Het algemene doel van dit protocol is het produceren van een hardnekkig zintuiglijk conflict voor de studie van langdurig leren bij vrij gedragende muizen. Door de experimentele kosten en tijd van zintuiglijk leren te verlagen, is deze aanpak geschikt voor de combinatie van in vivo en in vitro experimenten. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op teen knijpen in een verdoofde muis, gebruik maken van een paar stompe tangen om de huid te grijpen aan de achterkant van het hoofd en gebruik schaar om een anderhalve cm longitudinale incisie om de schedel bloot te leggen.
Kras het periosteum voorzichtig met een scalpel en breng een druppel groene activator aan op het midden van de schedel om de botpermeabiliteit te verhogen. Meng vervolgens een lepel polymeer uit de implantatiekit met vijf druppels monomeer en een druppel katalysator en bestrijk een royale hoeveelheid cementmix tussen de lambda- en bregmaschedeloriëntatiepunten. Met behulp van een veegbeweging van lambda naar bregma, plaats snel de hoofdpost op het cement en opnieuw extra cement rond het inferieure deel van de post om ervoor te zorgen dat de hoofdpost stevig aan de schedel plakt.
Terwijl het cement droogt, meng het harspoeder met harsvloeistof tot een gladde consistentie en breng het resulterende harsmengsel aan op het gedroogde cement en rond de koppost. Nadat u de hars drie minuten heeft laten drogen, gebruikt u een Vicryl 4-0 hechting om de huid aan de achterkant van de oren te sluiten en een wattenstaafje te gebruiken om een jodiumoplossing van 10 tot 20% op de incisie aan te brengen. Plaats het dier vervolgens onder een rood licht met controle tot volledig herstel.
Achtenveertig uur na de operatie lijn de gaten in het gestreepte apparaat met de gaten in de hoofdpost en gebruik een 1,3 mm hex schroevendraaier en twee 1,2 mm schroeven om het apparaat vast te zetten aan de hoofdpost. We raden u aan het apparaat met behulp van een tweede operator op de koppost te bevestigen om te voorkomen dat de hoofdpost wordt afgestoten of het dier met de schroevendraaier wordt bezeerd. Om de schijntoestand te herstellen, draait u het apparaat ondersteboven en met het achterste deel van het apparaat naar de rostral-richting lijn de gaten in het apparaat met de gaten in de hoofdpost.
Controleer of het apparaat goed beveiligd is en niet door het dier kan worden verwijderd en dat het apparaat geen druk rechtstreeks op de neus uitoefent, wat mogelijk pijn, ademhalingsproblemen of huidletsel kan veroorzaken. Aangezien de muizen sommige gedragsafwijkingen kunnen vertonen tijdens de eerste 48 uur van het dragen van het apparaat, houd de dieren in de gaten gedurende deze tijd en biedt u gemakkelijke toegang tot voedsel en water totdat de dieren gewend raken. Weeg de muizen onmiddellijk na de implantatie en opnieuw om de 24 uur daarna tot het einde van het experiment, met speciale aandacht voor de muizen die het gestreepte apparaat dragen.
Om de sensorische respons van de op het apparaat aangepaste dieren vast te leggen, bevestigt u de eerste muis op de draaitafel met de schroeven in de hoofdpost en plaatst u een schermkoepel rond het dier. Schakel alle lichten in de kamer uit, behalve de optokinetische projector en start de optokinetische reflex volledige veldstimulatie opname bij verschillende snelheden in zowel de richting met de klok mee en tegen de klok in. Zodra de opnames voorbij zijn, verwijder de koepel en zet de lichten aan.
Om de vestibulo-oculaire reflex in pikdonker op te nemen, breng dan een druppel van 2% pilocarpine aan op de ogen van het dier en wacht ten minste vijf minuten voordat u de zalf voorzichtig verwijdert met een wattenstaafje. Doe alle lichten weer uit en plaats een doos over de draaitafel om het dier in het pikkedonker te houden. Voordat u begint met de horizontale vestibulo-oculaire reflextest met sinusoïdale hoekrotaties rond een verticale as met verschillende frequenties en/of verschillende snelheden.
Wanneer de tweede opnamesessie is voltooid, keert u de muis terug naar zijn kooi onder een infraroodlamp met controle totdat het dier volledig is hersteld van de secundaire vaatverwijdende effecten van de pilocarpine. Na twee weken het dragen van een schijnvertoning of een gestreept apparaat, de vestibulo-oculaire reflex reacties van de schijnmuizen blijven ongewijzigd na de aanpassing, terwijl de gestreepte apparaat aangepaste dieren tonen een drastisch gecompromitteerde reflex reactie. Kwantificering van de gemiddelde vestibulo-oculaire reflex winsten bij een vaste frequentie van 0,5 hertz en bij 40 graden per seconde voor en na de visueel-vestibulaire mismatch protocol onthult een sterke winst daling van de muizen die het gestreepte apparaat droeg, terwijl de schijnmuizen niet vertonen significante winst veranderingen.
De optokinetische reflex van muizen die het gestreepte apparaat dragen, is echter vergelijkbaar met die van de periode voorafgaand aan het visueel-vestibulaire protocol en met die van de schijndieren. Zorg ervoor dat u de muizen dagelijks in de gaten houdt en ervoor zorgt dat het apparaat correct op de muizen is geplaatst en dat het hun routines niet belemmert. Na deze procedure in vitro elektrofysiologie of neuronale beeldvorming voor het identificeren van sellar aanpassingsmechanismen of gedragstesten voor het bestuderen van verschillende reflex uitgangen kunnen worden uitgevoerd.