Det overordnede målet med denne protokollen er å produsere en vedvarende sensorisk konflikt for studiet av langsiktig læring i fritt oppfører seg mus. Denne tilnærmingen reduserer de eksperimentelle kostnadene og tiden for sensorisk læring, og rommer kombinasjonen av in vivo- og in vitro-eksperimenter. Etter å ha bekreftet mangel på respons på tåklem i en sedert mus, bruk et par stumpe tang for å forstå huden på baksiden av hodet og bruk saks for å lage en og en halv cm langsgående snitt for å avsløre skallen.
Klø forsiktig i periosteum med en skalpell og påfør en dråpe grønn aktivator på midten av skallen for å øke beinpermeabiliteten. Deretter blander du en skje polymer fra implantasjonssettet med fem dråper monomer og en dråpe katalyser og børster en sjenerøs mengde sementblanding mellom lambda og bregma skallen landemerker. Bruk en sveipende bevegelse fra lambda til bregma, plasser raskt hodestolpen på sementen og bruk ekstra sement rundt den underlegne delen av stolpen for å sikre at hodestolpen fester seg sikkert til skallen.
Mens sementen tørker, bland harpikspulveret med harpiksvæske til en jevn konsistens og påfør den resulterende harpiksblandingen på den tørkede sementen og rundt hodestolpen. Etter å ha tillatt harpiksen å tørke i tre minutter, bruk en Vicryl 4-0 sutur for å lukke huden på baksiden av ørene og bruk en bomullspinne til å påføre en 10 til 20% jodløsning på snittet. Plasser deretter dyret under rødt lys med overvåking til full gjenoppretting.
Førtiåtte timer etter operasjonen justere hullene i den stripete enheten med hullene i hodestolpen og bruke en 1,3 mm hex skrutrekker og to 1,2 mm skruer for å feste enheten til hodestolpen. Vi anbefaler at du fester enheten på hodestolpen ved hjelp av en annen operatør for å unngå fare for å rive av hodestolpen eller skade dyret med skrutrekkeren. For å fikse sham-tilstanden, snu enheten opp ned og med den bakdelen av enheten vendt mot rostralretningen justere hullene i enheten med hullene i hodestolpen.
Bekreft at enheten er godt sikret og ikke kan fjernes av dyret, og at enheten ikke legger press direkte på nesen, noe som potensielt kan forårsake smerte, pustevansker eller hudskader. Som musene kan vise noen atferdsmessige abnormiteter i løpet av de første 48 timene med bruk av enheten, overvåke dyrene nøye i løpet av denne tiden og gi enkel tilgang til mat og vann til dyrene blir akklimatisert. Vei musene umiddelbart etter implantasjon og igjen hver 24.
For å registrere sensorisk respons fra de enhetstilpassede dyrene, fest den første musen på platespilleren med skruene satt inn i hodestolpen og plasser en skjermkuppel rundt dyret. Slå av alle lysene i rommet med unntak av den optokinetiske projektoren og start optokinetisk refleks full feltstimuleringsopptak ved flere forskjellige hastigheter i både retning med klokken og mot klokken. Så snart opptakene er over, fjern kuppelen og slå på lysene.
For å registrere vestibulo-okulær refleks i bekmørkt, påfør en dråpe 2% pilokarpin på dyrets øyne og vent minst fem minutter før du forsiktig fjerner salven med en bomullspinne. Slå av alle lysene igjen og plasser en boks over platespilleren for å holde dyret i bekmørkt. Før du starter den horisontale vestibulo-okulære reflekstesten ved hjelp av sinusformede kantete rotasjoner rundt en vertikal akse med forskjellige frekvenser og/eller forskjellige hastigheter.
Når den andre opptaksøkten er ferdig, returnerer du musen til buret under en infrarød lampe med overvåking til dyret er fullstendig gjenopprettet fra de sekundære vasodilatoreffektene av pilokarpinen. Etter to uker iført enten en bløff eller en stripete enhet, forblir de vestibulo-okulære refleksresponsene til de falske musene uendret etter tilpasningen, mens de stripete enhetstilpassede dyrene viser en drastisk kompromittert refleksrespons. Kvantifisering av gjennomsnittlig vestibulo-okulær refleks gevinster med en fast frekvens på 0,5 hertz og ved 40 grader per sekund før og etter den visuelle-vestibulære mismatchprotokollen avslører en sterk gevinstreduksjon i musene som hadde på seg den stripete enheten mens de falske musene ikke viste betydelige gevinstendringer.
Den optokintiske refleksen av mus som bruker den stripete enheten, kan imidlertid sammenlignes med den som observeres for perioden før den visuelle vestibulære protokollen og til den som demonstreres av de falske dyrene. Pass på å overvåke musene daglig og for å sikre at enheten er riktig plassert på musene, og at den ikke påvirker deres rutiner. Etter denne prosedyren in vitro elektrofysiologi eller nevronal bildebehandling for å identifisere sellar tilpasning mekanismer eller atferdsanalyser for å studere ulike refleks utganger kan utføres.