इस प्रोटोकॉल का समग्र लक्ष्य स्वतंत्र रूप से व्यवहार चूहों में दीर्घकालिक सीखने के अध्ययन के लिए लगातार संवेदी संघर्ष का उत्पादन करना है। संवेदी सीखने की प्रयोगात्मक लागत और समय को कम करना, यह दृष्टिकोण वीवो और इन विट्रो प्रयोगों के संयोजन को समायोजित करता है। एक बेहोश माउस में पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, कुंद संदंश की एक जोड़ी का उपयोग करने के लिए सिर के पीछे त्वचा समझ और कैंची का उपयोग करने के लिए एक डेढ़ सेमी देशांतर चीरा बनाने के लिए खोपड़ी का पर्दाफाश ।
धीरे-धीरे एक स्केलपेल के साथ पेरिओस्टियम को खरोंच करें और हड्डी पारगम को बढ़ाने के लिए खोपड़ी के बीच पर हरे रंग के एक्टिवेटर की एक बूंद लगाएं। अगले मोनोमर की पांच बूंदों और उत्प्रेरक की एक बूंद के साथ प्रत्यारोपण किट से बहुलक का एक चम्मच मिश्रण और लैम्ब्डा और ब्रेग्मा खोपड़ी स्थलों के बीच सीमेंट मिश्रण की एक उदार राशि ब्रश । लैम्ब्डा से ब्रेग्मा तक स्वाइप मोशन का उपयोग करके, हेडपोस्ट को सीमेंट पर जल्दी से रखें और पोस्ट के अवर हिस्से के चारों ओर अतिरिक्त सीमेंट को फिर से लागू करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि हेडपोस्ट खोपड़ी में सुरक्षित रूप से चिपक जाए।
जबकि सीमेंट सूख रहा है, राल तरल के साथ राल पाउडर को एक चिकनी स्थिरता में मिलाएं और परिणामस्वरूप राल मिश्रण को सूखे सीमेंट और हेडपोस्ट के आसपास लागू करें। राल को तीन मिनट तक सूखने की अनुमति देने के बाद, कान के पीछे त्वचा को बंद करने के लिए एक विक्रिल 4-0 सीवन का उपयोग करें और चीरा लगाने के लिए 10 से 20% आयोडीन समाधान लागू करने के लिए कपास झाड़ू का उपयोग करें। फिर पूरी वसूली तक निगरानी के साथ एक लाल बत्ती के नीचे जानवर जगह है।
सर्जरी के बाद ४८ घंटे हेडपोस्ट में छेद के साथ धारीदार डिवाइस में छेद संरेखित करें और हेडपोस्ट के लिए डिवाइस को सुरक्षित करने के लिए 1.3 मिमी हेक्स पेचकश और दो 1.2 मिमी शिकंजा का उपयोग करें। हम हेडपोस्ट से तेजस्वी या पेचकश के साथ जानवर को चोट पहुंचाने के जोखिम से बचने के लिए एक दूसरे ऑपरेटर की मदद से हेडपोस्ट पर डिवाइस को ठीक करने की सलाह देते हैं। नकली हालत को ठीक करने के लिए, डिवाइस को उल्टा करें और रोस्ट्रल दिशा का सामना करने वाले डिवाइस के पीछे के हिस्से के साथ डिवाइस में छेद को हेडपोस्ट में छेद के साथ संरेखित करें।
पुष्टि करें कि डिवाइस अच्छी तरह से सुरक्षित है और जानवर द्वारा हटाया नहीं जा सकता है और यह कि डिवाइस सीधे नाक पर दबाव लागू नहीं करता है, जो संभावित रूप से दर्द, सांस लेने में कठिनाइयों, या त्वचा की चोट का कारण बन सकता है। चूंकि चूहे डिवाइस पहनने के पहले 48 घंटों के दौरान कुछ व्यवहार असामान्यताओं का प्रदर्शन कर सकते हैं, इस समय के दौरान जानवरों की बारीकी से निगरानी कर सकते हैं और जानवरों के आदत होने तक भोजन और पानी तक आसान पहुंच प्रदान करते हैं। प्रत्यारोपण के तुरंत बाद चूहों का वजन करें और उसके बाद हर 24 घंटे में प्रयोग के अंत तक, धारीदार डिवाइस पहने चूहों पर विशेष ध्यान देते हैं।
डिवाइस-अनुकूलित जानवरों की संवेदी प्रतिक्रिया रिकॉर्ड करने के लिए, हेडपोस्ट में डाले गए शिकंजा के साथ टर्नटेबल पर पहला माउस सुरक्षित करें और जानवर के चारों ओर एक स्क्रीन गुंबद रखें। ऑप्टोकाइनेटिक प्रोजेक्टर को छोड़कर कमरे में सभी रोशनी बंद करें और दक्षिणावर्त और प्रतिवर्त दोनों दिशाओं में कई अलग-अलग वेग पर ऑप्टोकाइनेटिक रिफ्लेक्स फुल फील्ड उत्तेजना रिकॉर्डिंग शुरू करें। रिकॉर्डिंग खत्म होते ही गुंबद हटाकर लाइटें चालू कर दें।
पिच अंधेरे में वेस्टिबुलो-ऑक्यूलर पलटा रिकॉर्ड करने के लिए, जानवर की आंखों में 2% पिलोकार्पाइन की एक बूंद लागू करें और धीरे से एक कपास झाड़ू के साथ मरहम हटाने से पहले कम से कम पांच मिनट इंतजार करें। सभी रोशनी को फिर से बंद करें और जानवर को पिच अंधेरे में रखने के लिए टर्नटेबल पर एक बॉक्स रखें। विभिन्न आवृत्तियों और/या विभिन्न वेग के साथ एक ऊर्ध्वाधर धुरी के चारों ओर साइनसोइडल कोणीय घूर्णन का उपयोग करके क्षैतिज वेस्टिबुलो-ऑक्यूलर रिफ्लेक्स टेस्ट शुरू करने से पहले।
जब दूसरा रिकॉर्डिंग सत्र समाप्त हो जाता है, तो माउस को निगरानी के साथ एक अवरक्त दीपक के नीचे अपने पिंजरे में वापस करें जब तक कि जानवर पूरी तरह से पिलोकार्पाइन के माध्यमिक वासोडिलेटर प्रभावों से बरामद न हो जाए। दो सप्ताह के बाद या तो एक दिखावा या एक धारीदार डिवाइस पहने हुए, नकली चूहों के वेस्टिबुलो-नेत्र पलटा प्रतिक्रियाएं अनुकूलन के बाद अनछुए रहते हैं, जबकि धारीदार डिवाइस-अनुकूलित जानवर एक काफी समझौता पलटा प्रतिक्रिया प्रदर्शित करते हैं । 0.5 हर्ट्ज की एक निश्चित आवृत्ति पर और दृश्य-वेस्टिबुलर बेमेल प्रोटोकॉल से पहले और बाद में 40 डिग्री प्रति सेकंड पर मतलब वेस्टिबुलो-ऑक्यूलर रिफ्लेक्स लाभ का मात्राकरण चूहों में एक मजबूत लाभ में कमी का पता चलता है जो धारीदार डिवाइस पहनते थे जबकि नकली चूहों ने महत्वपूर्ण लाभ परिवर्तन प्रदर्शित नहीं किए थे।
हालांकि, धारीदार डिवाइस पहने चूहों का ऑप्टोकाइनेटिक पलटा दृश्य-वेस्टिबुलर प्रोटोकॉल से पहले की अवधि के लिए मनाया गया है और नकली जानवरों द्वारा प्रदर्शित किया गया है। चूहों की दैनिक निगरानी करना सुनिश्चित करें और यह सुनिश्चित करें कि डिवाइस चूहों पर सही ढंग से तैनात है और यह उनकी दिनचर्या में बाधा नहीं डालता है। विभिन्न पलटा आउटपुट का अध्ययन करने के लिए सेलर अनुकूलन तंत्र या व्यवहार परख की पहचान करने के लिए विट्रो इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी या न्यूरोनल इमेजिंग में इस प्रक्रिया का पालन किया जा सकता है।