحتوي على وسائل الإعلام الخلايا الجذعية العصبية.كرر هذا الإجراء حتى يتم تشريح جميع الدماغ الجزئي. قطع تشريح الانسة العقدية عن طريق وضع طرف ماصة ضد الجزء السفلي من الأنبوب وماصة تعليق صعودا وهبوطا لمدة 2 5 مرات لتفريق الأنسجة للحصول على تعليق خلية واحدة. الطرد المركزي تعليق في 110 غرام لمدة 5 دقائق.إزالة فائقة و resuspend الخلايا في 1 مل من 0.05٪ أنبوب في EDTA. احتضان تعليق الخلية في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. ثم إضافة حجم مكافئ من مثبطات التربسين فول الصويا لوقف نشاط التربسين.Pipette تعليق الخلية صعودا وهبوطا للتأكد من أن التربسين قد تم تعطيل تماما. الطرد المركزي تعليق الخلية في 110 غرام لمدة 5 دقائق. إزالة فائقة و resuspend الخلايا في 1 مل من الخلايا الجذعية العصبية كاملة المتوسطة وعدد عدد الخلايا.لوحة الخلايا في الخلايا الجذعية العصبية المتوسطة في حجم مناسب زراعة النسيج قارورة. نقل 5 مل من 2T25، 20 مل إلى T75، و 40 مل إلى قارورة T175. ستظهر القطاعات العصبية بعد 3 أيام من الاستزراع عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة بنسبة 5٪ من ثاني أكسيد الكربون.وامتصاص الاستزراع العصبي، نقل الوسيلة ذات الفوفيرات العصبية المعلقة إلى جهاز الطرد المركزي إلى جهاز طرد مركزي عند 110 غ لمدة 5 دقائق، ثم تخلص من المكبر. في 1 مل من 0.05٪ تريبسين EDTA واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. ثم تعطيل التربسين باستخدام مثبطات التيروبسين الصويا والماصات في الخلايا العصبية بلطف صعودا وهبوطا لجعلها خلايا واحدة.الطرد المركزي تعليق الخلية في 110 غرام لمدة 5 دقائق. تجاهل السوبر و resuspend الخلايا في 1 مل من الخلايا الجذعية العصبية المتوسطة. هذه الخلايا جاهزة لثقافة الخطوة التالية أو الثقافة على سطح صفح ومغلفة بالكامل لإجراء تجارب متقدمة.من خلال زراعة مليون خلية جذعية عصبية أولية بعد سبعة أيام، سيزداد عدد الخلايا إلى ثلاثة إلى أربعة ملايين. بعد ستة إلى سبعة أيام يجب أن تقيس المجالات ما بين 150 إلى 200 ميكرومتر في القطر وستكون جاهزة للثقافة الفرعية على الأطباق المغلفة بولي أو نيثين في غياب bFGF وEGF للتمايز العصبي. تظهر نتائج قياس التدفق للخلايا أن ما يقرب من 95٪ من الخلايا التي تشكل الخلايا العصبية كانت إيجابية Nestin وهو علامة معروفة للخلايا الجذعية العصبية.الاختبارات باستخدام بيتا tubulin الثالث و ganglio الأجسام المضادة للبروتين الليفي تكشف عن أنه من خلال زراعة الخلايا الجذعية العصبية على سطح المغلفة حول 94٪ يظهر النمط الظاهري العصبي وحوالي 5٪ تظهر النمط الظاهري الدالسي. في هذا الفيديو القصير فقط تقنية مختبر للعزل السريع للخلايا الجذعية العصبية من 13 وسمية جانج الجنين الماوس. آمل أن تكون ناجحاً في ثقافة الخلايا الجذعية العصبية الخاصة بك.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

العزل والتوسع في الخلايا الجذعية العصبية الكبار باستخدام الفحص Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

تأسيس الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية الثقافة باستخدام الفحص Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

العزلة وثقافة العصبية الخلايا الجذعية من بصيلات الشعر كريست الإنسان

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lectin القائم على عزل وثقافة حركية مماثلة الجنينية الماوس

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

العزلة والثقافة من خلايا الفئران العصبية الجنينية: بروتوكول سريعة

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

توسيع الجنينية والكبار الخلايا الجذعية العصبية من قبل<em&gt; في الرحم</em&gt; الصعق الكهربائي أو حقن التجسيمي الفيروسية

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...