Name: site-directed mutagenesis for in vitro and in vivo experiments exemplified with rna interactions in escherichia coli
Uploaded: 2019-02-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Site-Directed Mutagenesis for In Vitro and In Vivo Experiments Exemplified with RNA Interactions in Escherichia Coli at JoVE.com

作者要感谢南丹麦大学开放获取政策赠款。

1. 矢量选择
<ol><li>选择要使用的矢量。任何载体都适用于这种2步和3步 pcr 方法。</li>
	<li>根据载体的选择, 选择合适的限制性酶进行克隆。</li>
</ol>2. 现场定向诱变的底漆设计
<ol><li>在两步或3步 pcr 策略 (2 步仅用于突变 & lt;200 bp 之间做出决定)。对于两步 pcr, 请转到步骤 2.2, 对于3步 pcr, 请转到步骤2.3。</li>
	<li>设计两步 pcr 的引物。<ol>
<li>设计入门书1和3放大感兴趣的 dna, 并具?...

<ol>
	<li>Bouvier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+RNA+binding+to+5'+mRNA+coding+region+inhibits+translational+initiation.">Small RNA binding to 5' mRNA coding region inhibits translational initiation.</a> Molecular Cell. 32 (6), 827-837 (2008).</li><li>Jorgensen, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+regulatory+RNAs+control+the+multi-cellular+adhesive+lifestyle+of+Escherichia+coli.">Small regulatory RNAs control the multi-cellular adhesive lifestyle of Escherichia coli.</a> Molecular Microbioly. 84 (1), 36-50 (2012).</li><li>Antal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+bacterial+RNA+regulates+a+putative+ABC+transporter.">A small bacterial RNA regulates a putative ABC transporter.</a> The Journal of Biological Chemistry. 280 (9), 7901-7908 (2005).</li><li>Andreassen, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=sRNA-dependent+control+of+curli+biosynthesis+in+Escherichia+coli:+McaS+directs+endonucleolytic+cleavage+of+csgD+mRNA.">sRNA-dependent control of curli biosynthesis in Escherichia coli: McaS directs endonucleolytic cleavage of csgD mRNA.</a> Nucleic Acids Research. , (2018).</li><li>Thomason, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+RNA+that+regulates+motility+and+biofilm+formation+in+response+to+changes+in+nutrient+availability+in+Escherichia+coli.">A small RNA that regulates motility and biofilm formation in response to changes in nutrient availability in Escherichia coli.</a> Molecular Microbioly. 84 (1), 36-50 (2012).</li><li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerase+chain+reaction:+basic+protocol+plus+troubleshooting+and+optimization+strategies.">Polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e3998 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology.+Molecular+Cloning.">JoVE Science Education Database. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Molecular Cloning.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology.+The+Western+Blot.">JoVE Science Education Database. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. The Western Blot.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Biochemistry.+Electrophoretic+Mobility+Shift+Assay+(EMSA).">JoVE Science Education Database. Biochemistry. Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA).</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>Kunkel, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+efficient+site-specific+mutagenesis+without+phenotypic+selection.">Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (2), 488-492 (1985).</li><li>Laible, M., Boonrod, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homemade+site+directed+mutagenesis+of+whole+plasmids.">Homemade site directed mutagenesis of whole plasmids.</a> Journal of Visualized Experiments. (27), (2009).</li><li>Wells, J. A., Vasser, M., Powers, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cassette+mutagenesis:+an+efficient+method+for+generation+of+multiple+mutations+at+defined+sites.">Cassette mutagenesis: an efficient method for generation of multiple mutations at defined sites.</a> Gene. 34 (2-3), 315-323 (1985).</li><li>Cong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+genome+engineering+using+CRISPR/Cas+systems.">Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems.</a> Science. 339 (6121), 819-823 (2013).</li><li>Mali, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-guided+human+genome+engineering+via+Cas9.">RNA-guided human genome engineering via Cas9.</a> Science. 339 (6121), 823-826 (2013).</li></ol>

现场定向诱变有广泛的应用, 在这里, 具有代表性的结果, 从体内和体外实验中包括如何作出生物结论的技术。定位诱变长期以来一直是 rna 相互作用研究的黄金标准。这项技术的优势在于将相关突变与下游检测和实验 (如西方印迹或 emsa) 结合起来, 得出关于特定 dna 位点及其在基因产品功能中的重要性的结论。问题。在决定进行站点定向诱变时, 应仔细规划引物的设计, 以便从技术中获得最大收益 (?...

dna 通常被称为活细胞的蓝图, 因为细胞的所有结构都被编码在其 dna 的序列中。精确的复制和 dna 修复机制可确保只发生极低的突变率, 这对于维持编码基因的正确功能至关重要。dna 序列的变化会影响从 dna (通过转录因子和限制性酶识别) 开始的不同层次的连续功能, 然后影响 rna (碱对互补和二级结构改变) 和/或蛋白质 (氨基)酸取代、删除、添加或框架转移)。虽然许多突变不会显著影响基因功能, 但 dna 中的一些突变可能具有巨大的意义。因此, 位定向诱变是研究各级特定 dna 位点重要性的一个有价值的工具。
该协议描述了一种用于引入特定突变的有针对性的诱变方法。该协议依赖于两种不同的 pcr 策略: 2 步或3步 pcr。如果所需的突变接近感兴趣的 dna 的 5 ' 末端或 3 ' 末端 (从末端 lt;200 碱基对 (bp)), 则适用于所有情况下的三步 pcr。
在两步 pcr 方法中, 设计了3种引物, 其中一组引物被设计用于扩增感兴趣的 dna (引物1和 3, 分别向前和向后), 一个引物被设计为包含突变。如果突变接近 5 ' 末端, 引入引物 (引物 2) 的突变应该有相反的方向, 如果突变接近 3 ' 末端, 则应该有向前方向。在 pcr 的第一个步骤中, 引物 1 + 2 或 2 + 3 分别扩增一个靠近 5 ' 末端或 3 ' 末端的小片段。然后将生成的 pcr 产物用作第二步中的引物和引物1或 3, 从而导致 pcr 产物在感兴趣的 dna 中发生突变 (图 1 a)。
在三步 pcr 中, 设计了4种引物, 其中一组引物被设计用于扩增感兴趣的 dna (引物1和 4, 分别向前和向后), 一组引物设计为包含具有重叠互补的特定突变(引物2和 3, 分别反向和正向)。在第一步和第二步中, 引物 1 + 2 和 3 + 4 放大 5 ' 和 3 ' 端。在第三步中, 从第一步和第二步产生的 pcr 产品被用作模板, 并与引物 1 + 4 一起放大。因此, 产生的 pcr 产物是所需突变的 dna (图 1 b)。
虽然突变的 dna 可用于任何下游应用, 但该协议描述了如何将 dna 重新组合为克隆载体。克隆载体的使用有几个优点, 如易于克隆和特定的实验应用取决于载体的特征。此功能通常用于 rna 相互作用研究。rna 相互作用研究的另一种技术是与另一个 rna1、2或蛋白质3、4对复杂的 rna进行结构探测。然而, 结构探测只在体外进行, 而位定向诱变和随后的克隆允许在体内进行相互作用研究。
现场定向诱变已被广泛用于 rna 相互作用研究, 在此介绍。然而, 关于2步或3步 pcr 的关键方法适用于任何一片 dna, 因此不仅限于 rna 相互作用研究。
为了说明这项技术及其可能的用途, 使用了对大肠杆菌 (大肠杆菌) 的 mrna、 csgd、转录后调节重要区域的表征。在大肠杆菌中, csgd是由小的非编码 rna mcas 与蛋白质 hfq 合作, 抑制 csgd2,4,5的蛋白表达。该技术用于将突变引入 csgd和 mcas 之间的基对区, 以及csgd的 hfq 结合位点。然后将获得的 dna 克隆到适合后续实验的载体中。该技术的下游应用包括体内和体外实验。例如, 例子1在体内使用西方印迹法进行表征, 例子2在体外使用电泳移位分析 (emsa) 进行定性。在这两种情况下, 说明了如何将位定向诱变与其他技术结合起来, 对感兴趣的基因作出生物学结论。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-GroEL antibody produced in rabbit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>G6532</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azure c200</td>
			<td>Azure</td>
			<td>NA</td>
			<td>Gel imaging workstation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom DNA oligo</td>
			<td>Merck</td>
			<td>VC00021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeNovix DS-11</td>
			<td>DeNovix</td>
			<td>NA</td>
			<td>Spectrophotometer for nucleic acid measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Gel Loading Dye (6X)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R0611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide solution 1 %</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>2218.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJET Gel Extraction Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>K0691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneRuler DNA Ladder Mix</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>SM0333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gerard GeBAflex-tube Midi</td>
			<td>Gerard Biotech</td>
			<td>TO12</td>
			<td>Dialysis tubes for electro elution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 Transcription Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Sub Cell GT Cell</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1704406</td>
			<td>Horizontal electrophoresis system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal ANTI-FLAG M2 antibody produced in mouse</td>
			<td>Merck</td>
			<td>F3165</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Immunoglobulins</td>
			<td>Dako Cytomation</td>
			<td>P0447</td>
			<td>HRP conjucated secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoSpin miRNA</td>
			<td>Macherey Nagel</td>
			<td>740971</td>
			<td>RNA purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>NP0323BOX</td>
			<td>Bis-Tris gels for protein separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with HF Buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0531S</td>
			<td>DNA polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerPac HC High-Current Power Supply</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1645052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Immunoglobulins</td>
			<td>Dako Cytomation</td>
			<td>P0448</td>
			<td>HRP conjucated secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeaKem LE Agarose</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SigmaPlot</td>
			<td>Systat Software Inc</td>
			<td>NA</td>
			<td>Graph and data analysis software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T100 Thermal Cycler</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1861096</td>
			<td>PCR machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202</td>
			<td>Ligase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 Polynucleotide Kinase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0201S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAE Buffer (Tris-acetate-EDTA) (50X)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>B49</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

site-directed mutagenesis for in vitro and in vivo experiments exemplified with rna interactions in escherichia coli

位定向诱变是一种技术, 用于引入特定的突变在 dna 中, 以研究小的非编码核糖核酸 (srna) 分子与目标信使 rna (mrna) 之间的相互作用。此外, 位定向诱变被用来映射特定的蛋白质结合位点到 rna。描述了基于两步和三步 pcr 的突变导入。该方法适用于所有蛋白质-rna 和 rna-rna 相互作用研究。简而言之, 该技术依赖于设计具有所需突变的引物, 并通过2或3个步骤的 pcr 合成具有突变的 pcr 产品。然后将 pcr 产物用于克隆。在这里, 我们描述了如何执行站点定向诱变与2步和3步的方法, 以引入突变的 srna, mcas, 和 mrna, csgd, 以研究 rna-rna 和 rna-蛋白质相互作用. 我们应用这项技术来研究 rna 的相互作用;然而, 该技术适用于所有的诱变研究 (如 dna-蛋白质相互作用, 氨基酸替代/添加)。除非自然碱以外, 可以引入任何类型的突变, 但只有在 pcr 产品可用于下游应用 (例如克隆和进一步 pcr 模板) 的情况下, 该技术才适用。

为了研究 rna 在csgd转录后调控方面的相互作用, 选择了一个双载体设置: 一个表示 csgd mrna, 另一个表示小的非编码 rna, mcas. csgd被克隆到 pbad33 中, 它是一种抗氯霉素的阿拉伯糖诱导中份质粒, 并将 mcas 克隆到微型 r1 pndm220 中, 这是一种异丙基β-d-1-硫代唑酮 (iptg) 诱导的低拷贝质粒。氨匹西林的耐受性。利用引物 1 a 和 4 a (4 a 含 flg 序列) 对野生型csgd...

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Site-Directed Mutagenesis for In Vitro and In Vivo Experiments Exemplified with RNA Interactions in Escherichia Coli

体外和体内实验的位定向诱变-以大肠杆菌rna相互作用为例

位定向诱变是一种用于引入脱氧核糖核酸 (dna) 中的特定突变的技术。该协议描述了如何进行现场定向诱变与2步和3步聚合酶链反应 (pcr) 为基础的方法, 这是适用于任何 dna 片段的利益。

Site-directed mutagenesis is a technique used to introduce specific mutations in DNA to investigate the interaction between small non-coding ribonucleic ...

站点定向突变对于研究分子相互作用（如RNA-RNA）和RNA蛋白相互作用非常有用。该协议描述了如何使用两步或三步 PCR 方法执行站点定向突变。该方法的主要优点是可合并的不同突变的多样性，以及相对容易和成本这样做。首先，使用野生型DNA模板和底向对二、一、二、三，具体为2步，或底对为三步、一、四，专用为三步PCR获取PCR产品一。要通过阿加罗斯凝胶电泳验证PCR产品，使用微波炉在100毫升的1X TAE缓冲液中溶解两克阿加罗斯，使2%的加糖凝胶。以每毫升0.5微克的最终浓度加入溴化乙基。然后铸造阿加罗斯凝胶。凝固后，将它放在电泳单元中。装载已知大小的DNA梯子，将PCR样品与DNA加载染料混合到井中。以 75 伏运行样品 45 分钟。并在紫外线透光器或凝胶成像系统上可视化波段。接下来，根据制造商协议，使用凝胶提取试剂盒净化PCR产品，用分光光度计测量纯化DNA的浓度。然后将纯化的DNA储存在零下20摄氏度的TE缓冲液中。要开始使用两步PCR进行位点定向突变，首先使用野生型DNA模板，然后底向对2、1和2、2，用于5个底基因突变，或底数对2、2、2、3个底因突变获得PCR产品2。通过凝胶电泳验证PCR产品，净化PCR产品，并测量其浓度，如前所述。然后使用野生型DNA模板和PCR产品2作为底像，连同底像2，3为5个底基因突变，或底像2，一个为三个底基因突变，获得PCR产品三。通过凝胶电泳验证PCR产品，净化PCR产品，并测量其浓度，如前所述。然后将纯化的DNA储存在零下20摄氏度的TE缓冲液中。要开始使用三步PCR进行现场直接突变，首先使用野生型DNA模板和底向对三、一、三、二获得PCR产品二。使用野生型DNA模板和底向对三、三、三、四，获得PCR产品三。使用野生型DNA模板和底向对三、三、四，获得PCR产品三。通过凝胶电泳验证PCR产品，净化PCR产品，并测量其浓度，如前所述。最后使用二至五纳米的PCR产品二、三作为模板，以及底像对三、一、三、四，获得PCR产品四。通过凝胶电泳验证PCR产品，净化PCR产品，并测量其浓度，如前所述。将纯化的DNA储存在零下20摄氏度的TE缓冲液中。在这项研究中，使用两步和三步位点定向突变来研究与CsgD的转录后调控的RNA相互作用。野生型CsgD被PCR放大产生PCR产品IA，野生型mcs被PCR放大，产生PCR产品IB。使用三步PCR策略，前两个步骤合成了PCR产品IIA和IIIA，在第三步中合成了IVA，在CsgD中引入突变。同样，mcaS 中引入了免费的站点定向突变，在前两个步骤中产生 PCR 产品 IIB、IIIB，在第三步中引入 IVB。西方的印迹分析表明，虽然野生型 mcaS 的表达阻止野生型 CsgD 的翻译，但 mcaS 或 CsgD 的突变减轻了观察到的抑制。然而，CsgD 和 mcaS 的突变都阻止 CsgD 的翻译。使用两步PCR策略，在第一步合成PCR产品IC、IID、IIE、IIF和IIG，在第二步中合成PCR产品IIIC、IIID、IIIE、IIIF和IIIG，将突变引入整个CsgD DNA。使用PCR产品IIIC、IIID、IIIE、IIIF和IIIG合成的HFQ结合到体外转录的CsgD野生型和突变RNA的EMSA结果表明突变等位基因的KD值增加。这证明HFQ可以更有效地与突变体结合。此外，HFQ在CsgD上有几个结合点，这表现在野生型RNA的三个班次上。但是，对于不同的突变RNA，只观察到两个绑定位点。因此，位点定向突变方法可识别对HFQ完全结合重要的CsgD mRNA的初级和/或次要结构。此处描述的站点定向突变发生方法依赖于 PCR。良好的 PCR 实践对于该方法至关重要，可能需要优化才能成功。站点定向突变只具有所有三种方法，如 EMSA 和西膨胀功能。其他方法，例如，包括各种结构测定和一些活动分析，以及翻译后修改研究。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Site-Directed Mutagenesis for In Vitro and In Vivo Experiments Exemplified with RNA Interactions in Escherichia Coli

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

的pH依赖性活性的检测<em&gt;大肠杆菌</em&gt;陪护HdeB<em&gt;体外</em&gt;和<em&gt;在体内</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

科研

生物化学

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

时间分辨电喷雾电离氢氘交换质谱用于研究蛋白质结构与动态

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

RNA 结合区质量谱鉴定的样品制备

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

Quantification of the Abundance and Charging Levels of Transfer RNAs in Escherichia coli

Quantification of the Abundance and Charging Levels of Transfer RNAs in Escherichia coli

丰度和收费水平的转移 Rna 在大肠杆菌中的量化

Transfer RNA (tRNA) is an essential part of the translational machinery in any organism. tRNAs bind and transfer amino acids to the translating ribosome. ...

Characterization of Glycoproteins with the Immunoglobulin Fold by X-Ray Crystallography and Biophysical Techniques

用 X 射线晶体学和生物物理技术表征免疫球蛋白折叠的糖蛋白

Glycoproteins on the surface of cells play critical roles in cellular function, including signalling, adhesion and transport. On leukocytes, several of ...

Application of Biolayer Interferometry (BLI) for Studying Protein-Protein Interactions in Transcription

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生物层干涉测量(BLI)在转录中研究蛋白质-蛋白质相互作用的应用

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Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

大鼠胰腺组织快速、经济高效的RNA提取

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Site Specific Lysine Acetylation of Histones for Nucleosome Reconstitution using Genetic Code Expansion in Escherichia coli

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网站特定赖氨酸乙酰化的组蛋白为核体重组使用遗传密码扩展在 埃斯切里西亚大肠杆菌

Acetylated histone proteins can be easily expressed in Escherichia coli encoding a mutant, N&#949;-acetyl-lysine (AcK)-specific Methanosarcina mazi ...