Name: isolation and culture of embryonic mouse neural stem cells
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00
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इस काम को रोयन् इंस्टीट्यूट ने सपोर्ट किया था ।

पशु पर सभी सर्जरी और प्रक्रियाओं रोयन् संस्थान, तेहरान, ईरान की पशु नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. शल्य चिकित्सा उपकरणों की तैयारी, बफर (HEPES-मेम), सेल संस्कृति मीडिया और सेल संस्कृति ...

<ol>
	<li>Navarro Quiroz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Signaling+in+Neuronal+Stem+Cells.">Cell Signaling in Neuronal Stem Cells.</a> Cells. 7 (7), (2018).</li><li>Choi, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Thrombin+Receptor+Restricts+Subventricular+Zone+Neural+Stem+Cell+Expansion+and+Differentiation.">The Thrombin Receptor Restricts Subventricular Zone Neural Stem Cell Expansion and Differentiation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9360 (2018).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+novel+rat+neural+progenitor+clone+that+expresses+Dlx+family+transcription+factors+and+gives+rise+to+functional+GABAergic+neurons+in+culture.">Isolation of a novel rat neural progenitor clone that expresses Dlx family transcription factors and gives rise to functional GABAergic neurons in culture.</a> Developmental Neurobiology. 72 (6), 805-820 (2012).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+phenotypically+diverse+neural+culture+from+hESC+by+combining+adherent+and+dissociation+methods.">Derivation of phenotypically diverse neural culture from hESC by combining adherent and dissociation methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2018).</li><li>Dhara, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+progenitor+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+cultures.">Human neural progenitor cells derived from embryonic stem cells in feeder-free cultures.</a> Differentiation. 76 (5), 454-464 (2008).</li><li>Aligholi, H., Hassanzadeh, G., Gorji, A., Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Biopsy+Method+for+Isolating+Neural+Stem+Cells+from+the+Subventricular+Zone+of+the+Adult+Rat+Brain+for+Autologous+Transplantation+in+CNS+Injuries.">A Novel Biopsy Method for Isolating Neural Stem Cells from the Subventricular Zone of the Adult Rat Brain for Autologous Transplantation in CNS Injuries.</a> Methods in Molecular Biology. 1462, 711-731 (2016).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+embryonic+mouse+neural+stem+cell+culture+using+the+neurosphere+assay.">Establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), (2011).</li><li>Ferrari, D., Binda, E., De Filippis, L., Vescovi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neural+stem+cells+from+neural+tissues+using+the+neurosphere+technique.">Isolation of neural stem cells from neural tissues using the neurosphere technique.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. , (2010).</li><li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse.">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nature Protocols. 7 (2012), (2005).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passage+Number+is+a+Major+Contributor+to+Genomic+Structural+Variations+in+Mouse+iPSCs.">Passage Number is a Major Contributor to Genomic Structural Variations in Mouse iPSCs.</a> Stem Cells and Development. 32 (10), 2657-2667 (2014).</li><li>Diaferia, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Chromosomal+Analysis+of+Cultured+Mouse+Neural+Stem+Cell+Lines.">Systematic Chromosomal Analysis of Cultured Mouse Neural Stem Cell Lines.</a> Stem Cells and Development. 20 (8), 1411-1423 (2011).</li><li>Hemmer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Neural+Stem+Cells+Achieve+Long-Term+Survival+and+Functional+Integration+in+the+Adult+Mouse+Brain.">Induced Neural Stem Cells Achieve Long-Term Survival and Functional Integration in the Adult Mouse Brain.</a> Stem Cell Reports. 3 (3), 423-431 (2014).</li><li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+Cytometry+Protocols+for+Surface+and+Intracellular+Antigen+Analyses+of+Neural+Cell+Types.">Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), 52241 (2014).</li><li>Zhang, Z., Wang, Z., Rui, W., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnesium+lithospermate+B+promotes+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+in+vitro+and+enhances+neurogenesis+in+vivo.">Magnesium lithospermate B promotes proliferation and differentiation of neural stem cells in vitro and enhances neurogenesis in vivo.</a> Tissue and Cell. 53, 8-14 (2018).</li><li>Zilkha-Falb, R., Gurevich, M., Hanael, E., Achiron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prickle1+as+positive+regulator+of+oligodendrocyte+differentiation.">Prickle1 as positive regulator of oligodendrocyte differentiation.</a> Neuroscience. 364, 107-121 (2017).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte+differentiation+from+human+neural+stem+cells:+A+novel+role+for+c-Src.">Oligodendrocyte differentiation from human neural stem cells: A novel role for c-Src.</a> Neurochemistry International. 120, 21-32 (2018).</li><li>Palanisamy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+alters+cell+fate+selection+of+rat+neural+progenitor+cells+in+vitro.">Oxytocin alters cell fate selection of rat neural progenitor cells in vitro.</a> PLoS ONE. 13 (1), e0191160 (2018).</li><li>Llewellyn-Smith, I. J., Basbaum, A. I., Braz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+dynamic+synaptic+reorganization+after+GABAergic+precursor+cell+transplantation+into+adult+mouse+spinal+cord.">Long-term, dynamic synaptic reorganization after GABAergic precursor cell transplantation into adult mouse spinal cord.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (3), 480-495 (2018).</li><li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation.">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li></ol>

तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के एक उपयुक्त स्रोत का उपयोग neuroscientists के लिए बहुत महत्वपूर्ण है । तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं भ्रूण मस्तिष्क के विभिंन क्षेत्रों से काटा जा सकता है और वे ंयूरॉंस और glial कोशिकाओं के वि?...

तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (एनएससी) वयस्क और भ्रूण मस्तिष्क के विभिन्न क्षेत्रों में रहते हैं और वे न्यूरॉन्स और glial सेल1के विभिन्न प्रकार उत्पन्न करने के लिए एक प्रवृत्ति है. subventricular जोन में वयस्क स्तनधारी ब्रेन2 और ganglionic उभार भ्रूण मस्तिष्क में एनएससी समृद्ध क्षेत्र3हैं । विकासशील मस्तिष्क में, ganglionic उभार cortical न्यूरॉन्स की सबसे अधिक बचाता है और विशेष रूप से GABAergic न्यूरॉन्स3. वहां भी कर रहे है कम इनवेसिव विधि भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ESCs) या प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (iPSCs) है कि पशु उपयोग के लिए मांग को कम से स्टेम कोशिका पीढ़ी के लिए । तथ्य यह है कि ESCs या iPSCs से एनएससी पैदा करने के बावजूद4संभव है,5, यह कुछ फायदे और नुकसान है तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के अलगाव की तुलना में वयस्क या भ्रूण मस्तिष्क6,7से, 8. न्यूरॉन phenotypes की ओर ESCs और iPSCs के भेदभाव उत्प्रेरण के लिए प्रोटोकॉल हमेशा समय और लागत लेने वाले हैं और सफलता की दर (70-80% Nestin सकारात्मक कोशिकाओं)5 पशु मस्तिष्क से एनएससी के प्रत्यक्ष अलगाव के साथ तुलना में कम है ( ९९% से अधिक Nestin धनात्मक कोशिकाएं)9. इसके अलावा, स्टेम सेल कई मार्ग10,11के बाद उनके आनुवंशिक स्थिरता और भेदभाव की प्रवृत्ति खो देते हैं । हालांकि वहां एनएससी में दैहिक कोशिकाओं के प्रत्यक्ष रूपांतरण के बारे में अंय नई रिपोर्ट कर रहे हैं, इन कोशिकाओं को आनुवंशिक रूप से इंजीनियर है और हर12प्रयोगशाला में आसानी से सुलभ नहीं हैं । इसलिए, अभी भी पशु मस्तिष्क से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक बड़ी मांग है; यह शल्य चिकित्सा तकनीक में सुधार के द्वारा पशु उपयोग की मात्रा को कम करने के लिए संभव है । शल्य चिकित्सा समय को कम करने और तकनीक में सुधार करके, कोशिकाओं को नुकसान से दूर रखने के लिए और प्रत्येक जानवर से एनएससी की उच्चतम दर प्राप्त करने के लिए संभव है ।
यहां, हम माउस ई13 भ्रूण मस्तिष्क से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक सरलीकृत और reproducible तकनीक परिचय ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:942px;" width="941">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">15 mL tubes</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">352097</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">50 mL tubes</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Adson Forceps, 12 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">14226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">B27</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">17504-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">bFGF</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">F0291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">dish 10cm&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Dressing Forceps, 12.5 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">15908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Dumont Tweezers, 11 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">500342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">EGF</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Merck</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">100983&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Glutamate</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">G3291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Glutamax</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">goat anti rabbit FITC conjugated secondary antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">AP307F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">goat serum</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Heparin&#160;&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">h3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">HEPES</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">83264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">HEPES</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR">90909C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">insulinsyringe with 25-27 gauge Needle&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">SUPA medical</td>
			<td dir="LTR">A1SNL127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">laminin</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">sigma&#160;&#160;&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td dir="LTR" height="26" style="height:26px;width:389px;">MEM</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">M2279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td dir="LTR" height="26" style="height:26px;width:389px;">N2 supplement</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">NB medium</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">21103-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Non-essential amino acid (NEAA)</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">PBS without Ca and Mg</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR">20012050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Penicilin/ Streptomycin</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">5140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Poly-L-ornithine</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">&#160;P4957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse beta tubulin-III antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">T2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse GFAP antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">G4546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse Nestin antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">N5413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Scalpel Handle #3</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">500236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Scissors curve</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">14396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Scissors sharp straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">14192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Soybean trypsin inhibitor</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Roche</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">10109886001&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Tissue culture flasks, T25</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">BD</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Tissue culture flasks, T75</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">BD</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">Tween 20</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors,&#160; 8 cm, Straight&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td>14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR">M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of embryonic mouse neural stem cells

तंत्रिका स्टेम सेल (एनएससी) multipotent है और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) के तीन प्रमुख कोशिका प्रकार को जंम दे सकते हैं । इन विट्रो में संस्कृति और एनएससी के विस्तार neuroscientists के लिए कोशिकाओं का एक उपयुक्त स्रोत प्रदान करने के लिए न्यूरॉन्स और glial कोशिकाओं के समारोह के साथ उनकी बातचीत का अध्ययन. वयस्क या भ्रूण स्तनधारी दिमाग से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के लिए कई तकनीक की सूचना दी । भ्रूण सीएनएस के विभिन्न क्षेत्रों से एनएससी को अलग करने के लिए microsurgical आपरेशन के दौरान, यह जीवित और विस्तार योग्य स्टेम कोशिकाओं के उच्चतम अनुपात प्राप्त करने के लिए मस्तिष्क की कोशिकाओं को नुकसान को कम करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है । माउस भ्रूण मस्तिष्क से इन कोशिकाओं के अलगाव के दौरान तनाव में कमी के लिए एक संभव तकनीक शल्य चिकित्सा समय की कमी है । यहां, हम ई13 माउस भ्रूण ganglionic उभार से इन कोशिकाओं के तेजी से अलगाव के लिए एक विकसित तकनीक का प्रदर्शन । सर्जिकल प्रक्रियाओं ई गर्भाशय से13 चूहे भ्रूण कटाई शामिल हैं, एक तुला सुई टिप के साथ भ्रूण के ललाट ब्रह्मारंध्र काटने, खोपड़ी से मस्तिष्क निकालने, अलग मस्तिष्क के microdissection ganglionic उभार फसल के लिए, पृथक्करण एक सेल निलंबन हासिल करने के लिए एनएससी माध्यम में काटा ऊतक के, और अंत में निलंबन संस्कृति में कोशिकाओं चढ़ाना neurospheres उत्पंन करने के लिए ।

सूक्ष्म विच्छेदन, कोशिका अलगाव और Neurosphere संस्कृति । यहां, हम माउस ई13 मस्तिष्क microsurgery और तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक तेजी से और कारगर तरीका प्रस्तुत किया । इस लेख से पता ?...

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Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

यहां, हम ई13 माउस भ्रूण ganglionic उभार से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक उपंयास microsurgical तकनीक परिचय ।

अलगाव और भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं की संस्कृति

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

इस वीडियो प्रोटोकॉल का उद्देश्य भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम सेल अलगाव और संस्कृति के लिए एक स्रोत और कुशल प्रोटोकॉल की स्थापना है । नमस्ते, मैं मरयम सादेगी-ज़देह हूं। मैं रॉयन संस्थान में सेलुलर और आणविक जीव विज्ञान का एक मास्टर छात्र हूं ।आज मैं और मेरे सहयोगी आपको दिखाना चाहते हैं कि 13 भ्रूण माउस गैंगलियोनिक श्रेष्ठता से तंत्रिका स्टेम सेल को कैसे काटा जाता है। हैलो, मैं बहारेह अलीजादेह-शोरजेस्तान हूं। मैं जैव प्रौद्योगिकी के लिए Royan संस्थान के स्टेम सेल विभाग में सेलुलर और आणविक जीव विज्ञान के लिए एक मास्टर छात्र हूं ।हैलो, मैं रजा देहघानी-वरनामखास्ती हूं। इसके अलावा मैं Royan संस्थान में सेलुलर और आणविक जीव विज्ञान का अध्ययन कर रहा हूं । सर्जिकल प्रक्रियाओं में गर्भाशय से प्रत्येक 13 माउस भ्रूण की कटाई शामिल है।खोपड़ी से मस्तिष्क को निकालने के लिए एक तुला सुई टिप के साथ भ्रूण के फ़ॉन्टेनेल के सामने काटना। गैंगलियोनिक श्रेष्ठता को काटने के लिए अलग-थलग मस्तिष्क का सूक्ष्म विच्छेदन। एक एकल कोशिका निलंबन हासिल करने के लिए एक तंत्रिका स्टेम सेल माध्यम में काटा ऊतक का वियोजन।और अंत में, तंत्रिका कोशिकाओं को उत्पन्न करने के लिए निलंबन संस्कृति में कोशिकाओं को चढ़ाना। 70% इथेनॉल के साथ छिड़काव करके पेट क्षेत्र की त्वचा को साफ और कीटाणुरहित करें। त्वचा को ऊपर की ओर पेट को नियंत्रित करें और फिर त्वचा को काटें और पेट की गुहा और गर्भाशय सींग को उजागर करने के लिए कैंची से चेहरे को रेखांकित किया।कैंची द्वारा भ्रूण युक्त गर्भाशय सींग निकालें और उन्हें 25 मिलीलीटर ठंड HEPES MEM बफर युक्त 50 मिलीलीटर शंकु ट्यूब में स्थानांतरित करें। लेमिनल फ्लो हुड के नीचे शंकु नली रखें। हुड के नीचे टोपी खोलें।गर्भाशय सींग ट्यूब से बाहर लाओ, और मलबे और रक्त को खत्म करने के लिए ताजा ठंड HEPES MEM बफर की पर्याप्त मात्रा के साथ तीन बार कुल्ला । गर्भाशय के ऊतकों को 7 से 10 मिलीलीटर ठंडे हेप्स एमईएम बफर युक्त 10 सेमी पेट्री डिश में स्थानांतरित करें। ठीक कैंची का उपयोग कर गर्भाशय सींग खोलें और 7 से 10 मिलीलीटर ठंडे HEPES MEM बफर युक्त एक नई डिश में भ्रूण स्थानांतरित करें।अब माइक्रो विच्छेदन ऑपरेशन के लिए विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे भ्रूण के साथ 10 सेमी डिश डाल दें। एक स्टील स्केलपेल ब्लेड हैंडल पर अपनी नोक को धक्का देकर सिरिंज सुई की नोक को मोड़ें। सुई की नोक को तब तक मोड़ें जब तक टिप 70 से 90 डिग्री के कोण पर झुक न जाए।सुई की नोक पर मोड़ देखने के लिए विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे सुई की नोक की जांच करें। स्वाभाविक रूप से भ्रूण इस में एक पार्श्व स्थिति है । अपनी स्थिति को बदले बिना, ठीक संदंश के साथ भ्रूण की गर्दन और शरीर आयोजित किया और फिर भ्रूण सिर के फ़ॉन्टनेल के सामने गहरी सुई के तुला हिस्सा डालें।वहां एक छोटा सा रक्तस्राव या खून का थक्का होगा। सुई टिप को सतही रूप से ले जाएं जबकि तुला हिस्सा माथे की ओर उभार के अंदर है और फिर सिर के पीछे की ओर। त्वचा और खोपड़ी के माध्यम से कटौती करने के लिए सुनिश्चित करें, और अंतर्निहित मस्तिष्क को नुकसान नहीं है ।मस्तिष्क को उजागर करने के लिए त्वचा को बाद में सुई टिप के साथ पुश करें। त्वचा के पार्श्व पक्ष से सुई को त्वचा के पार्श्व पक्ष से मस्तिष्क के नीचे के क्षेत्र में फ्रेम के नीचे डालें। और फिर इस खोपड़ी से मस्तिष्क को विच्छेदित खोपड़ी से बाहर आने के लिए धक्का देकर हटा दें।गैंगलियोनिक एमिनेंस को वीडियो में अपने मध्य और पार्श्व भागों के साथ स्पष्ट रूप से दिखाया गया है । देखभाल संदंश का उपयोग कर मस्तिष्क स्थिर आयोजित किया और फिर माइक्रो कैंची का उपयोग करने के लिए प्रत्येक गोलार्द्ध के प्रांतस्था में कटौती करने के लिए गैंगलियोनिक श्रेष्ठता का पर्दाफाश । मस्तिष्क का आयोजन किया और तंत्रिका स्टेम सेल मीडिया युक्त 15 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में गैंगलियोनिक श्रेष्ठता को रखा।इस प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि सभी मस्तिष्क को सूक्ष्म विच्छेदित न किया जाए। ट्यूब के नीचे के खिलाफ पिपेट टिप रखकर विच्छेदित गैंगलियोनिक श्रेष्ठता को काटें और एक एकल कोशिका निलंबन प्राप्त करने के लिए ऊतक को तोड़ने के लिए निलंबन को 2 5 बार ऊपर और नीचे पिपेट करें। 5 मिनट के लिए 110 ग्राम पर निलंबन अपकेंद्रित्र करें।सुपरनेट निकालें और ईडीटीए में 0.05% ट्यूब के 1 मिलीलीटर में कोशिकाओं को फिर से खर्च करें। सेल निलंबन को 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस में इनक्यूबेट करें। और फिर ट्राइप्सिन गतिविधि को रोकने के लिए सोयाबीन ट्राइप्सिन अवरोधक की बराबर मात्रा जोड़ें।यह सुनिश्चित करने के लिए कि ट्राइप्सिन पूरी तरह से निष्क्रिय हो गया है, सेल निलंबन को ऊपर और नीचे पिपेट करें। 5 मिनट के लिए 110 ग्राम पर सेल निलंबन अपकेंद्रित्र करें। सुपरनैंट निकालें और कोशिकाओं को 1 मिलीलीटर पूर्ण तंत्रिका स्टेम सेल माध्यम में फिर से खर्च करें और कोशिकाओं की संख्या गिनें।उपयुक्त आकार ऊतक संस्कृति फ्लास्क में तंत्रिका स्टेम सेल माध्यम पर कोशिकाओं प्लेट। 2T25 के 5 मिलीलीटर, T75 के लिए 20 मिलीलीटर, और T175 फ्लास्क के लिए 40 मिलीलीटर स्थानांतरित करें। न्यूरोस्फीयर 5% CO2 के साथ एक आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर 3 दिनों की संस्कृति के बाद दिखाई देगा।संस्कृति को चूसने के लिए, निलंबित न्यूरोस्फीयर के साथ माध्यम को 5 मिनट के लिए 110 ग्राम पर अपकेंद्रित्र करने के लिए अपकेंद्रित्र में स्थानांतरित करें, और फिर सुपरनैंट को त्याग दें। 0.05% ट्राइप्सिन ईडीटीए के 1 मिलीलीटर पर और 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट। फिर सोयाबेन टायर्पसिन अवरोधक का उपयोग करके ट्राइप्सिन को निष्क्रिय करें और उन्हें एकल कोशिकाओं बनाने के लिए न्यूरोस्फीयर को धीरे-धीरे ऊपर और नीचे पिपेट करें।5 मिनट के लिए 110 ग्राम पर सेल निलंबन अपकेंद्रित्र करें। सुपरनेट को त्यागें और कोशिकाओं को 1 मिलीलीटर तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं माध्यम में फिर से खर्च करें। ये कोशिकाएं उन्नत प्रयोगों के लिए टुकड़े टुकड़े और पूरी तरह से लेपित सतह पर अगले कदम संस्कृति या संस्कृति के लिए तैयार हैं।सात दिनों के बाद १,०,० प्राथमिक तंत्रिका स्टेम सेल की खेती करके कोशिकाओं की संख्या बढ़कर तीन से चार लाख हो जाएगी । छह से सात दिनों के बाद क्षेत्रों व्यास में १५० से २०० माइक्रोमीटर के बीच उपाय करना चाहिए और बीडब्ल्यूनल भेदभाव के लिए टीएफजीएफ और ईजीएफ की अनुपस्थिति में टुकड़े टुकड़े पाली पक्षी कोटेड व्यंजन पर उप संस्कृति के लिए तैयार हो जाएगा । प्रवाह साइटोमेट्री परख परिणाम बताते हैं कि न्यूरोस्फीयर का गठन करने वाली कोशिकाओं में से 95% के पास नेस्टिन सकारात्मक थे जो तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के लिए एक ज्ञात मार्कर है।बीटा ट्यूबुलिन III और गैंगलियो रेशेदार प्रोटीन एंटीबॉडी का उपयोग करने से पता चलता है कि 94% के आसपास लेपित सतह पर तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं की खेती करके न्यूरोनल फेनोटाइप दिखाया गया है और लगभग 5% ग्लियल फेनोटाइप दिखाते हैं। बस इस छोटे से वीडियो में 13 माउस भ्रूण गैंगलियोनिक श्रेष्ठता से तंत्रिका स्टेम सेल के तेजी से अलगाव के लिए एक प्रयोगशाला तकनीक । मुझे आशा है कि आप अपने तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृति में सफलता होगी।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

विच्छेदन और भ्रूणीय स्पाइनल कॉर्ड से Commissural न्यूरॉन्स की संस्कृति

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

अलगाव और वयस्क माउस तंत्रिका स्टेम सेल के विस्तार Neurosphere परख का उपयोग

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृति की स्थापना Neurosphere परख का उपयोग

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

अलगाव और तंत्रिका शिखा मानव बालों के रोम से स्टेम सेल के संस्कृति

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lectin आधारित और माउस भ्रूणीय motoneurons के अलगाव संस्कृति

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

अलगाव और चूहा भ्रूण तंत्रिका कोशिकाओं की संस्कृति: एक त्वरित प्रोटोकॉल

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

भ्रूण और वयस्क तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के द्वारा विस्तार<em&gt; Utero में</em&gt; Electroporation या वायरल Stereotaxic इंजेक्शन

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

अलगाव और भ्रूण murine तंत्रिका ट्यूब से तंत्रिका शिखा कोशिकाओं की संस्कृति

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

भ्रूण अग्रमस्तिष्क से endothelial कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

एक माउस, दो संस्कृतियों: अलगाव और वयस्क तंत्रिका की संस्कृति व्यक्तिगत चूहों के दो तंत्रिकाजन्य क्षेत्रों से स्टेम सेल

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...