Name: quantifying the heterogeneous distribution of a synaptic protein in the mouse brain using immunofluorescence
Uploaded: 2019-01-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying the Heterogeneous Distribution of a Synaptic Protein in the Mouse Brain Using Immunofluorescence at JoVE.com

Irmgard Weiss mükemmel teknik destek için teşekkür ederiz. Yazarlar destek Hermes Pofantis ve Andoniya Petkova tarafından kabul. Yazarlar ayrıca Avrupa Nörolojik Bilimler Enstitüsü LSM800 ve teknik destek, özellikle Dr. Nils Halbsgut tarafından kullanımı için teşekkür ederiz. Bu eser Göttingen Üniversitesi Tıp Merkezi nde tarafından finanse edildi. JSV nano mikroskobu ve moleküler Fizyoloji beyin (CNMPB) desteği Merkezi tarafından kabul eder.

Bu iletişim kuralı canlı hayvanlar üzerinde deneyler anlamına gelmez. Hayvanların beyin örneklerini almak için ötenazi ile ilgili deneyler onay numarası altında T 10/30 (Tierschutzkommission der Universitätsmedizin Göttingen) yerel hayvan koruma yetkilileri tarafından kabul edildi.
Not: Bu iletişim kuralı için 3 Yetişkin erkek C57BL/6 fareler kullanıldı.
1. numune hazırlama
<ol><li>Sabitleştirici ve 0.1 M fosfat tampon (PB; bkz: Tablo...

<ol>
	<li>Wallrafen, R., Dresbach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Presynaptic+Protein+Mover+Is+Differentially+Expressed+Across+Brain+Areas+and+Synapse+Types.">The Presynaptic Protein Mover Is Differentially Expressed Across Brain Areas and Synapse Types.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 12, 58 (2018).</li><li>Augustin, I., Betz, A., Herrmann, C., Jo, T., Brose, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+two+novel+Munc13+proteins+in+rat+brain.">Differential expression of two novel Munc13 proteins in rat brain.</a> Biochemical Journal. 337, 363-371 (1999).</li><li>Rosenmund, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Control+of+Vesicle+Priming+and+Short-Term+Plasticity+by+Munc13+Isoforms.">Differential Control of Vesicle Priming and Short-Term Plasticity by Munc13 Isoforms.</a> Neuron. 33, 411-424 (2002).</li><li>Breustedt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Munc13-2+differentially+affects+hippocampal+synaptic+transmission+and+plasticity.">Munc13-2 differentially affects hippocampal synaptic transmission and plasticity.</a> Cerebral cortex. 20, 1109-1120 (2010).</li><li>Chen, Z., Cooper, B., Kalla, S., Varoqueaux, F., Young, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Munc13+Proteins+Differentially+Regulate+Readily+Releasable+Pool+Dynamics+and+Calcium-Dependent+Recovery+at+a+Central+Synapse.">The Munc13 Proteins Differentially Regulate Readily Releasable Pool Dynamics and Calcium-Dependent Recovery at a Central Synapse.</a> The Journal of Neuroscience. 33, 8336-8351 (2013).</li><li>Taylor, S. C., Berkelman, T., Yadav, G., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Defined+Methodology+for+Reliable+Quantification+of+Western+Blot+Data.">A Defined Methodology for Reliable Quantification of Western Blot Data.</a> Mol Biotechnol. , (2013).</li><li>Charette, S. J., Lambert, H., Nadeau, P. J., Landry, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+quantification+by+chemiluminescent+Western+blotting+Elimination+of+the+antibody+factor+by+dilution+series+and+calibration+curve.">Protein quantification by chemiluminescent Western blotting Elimination of the antibody factor by dilution series and calibration curve.</a> Journal of Immunological Methods. 353, 148-150 (2010).</li><li>Heidebrecht, F., Heidebrecht, A., Schulz, I., Behrens, S., Bader, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+semiquantitative+Western+blot+technique+with+increased+quantification+range.">Improved semiquantitative Western blot technique with increased quantification range.</a> Journal of Immunological Methods. 345, 40-48 (2009).</li><li>Toki, M. I., Cecchi, F., Hembrough, T., Syrigos, K. N., Rimm, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proof+of+the+quantitative+potential+of+immunofluorescence+by+mass+spectrometry.">Proof of the quantitative potential of immunofluorescence by mass spectrometry.</a> Laboratory Investigation. 97, 329-334 (2017).</li><li>Wilhelm, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composition+of+isolated+synaptic+boutons+reveals+the+amounts+of+vesicle+trafficking+proteins.">Composition of isolated synaptic boutons reveals the amounts of vesicle trafficking proteins.</a> Science. 344, 1023-1028 (2014).</li><li>Navone, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+p38:+An+integral+membrane+protein+specific+for+small+vesicles+of+neurons+and+neuroendocrine+cells.">Protein p38: An integral membrane protein specific for small vesicles of neurons and neuroendocrine cells.</a> Journal of Cell Biology. 103, 2511-2527 (1986).</li><li>Gundelfinger, E. D., Reissner, C., Garner, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Bassoon+and+Piccolo+in+Assembly+and+Molecular+Organization+of+the+Active+Zone.">Role of Bassoon and Piccolo in Assembly and Molecular Organization of the Active Zone.</a> Frontiers in Synaptic Neuroscience. 7, (2016).</li><li>Ziegler, D. R., Cullinan, W. E., Herman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+vesicular+glutamate+transporter+mRNA+in+rat+hypothalamus.">Distribution of vesicular glutamate transporter mRNA in rat hypothalamus.</a> Journal of Comparative Neurology. 448, 217-229 (2002).</li><li>Chaudhry, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vesicular+GABA+transporter,+VGAT,+localizes+to+synaptic+vesicles+in+sets+of+glycinergic+as+well+as+GABAergic+neurons.">The vesicular GABA transporter, VGAT, localizes to synaptic vesicles in sets of glycinergic as well as GABAergic neurons.</a> Journal of Neuroscience. 18, 9733-9750 (1998).</li><li>Aoki, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+Microscopic+Immunocytochemical+SAP-97+at+Postsynaptic,+Presynaptic,+and+Nonsynaptic+Sites+of+Adult+and+Neonatal+Rat+Visual+Cortex.">Electron Microscopic Immunocytochemical SAP-97 at Postsynaptic, Presynaptic, and Nonsynaptic Sites of Adult and Neonatal Rat Visual Cortex.</a> Synapse. 257, 239-257 (2001).</li><li>Valtschanoff, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+NR2+Receptor+Subunit+in+Rat+Somatic+Sensory+Cortex+:+Synaptic+Distribution+and+Colocalization+With+NR1+and+PSD-95.">Expression of NR2 Receptor Subunit in Rat Somatic Sensory Cortex : Synaptic Distribution and Colocalization With NR1 and PSD-95.</a> Journal of Comparative Neurology. 611, 599-611 (1999).</li><li>Hunt, A., Schenker, L. J., Kennedy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PSD-95+Is+Associated+with+the+Postsynaptic+Density+and+Not+with+the+Presynaptic+Membrane+at+Forebrain+Synapses.">PSD-95 Is Associated with the Postsynaptic Density and Not with the Presynaptic Membrane at Forebrain Synapses.</a> Journal of Neuroscience. 76, 1380-1388 (1996).</li><li>Luscher, B., Fuchs, T., Kilpatrick, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+A+Receptor+Trafficking-Mediated+Plasticity+of+Inhibitory+Synapses.">GABA A Receptor Trafficking-Mediated Plasticity of Inhibitory Synapses.</a> Neuron. 70, 385-409 (2011).</li><li>Kirby, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Understanding the molecular diversity of GABAergic synapses. 5, 1-12 (2011).</li><li>Harris, K. M., Weinberg, R. J., Verrall, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+Synapses+in+the+Mammalian+Brain.">Ultrastructure of Synapses in the Mammalian Brain.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. , 1-30 (2012).</li><li>Heise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+Localization+of+Shanks+to+VGLUT1-Positive+Excitatory+Synapses+in+the+Mouse+Hippocampus.">Selective Localization of Shanks to VGLUT1-Positive Excitatory Synapses in the Mouse Hippocampus.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 10, (2016).</li><li>Peters, P. J., Yuan, L. C., Biology, C., Branch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+TGN38+to+the+trans-Golgi+network:+involvement+of+a+cytoplasmic+tyrosine-containing+sequence.">Localization of TGN38 to the trans-Golgi network: involvement of a cytoplasmic tyrosine-containing sequence.</a> Journal of Cell Biology. 120, 1123-1135 (1993).</li><li>Antonini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tprg,+a+gene+predominantly+expressed+in+skin,+is+a+direct+target+of+the+transcription+factor+p63.">Tprg, a gene predominantly expressed in skin, is a direct target of the transcription factor p63.</a> Journal of Investigative Dermatology. 128, 1676-1685 (2008).</li><li>Burre, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+proteins+under+conditions+of+rest+and+activation:+Analysis+by+2-D+difference+gel+electrophoresis.">Synaptic vesicle proteins under conditions of rest and activation: Analysis by 2-D difference gel electrophoresis.</a> Electrophoresis. 27, 3488-3496 (2006).</li><li>Kremer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mover+is+a+novel+vertebrate-specific+presynaptic+protein+with+differential+distribution+at+subsets+of+CNS+synapses.">Mover is a novel vertebrate-specific presynaptic protein with differential distribution at subsets of CNS synapses.</a> FEBS Letters. 581, 4727-4733 (2007).</li><li>Ahmed, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mover+Is+a+Homomeric+Phospho-Protein+Present+on+Synaptic+Vesicles.">Mover Is a Homomeric Phospho-Protein Present on Synaptic Vesicles.</a> PLoS ONE. 8, (2013).</li><li>K&#246;rber, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Presynaptic+Release+Probability+by+the+Vertebrate-Specific+Protein+Mover.">Modulation of Presynaptic Release Probability by the Vertebrate-Specific Protein Mover.</a> Neuron. 87, 521-533 (2015).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. , 1-9 (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, (2012).</li><li>Schneider Gasser, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunofluorescence+in+brain+sections:+simultaneous+detection+of+presynaptic+and+postsynaptic+proteins+in+identified+neurons.">Immunofluorescence in brain sections: simultaneous detection of presynaptic and postsynaptic proteins in identified neurons.</a> Nature Protocols. 1, 1887-1897 (2006).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Sun, Y., Ip, P., Chakrabartty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+Elimination+of+Background+Fluorescence+in+Formalin-Fixed+Human+Brain+Tissue+for+Immunofluorescence+Microscopy.">Simple Elimination of Background Fluorescence in Formalin-Fixed Human Brain Tissue for Immunofluorescence Microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. , 1-6 (2017).</li><li>Poole, A. R., Dingle, J. T., Mallia, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+localization+of+retinol-binding+protein+in+rat+liver+by+immunofluorescence+microscopy.">The localization of retinol-binding protein in rat liver by immunofluorescence microscopy.</a> Journal of Cell Science. 394, 379-394 (1975).</li></ol>

Yöntemi burada sunulan bir protein göreli bir işaretleyici protein bolluğu ilgi dağılımıyla bilinen bir dağıtım miktarının amaçlamaktadır. Ayirt boyama boyama yoğunluklarda farklı dilimleri arasında yüksek bir değişkenlik gösterebilir. Burada açıklanan miktar yaklaşım Yarımküre protein ortalama faiz oranını belirleyerek bu sorunu kaçınmanızı sağlar. Bu nedenle, farklı boyama şiddetlerde dilimleri arasında iptal edilir ve nicel açıklamasını sağlar.
Her...

Sinir hücreleri arasındaki iletişimi sinapslarda denilen özel kişi sitelerinde olur. Sinapsların sayısız sinaptik iletimi yönetmek farklı protein içerir. Bazı bu proteinlerin sinir sistemi boyunca heterojen bir dağılımını göstermek ve her synapse1' mevcut değildir. Bir tür bir protein için sinaptik veziküller astar sürece dahil Munc13 örnektir. Heterogeneously beyin2dağıtılır, Munc13, ve farklı izoformlarının vardır ve belirli izoformlarının olup kısa vadeli sinaptik plastisite ve sinaptik vezikül dynamics3, üzerinde etkili olabileceği 4 , 5. bu nedenle, beyin bölgeleri arasında farklı sinaptik proteinlerin varlığı tespit edebilmek için hayati önem taşıyor.
Seçim yöntemleri için miktar sinaptik proteinler - defa - kütle spektrometresi ve Western blot yerine, immünhistokimya6,7,8,9vardır. Bazı durumlarda, miktar ve spesifik proteinlerin (yani, Wilhelm ve ark. lokalizasyonu değerlendirmek için birbirlerini tamamlayıcı için çeşitli yöntemler kullanılır 10). miktar ilgi sadece immünfloresan stainings istihdam biyokimyasal herhangi bir yöntem kullanarak gerek kalmadan proteinlerin ve yerelleştirme için biz tarif işte yöntem sağlar. Başka bir avantaj burada miktar çok daha küçük bir alana yapılabilir ve bu nedenle, daha belirgin, bu daha başka yöntemlerle elde var. Ancak, bir güvenilir referans protein faiz protein dağılımı değerlendirmek gerektiğini dikkate almak zorunda.
Floresan immünhistokimya tarafından boyama yerelleştirme proteinlerin beyin bölgeleri arasında yanı sıra farklı nöronal bölmeleri içinde düzenli olarak tanımlamak için bize izin verir. Farklı bölmeleri tanımlamak için belirli işaretleri kullanılır. Genellikle, synapsin ve synaptophysin11 karşı antikor Fagot karşı antikor presynaptic terminal12etkin bölgenin etiket iken sinaptik veziküller, etiketlemek için kullanılabilir. Veziküler glutamat taşıyıcılar (vGluT) veya veziküler GABA ışınlama (vGAT), gibi veziküler taşıyıcılar13 eksitatör ve inhibitör14 presynaptic terminalleri, sırasıyla etiketlemek için kullanılır. Postsinaptik tarafında, Homer protein karşı antikor postsinaptik terminalleri ve postsinaptik yoğunluğu protein 95 (PSD95)15,16,17 veya gephyrin18 karşı antikor işaretlemek için istihdam edilebilir , 19 , 20 eksitatör veya inhibitör postsinaptik terminalleri, sırasıyla etiketleyebilirsiniz. Faiz ve işaretleri yukarıda açıklanan olanlar gibi bir protein karşı antikor kullanarak, bir tür protein lokalizasyonu belirleyebilirsiniz. Bugüne kadar birçok çalışma bu nitel şekilde21' yaptık. Ancak, güvenilir bir şekilde belirli bir sinaptik protein fark dağılımını belirlemek için biri sadece varlığını veya yokluğunu aynı zamanda onun göreli yoğunlaşmasını belirlemeniz gerekir değil. Sinapsların yoğunluğu ve boyutları heterojen sinaptik marker ve faiz protein arasındaki oran kurmak önemli hale getirir. Aksi takdirde, sinaps zengini bölgeleri hipokampüs piramit katmanları ve beyincik moleküler tabakası gibi yüksek yoğunluklu sinaptik proteinlerin, sinapslarda daha yüksek yoğunluk nedeniyle sadece ama bu proteinin güçlü bir varlığı nedeniyle değil gösterecektir Her synapse (Örneğin, Wallrafen ve Dresbach1). Öte yandan, nöronal soma (Örneğin, TGN3822) proteinler genelde güçlü bir varlık hipokampal piramit hücre katmanı veya hipokampal veya serebellar granül hücre katmanı nöronal hücre gövdeleri yüksek konsantrasyon nedeniyle gösterir Bu alanlarda. Bu nedenle, homojen olmayan bu dağıtım yapıları, bu durumda synapses, faiz kendisi protein dağıtımını yanlış bir tahmin için yol açabilir. Ayrıca, bir içsel değişkenlik immunohistokimyasal stainings örnekleri arasında yoğunluklarda boyama olduğunu. Burada açıklanan protokol bu dikkate alır ve immunohistokimyasal yöntemleri ortaya çıkan diğer uyarılar yanı sıra böyle önyargıları önler.
Bizim son çalışma, 16 farklı beyin alanları1arasında bu yöntem biz (TPRGL23 veya SVAP3024da denir) taşıyıcı fark ifade tanımlamak için kullanılan. Taşıyıcı Derneği sinaptik veziküller bulunabilir ve nörotransmitter yayın25,26,27etkiler, omurgalılar özgü sinaptik proteindir. Biz taşıyıcı ifade sinaptik veziküller, bereket için synaptophysin bir sinaptik vezikül başvuru işaretçisi olarak için boyama ile ilgili. Özellikle septum nükleuslar, ventral yarayan ve amigdala Mover yüksek düzeyde bulduk. Hippocampus içinde taşıyıcı, türdeş olmayan bir dağıtım içi hipokampal hesaplama ve giriş ve çıkış katmanları düşük düzeyleri ile ilgili katmanlarında yüksek seviyelerde bulduk.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:736px;" width="737">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">1.5 mL reaction tubes</td>
			<td style="width:167px;">Eppendorf</td>
			<td align="right" style="width:187px;">30120094</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">50 mL reaction tubes</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td align="right">227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">multiwell 24 well</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td colspan="2">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 087721H</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">plastic pipette (disposable)</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td align="right">861,176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">1000 mL pipette</td>
			<td style="width:167px;">Rainin</td>
			<td style="width:187px;">&#160;17014382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">2 ml pipette</td>
			<td style="width:167px;">Eppendorf</td>
			<td align="right">3123000012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Vortex Genius 3&#160;</td>
			<td>IKA</td>
			<td align="right">3340001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Menzel microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td colspan="2">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 10144633CF</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Stereoscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">LSM800</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">freezing microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">PBS (10X)</td>
			<td style="width:167px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 11666789001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PFA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td colspan="2">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; P6148-1kg</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NaCl</td>
			<td>BioFroxx</td>
			<td>1394KG001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">sucrose</td>
			<td>neoFroxx</td>
			<td>1104KG001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tissue Tek</td>
			<td>Sakura&#160;</td>
			<td align="right">4583</td>
			<td>OCT</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Na2HPO4</td>
			<td>BioFroxx</td>
			<td>5155KG001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NaH2PO4</td>
			<td>Merck</td>
			<td align="right">1,063,460,500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">normal goat serum</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>S26-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">normal donkey serum</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S30-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Triton X-100</td>
			<td>Merck</td>
			<td align="right">1,086,031,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">rabbit anti-Mover</td>
			<td>Synaptic Systems</td>
			<td>RRID: AB_10804285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">guinea pig anti-Synaptophysin</td>
			<td>Synaptic Systems</td>
			<td>RRID: AB_1210382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">donkey anti-rabbit AF647</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>RRID: AB_2492288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">goat anti-mouse AF488</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>RRID: AB_2337438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Mowiol4-88</td>
			<td style="width:167px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:187px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 475904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">ZEN2 blue software</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td>Microscopy software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">FIJI</td>
			<td style="width:167px;">ImageJ</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying the heterogeneous distribution of a synaptic protein in the mouse brain using immunofluorescence

Ciddi varlığı, yokluğu veya belirli sinaptik proteinlerin seviyeleri sinaptik iletimi etkisi altına alabiliyor. Işlev bir protein elucidating ek olarak, ayrıca dağılımı belirlemek için önemlidir. Burada, biz istihdam ayirt, confocal mikroskobu ve sinaptik protein (TPRGL veya SVAP30 olarak da adlandırılır) taşıyıcı dağılımını belirlemek için analiz bilgisayar tabanlı bir protokol tanımlamak. Biz taşıyıcı dağıtım sinaptik vezikül protein synaptophysin olan için böylece sinaptik veziküller bolluk göre nicel bir şekilde hareket ettirmek dağıtımını belirleme karşılaştırın. Özellikle, bu yöntem dağıtım farklı antikorlar veya mikroskoplar kullanarak proteinlerin veya farklı çalışmalar arasında karşılaştırılması için izin vermek için potansiyel olarak uygulanabilir. Bizim Yöntem immünfloresan stainings doğasında değişkenliği mutlak floresans düzeyleri yerine bir oranı verimli kaçınmanızı sağlar. Ek olarak, farklı düzeylerde bir proteinin dağıtım analiz etmek araştırmacı tarif yöntemi sağlar: beyin bölgeleri için farklı katmanları oluşur veya duyusal gibi bir beyin alanına farklı milletlere dilimlere tüm beyin üzerinden cortices. Taşıyıcı sinaptik veziküller ile ilişkili bir omurgalılar özgü proteindir. Bu yöntemle, gösterdiğimiz taşıyıcı heterogeneously yüksek seviyelerde ventral yarayan, septal çekirdekleri ve amigdala ve hipokampus farklı katmanları gibi tek beyin bölgeleri içinde beyin bölgeleri arasında dağıtılır.

Boyama desenleri farklı imleyici temsilcisi Şekil 1' de görülebilir. Desen protein dağıtım bağlı olarak değişir. Beş rostro kaudal düzeyi örnekleri(a)sütunlarda gösterilir-(E). Bir temsilci DAPI boyama ilk satırında gösterilir: DAPI bir hücre DNA'yı bağlıdır ve böylece çekirdeklerin lekeli. Bu punctate bir düzen içinde sonuçlanır. Yüksek hücre yoğunluklu bölgelerde düşük hücre yoğunlukla...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying the Heterogeneous Distribution of a Synaptic Protein in the Mouse Brain Using Immunofluorescence at JoVE.com

Quantifying the Heterogeneous Distribution of a Synaptic Protein in the Mouse Brain Using Immunofluorescence

Burada, bir sinaptik protein ayirt boyama kullanarak işaret protein, confocal mikroskobu ve bilgisayar tabanlı analiz göre dağılımını belirlemek için nicel bir yaklaşım açıklar.

Türdeş olmayan dağıtım ayirt kullanarak fare beynindeki bir sinaptik protein miktarının

The presence, absence, or levels of specific synaptic proteins can severely influence synaptic transmission. In addition to elucidating the function of a ...

Burada, bir referans proteine göre sinaptik protein dağılımını belirlemek için immünoresans, konfokal mikroskopi ve bilgisayar tabanlı analiz uygulayan bir protokol uyguluyoruz. Yöntemimiz mutlak floresan düzeyleri yerine bir oran kullanarak immünfloresans boyama doğal değişkenlik atlatır. Ayrıca bu yöntem le farklı düzeylerde protein dağılımının heterojenliğini analiz edebilirsiniz.Tüm beyin dilimlerinden beyin bölgelerine, hipokampusun farklı katmanları gibi alt bölgelere kadar. Bu teknik, fareler dışındaki beyin ve model sistemleri dışındaki farklı dokularda protein dağılımını belirlemek için uyarlanabilir. El yazmasında açıklandığı gibi daha önce izole edilmiş ve sabit fare beynini yıkayarak başlayın.Sonra% 30 sakaroz 0.1 molar PB ile 15 mililitre reaksiyon tüpü için beyin aktarın. Kriyo, beyni 48 saat boyunca 4 derecede kuluçkaya yatırmak için ya da batana kadar. Bundan sonra ilgi alanına bağlı olarak kriyo korumalı beyin kırpmak için keskin bir bıçak kullanın. Sonra bir kriyo kalıp beyin yerleştirin ve kabarcıklar önlemek için emin ve böylece kesme bir koronal düzlemiçin beyin yönlendirmek emin gömmek için Optimal Kesme Sıcaklık Bileşik ekleyin.Dondurucu kalıbı eksi 80 derece lik dondurucuya, dondurulana kadar yerleştirin. Dondurulmuş dokuyu kriyo mikrotomu üzerine monte edin ve mikrotom sıcaklığına göre dengelemek için bölümden en az 15 dakika önce bekleyin. Beyni 25 mikrometre kalınlığında koronal dilimlere ayırmaya başla.Beyin dokusudokunmadan dikkatle ilk dilimIN OCT için bir cam kanca kullanın. OCT cam kanca yada yapışacak. İlk kuyuiçine beyin dilimi aktarmak için cam kanca kullanın.0,1 azı pb ile dolu bir 24 kuyu plaka iyi başına üç bitişik dilim toplamak. Dilimleri iki haftaya kadar boyanana kadar dört derecede saklayın. Bağışıklık boyama için dilimleri hazırlamak için beyin dilimleri çizim olmadan bir kuyudan PB çözeltisi kaldırmak için plastik bir pipet kullanın. Sonra aşırı OCT onları yıkamak için taze PB 250 mikrolitre eklemek için 1000 mikro litre pipet kullanın.Dilimlerin kurumasını önlemek için her kuyu için bu yıkamayı tekrarlayın. Daha sonra, pb çözeltisini ilk kuyudan çıkarmak için plastik bir pipet kullanın. Iyi tekrar iyi çalışan başına engelleme tampon 250 mikrolitre eklemek için 1000 mikrolitrelik pipet kullanın.Tabağı oda sıcaklığında üç saat boyunca çalkalayıcıyla kuluçkaya yatırın. Kuluçka sırasında bir reaksiyon tüpü ne kadar iyi başına 250 mikrolitre antikor tamponu ekleyin. Daha sonra doğrudan çözelti içine antikor boru uygun miktarda eklemek için 2 mikrolitre pipet kullanın ve yavaşça karıştırmak için birkaç kez yukarı ve aşağı pipet.Sonra uygun karıştırma emin değil bu seyreltilmiş antikor girdap. Iyi plastik bir pipet ile engelleme tampon kaldırmak ve iyi başına birincil antikor çözeltisi 250 mikrolitre ekleyerek iyi çalışma. Tabağı bir gecede dört derece lik bir çalkalayıcıya kuluçkaya yatırın.Ertesi gün plastik bir pipet ile antikor çözeltisi kaldırın. 300 mikrolitre yıkama tamponu ile dilimleri yıkayın her üç kez on dakika oda sıcaklığında bir shaker üzerinde yıkayın. Yıkama sırasında, karanlıkta çalışan, daha önce birincil antikor ile yapılan aynı şekilde bir reaksiyon tüpü bir çift ikinci antikor için flor seyreltmek.Yıkama tamamlandıktan sonra plastik bir pipet ile yıkama tamponu çıkarın ve kuyu başına ikincil antikor çözeltisi 250 mikrolitre ekleyin. 90 dakika boyunca oda sıcaklığında karanlıkta kuluçka. Kuluçka tamamlandıktan sonra plastik bir pipet ile antikor çözeltisi çıkarın.Bölümleri üç kez yıkama tamponu ile aynı şekilde aynı şekilde tampon bir yıkayın. Bu yıkama sırasında 0.1 molar PB DAPI leke seyreltilmiş bir ila 2000 konsantrasyon elde etmek. Plakadan yıkama tamponu çıkardıktan sonra 250 mikrolitre DAPI çözeltisi ekleyin ve 5 dakika boyunca çalkalayıcının oda sıcaklığında kuluçkaya yatırın.Plastik bir pipet ile DAPI çözeltisi çıkardıktan sonra iyi başına 0,1 molar PB 500 mikrolitre eklemek için 1000 mikrolitre pipet kullanın. Bir stereoskop altında bir mikroskop slayt yerleştirin. Slayta 0,1 molar PB'den üç ayrı damla eklemek için ince bir fırça kullanın.Fırçayı kullanarak slaytta damla başına bir dilim yerleştirin ve ardından dilimleri düzleştirmek ve yönlendirmek. Tüm dilimler doğru konumlandırıldıktan sonra aşırı PB kaldırmak için bir kağıt mendil kullanın ve dilimleri tamamen kurutmadan dikkatlice kurulayın. Daha sonra slayt üzerine 80 mikrolitre gömme ortamı ekleyin ve dikkatlice beyin dilimleri gömmek için bir kapak kayma ile kaplayın.Işık maruziyetini önlemek için slaytları kapatın ve duman kaputunda 1-2 saat kurumaya bırakın ve sonra konfokal mikroskop mikroskobu için hazır olana kadar dört derece santigrat derecede bir mikroskop slayt kutusunda saklayın. El yazmasında açıklandığı gibi farklı kanallar için tüm beyin diliminin sanal dokularını aldıktan sonra dosyayı tıklayarak tüm tek kanalları veya bir görüntüyü FIJI'ye yükleyin ve açın. Sonra DAPI kanalında bir yarımküreyi çizgilemek için ücretsiz el seçim aracını kullanın.Edet'i tıklatın, sonra seçim yapın, ardından seçili bölgenin maskesini oluşturmak için maske oluşturun. Sonra analiz tıklayın ve sonra tek kanallar için ortalama floresan yoğunluğunu belirlemek için parçacıkları ölçmek. Her kanal için ortalama floresan yoğunluk değerlerini belirlemek için tek kanal seçtiğinizden emin olun.Bundan sonra, tek kanallar için ortalama floresan yoğunluğunu elektronik tabloya kopyalayın. İlgi alanı ndaki tek kanallar için ortalama floresan yoğunluğunu belirlemek için alanı serbest el seçim aracı ile belirleyin. DaPI ile boyandıktan sonra çekirdek beyin kesitleri bir delinme deseni vardır ve yüksek hücre yoğunluğu olan bölgeler hücre yoğunluğu düşük olan bölgelere göre daha parlaktır.Mover antikor ile boyama synaptophysin daha homojen dağılımı ortaya ise beyin boyunca parlak sıcak nokta alanları ve dimmer alanları ile heterojen dağılımı ortaya koymuştur. Görüntülerin bir bindirme Sinaptophysin gösteren yeşil floresan karşılaştırıldığında Mover protein gösteren kırmızı floresan diferansiyel dağılımı gösterdi. Sayısallaştırma analizinden sonra hem hem ferisit hem de sinaptophysin için farklı kanallar ve ilgi alanları için floresan yoğunluk değerleri belirlenmiştir.Mover floresan değerlerinin Synaptophysin floresan değerlerine oranı, Sinaptik veziküllere göre yüksek ve düşük Mover düzeylerine sahip mover düzeyleriile Mover'ın heterojen dağılımını göstermektedir. Göreceli Mover bolluk ilgi bir alanda oranı yarımkürede göre ve bir yüzdesi tercüme ne kadar Mover ortalamaya göre ilgi bir alanda mevcut olduğunu gösterdi. Hipokampusun alt alanlarında farklı tabakalar için göreceli Mover bolluğu belirlenmiştir.İlgilenen üç bölge, ilgili katmanlarda ilgili yarımkürenin oranıile karşılaştırılarak ölçülür. Bu işlem kolayca adapte edilebilir ve süper çözünürlüklü mikroskopi gibi farklı görüntüleme teknikleri ile kombine ek olarak ilgi proteinin in alt hücresel dağılımını belirlemek için. Bu teknik aynı zamanda genetik olarak modifiye edilmiş veya ilaç la tedavi edilmiş hayvanlar gibi farklı model sistemlerine de uygulanabilir.Bu farklı deneysel koşullar ve hatta türler arasında karşılaştırmalı bir yaklaşım için izin verebilir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Aktivitesi miktarının Cis</emEksplant Elektroporasyon Fare Retina> Düzenleme Elemanları

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

Nörobilim

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Mollusk içinde hücre içi kalsiyum konsantrasyonu ve Synaptic Etkinliği İzlenmesi Değişiklikler<em&gt; Aplysia&#39;nın</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

Implementing Dynamic Clamp with Synaptic and Artificial Conductances in Mouse Retinal Ganglion Cells

Fare Retina Ganglion Hücreleri Synaptic ve Yapay iletkenlikleri Dinamik Kelepçe Uygulama

Ganglion cells are the output neurons of the  retina and their activity reflects the integration of multiple synaptic inputs  arising from specific neural ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Glutamat ve GABA hızlı Micro-iyontoforez: Synaptic Entegrasyon Araştırma yararlı bir araç

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Fare Beyin lateral ventrikül Ependimal Cilia Canlı Görüntüleme

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Kullanımı Netlik Fare Omurilik içinde Serotonerjik Elyaf Görüntüleme / KÜBİK Tekniği

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Combining Optogenetics with Artificial microRNAs to Characterize the Effects of Gene Knockdown on Presynaptic Function within Intact Neuronal Circuits

Optogenetics gen nakavt etkileri olduğu gibi nöronal devreler içinde Presynaptic işlevi karakterize etmek için yapay mikroRNA'lar birleştirme

The purpose of this protocol is to characterize the effect of gene knockdown on presynaptic function within intact neuronal circuits. We describe a ...

Quantifying Subcellular Ubiquitin-proteasome Activity in the Rodent Brain

Subcellular Ubiquitin ölçümü-kemirgen beyinde proteasom aktivitesi

The ubiquitin-proteasome system is a key regulator of protein degradation and a variety of other cellular processes in eukaryotes. In the brain, increases ...