Det övergripande målet med detta protokoll är att producera en ihållande sensorisk konflikt för studier av långvarigt lärande i fritt beter möss. Sänka den experimentella kostnaden och tiden för sensorisk inlärning, rymmer detta tillvägagångssätt kombinationen av in vivo och in vitro-experiment. Efter att ha bekräftat en brist på svar på tå nypa i en sövd mus, använd ett par trubbiga tövråkar för att förstå huden på baksidan av huvudet och använda sax för att göra en en och en halv cm längsgående snitt för att exponera skallen.
Skrapa försiktigt fram benhinnan med en skalpell och applicera en droppe grön aktivator på mitten av skallen för att öka benpermeabiliteten. Nästa blanda en sked av polymer från implantation kit med fem droppar monomer och en droppe katalyzer och borsta en generös mängd cement mix mellan lambda och bregma skull landmärken. Med hjälp av en svepande rörelse från lambda till bregma, snabbt placera huvudstolpen på cement och återapplicera ytterligare cement runt sämre delen av stolpen för att säkerställa att huvudposten fastnar säkert till skallen.
Medan cementen torkar, blanda harts pulver med harts vätska till en slät konsistens och tillämpa den resulterande harts blandningen till torkad cement och runt headpost. Efter att ha cktset att torka i tre minuter, använd en Vicryl 4-0 sutur för att stänga huden på baksidan av öronen och använda en bomullspinne för att applicera en 10 till 20%jodlösning på snittet. Placera sedan djuret under rött ljus med övervakning tills fullständig återhämtning.
Fyrtio åtta timmar efter operationen rikta hålen i den randiga enheten med hålen i headpost och använda en 1,3 mm hex skruvmejsel och två 1,2 mm skruvar för att säkra enheten till headpost. Vi rekommenderar att du fäster enheten på huvudstolpen med hjälp av en andra operatör för att undvika risken att slita av huvudstolpen eller skada djuret med skruvmejseln. För att fixera skentillståndet, vänd enheten upp och ner och med den bakre delen av enheten vänd mot den rostrala riktningen rikta in hålen i enheten med hålen i huvudstolpen.
Bekräfta att enheten är väl säkrad och inte kan avlägsnas av djuret och att enheten inte använder tryck direkt på näsan, vilket potentiellt kan orsaka smärta, andningssvårigheter eller hudskada. Eftersom mössen kan uppvisa vissa beteendemässiga avvikelser under de första 48 timmarna av att bära enheten, övervaka djuren noga under denna tid och ge enkel tillgång till mat och vatten tills djuren blir acklimatiserade. Väg mössen omedelbart efter implantationen och igen var 24:e timme därefter till slutet av experimentet, vilket ger särskild uppmärksamhet åt mössen som bär den randiga enheten.
För att registrera de apparatanpassade djurens sensoriska respons, säkra den första musen på skivspelaren med skruvarna insatta i huvudstolpen och placera en skärmkupol runt djuret. Stäng av alla lampor i rummet utom för optokinetiska projektorn och starta optokinetic reflex full fält stimulering inspelning vid flera olika hastigheter i både medurs och moturs riktningar. Så snart inspelningarna är över, ta bort kupolen och slå på lamporna.
För att registrera vestibulo-okulär reflex i beck mörkt, applicera en droppe 2%pilokarpin på djurets ögon och vänta minst fem minuter innan försiktigt ta bort salvan med en bomullspinne. Släck alla lampor igen och placera en låda över skivspelaren för att hålla djuret i beckmörk. Innan det horisontella testet av vestibulo-okulär reflex inleds med hjälp av sinusformiga vinkelrotationer runt en vertikal axel med olika frekvenser och/eller olika hastigheter.
När den andra inspelningssessionen är klar, returnera musen till sin bur under en infraröd lampa med övervakning tills djuret är helt återställd från de sekundära vasodilaterande effekterna av pilokarpin. Efter två veckor bär antingen en bluff eller en randig enhet, vestibulo-okulär reflex svar av skenmössan förblir oförändrade efter anpassningen, medan den randiga enheten anpassade djur visar ett drastiskt komprometterad reflex svar. Kvantifiering av medelvärdet vestibulo-okulär reflex vinster på en fast frekvens av 0,5 hertz och vid 40 grader per sekund före och efter den visuella-vestibulära obalans protokollet avslöjar en stark vinst minskning av möss som bar den randiga enheten medan den skenmössa inte uppvisar betydande vinst förändringar.
Den optokinetiska reflexen hos möss som bär den randiga enheten är dock jämförbar med den som observerats för perioden före det visuella vestibulära protokollet och med det som bluffdjuren visar. Var noga med att övervaka mössen dagligen och se till att enheten är korrekt placerad på mössen och att den inte hindrar deras rutiner. Efter detta förfarande in vitro elektrofysiologi eller neuronal imaging för att identifiera sellar anpassning mekanismer eller beteendemässiga analyser för att studera olika reflex utgångar kan utföras.