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7.2K Views
•
12:49 min
March 21st, 2020
DOI :
10.3791/58956-v
Chapters
0:01
Introduction
0:48
Neutrophil Isolation from Human Peripheral Blood
7:18
LRRK2 Kinase Inhibitor Treatment
10:33
Results
12:14
Conclusion
Transcript
该程序的总体目标是提供一种评估人类外周血内源性LRRK2激酶活性的方法。这是通过监测LRRK2中基的拉布蛋白磷酸化,使用Michael J.Fox基金会磷特异性拉布单克隆抗体实现的。在这里,我们专注于人类周围血嗜中性粒细胞作为同源位点种群的构成,具有高表达水平的Rab2和Rab10。
嗜中性粒细胞分离是基于一个负选择,在完成操作后40分钟内允许分离99%的纯和可行的嗜中性粒细胞,同时产生大量的蛋白质水平。将10毫升血液收集到血液收集管中。通过反转管轻轻混合七到八次。
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Summary
白氨酸丰富的重复激酶2基因(LRRK2)的突变导致遗传性帕金森病。我们开发了一种简单可靠的方法,用于评估人类外周血中Rab10的LRRK2控制磷酸化。这可能有助于识别具有增加LRRK2激酶通路活性的个人。
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