Name: using microarrays to interrogate microenvironmental impact on cellular phenotypes in cancer
Uploaded: 2019-05-21T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Microarrays to Interrogate Microenvironmental Impact on Cellular Phenotypes in Cancer at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av NIH Fellesfondet bibliotek av nettverk Cellular signaturer (LINCS) Grant HG008100 (J.W.G., L.M.H., og J. K).

Merk: En oversikt over hele MEMA-prosessen, inkludert estimert tid, er beskrevet i flytskjemaet som vises i figur 1. Denne protokollen detaljer fabrikasjon av MEMAs i 8-brønn plater. Protokollen kan tilpasses andre plater eller lysbilder.
1. utarbeidelse av protein, fortynningsmiddel og farge buffere
<ol><li>Likevekt hetteglass med ECMs, ligander og cytokiner til romtemperatur (RT) og kort sentrifuge. Legg til riktig volum av riktig RT-buffer s...

<ol>
	<li>Hanahan, D., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessories+to+the+crime:+functions+of+cells+recruited+to+the+tumor+microenvironment.">Accessories to the crime: functions of cells recruited to the tumor microenvironment.</a> Cancer Cell. 21 (3), 309-322 (2012).</li><li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Hughes, C. S., Postovit, L. M., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+a+complex+protein+mixture+required+for+optimal+growth+of+cell+culture.">Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture.</a> Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).</li><li>LaBarge, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mammary+progenitor+cell+fate+decisions+are+products+of+interactions+with+combinatorial+microenvironments.">Human mammary progenitor cell fate decisions are products of interactions with combinatorial microenvironments.</a> Integrative Biology (Cambridge). 1 (1), 70-79 (2009).</li><li>Watson, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironment-Mediated+Mechanisms+of+Resistance+to+HER2+Inhibitors+Differ+between+HER2++Breast+Cancer+Subtypes.">Microenvironment-Mediated Mechanisms of Resistance to HER2 Inhibitors Differ between HER2+ Breast Cancer Subtypes.</a> Cell Systems. 6 (3), 329-342 (2018).</li><li>Ranga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+niche+microarrays+for+systems-level+analyses+of+cell+fate.">3D niche microarrays for systems-level analyses of cell fate.</a> Nature Communications. 5, 4324 (2014).</li><li>Malta, D. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+microarrays+to+study+inductive+signaling+for+endoderm+specification.">Extracellular matrix microarrays to study inductive signaling for endoderm specification.</a> Acta Biomater. 34, 30-40 (2016).</li><li>Kamentsky, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+structure,+function+and+compatibility+for+CellProfiler:+modular+high-throughput+image+analysis+software.">Improved structure, function and compatibility for CellProfiler: modular high-throughput image analysis software.</a> Bioinformatics. 27 (8), 1179-1180 (2011).</li><li>Gagnon-Bartsch, J. A., Jacob, L., Speed, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removing+Unwanted+Variation+from+High+Dimensional+Data+with+Negative+Controls.">Removing Unwanted Variation from High Dimensional Data with Negative Controls.</a> University of California, Berkeley, Department of Statistics, University of California, Berkeley. , (2013).</li><li>Allan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OMERO:+flexible,+model-driven+data+management+for+experimental+biology.">OMERO: flexible, model-driven data management for experimental biology.</a> Nature Methods. 9 (3), 245-253 (2012).</li><li>Simian, M., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids:+A+historical+perspective+of+thinking+in+three+dimensions.">Organoids: A historical perspective of thinking in three dimensions.</a> Journal of Cell Biology. 216 (1), 31-40 (2017).</li><li>Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiated+state+of+normal+and+malignant+cells+or+how+to+define+a+"normal"+cell+in+culture.">The differentiated state of normal and malignant cells or how to define a "normal" cell in culture.</a> International Review of Cytology. 70, 27-100 (1981).</li><li>Serban, M. A., Prestwich, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular+extracellular+matrices:+solutions+for+the+puzzle.">Modular extracellular matrices: solutions for the puzzle.</a> Methods. 45 (1), 93-98 (2008).</li><li>Kaylan, K. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+lung+tumor+cell+drug+responses+as+a+function+of+matrix+context+and+genotype+using+cell+microarrays.">Mapping lung tumor cell drug responses as a function of matrix context and genotype using cell microarrays.</a> Integrative Biology (Cambridge). 8 (12), 1221-1231 (2016).</li><li>Lin, C. H., Jokela, T., Gray, J., LaBarge, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+Microenvironments+Impose+a+Continuum+of+Cellular+Responses+to+a+Single+Pathway-Targeted+Anti-cancer+Compound.">Combinatorial Microenvironments Impose a Continuum of Cellular Responses to a Single Pathway-Targeted Anti-cancer Compound.</a> Cell Reports. 21 (2), 533-545 (2017).</li><li>Gjorevski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+matrices+for+intestinal+stem+cell+and+organoid+culture.">Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture.</a> Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).</li></ol>

Betydningen av "dimensionality" og kontekst har vært en motiverende faktor i utviklingen av in vitro kultur systemer som verktøy i karakterisering av kreftceller gjennom deres interaksjon med mikromiljøet11, og evnen til in vitro kultur systemer for å etterligne in vivo-miljøet er en drivkraft bak jakten på å forbedre disse kultur systemene. In vitro-systemer, derimot, er fortsatt betydelige verktøy for kreftforskning nettopp på grunn av deres evne til å brenne den komplekse in vivo situ...

Dyrking av kreftcelle linjer på plast i to-dimensjonale (2D) monolagere er fortsatt en av de store arbeidshester for kreft forskere. Imidlertid er mikromiljøet i økende grad blir anerkjent for sin evne til å påvirke mobilnettet fenotyper. I kreft, tumor mikromiljøet er kjent for å påvirke flere cellulære atferd, inkludert vekst, overlevelse, invasjon, og respons på terapi1,2. Tradisjonell monolag cellekulturer vanligvis mangler mikromiljøet påvirkninger, noe som har ført til utvikling av mer komplekse tredimensjonale (3D) analyser for å dyrke celler, inkludert kommersielt tilgjengelige renset kjeller membran ekstrakter. Men disse renset matriser er vanligvis komplisert å bruke og lider av tekniske problemer som batch variasjon3 og komplekse komposisjoner3. Som et resultat, kan det være vanskelig å tildele funksjon til bestemte proteiner som kan påvirke cellulære fenotyper3.
For å løse disse begrensningene har vi utviklet mikromiljøet Microarray (MEMA)-teknologi, som reduserer mikromiljøet ned til enkle kombinasjoner av ekstracellulære Matrix (ECM) og løselig vekstfaktor proteiner4,5 . MEMA-plattformen muliggjør identifisering av dominerende microenvironmental faktorer som påvirker virkemåten til celler. Ved å bruke et array-format, kan tusenvis av kombinasjoner av mikromiljøet faktorer bli analyseres i et enkelt eksperiment. Den MEMA beskrevet her interrogates ~ 2 500 forskjellige unike mikromiljøet forhold. ECM proteiner trykt inn i brønn platene danner vekst pads på hvilke celler kan være kultivert. Oppløselige ligander legges til individuelle brønner, og skaper unike Kombinatorisk microenvironments (ECM + ligand) på hvert annet sted som cellene utsettes for. Celler er kultivert i flere dager, deretter fast, beiset, og avbildet å vurdere cellulære fenotyper som følge av eksponering for disse spesifikke mikromiljøet kombinasjoner. Siden microenvironments er enkle kombinasjoner, er det enkelt å identifisere proteiner som driver store fenotypiske endringer i cellene. MEMAs har blitt brukt med hell for å identifisere faktorer som påvirker flere cellulære fenotyper, inkludert de som driver celle skjebne beslutninger og respons på terapi4,5,6,7. Disse svarene kan valideres i enkle 2D eksperimenter og kan deretter vurderes under forhold som mer fullstendig recapitulate kompleksiteten i tumor mikromiljøet. MEMA-plattformen er svært tilpasningsdyktig til en rekke celletyper og endepunkter, forutsatt at gode fenotypiske biomarkører er tilgjengelige.

using microarrays to interrogate microenvironmental impact on cellular phenotypes in cancer

Forstå virkningen av mikromiljøet på fenotype av celler er et vanskelig problem på grunn av den komplekse blanding av både oppløselige vekstfaktorer og matrise-assosiert proteiner i mikromiljøet in vivo. Videre er lett tilgjengelige reagenser for modellering av microenvironments in vitro vanligvis bruk av komplekse blandinger av proteiner som er ufullstendig definert og lider fra parti til parti variasjon. Den mikromiljøet Microarray (MEMA) plattformen tillater vurdering av tusenvis av enkle kombinasjoner av mikromiljøet proteiner for deres innvirkning på mobilnettet fenotyper i en enkelt analysen. MEMAs er klargjort i brønn plater, som gjør det mulig å legge til individuelle ligander for å skille brønner som inneholder plassert ekstracellulære Matrix (ECM) proteiner. Kombinasjonen av løselig ligand med hver trykte ECM danner en unik kombinasjon. En typisk MEMA analysen inneholder større enn 2 500 unike Kombinatorisk microenvironments at cellene er eksponert for i en enkelt analysen. Som en test tilfellet var brystkreft cellelinjen MCF7 belagt på MEMA plattformen. Analyse av denne analysen identifiserte faktorer som både forsterke og hemme vekst og spredning av disse cellene. Den MEMA plattformen er svært fleksibel og kan utvides for bruk med andre biologiske spørsmål utover kreftforskning.

For å forenkle microenvironmental virkninger på cellevekst og spredning, og for å identifisere forhold som fremmet eller hemmet cellevekst og spredning, brystkreft cellelinjen MCF7 ble sådd på et sett av åtte 8-brønn MEMAs som beskrevet i protokollen. Denne analysen eksponert cellene til 48 forskjellige ECMs og 57 forskjellige ligander, for totalt 2736 Kombinatorisk microenvironmental forhold. Etter 71 i kultur var celler pulserende med EdU, fast, permeablized og farget med DAPI, reaksjonen for EdU-deteksjon, et a...

Watch this Scientific Journal Video about Using Microarrays to Interrogate Microenvironmental Impact on Cellular Phenotypes in Cancer at JoVE.com

Using Microarrays to Interrogate Microenvironmental Impact on Cellular Phenotypes in Cancer

Formålet med metoden som presenteres her er å vise hvordan mikromiljøet Microarrays (MEMA) kan være fabrikkert og brukes til å forhøre virkningen av tusenvis av enkle Kombinatorisk microenvironments på fenotype av kulturperler celler.

Bruke Microarrays å avhøre Microenvironmental Impact on Cellular fenotyper i Cancer

Understanding the impact of the microenvironment on the phenotype of cells is a difficult problem due to the complex mixture of both soluble growth ...

Å studere tumormikromiljøet er vanskelig på grunn av kompleksiteten. Vi har utviklet mikromiljømikroarrayer bestående av enkle kombinatoriske mikromiljøer som tillater identifisering av store drivere av tumorcellefenotyper. Den største fordelen med MEMA-plattformen er at fordi mikromiljøets forhold er definert, er det enkelt å identifisere mikromiljøfaktorer som driver fenotyper av interesse.MEMA-plattformen gjelder mye i andre ikke-kreftsystemer, inkludert primære cellestammer og stamceller. Det finnes en rekke tekniske triks og trinn som vi har utviklet for å øke hastigheten på det våte benkarbeidet og forenkle protokollen. Til å begynne med bruker du en touch pin-skriver til å skrive ut ekstracellulær matriseutskriftsblanding på fiducial-flekker i åtte-brønns plater.Bruk 350-mikrometer diameter pinner arrangert i en fire ganger-syv print head konfigurasjon for å skrive ut den ekstracellulære matrisen for mikromiljø mikroarrays. Kollagenblokken skrives ut på MMAer som et rutenett. De PBS-fylte brønnene gir ekstra fuktighet for å forhindre uttørking av den ekstracellulære matriseutskriftsblandingens kildeplate.Skriv ut matrisene i de åtte-brønnsplatene som 20 kolonner med 35 rader, totalt 700 plasser. Etter utskrift, oppbevar platene i en desiccator i minst tre dager før bruk. Først designe en 96-brønns platelayout med avstand som gjør det mulig å bruke en flerkanals pipette med fire avstandsspisser, slik at behandlingen av mange MEMA-plater kan gjøres samtidig.Deretter hente ligands fra fryseren, og tine i is i en laminær strømningshette. Knips kort og spinn ned hvert rør. Bruk produsentens anbefalte buffer til å fortynne ligandene til en 200 ganger fungerende lager.Pipette 10 mikroliter av hver 200 ganger ligand lager inn i tilsvarende brønn innenfor 96-brønnplaten. Bruk tetningsfilm for å forsegle platene og lagre dem på minus-20 grader Celsius. Lag ligand behandlingsplater i grupper, og fange alle metadata for nedstrøms analyse.Før du culturing celler, blokkere MEMAs med to milliliter per brønn av ubegrunnende blokkering buffer i 20 minutter. Bruk en Y-splitter med to Pasteur pipetter til å aspirere blokkeringsbuffer i flere brønner samtidig, og deretter trippelvaske brønnene med PBS. For å forhindre utskalking, la det endelige volumet av PBS i brønnene være klar for celleplating.Før et fullstendig MEMA-eksperiment kan du optimalisere MCF7-cellesåingkonsentrasjonen ved å utføre et celletitreringseksperiment. Et ideelt sted, som vist her, har tilstrekkelige celletall til å trekke ut data, men ikke så mange at stedet er altfor samløpet. I MEMA, aspirere de resterende PBS og frø MCF7 celler på 30,000 til 35, 000 celler per brønn i to milliliter av seeding medium.Plasser MEMA i en inkubator ved 37 grader Celsius. Etter vedheft over natten i inkubatoren, aspirerer mediet og erstatter med to milliliter med redusert vekstmedium for å isolere den stimulerende effekten av spesifikke ligande. Tin deretter en tidligere frossen ligand behandlingsplate på is.Sentrifuge tint plate ved 200 ganger g i ett minutt. Overfør 200 mikroliter medium fra hver brønn i MEMA-kulturplaten til riktig brønn i ligand-behandlingsplaten. Pipette opp og ned for å blande ligande med mediet, og overføre denne blandingen tilbake til riktig brønn i MEMA kulturplate.Lett rock for hånd og returnere MEMA plater til inkubatoren til kultur ligand-ECM kombinasjonen på 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Etter 71 timer legger du til 100 ganger EdU til MEMA-brønnene for en endelig konsentrasjon på 10 mikromos. Inkuber den i ytterligere en time ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid.Etter den endelige inkubasjonen, aspirer brønnene. Fiks MEMAer i to milliliter per brønn på 2% PFA i 15 minutter ved romtemperatur. Deretter aspirerer PFA fra brønnene.Permeabilize med to milliliter per brønn på 0,1% ikke-ionisk overflateaktivt middel i 15 minutter. Aspirer overflateaktivt middel, og vask deretter brønnene med to milliliter PBS og PBS-T, sekvensielt. Deretter legger du til 1,5 milliliter edu deteksjonsreaksjonsreagenser til hver brønn.Inkuber i en time ved romtemperatur, gynge og beskyttet mot lys. Deretter slukke reaksjonen med 1,5 milliliter kommersiell slukke buffer per brønn. Aspirer igjen, og vask med PBS-T før inkubering med optimaliserte konsentrasjoner av flekker eller antistoffer.Inkuber MEMA-brønner med primære antistoffer i fargebuffer, gynge ved fire grader Celsius over natten. Etter primær antistoff inkubasjon, vask brønner med PBS etterfulgt av PBS-T. Tilsett sekundære antistoffer i 0,5 mikrogram per milliliter DAPI, fortynnet i fargebuffer.Inkuber, gynge i en time ved romtemperatur i mørket. Vask brønner to ganger med to milliliter per brønn av PBS, og la dem stå i de to siste milliliter pbs. For å bilde farget MEMA, plasser den på mikroskopstadiet i et automatisert bildesystem med passende fluorescerende deteksjonskanaler.Utdata som resulterer i bildedata til et bildebehandlingssystem. Segmenter celler og beregn intensitetsnivåer ved hjelp av CellProfiler. I denne protokollen angir cellesyklusprofiler for binned DAPI intensitetsverdier versus celletall fra en åttebrønns plate celler i G1 versus G2 cellesyklusfase.Dette tilsvarer to nDNA-innhold i celler i tidlig vekstfase, og fire nDNA-innhold i celler som er i ferd med å gjennomgå mitose. Virkningen av mikromiljøet av ligande og ECM på både cellenummer og EdU-inkorporering er vist. Rød indikerer høyere cellenummer, og blått er lavere cellenummer.Mange av effektene er ligand-drevet, da ECM-tilstanden ikke sterkt påvirket cellenummer eller EdU-positivitet. Natagen 1 er et klart unntak, da tilstedeværelsen av dette ECM-molekylet hemmer cellebinding og vekst av MCF7. Ligands som FGF6 og neuregulin-1 alfa forbedre cellenummer og har høye forekomster av EdU inkorporering, mens ligands som amphiregulin og neuregulin-1 SMDF hemme cellebinding og vekst av celler.Et eksempel på MCF7-celler som vokser på et MEMA-sted behandlet med neuregulin-1 alfa, viser høye forekomster av EdU-inkorporering, indikert av rosa kjerner. I dette bildet er grønn flekk cellemaske, og blå er DAPI. Siden et fullstendig MEMA-eksperiment er dyrt, er det svært viktig å utføre optimaliseringstrinn, for eksempel celle- og serumtitreringer, før du utfører hele eksperimentet.Når mikromiljøforhold av interesse identifiseres ved hjelp av MEMA-plattformen, kan de spesifikke ligandene og ekstracellulære matriseproteinene studeres i mer dybde ved hjelp av tradisjonelle 2D- og 3D-cellekultursystemer.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantifisering av genekspresjon og Tumor Invasivitet Bruke Genetic Mosaikk

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection å produsere mus modeller av hjernemetastaser

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Counting Proteins in Single Cells with Addressable Droplet Microarrays

Telle proteiner i enkeltceller med adresserbare slippverktøy Microarrays

Often cellular behavior and cellular responses are analyzed at the population level where the responses of many cells are pooled together as an average ...

Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

Bruke Dot analysen å analysere migrering av cellen ark

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Med 22C 3 Anti-PD-L1 antistoff konsentrere seg om biopsi og cytologi eksempler fra ikke-småcellet lungekreft pasienter

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellular og cellulær lunge modell å studere svulst metastasering

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastisk farging på parafin-embedded lysbilder av pT3N0M0 magekreft vev

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse av kreft cellen invasjon og anti-metastatisk narkotikarelaterte Screening bruker Hydrogel mikro-kammer Array (HMCA)-baserte plater

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Karakterisere sykdom-relaterte mutanter av RAF familie kinaser ved hjelp av et sett av praktiske og gjennomførbare metoder

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Identifikasjon av transkripsjonsfaktorregulatorer ved hjelp av middels gjennomstrømningsscreening av arrayed biblioteker og en Dual-Luciferase-basert reporter

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...