Name: extraction of extracellular vesicles from whole tissue
Uploaded: 2019-02-07T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction of Extracellular Vesicles from Whole Tissue at JoVE.com

يشكر المؤلفون الدكتور ريتشارد نوواكووسكي والموارد الحيوانية فلوريدا دولة جامعة المختبر لتقديم ورعاية الحيوانات المستخدمة لوضع هذا البروتوكول، مع الاحترام. ونحن نشكر ليو شيا والدكتور راكيش سينغ، وفلوريدا دولة جامعة متعدية علوم المختبر للمساعدة مع عمل الكتلي المستخدمة لوصف حويصلة المتلقين للمعلومات، فضلا عن مرفق "الموارد التصوير العلوم البيولوجية الاتحاد السوفياتي السابق" في استخدام المجهر الإلكتروني الإرسال في هذه الدراسة. وأخيراً، نشكر الدكتور ومانديب ساشديفا (فلوريدا جامعة أية آند أم) للتبرع بورم في العينات المستخدمة في تطوير هذا الأسلوب. هذه الدراسة كانت تدعمها المنح من "برنامج البحوث" بفلوريدا وزارة الصحة اد واثيل مور الزهايمر المرض الممنوحة إلى D.G.M. و J.M.O (6AZ11) والمعهد الوطني للسرطان من "المعاهد الوطنية للصحة" تحت "رقم جائزة" R01CA204621 إلى D.G.M.

تم الحصول على العقول كلها بموافقة من "استخدام الحيوان المؤسسية" ولجنة الرعاية (إياكوك) من جامعة ولاية فلوريدا. ما مجموعة اثنا عشر الماوس العقول (3 العقول من كل فئة عمرية: 2، 4، 6، و 8 أشهر) من "ي" C57BL/6 الخلفية كانت تستخدم لاستخراج EV، كما هو موضح سابقا16. الدكتور ومانديب ساشديفا سخاء تب...

<ol>
	<li>Bobrie, A., Colombo, M., Raposo, G., Th&#233;ry, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+secretion:+molecular+mechanisms+and+roles+in+immune+responses.">Exosome secretion: molecular mechanisms and roles in immune responses.</a> Traffic. 12 (12), 1659-1668 (2011).</li><li>Th&#233;ry, C., Zitvogel, L., Amigorena, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes:+composition,+biogenesis+and+function.">Exosomes: composition, biogenesis and function.</a> Nature Reviews Immunology. 2 (8), 569-579 (2002).</li><li>Howitt, J., Hill, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+in+the+Pathology+of+Neurodegenerative+Diseases.">Exosomes in the Pathology of Neurodegenerative Diseases.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (52), 26589-26597 (2016).</li><li>Sardar Sinha, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+disease+pathology+propagation+by+exosomes+containing+toxic+amyloid-beta+oligomers.">Alzheimer's disease pathology propagation by exosomes containing toxic amyloid-beta oligomers.</a> Acta Neuropathologica. 136 (1), 41-56 (2018).</li><li>Meckes, D. G., Raab-Traub, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvesicles+and+viral+infection.">Microvesicles and viral infection.</a> Journal of Virology. 85 (24), 12844-12854 (2011).</li><li>Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomal+communication+goes+viral.">Exosomal communication goes viral.</a> Journal of Virology. 89 (10), 5200-5203 (2015).</li><li>Schorey, J. S., Cheng, Y., Singh, P. P., Smith, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+other+extracellular+vesicles+in+host-pathogen+interactions.">Exosomes and other extracellular vesicles in host-pathogen interactions.</a> EMBO Reports. 16 (1), 24-43 (2015).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+in+cancer:+small+particle,+big+player.">Exosomes in cancer: small particle, big player.</a> Journal of Hematology Oncology. 8, 83 (2015).</li><li>Janas, A. M., Sapo&#324;, K., Janas, T., Stowell, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+other+extracellular+vesicles+in+neural+cells+and+neurodegenerative+diseases.">Exosomes and other extracellular vesicles in neural cells and neurodegenerative diseases.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1858 (6), 1139-1151 (2016).</li><li>Chahar, H. S., Bao, X., Casola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+and+Their+Role+in+the+Life+Cycle+and+Pathogenesis+of+RNA+Viruses.">Exosomes and Their Role in the Life Cycle and Pathogenesis of RNA Viruses.</a> Viruses. 7 (6), 3204-3225 (2015).</li><li>Pegtel, D. M., Peferoen, L., Amor, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+modulators+of+cell-to-cell+communication+in+the+healthy+and+diseased+brain.">Extracellular vesicles as modulators of cell-to-cell communication in the healthy and diseased brain.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 369 (1652), (2014).</li><li>Raposo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+lymphocytes+secrete+antigen-presenting+vesicles.">B lymphocytes secrete antigen-presenting vesicles.</a> Journal of Experimental Medicine. 183 (3), 1161-1172 (1996).</li><li>Katsiougiannis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Vesicles:+Evolving+Contributors+in+Autoimmunity.">Extracellular Vesicles: Evolving Contributors in Autoimmunity.</a> Forum on immunopathological diseases and therapeutics. 6 (3-4), 163-170 (2015).</li><li>Costa-Silva, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cancer+exosomes+initiate+pre-metastatic+niche+formation+in+the+liver.">Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver.</a> Nature Cell Biology. 17 (6), 816-826 (2015).</li><li>Hoshino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+exosome+integrins+determine+organotropic+metastasis.">Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis.</a> Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).</li><li>Hurwitz, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+method+for+enrichment+of+whole+brain-derived+extracellular+vesicles+reveals+insight+into+neurodegenerative+processes+in+a+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">An optimized method for enrichment of whole brain-derived extracellular vesicles reveals insight into neurodegenerative processes in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Journal of Neuroscience Methods. 307, 210-220 (2018).</li><li>Kowal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+comparison+defines+novel+markers+to+characterize+heterogeneous+populations+of+extracellular+vesicle+subtypes.">Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 113 (8), 968-977 (2016).</li><li>Perez-Gonzalez, R., Gauthier, S. A., Kumar, A., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+exosome+secretory+pathway+transports+amyloid+precursor+protein+carboxyl-terminal+fragments+from+the+cell+into+the+brain+extracellular+space.">The exosome secretory pathway transports amyloid precursor protein carboxyl-terminal fragments from the cell into the brain extracellular space.</a> Journal of Biological Chemistry. 287 (51), 43108-43115 (2012).</li><li>Hurwitz, S. N., Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adaptable+Polyethylene+Glycol-Based+Workflow+for+Proteomic+Analysis+of+Extracellular+Vesicles.">An Adaptable Polyethylene Glycol-Based Workflow for Proteomic Analysis of Extracellular Vesicles.</a> Methods in Molecular Biology. 1660, 303-317 (2017).</li><li>Vella, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rigorous+method+to+enrich+for+exosomes+from+brain+tissue.">A rigorous method to enrich for exosomes from brain tissue.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6 (1), 1348885 (2017).</li><li>Hurwitz, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD63+Regulates+Epstein-Barr+Virus+LMP1+Exosomal+Packaging,+Enhancement+of+Vesicle+Production,+and+Noncanonical+NF-.&#954;B+Signaling.">CD63 Regulates Epstein-Barr Virus LMP1 Exosomal Packaging, Enhancement of Vesicle Production, and Noncanonical NF-.&#954;B Signaling.</a> Journal of Virology. 91 (5), (2017).</li><li>Hurwitz, S. N., Conlon, M. M., Rider, M. A., Brownstein, N. C., Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+analysis+sheds+budding+insights+into+genetic+drivers+of+extracellular+vesicle+biogenesis.">Nanoparticle analysis sheds budding insights into genetic drivers of extracellular vesicle biogenesis.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 5, 31295 (2016).</li><li>L&#228;sser, C., Eldh, M., L&#246;tvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+RNA-containing+exosomes.">Isolation and characterization of RNA-containing exosomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), e3037 (2012).</li><li>Jung, M. K., Mun, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+Preparation+and+Imaging+of+Exosomes+by+Transmission+Electron+Microscopy.">Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), (2018).</li><li>Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+purification+combined+with+mass+spectrometry+to+identify+herpes+simplex+virus+protein-protein+interactions.">Affinity purification combined with mass spectrometry to identify herpes simplex virus protein-protein interactions.</a> Methods in Molecular Biology. 1144, 209-222 (2014).</li><li>Rider, M. A., Hurwitz, S. N., Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ExtraPEG:+A+Polyethylene+Glycol-Based+Method+for+Enrichment+of+Extracellular+Vesicles.">ExtraPEG: A Polyethylene Glycol-Based Method for Enrichment of Extracellular Vesicles.</a> Scientific Reports. 6, 23978 (2016).</li><li>L&#246;tvall, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+experimental+requirements+for+definition+of+extracellular+vesicles+and+their+functions:+a+position+statement+from+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles.">Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: a position statement from the International Society for Extracellular Vesicles.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3, 26913 (2014).</li><li>Thakur, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double-stranded+DNA+in+exosomes:+a+novel+biomarker+in+cancer+detection.">Double-stranded DNA in exosomes: a novel biomarker in cancer detection.</a> Cell Research. 24 (6), 766-769 (2014).</li><li>Balaj, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+microvesicles+contain+retrotransposon+elements+and+amplified+oncogene+sequences.">Tumour microvesicles contain retrotransposon elements and amplified oncogene sequences.</a> Nature Communications. 2, 180 (2011).</li><li>Skog, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers.">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nature Cell Biology. 10 (12), 1470-1476 (2008).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+distinct+nanoparticles+and+subsets+of+extracellular+vesicles+by+asymmetric+flow+field-flow+fractionation.">Identification of distinct nanoparticles and subsets of extracellular vesicles by asymmetric flow field-flow fractionation.</a> Nature Cell Biology. 20 (3), 332-343 (2018).</li><li>Zijlstra, A., Di Vizio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+matters+in+nanoscale+communication.">Size matters in nanoscale communication.</a> Nature Cell Biology. 20 (3), 228-230 (2018).</li><li>Meehan, B., Rak, J., Di Vizio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncosomes+-+large+and+small:+what+are+they,+where+they+came+from.">Oncosomes - large and small: what are they, where they came from.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 5, 33109 (2016).</li></ol>

تم إنشاؤها الاهتمام العلمي كثيرا فيما يتعلق بالأدوار التي تلعب المركبات الكهربائية الصغيرة في ورم المكروية، وكذلك في تطوير الجهاز والنضج، والدالة. وتوفر هذه الدراسة الشاملة، سير العمل أمثل لاستخراج المركبات الكهربائية سليمة من الدماغ كله أو عينات من الورم. بينما هنا نحن ببساطة توضح إمك?...

وتشمل حويصلات صغيرة خارج الخلية (EVs) المستمدة من اندوسومال اكسوسوميس وميكروفيسيكليس الغشاء-تسلط الصغيرة التي من مصلحة الطب الأحيائي الواسع. المركبات الكهربائية الصغيرة تتكون من عدد السكان غير متجانسة من 50-250 نانومتر غشاء زمنياً الحويصلات المحتوية على البروتينات النشيطة بيولوجيا والدهون والأحماض النووية التي يعتقد أنها مجتمعة على القيام بأدوار هامة في العديد من عمليات المرض. النهوض بالبحوث وبخاصة قد تورط هذه الحويصلات في الأعصاب واضطرابات بريون، العمليات المعدية والظروف الذاتية أو التحريضية، ونمو الورم وورم خبيث1،،من23 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13-البحوث الطبية الحيوية التي تنمو بسرعة إلى أهمية المركبات الكهربائية في إمراضية المرض قد أثارت الاهتمام الموازي في تطوير أساليب استنساخه وصارمة لعزل وتنقية هذه الحويصلات.
وكان تحدي التاريخي والحالي في توصيف EV عدم القدرة على فصل الفئات السكانية الفرعية EV الصغيرة تماما. هذا التحدي إلى حد كبير نتيجة لفهمنا المحدود للآليات الجزيئية المختلفة التي تحكم نشوء حيوي حويصلات متميزة. تداخل في الحجم والكثافة والشحنات بيولوجي بين الفئات السكانية الفرعية كذلك كونفولوتيس هذه الفروق. وكان جزءا من هذا التحدي أيضا استخدام اختلاف تقنيات تخصيب اليورانيوم على نطاق واسع، وتوفير عدم تناسق في تحليل المتلقين للمعلومات من الحويصلات المعزولة عبر المختبرات وتقويض الجهود العالمية لإلقاء الضوء على القاطع EV السكان.
تجدر الإشارة إلى أن غالبية توصيف EV قد أنجز من جمع في المختبر لخلية ثقافة طافية، مع أكثر حداثة الدراسات المجراة في وصف تقنيات لعزل حويصلات من سوائل جسم الحيوان أو الإنسان، بما في ذلك البلازما، البول ، واللعاب. بينما المركبات الكهربائية موجودة بكميات كبيرة في الدورة الدموية، كما أقر بأن هذه الحويصلات تلعب أدواراً هامة في أحداث خلية لخلية الاتصال وموجودة في إينتيرستيتيوم الأنسجة الخلوية. في السياق السرطان، قد تكون المركبات الكهربائية المتداخلة أهمية خاصة في تحوير وورم المكروية للخلايا السرطانية البذر والنمو المنتشر14،15. ونتيجة لذلك، هناك قيمة في تطوير وتحسين تقنيات استخراج حويصلات من عينات الأنسجة الصلبة. هذه الأساليب سوف توفر وسيلة لمباشرة دراسة الجهاز-أو الورم المشتقة من المركبات الكهربائية التي تحصد من العينات السريرية، بما في ذلك الخزعات الصغيرة وريسيكشنز الجهاز الجزئي أو الكامل.
في هذه الدراسة، وفي تقرير سابق نشرته لدينا مختبر16، نحن نهدف إلى معالجة العديد من الشواغل الرئيسية الحالية في منهجية الإثراء EV: 1) لوصف تقنية استنساخه لعزل وتنقية المركبات الكهربائية بأعلى معايير حاليا قبلت في هذا الميدان؛ 2) في محاولة لعزل الفئات السكانية الفرعية الصغيرة EV عالي التخصيب في اكسوسوميس المستمدة من اندوسومال؛ و 3) تقديم بروتوكول لاستخراج هذه الحويصلات من عينات الأنسجة الصلبة غرض مزيد من الوصف.
في الآونة الأخيرة، وصف Kowal والزملاء تدرج كثافة إيوديكسانول صغيرة نسبيا لفصل وتنقية EV الفئات السكانية الفرعية بفعالية أكبر من السكروز مقارنة كثافة التدرجات17. في الدراسة المذكورة، والمركبات المستمدة من الخلايا الجذعية استولت في كسر كثافة خفيفة نسبيا، اتساقا مع كثافة 1.1 غ/مل، تم التخصيب في البروتينات اندوسومال ويعتقد أن يكون أكثر اتساقا مع نسبة عالية من اكسوسوميس في هذا كسر. وشملت هذه البروتينات اكسوسومال "حسن النية" وفقا للمؤلفين، الورم قابلية الجينات 101 (TSG101)، سينتينين-1، CD81، ADAM10، EHD4، والعديد من البروتينات أنيكسين17. ونحن في وقت لاحق تكييف هذا الأسلوب أن ينجح أسلوب تفكك النسيج التي وصفها جونزاليز بيريز وآخرون18 وبروتوكول الطرد المركزي تفاضلي لاحقة لعزل المركبات الكهربائية المستمدة من الدماغ كله16. كما أظهرنا في جدوى هذا الأسلوب في وصف بروتيوميس EV بالجمع بين بروتوكول متسلسلة للمتلقين للمعلومات الكمية والنسبية الكتلي للبروتين حويصلية، الموصوفة سابقا لدينا مختبر19. توازي هذا العمل أن من المختبر هيل، الذي كانت أثري المركبات الكهربائية من قشرة المخ20أمامي.
في هذه الدراسة، وضع على هذا الأسلوب، وتوسيع نطاق تطبيق البروتوكول نشرت مؤخرا من المختبر لعزل المركبات الكهربائية عن أورام الرئة صلبة. على حد علمنا، هذا هو أول دراسة لوصف وضع بروتوكول لإثراء المركبات الكهربائية من السابقين فيفو الورم العينات. ونظرا للاهتمام الواسع النطاق في المركبات الكهربائية كرواية المؤشرات الحيوية التشخيصية ودورها في توموريجينيسيس، هذا الأسلوب يحتمل أن يتضح أن قيمة بالنسبة لعدد متزايد من الباحثين العلميين. من وجهة نظر سريرية، يمكن إيواء المركبات الكهربائية المتداخلة قيمة تشخيصية كبيرة، لا سيما في العينات حيث يقتصر تقييم نسيجية. وأملنا أن الأسلوب المبين هنا سيوفر أساس لتقنية استنساخه لحصاد المركبات الكهربائية من الطازجة أو المجمدة الحيوانية أو البشرية الجراحية العينات، مما يمهد الطريق للعمل في المستقبل لكشف الأدوار الهامة في إمراضية المرض هذه الصغيرة وقد لعب حويصلات.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1017px;" width="1017">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">0.45 &#181;m filter</td>
			<td style="width:183px;">VWR</td>
			<td style="width:176px;">28145-505</td>
			<td style="width:355px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">12 mL ultracentrifuge tubes</td>
			<td style="width:183px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:176px;">331372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">5.5 mL ultracentrifuge tubes</td>
			<td style="width:183px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:176px;">344057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-Alix antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-7129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-Calnexin antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-11397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-CD63 antibody</td>
			<td style="width:183px;">Abcam</td>
			<td style="width:176px;">ab59479</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-CD81 antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-9158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-Flotillin 2 antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-25507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-HSC70 antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-7298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-Syntenin-1 antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-100336</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">anti-TSG101 antibody</td>
			<td style="width:183px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:176px;">sc-7964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Dounce homogenizer</td>
			<td style="width:183px;">DWK Life Sciences</td>
			<td style="width:176px;">885300-0015</td>
			<td>Loose-fit pestle (clearance of 0.889&#8211;0.165&#8239;mm) used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">EZQ protein quantification kit</td>
			<td style="width:183px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:176px;">R33200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">FA-45-6-30 rotor&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:176px;">5820715006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">FEI CM120 Electron Microscope</td>
			<td style="width:183px;">TSS Microscopy</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">goat anti-rabbit IgG (Fab fragment)</td>
			<td style="width:183px;">Genetex</td>
			<td style="width:176px;">27171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">HALT phosphatase inhibitor (100x solution)</td>
			<td style="width:183px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:176px;">78420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">HALT protease inhibitor (100x solution)</td>
			<td style="width:183px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:176px;">78438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Hibernate E medium</td>
			<td style="width:183px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:176px;">A1247601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">MLS-50 swinging-bucket rotor</td>
			<td style="width:183px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:176px;">367280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">NanoSight LM10</td>
			<td style="width:183px;">Malvern</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Optima MAX-XP Benchtop Ultracentrifuge&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:176px;">393315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Optima XE-100 ultracentrifuge</td>
			<td style="width:183px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:176px;">A94516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Optiprep</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:176px;">D1556</td>
			<td>60% iodixanol in sterile water solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Q Exactive HF Mass Spectrometer</td>
			<td style="width:183px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">rabbit anti-goat IgG</td>
			<td style="width:183px;">Genetex</td>
			<td style="width:176px;">26741</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">rabbit anti-mouse IgG</td>
			<td style="width:183px;">Genetex</td>
			<td style="width:176px;">26728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Refracto 30PX (refractometer)</td>
			<td style="width:183px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:176px;">51324650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">S-4-104 rotor</td>
			<td style="width:183px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:176px;">5820759003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">SW 41 Ti swinging-bucket Rotor</td>
			<td style="width:183px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:176px;">333790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Tabletop 5804R centrifuge</td>
			<td style="width:183px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:176px;">22623508</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction of extracellular vesicles from whole tissue

تعميم والمتداخلة الصغيرة الغشاء زمنياً خارج الخلية حويصلات (EVs) تمثل أهداف واعدة لتطوير فحوصات رواية العلامات البيولوجية التشخيص أو تشخيصية، ويرجح أن تكون بمثابة جهات فاعلة هامة في التقدم من طائفة واسعة من الأمراض. تركز الأبحاث الحالية على توصيف حويصلات تفرز من خلايا متعددة وأنواع الأنسجة بغية تحسين فهم دور المركبات الكهربائية في الآلية المرضية للشروط بما في ذلك نيوروديجينيريشن، والالتهابات، والسرطان. ومع ذلك، تظل أساليب متسقة على الصعيد العالمي واستنساخه لعزل وتنقية حويصلات في التقدم. وعلاوة على ذلك، نادراً ما يتم وصف طرق لاستخراج المركبات الكهربائية من الأنسجة الصلبة السابقين فيفو . هنا، نحن نقدم بروتوكول مفصل لاستخراج المركبات الكهربائية الصغيرة لمصلحة من الأنسجة كاملة الطازجة أو المجمدة، بما في ذلك عينات المخ والورم، لمزيد من الوصف. علينا أن نظهر قدرة التكيف مع هذا الأسلوب لتحليلات المصب متعددة، بما في ذلك الميكروسكوب الإلكتروني وتوصيف إيمونوفينوتيبيك من حويصلات، وكذلك الكمية الكتلي من البروتينات EV.

يتم عرض لمحة تخطيطي لتفكك النسيج والطرد المركزي التفاضلي، وتنقية التدرج من حويصلات في الشكل 1. يتم إبراز تأكيد مورفولوجك وإيمونوفينوتيبيك من المركبات الكهربائية تنقية التدرج في الشكل 2. رسم تخطيطي لاستنساخه بكثافة بعد تنبيذ فائق التدرج إ...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction of Extracellular Vesicles from Whole Tissue at JoVE.com

Extraction of Extracellular Vesicles from Whole Tissue

استخراج الحويصلات خارج الخلية من الأنسجة كاملة

هنا، نحن نقدم بروتوكول مفصل لعزل حويصلات خارج الخلية الصغيرة (EVs) من الأنسجة كاملة، بما في ذلك عينات المخ والورم. ويوفر هذا الأسلوب أسلوب استنساخه لاستخراج المركبات الكهربائية من الأنسجة الصلبة للمزيد من التحليلات المتلقين للمعلومات.

Circulating and interstitial small membrane-bound extracellular vesicles (EVs) represent promising targets for the development of novel diagnostic or ...

يوفر هذا البروتوكول تقنية صارمة وقابلة للتكرار لاستخراج وعزل العويصلات الصغيرة خارج الخلية من عينات الأنسجة الكاملة لتحليلات المصب السابقين في الجسم. مع بين أعلى مستويات النقاء التي يمكن تحقيقها حاليا، وهذا الأسلوب يسهل morphologic المباشر، المناعة، وتوصيف عميق من الحويصلات الخلالية يفرز في عينات الأنسجة المختلفة، بما في ذلك الأورام. هنا، نحن نبرهن على عزلة المركبات الكهربائية الأنسجة من الدماغ والرئة العينات الورم.ومع ذلك، يمكن تطبيق هذه التقنية على الدراسات التي تستخدم عينات الورم المتنوعة أو الحميدة أو غيرها من العينات أيضاً. للبدء، إعداد 10 ملليلتر من العازلة تفكك في المتوسط إسبات-E لكل 0.4 إلى 1.0 غرام من الأنسجة. إضافة الأنسجة الطازجة أو المجمدة كلياً إلى المخزن المؤقت في أنبوب 50 ملليلتر، واحتضان في حمام ماء دافئ في 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.بعد ذلك، إضافة مثبطات البروتياز والفوسفاتاز لتركيز 1x النهائي في العازلة تفكك. صب الحل مع الأنسجة في فضفاضة تناسب داونز التجانس. استخدم ما يقرب من 30 ضربة بطيئة لكل عينة لتفكك الأنسجة بلطف.ثم, نقل الأنسجة المنفصلة والمحلول العازلة إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي في 500x ز و4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق ل بيليه الخلايا والألياف المتبقية أو شظايا الأنسجة متماسكة. نقل المكبر إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر نظيفة، والطرد المركزي في 2، 000x ز وعند أربع درجات مئوية لمدة 10 دقائق ل بيليه والتخلص من الحطام الخلوي الكبير.نقل هذا مكبر إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر نظيفة، والطرد المركزي في 10، 000x ز وعند أربع درجات مئوية لمدة 40 دقيقة ل بيليه أي هواسيكلات أكبر غير مرغوب فيها أو الهيئات المبرمجة الصغيرة. decant الماحتف من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر في أنبوب 12 ملليلتر نظيف للطرد الشديد. بعد ذلك، طارد العينة فائقة التركيز عند 100، 000x ز وعند أربع درجات مئوية لمدة ساعتين، إلى بيليه المركبات الكهربائية الصغيرة.decant المغرور وترك أنابيب الطارد فائقة مقلوب لمدة خمس إلى 10 دقائق، والتنصت في كثير من الأحيان لإزالة أي السائل المتبقية على جانبي الأنابيب. ثم, resuspend بيليه EV في 1.5 ملليلتر من 0.25 مولار السكروز العازلة. تغطية الأنابيب مع بارا فيلم، ومن ثم دوامة المركبات الكهربائية في الحل.صخرة أنابيب الطرد الفائقة لمدة 10 إلى 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم دوامة مرة أخرى. لفترة وجيزة الطرد المركزي الأنابيب بسرعة أقل من 1، 000x ز لاسترداد تعليق السائل في الجزء السفلي من الأنبوب.إذا لزم الأمر، قم بتخزين التعليق عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. أولاً، أضف 1.5 ملليلتر من 60٪ iodixanol إلى 1.5 ملليلتر من المخزن المؤقت sucrose tris الذي يحتوي على المركبات الكهربائية لإنشاء حل نهائي يحتوي على 30٪ iodixanol. الماصات صعودا وهبوطا عدة مرات لخلط الحل بدقة.نقل هذا الحل إلى الجزء السفلي من أنبوب 5.5 ملليلتر الطرد الفائق. بعد ذلك، اخلطي مخزون iodixanol 60٪ مع المياه النقية للغاية لإعداد 1.5 ملليلتر على الأقل من كل من 20٪ وحل iodixanol بنسبة 10٪. باستخدام حقنة وإبرة قياس 18، قياس 1.3 ملليلتر من محلول iodixanol 20٪، وطبقة بعناية على رأس التدرج السفلي.الحفاظ على شطبة من الإبرة في اتصال مع داخل الأنبوب، فقط فوق الغضروف المفصلي وإضافة حل إسقاط الحكمة لتجنب خلط الطبقات في واجهة الكثافة. ثم، طبقة 1.2 ملليلتر من حل iodixanol 10٪على رأس طبقة 20٪، وذلك باستخدام نفس التقنية. توازن بعناية وتحميل أنابيب الطارد فائقة في دلاء الدوار.تعيين التسارع وسرعة التباطؤ من الدوار دلو سوينغ إلى الحد الأدنى من معدلات، والطرد المركزي في 268، 000x ز وعند أربع درجات مئوية لمدة 50 دقيقة. في حين يجري الطرد العينة، التسمية 10 1.5 ملليلتر أنابيب microcentrifuge لكل عينة التي سوف تتوافق مع الكسور واحد إلى 10 من التدرج الكثافة. بمجرد اكتمال الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنابيب بلطف من دلاء الدوار ووضعها في حامل مستقر.Pipette 10 الكسور التسلسلية من 490 ميكرولترات من أعلى التدرج في الأنابيب المقابلة. باستخدام مقياس الانكسار، قم بقياس مؤشرات الانكسار للكسور. ثم، نقل كل كسر إلى أنبوب 12 ملليلتر نظيفة الطرد الفائق.إضافة خمسة ملليلتر من 1X برنامج تلفزيوني لكل أنبوب وماصة صعودا وهبوطا ببطء لخلط. إضافة 6 ملليلتر إضافية من 1X برنامج تلفزيوني إلى أعلى الأنبوب، ومزيج بعناية مرة أخرى. فائقة التركيز على الأنابيب في 100، 000x ز وعند أربع درجات مئوية لإعادة بيليه في vesicles الصغيرة.Decant فائقة والاستفادة من الأنابيب الجافة قبل التحلل من vesicles لتحليل البروتين أو reresuspending المركبات الكهربائية لتحليل morphologic. لlyse EVs لتحليل البروتين، إضافة 40 ميكرولترات من عازلة تحلل قوية تحتوي على مثبطات البروتياز إلى الكريات EV. مكان بارا فيلم فوق كل أنبوب، ودوامة بقوة.بعد ذلك، صخرة الأنابيب لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ودوامة مرة أخرى. لفترة وجيزة الطرد المركزي العينة في 1، 000x ز لمدة 30 إلى 60 ثانية لاسترداد حجم العينة بأكملها. نقل كل عينة إلى أنبوب جديد 1.5 ملليلتر microcentuge، وتخزينها في درجة حرارة تتراوح بين 20 و 80 درجة مئوية حتى جاهزة لمزيد من المعالجة.لتحضير الليساتات المنقية لتحليل مناعي، إضافة 5x Laemmli عينة العازلة إلى العينات لتركيز النهائي من 1x. تغلي العينة في 95 درجة مئوية لمدة خمس إلى 10 دقائق. ثم، تحميل وحدة تخزين متساوية من الكسور واحد إلى 10 في هلام صفحة 10٪ SDS.تحميل كتلة متساوية من تجانس الأنسجة. إجراء تحليل الكهربائي ولطخة الغربية لتأكيد البروتينات EV في lysates تنقية ومقارنة وفرة EV النسبية في الكسور. في هذه الدراسة، يتم استخراج الخلايا خارج الخلية وتنقيتها من الأنسجة بأكملها.بعد الطرد من 10 إلى 30٪ iodixanol التدرج، ويمكن رؤية مجموعة من المركبات الكهربائية الخفيفة المهاجرة تصل إلى كسر اثنين، في حين يمكن رؤية مجموعة من المركبات الكهربائية الكثيفة الهجرة تصل إلى الكسر خمسة، اعتمادا على نوع الأنسجة. تظهر مناعة تمثيلية لكسور التدرج الفصل الفعال وتنقية المركبات الكهربائية الصغيرة المستمدة من الورم في الكسر الخامس. وتجدر الإشارة إلى أن عينات ورم الرئة تبدو غنية في المركبات الكهربائية الكثيفة مقارنة بالمصابيح الكهربائية الخفيفة التي تم حصادها سابقًا من أنسجة الدماغ بأكملها.ممثل نانو الجسيمات التحليل وتتبع المجهر الإلكترون من الأنسجة المشتقة من vesicles في الحيصلة السائدة التي تحتوي على جزء يدل على إثراء والحفاظ على vesicles كاملة. بما يتفق مع حجم وبنية المركبات الصغيرة. وتمثل المركبات الكهربائية الخلالية أهدافا واعدة لتطوير مقايسات تشخيصية أو مؤشرات بيولوجية جديدة.هذه التقنية تزود الباحثين بأدوات لاستخراج وتنقية من السقطات للفائدة المصب. بعد استخراج كامل أو أنسجة متحللة EVs، يمكن إجراء توصيف واسع من vesicles بما في ذلك البروتيومية، الجينوم، وتحليلات الدهون. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام العينات في اتباع نهج أكثر استهدافاً.يمكن أن توفر الفُيصلات المعزولة مباشرة عن عينات الأنسجة المزيد من التبصر في آليات المرض، بما في ذلك نشأة الورم، وقد توفر أدوات تشخيصية أو تشخيصية مهمة في المستقبل.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Neutrophil Extracellular Traps Generated by Low Density Neutrophils Obtained from Peritoneal Lavage Fluid Mediate Tumor Cell Growth and Attachment

الحصول على العَدلات الفخاخ خارج الخلية التي تم إنشاؤها بواسطة العَدلات منخفض الكثافة من الغسل البريتوني السوائل التوسط نمو الخلايا السرطانية والمرفقات

Activated neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which can capture and destroy microbes. Recent studies suggest that NETs are involved ...

Studying Normal Tissue Radiation Effects using Extracellular Matrix Hydrogels

دراسة آثار إشعاع الأنسجة الطبيعية باستخدام هيدروجيلات مصفوفة خارج الخلية

Radiation is a therapy for patients with triple negative breast cancer. The effect of radiation on the extracellular matrix (ECM) of healthy breast tissue ...

Extraction of Aqueous Metabolites from Cultured Adherent Cells for Metabolomic Analysis by Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry

استخراج الأيض المائي من خلايا ملتصقة مثقفه للتحليل الأيضي بواسطة الكهربائي الكهربي-الطيف الكتلي

Metabolomic analysis is a promising omics approach to not only understand the specific metabolic regulation in cancer cells compared to normal cells but ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

عزل الحويصلات خارج الخلية المخصبة Exosome تحمل عامل تحفيز مستعمرة الحبيبية-الضامة من الخلايا الجذعية الجنينية

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

العزل والتقييم الوظيفي للخلايا الجذعية لسرطان الثدي البشري من عينات الخلايا والأنسجة

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

في فيفو فحص المناعة للحويصلات خارج الخلية المشتقة من الورم عن طريق قياس التدفق الخلوي للخلايا التائية الطحالية

Immunogenic cell death of tumors, caused by chemotherapy or irradiation, can trigger tumor-specific T cell responses by releasing danger-associated ...

Generating and Imaging Mouse and Human Epithelial Organoids from Normal and Tumor Mammary Tissue Without Passaging

توليد وتصوير الفئران والكائنات العضوية الظهارية البشرية من الأنسجة الثديية الطبيعية والأورام دون المرور

Organoids are a reliable method for modeling organ tissue due to their self-organizing properties and retention of function and architecture after ...

An Enrichment Method for Small Extracellular Vesicles Derived from Liver Cancer Tissue

طريقة إثراء للحويصلات الصغيرة خارج الخلية المشتقة من أنسجة سرطان الكبد

Small extracellular vesicles (sEVs) derived from tissue can reflect the functional status of the source cells and the characteristics of the tissue's ...

Pancreatic Cancer-Derived Tumor Organoids and Fibroblasts from Fresh Tissue

Establishment of Pancreatic Cancer-Derived Tumor Organoids and Fibroblasts From Fresh Tissue

Establishment of Pancreatic Cancer-Derived Tumor Organoids and Fibroblasts From Fresh Tissue (Video) | JoVE 

إنشاء عضويات الورم المشتقة من سرطان البنكرياس والخلايا الليفية من الأنسجة الطازجة

Tumor organoids are three-dimensional (3D) ex vivo tumor models that recapitulate the biological key features of the original primary tumor tissues. ...

Diagnosis of Vitreoretinal Lymphoma Using Cell-Free DNA

Cell-Free DNA Extraction of Vitreous and Aqueous Humor Specimens for Diagnosis and Monitoring of Vitreoretinal Lymphoma

Advancing VRL Diagnosis Using Cell-Free DNA Extraction from Vitreous Humor (Video) | JoVE

استخراج الحمض النووي الخالي من الخلايا لعينات الفكاهة الزجاجية والمائية لتشخيص ومراقبة سرطان الغدد الليمفاوية في الشبكية والجسم الزجاجي

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To ...