Name: isolation and culture of embryonic mouse neural stem cells
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells at JoVE.com

Bu eser Royan Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

Tüm ameliyatları ve hayvan ilgili yordamlar Royan Enstitüsü, Tahran, Iran hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. cerrahi aletler, arabellek (HEPES-MEM), hücre kültürü medya ve hücre kültür tabak yıkama hazırlanması
<ol><li>Cerrahi alet (makas, neşter bıçak sapı ve forseps) tarafından onları rutin sterilizasyon yönergeleri dayalı ısıyla sterilize.</li>
	<li>HEPES-MEM arabellek yeterli bir hacmi hazırlamak (yaklaşık 100 mL her hamile fareler için yeter). ...

<ol>
	<li>Navarro Quiroz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Signaling+in+Neuronal+Stem+Cells.">Cell Signaling in Neuronal Stem Cells.</a> Cells. 7 (7), (2018).</li><li>Choi, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Thrombin+Receptor+Restricts+Subventricular+Zone+Neural+Stem+Cell+Expansion+and+Differentiation.">The Thrombin Receptor Restricts Subventricular Zone Neural Stem Cell Expansion and Differentiation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9360 (2018).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+novel+rat+neural+progenitor+clone+that+expresses+Dlx+family+transcription+factors+and+gives+rise+to+functional+GABAergic+neurons+in+culture.">Isolation of a novel rat neural progenitor clone that expresses Dlx family transcription factors and gives rise to functional GABAergic neurons in culture.</a> Developmental Neurobiology. 72 (6), 805-820 (2012).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+phenotypically+diverse+neural+culture+from+hESC+by+combining+adherent+and+dissociation+methods.">Derivation of phenotypically diverse neural culture from hESC by combining adherent and dissociation methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2018).</li><li>Dhara, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+progenitor+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+cultures.">Human neural progenitor cells derived from embryonic stem cells in feeder-free cultures.</a> Differentiation. 76 (5), 454-464 (2008).</li><li>Aligholi, H., Hassanzadeh, G., Gorji, A., Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Biopsy+Method+for+Isolating+Neural+Stem+Cells+from+the+Subventricular+Zone+of+the+Adult+Rat+Brain+for+Autologous+Transplantation+in+CNS+Injuries.">A Novel Biopsy Method for Isolating Neural Stem Cells from the Subventricular Zone of the Adult Rat Brain for Autologous Transplantation in CNS Injuries.</a> Methods in Molecular Biology. 1462, 711-731 (2016).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+embryonic+mouse+neural+stem+cell+culture+using+the+neurosphere+assay.">Establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), (2011).</li><li>Ferrari, D., Binda, E., De Filippis, L., Vescovi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neural+stem+cells+from+neural+tissues+using+the+neurosphere+technique.">Isolation of neural stem cells from neural tissues using the neurosphere technique.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. , (2010).</li><li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse.">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nature Protocols. 7 (2012), (2005).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passage+Number+is+a+Major+Contributor+to+Genomic+Structural+Variations+in+Mouse+iPSCs.">Passage Number is a Major Contributor to Genomic Structural Variations in Mouse iPSCs.</a> Stem Cells and Development. 32 (10), 2657-2667 (2014).</li><li>Diaferia, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Chromosomal+Analysis+of+Cultured+Mouse+Neural+Stem+Cell+Lines.">Systematic Chromosomal Analysis of Cultured Mouse Neural Stem Cell Lines.</a> Stem Cells and Development. 20 (8), 1411-1423 (2011).</li><li>Hemmer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Neural+Stem+Cells+Achieve+Long-Term+Survival+and+Functional+Integration+in+the+Adult+Mouse+Brain.">Induced Neural Stem Cells Achieve Long-Term Survival and Functional Integration in the Adult Mouse Brain.</a> Stem Cell Reports. 3 (3), 423-431 (2014).</li><li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+Cytometry+Protocols+for+Surface+and+Intracellular+Antigen+Analyses+of+Neural+Cell+Types.">Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), 52241 (2014).</li><li>Zhang, Z., Wang, Z., Rui, W., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnesium+lithospermate+B+promotes+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+in+vitro+and+enhances+neurogenesis+in+vivo.">Magnesium lithospermate B promotes proliferation and differentiation of neural stem cells in vitro and enhances neurogenesis in vivo.</a> Tissue and Cell. 53, 8-14 (2018).</li><li>Zilkha-Falb, R., Gurevich, M., Hanael, E., Achiron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prickle1+as+positive+regulator+of+oligodendrocyte+differentiation.">Prickle1 as positive regulator of oligodendrocyte differentiation.</a> Neuroscience. 364, 107-121 (2017).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligodendrocyte+differentiation+from+human+neural+stem+cells:+A+novel+role+for+c-Src.">Oligodendrocyte differentiation from human neural stem cells: A novel role for c-Src.</a> Neurochemistry International. 120, 21-32 (2018).</li><li>Palanisamy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+alters+cell+fate+selection+of+rat+neural+progenitor+cells+in+vitro.">Oxytocin alters cell fate selection of rat neural progenitor cells in vitro.</a> PLoS ONE. 13 (1), e0191160 (2018).</li><li>Llewellyn-Smith, I. J., Basbaum, A. I., Braz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+dynamic+synaptic+reorganization+after+GABAergic+precursor+cell+transplantation+into+adult+mouse+spinal+cord.">Long-term, dynamic synaptic reorganization after GABAergic precursor cell transplantation into adult mouse spinal cord.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (3), 480-495 (2018).</li><li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation.">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li></ol>

Nöral kök hücrelerin uygun bir kaynak kullanarak nörologlar için çok önemlidir. Sinir kök hücreleri embriyo beyin farklı bölgelerinden hasat edilecek ve nöronlar ve Gliyal hücreler belirli türleri oluşturabilir. İndüksiyon farklılaşma nöral kök hücrelerin olgun nöronlar ve Gliyal hücreler oluşturmak için onları ikna etmek için birkaç yöntem vardır. Belirli koşullar ve trofik faktör alayı altında onlar nöronlar14, oligodendrocytes15,<...

Sinir kök hücreleri (NSCs) Yetişkin ve embriyo beyin farklı bölgelerinde bulunan ve farklı nöronlar ve gliyal hücreye1oluşturmak için bir eğilim vardır. 2 yetişkin memeli beyin subventricular bölgeler ve embriyo beyinde ganglionic Hazretleri NSC zengin bölgeleri3olabilir. Gelişmekte olan beyin, ganglionic itibar kortikal interneurons ve özellikle GABAergic interneurons3çoğunu sağlar. Ayrıca daha az invaziv yöntem vardır embriyonik kök hücrelerden (ESCs) sinir kök hücre üretimi için veya hayvan talebi azaltmak indüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPSCs) kullanın. NSCs ESCs veya iPSCs üreten olası4,5olması rağmen bazı avantajları ve dezavantajları sinir kök hücreleri yalıtım için yetişkin veya embriyo beyin6,7göre vardır, 8. ESCs ve iPSCs nöronal fenotipleri doğru farklılaşma inducing iletişim kurallarını her zaman zaman ve maliyet tüketen ve başarı (% 70-80 Nestin pozitif hücrelerinin)5 oranı düşük doğrudan NSCs izolasyonu hayvan beyin () ile karşılaştırıldığında fazla %99 Nestin pozitif hücrelerinin)9. Ayrıca, kök hücrelerin genetik onların istikrar ve farklılaşma eğilimi sonra çeşitli pasajlar10,11kaybetmek. NSCs içine somatik hücre doğrudan dönüşüm hakkında diğer yeni raporlar olsa bile, bu hücrelerin genetik mühendisliğiyle ve her laboratuvar12' kolayca erişilebilir değildir. Bu nedenle, hala izolasyon-in hayvan beyin sinir kök hücreleri için büyük bir talep var; cerrahi teknikler geliştirerek hayvan kullanımı miktarını azaltmak mümkündür. Cerrahi süresini azaltmak ve teknikleri geliştirmek, hücreler zarar uzak tutmak ve NSCs en yüksek oranı her hayvandan elde etmek mümkündür.
Burada, fare E13 embriyo beyinden yalıtım nöral kök hücrelerin teknik bir Basitleştirilmiş ve tekrarlanabilir tanıtmak.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:942px;" width="941">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">15 mL tubes</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">352097</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">50 mL tubes</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR">352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Adson Forceps, 12 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">14226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">B27</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">17504-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">bFGF</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">F0291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">dish 10cm&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Falcon</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Dressing Forceps, 12.5 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">15908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Dumont Tweezers, 11 cm, Straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">500342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">EGF</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Merck</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">100983&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Glutamate</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">G3291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Glutamax</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">goat anti rabbit FITC conjugated secondary antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">AP307F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">goat serum</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Heparin&#160;&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">h3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">HEPES</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">83264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">HEPES</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR">90909C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">insulinsyringe with 25-27 gauge Needle&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">SUPA medical</td>
			<td dir="LTR">A1SNL127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">laminin</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">sigma&#160;&#160;&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td dir="LTR" height="26" style="height:26px;width:389px;">MEM</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">M2279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td dir="LTR" height="26" style="height:26px;width:389px;">N2 supplement</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">NB medium</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">21103-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Non-essential amino acid (NEAA)</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">PBS without Ca and Mg</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR">20012050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Penicilin/ Streptomycin</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Gibco</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">5140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Poly-L-ornithine</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">&#160;P4957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse beta tubulin-III antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">T2200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse GFAP antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">G4546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">rabbit anti mouse Nestin antibody</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">N5413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Scalpel Handle #3</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">500236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Scissors curve</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">14396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">Scissors sharp straight</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td dir="LTR">14192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Soybean trypsin inhibitor</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Roche</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">10109886001&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Tissue culture flasks, T25</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">BD</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Tissue culture flasks, T75</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">BD</td>
			<td dir="LTR" style="width:235px;">353024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:389px;">Tween 20</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:235px;">P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors,&#160; 8 cm, Straight&#160;</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">WPI</td>
			<td>14003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;width:389px;">&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td dir="LTR" style="width:145px;">Sigma</td>
			<td dir="LTR">M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of embryonic mouse neural stem cells

Sinir kök hücreleri (NSCs) multipotent ve merkezi sinir sistemi (MSS) üç büyük hücre tür çıkmasına neden olabilir. Vitro kültür ve NSCs genişlemesi hücrelerin nöronlar fonksiyonu çalışmaya nörologlar için ve onların etkileşim ile birlikte Gliyal hücreler uygun bir kaynak sağlar. Yetişkin veya embriyo memeli beyin sinir kök hücreleri yalıtım bildirilen bazı teknikler vardır. NSCs embriyonik CNS farklı bölgelerinden izole mikrocerrahi işlem sırasında canlı ve Genişletilebilir kök hücrelerin en yüksek oranı elde etmek için beyin hücrelerine zarar azaltmak çok önemlidir. Stres azaltma sırasında yalıtım fare embriyo beyin bu hücre için olası bir teknik cerrahi zaman azalma var. Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bu hücreler hızlı yalıtım için gelişmiş bir tekniği göstermek. Cerrahi işlemler E13 fare embriyo gelen beyin kafatasından mikrodiseksiyon ganglionic Hazretleri hasat izole beyin açılan bir bükülmüş iğne ucu ile embriyo ön Fontanel kesme rahim, hasat dahil, ayrılma NSC orta bir tek hücre süspansiyon kazanmak için hasat dokusunda ve sonunda kaplama hücre süspansiyon kültür neurospheres oluşturmak için.

Mikro-diseksiyon, hücre izolasyon ve Neurosphere kültür. Burada, biz fare E13 beyin mikrocerrahi ve nöral kök hücrelerin yalıtım için hızlı ve etkili bir yöntem sundu. Bu makalede, tüm beyin ön Fontanel iyi bir kopma bir E13 fare embriyo kafatasını kaldırmak olası gösterir. Bu yöntemle beyin daha az hasar dayandı ve hücreleri beynin farklı yerlerinden izole etmek mümkündür. Hasat hücreleri neurospheres bFGF ve EGF NSC ortam...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells at JoVE.com

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Bu video protokolünün amacı Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre İzolasyon ve Kültür için bir kaynak ve verimli bir protokol oluşturmaktır. Merhaba, ben Meryem Sadeghi-Zadeh. Royan Enstitüsü'nde Hücresel ve Moleküler Biyoloji yüksek lisans öğrencisiyim.Bugün ben ve meslektaşım size 13 embriyo fare ganglionik itibar dan nöral kök hücre hasat nasıl göstermek istiyorum. Merhaba, ben Bahareh Alizadeh-Shoorjestan. Royan Biyoteknoloji Enstitüsü Kök Hücre Bölümü'nde Hücresel ve Moleküler Biyoloji yüksek lisans öğrencisiyim.Merhaba, ben Rıza Dehghani-Varnamkhasti. Ayrıca Royan Enstitüsü'nde Hücresel ve Moleküler Biyoloji okuyorum. Cerrahi işlemler rahim her 13 fare embriyoları hasat içerir.Kafatasından beyni çıkaran bükülmüş bir iğne ucuyla embriyonun fontanel'inin ön ünü kesmek. Ganglionik saygınlığı toplamak için izole beynin mikro-diseksiyonu. Tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için nöral kök hücre orta hasat doku dissociation.Ve son olarak, sinir hücreleri oluşturmak için bir süspansiyon kültürü nde hücreleri kaplama. Temiz ve dezenfektan karın bölgesinin cilt% 70 etanol ile püskürterek. Kontrol deri yukarı karın ve daha sonra karın boşluğu ve rahim boynuzları ortaya çıkarmak için makas ile deri ve altı çizili yüz kesti.Makas ile embriyoiçeren rahim boynuzları çıkarın ve 25 ml soğuk HEPES MEM tampon içeren 50 ml konik tüp içine transfer. Konik tüpü laminal akış başlığının altına yerleştirin. Kaputun altındaki kapağı aç.Rahim boynuzlarını tüpten dışarı getirin ve enkaz ve kanı ortadan kaldırmak için taze soğuk HEPES MEM tamponunun yeterli hacmiyle üç kez durulayın. Rahim dokusunu 7 ila 10 ml soğuk HEPES MEM tamponu içeren 10 cm'lik petri kabına aktarın. Rahim boynuzlarını ince makas kullanarak açın ve embriyoları 7 ila 10 ml soğuk HEPES MEM tamponu içeren yeni bir tabağa aktarın.Şimdi mikro-diseksiyon işlemi için diseksiyon mikroskobu n altında embriyolar ile 10 cm çanak koyun. Bir şırınga iğnesinin ucunu çelik neşter bıçak sapına bastırarak bükün. Ucu 70 ila 90 derecelik bir açıyla bükülene kadar iğnenin ucunu bükün.İğnenin ucundaki bükümü görmek için kesme mikroskobunun altındaki iğnenin ucunu kontrol edin. Doğal olarak embriyolar bu bir lateral konuma sahip. Konumlarını değiştirmeden, ince forceps ile embriyo nun boyun ve vücut düzenlenen ve daha sonra derin embriyo başının fontanel önüne iğne bükülmüş kısmını yerleştirin.Orada küçük bir kanama ya da kan pıhtısı olurdu. Bükülmüş kısmı alına doğru şişkinlik içinde ve daha sonra başın arkasına doğru iken yüzeysel iğne ucu taşıyın. Deri ve kafatası ile kesmek için emin olun, ve altta yatan beyin zarar değil.Beyin ortaya çıkarmak için yanal iğne ucu ile cilt itin. İğneyi derinin lateral tarafından beynin altındaki bölgeye deri den lateral tarafına kadar çerçevenin altına yerleştirin. Ve sonra bu kafa derisi nden beyin çıkararak onu parçalanmış kafatası ndan çıkması için iterek.Ganglionik itibar açıkça medial ve lateral parçaları ile video gösterilir. Beyin bakım forsepskullanarak sabit tuttu ve sonra ganglionik itibar ortaya çıkarmak için her yarımkürenin korteksini kesmek için mikroskalsors kullanarak. Beyin düzenlenen ve nöral kök hücre medya içeren 15 ml santrifüj tüp içine diseksiyon ganglionik itibar yerleştirin.Tüm beyin mikro-diseksiyon olana kadar bu işlemi tekrarlayın. Tek bir hücre süspansiyon almak için doku kırmak için 2 5 kez yukarı ve aşağı süspansiyon tüp ve pipet altına pipet ucu yerleştirerek kesilen ganglionik itibar kesilir. Süspansiyonu 110 g'da 5 dakika santrifüj edin.Supernatant çıkarın ve EDTA% 0.05 tüp 1 ml hücreleri yeniden askıya. Hücre süspansiyonuna 37 derece lik bir süre 10 dakika kuluçkaya yat. Ve sonra tripsin aktivitesini durdurmak için soya tripsin inhibitörü eşdeğer bir hacim ekleyin.Pipet, tripsinin tamamen inaktive edildiğinden emin olmak için hücre süspansiyonu yukarı ve aşağı. Hücre süspansiyonuna 110 g'da 5 dakika santrifüj edin. Supernatant çıkarın ve tam nöral kök hücre orta 1 ml hücreleri resuspend ve hücre sayısını saymak.Nöral kök hücre orta hücreleri uygun boyutta doku kültürü şişesi içine plaka. 2T25 5 ml, T75'e 20 ml ve T175 şişelerine 40 ml aktarın. Nörosferler 3 gün sonra 37 santigrat derecede nemlendirilmiş bir kuluçka makinesinde %5 CO2 ile ortaya çıkar.Kültür nörosferleri emmek için, 5 dakika boyunca 110 g santrifüj için santrifüj için askıya nörosferler ile orta transfer, ve sonra supernatant atın. 1 ml 0.05% tripsin EDTA ve inkübate 37 derece Santigrat 10 dakika. Sonra soyaben tyrpsin inhibitörü ve pipet kullanarak tripsin inaktive yavaşça yukarı ve aşağı onları tek hücre yapmak için nörosferler.Hücre süspansiyonuna 110 g'da 5 dakika santrifüj edin. Supernatant atın ve nöral kök hücrelerin orta 1 ml hücreleri resuspend. Bu hücreler ileri deneyler için laminat ve tamamen kaplanmış yüzeyde bir sonraki adım kültür veya kültür için hazırdır.Yedi gün sonra bir milyon birincil nöral kök hücre yetiştirerek hücre sayısı üç ila dört milyona çıkacaktır. Altı ila yedi gün sonra küreler çapı 150 ila 200 mikrometre arasında ölçmek gerekir ve nöronal farklılaşma için bFGF ve EGF yokluğunda laminat poli ornitin kaplı yemekler alt kültür için hazır olacaktır. Akış sitometri tahdit sonuçları, nörosferleri oluşturan hücrelerin %95'ine yakınının nöral kök hücreler için bilinen bir belirteç olan Nestin pozitif olduğunu göstermektedir.Beta tubulin III ve ganglio fibröz protein antikorları kullanılarak yapılan tahliller, kaplamalı yüzeyde nöral kök hücrelerin %94 civarında işitilmesi yle nöronal fenotip ve yaklaşık %5'inin glial fenotip gösterdiğini ortaya koymaktadır. Sadece bu kısa video 13 fare embriyo ganglionik saygınlık nöral kök hücrenin hızlı izolasyon için bir laboratuvar tekniği. Umarım nöral kök hücre kültüründe başarılı olursun.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Embriyonik Omurilik Commissural Nöronlar Diseksiyon ve Kültür

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nörobilim

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Fare Embriyonik motor nöronlar lektin tabanlı İzolasyon ve Kültür

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

Sıçan Embriyonik Nöral Hücre İzolasyonu ve Kültür: Bir Hızlı Protokol

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Tarafından Embriyonik ve Erişkin Nöral Kök Hücre Genişletme<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporasyon veya Viral Stereotaksik Enjeksiyon

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

Embriyonik ön beyin gelen Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...