Name: direct injection of a lentiviral vector highlights multiple motor pathways in the rat spinal cord
Uploaded: 2019-03-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord at JoVE.com

تم تمويل هذا العمل بمنحه مقدمة من المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية R01 R01NS103481 ومستشفى شرينيرس "بحوث طب الأطفال" منح برنامج العسر الشديد 84051 وحالات العسر الشديد 86000 ووزارة الدفاع (SC140089).

جميع الإجراءات الجراحية والحيوان الرعاية التالية عليها برعاية الحيوانات واستخدام اللجنة لجامعة تمبل.
1-مرحلة ما قبل الجراحية التحضير
<ol><li>إعداد الزجاج سحبت الإبر لحقن الفيروسية بضعة أيام قبل الجراحة باستخدام 3.5 نانولتر الزجاج الشعرية الماصات مصممة للحقن نانولتر. اسحب كل ...

المعالجة الجينية للخلايا العصبية في المخ والحبل الشوكي عملت على تسليط الضوء، الحسية والحركية ومسارات الاستقلال الذاتي عن طريق تتبع الفلورسنت، واستكشاف إمكانات نمو مساحات الخلايا العصبية بعد إصابة27،28، 29 , 30 , <sup ...

النواقل الفيروسية هي أدوات البيولوجية الهامة التي يمكن إدخال المواد الجينية في الخلايا من أجل التعويض عن الجينات المعيبة، بروتينات النمو الهام upregulate أو صنع البروتينات العلامة التي تسلط الضوء على هيكل واتصالات متشابك من أهدافها. تركز هذه المقالة على الحقن المباشر لناقل لينتيفيرال ريتروجراديلي القابلة للنقل ذات كفاءة عالية في الحبل الشوكي الفئران بغية تسليط الضوء على مسارات السيارات الرئيسية مع تتبع الفلورسنت.  هذا الأسلوب هو أيضا مناسب جداً لدراسات التجديد وإعادة نمو محواري ﻹدخال البروتينات لمصلحة السكان متنوعة من الخلايا العصبية، وقد استخدمت لإسكات الخلايا العصبية لرسم الخرائط الوظيفية الدراسات1،2.
كثير من التفاصيل التشريحية للعمود الفقري مسارات السيارات تم توضيحها من خلال دراسات الحقن المباشر مع تتبع الكلاسيكية مثل BDA ومخفضات والذهب3،،من45،،من67 , 8-تتبع هذه تعتبر معيار الذهب ولكن قد يكون بعض العيوب مثل الإقبال بمحاور عصبية تالفة، أو محاور عصبية في ممر في هذا الشأن البيضاء المحيطة بحقن الموقع9،10،11 . وهذا يمكن أن يؤدي إلى تفسيرات خاطئة لمسار الاتصال وقد يكون هناك عيب في دراسات التجديد حيث يمكن أن يكون مخطئا امتصاص الصبغة بواسطة محاور عصبية معطوبة أو مقطوعة لتجديد الألياف أثناء تحليل لاحق12.
لينتيفيرال الناقلة شعبية في دراسات العلاج الجيني، كما أنها توفر التعبير مستقرة وطويلة الأمد في السكان العصبية13،،من1415،،من1617،18 ،19. بيد ناقلات لينتيفيرال تقليديا المعلبة يمكن حدت من النقل إلى الوراء وقد تؤدي إلى استجابة الجهاز المناعي عند استخدامها في فيفو4،،من2021. وتنتج ناقل نقل إلى الوراء ذات كفاءة عالية ووصف حرية كاتو et al. بتعديل المغلف الفيروسي مع داء فيروس بروتين سكري لإنشاء ناقل هجينة التي تعمل على تحسين النقل إلى الوراء22،23.
اقتفاء أثر رجعي يدخل متجه إلى مساحة متشابك لخلية الهدف، مما يسمح لها أن تتناولها إكسون تلك الخلية ونقلها إلى جسم الخلية. قد ثبت النقل الناجح حرية من نهايات الخلايا العصبية في أدمغة الفئران والقرود23،24 ومن العضلات في الخلايا العصبية الحركية22. هذا البروتوكول يوضح حقن في الحبل الشوكي القطني، تستهدف على وجه التحديد محطات متشابك إينتيرنيورونس بروبريوسبينال والخلايا العصبية في الدماغ. السندات الإذنية تلقي اتصالات من العديد من مسارات مختلفة العمود الفقري وهكذا يمكن أن تستخدم لاستهداف سكان متنوعة من الخلايا العصبية في الحبل الشوكي والدماغ. تسمية الخلايا العصبية في هذه الدراسة تمثل الدوائر إينيرفاتينج تجمعات الخلايا العصبية الحركية المتصلة بوظيفة الحركة اللكتات. ويعتبر وسم قوية في الحبل الشوكي وجذع الدماغ، بما في ذلك تفاصيل عالية الدقة للعرش الجذعية ومحطات إكسون. كما أننا استخدمنا هذا الأسلوب في الدراسات السابقة داخل الحبل الشوكي عنق الرحم لتسمية بروبريوسبينال والدماغ ريتيكولوسبينال مسارات25.
هذا البروتوكول يوضح ضخ النواقل الفيروسية في الحبل الشوكي القطني من الفئران. كما يظهر في الفيلم 1، يستهدف الشق طريق تحديد فقرة L1 يقع في الضلع الأخير. وهذا كعلامة بارزة والذيلية لشق سم 3-4 الذي يعرض الجهاز العضلي عبر الحبل الشوكي L1-L4. تتم لامينيكتوميس جوانب الظهرية لفقرات T11 T13 ويوجه إبرة زجاج مشطوف الوحشي 0.8 ملم من خط الوسط وخفض 1.5 مم عمق الرمادية لحقن الفيروس.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>#10 Scalpel Blades</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9801-10</td>
			<td>For use with the scalpel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>309659</td>
			<td>For anesthetic IP injection, potential anesthetic booster shots, and antibiotic injections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mL Syringes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>309604</td>
			<td>For injecting saline into the animal, post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.0 Chromic Catgut Suture</td>
			<td>DemeTECH</td>
			<td>NN374-16</td>
			<td>To re-bind muscle during closing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48000 Micropipette Beveler</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>32416</td>
			<td>Used to bevel the tips of the pulled glass capillary tubes to form functional glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Iodine Solution</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>L01020-08</td>
			<td>For use in sterilzation of the surgical site.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For sterilization of newly prepared glass needles, animal models during surgical preparation, and surgeon&#39;s hands during surgery, as well as all other minor maintainances of sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic (Ketamine/Xylazine Solution)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>240048</td>
			<td>For keeping the animal in the correct plane of consciousness during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic (Cefazolin)</td>
			<td>West-Ward Pharmaceuticals</td>
			<td>NPC 0143-9924-90</td>
			<td>To be injected subcutaneously to prevent infection post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Sterilizer</td>
			<td>CellPoint</td>
			<td>5-1450</td>
			<td>To heat sterilize surgical instruments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonewax</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>19009-00</td>
			<td>To seal up bone in the case of bone bleeding.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cauterizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td>To seal any arteries or veins severed during surgery to prevent excessive blood loss.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Scale</td>
			<td>Okaus</td>
			<td>REV.005</td>
			<td>For weighing the animal during surgical preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible Needle Attachment</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MF34G-5</td>
			<td>For cleaning glass needles and loading red oil into glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>H68079</td>
			<td>To seal up bone in the case of bone bleeding.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary Tubes</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>4878</td>
			<td>For pulled glass needles - should be designed for nanoliter injectors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Clippers</td>
			<td>Oster</td>
			<td>111038-060-000</td>
			<td>For clearing the surgical site of hair.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7231</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimtech</td>
			<td>34155</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium Point Curved Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator with a Vernier Scale</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For precise targeting during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5621</td>
			<td>For cutting glass whisps off of freshly pulled glass capillary tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope with Light and Vernier Scale Ocular</td>
			<td>Leitz Wetzlar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to visualize and measure beveling of pulled glass capillary tubes into functional glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroSyringe Pump Controller</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>62403</td>
			<td>To control the rate of injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoliter 2000 Pump Head Injector</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500150</td>
			<td>To load and inject virus in a controlled fashion.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC-100</td>
			<td>To heat and pull apart glass capillary tubes to form glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalamic Ointment</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>RAC 0119</td>
			<td>To protect the animal&#39;s eyes during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td>To assist with loading virus into the nanoinjector.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needles (25G x 5/8)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>305122</td>
			<td>For use with the 1mL and 10 mL syringes to allow injection of the animal model.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Tooth Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5152</td>
			<td>For griping spinous processes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Oil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To provide a front for visualization of virus entering tissue during injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6510</td>
			<td>To hold open the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl Tablets</td>
			<td>Bio Serv</td>
			<td>MP275-050</td>
			<td>For pain management post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeurs</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8300</td>
			<td>To remove muscle from the spinal column during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Handle</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9843</td>
			<td>To slice open skin and fat pad of animal model during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5980</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steal Wound Clips</td>
			<td>CellPoint</td>
			<td>201-1000</td>
			<td>To bind the skin of the surgical wound during closing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staple Removing Forceps</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS750347</td>
			<td>To remove the staples, should they be applied incorrectly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cloth</td>
			<td>Phenix Research Products</td>
			<td>BP-989</td>
			<td>To provide a sterile surface for the operation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>806-WC</td>
			<td>To soak up blood in the surgical wound while maintaining sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>2146</td>
			<td>To clean the surgical area and surgical tools while maintaining sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>281324</td>
			<td>For use in blood clearing, and for replacing fluids post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gloves</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For use by the surgeon to maintain sterile field during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Heating Pad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For maintaining the body temperature of the animal model during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For enhanced visualization of the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Stapler</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS750546</td>
			<td>To apply the staples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T/Pump Heat Therapy Water Pump</td>
			<td>Gaymar</td>
			<td>TP500C</td>
			<td>To pump warm water into the water convection warming pad.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Convection Warming Pad</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>L1K018</td>
			<td>For use in the post-operational recovery area to maintain the body temperature of the unconscious animal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighted Hooks</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To hold open the surgical wound.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct injection of a lentiviral vector highlights multiple motor pathways in the rat spinal cord

إدخال البروتينات ذات الاهتمام في الخلايا في الجهاز العصبي يشكل تحديا بسبب الحواجز البيولوجية الفطرية التي تحد من الوصول إلى معظم الجزيئات. تتجاوز هذه الحواجز، وتوفير إمكانية الوصول إلى الأجهزة المحمولة الحقن مباشرة في أنسجة النخاع الشوكي أو synapses حيث يمكن إدراج الجزيئات. الجمع بين التكنولوجيا النواقل الفيروسية مع هذا الأسلوب يسمح لإدخال الجينات المستهدفة في النسيج العصبي غرض العلاج الجيني أو تتبع المسالك. هنا هو عرض فيروس هندسيا للنقل إلى الوراء ذات كفاءة عالية (حرية) عند نهايات من بروبريوسبينال إينتيرنيورونس (السندات الإذنية) لتشجيع النقل المحددة للخلايا العصبية في الحبل الشوكي ونوى جذع الدماغ. استهداف السندات الإذنية يستفيد من الاتصالات العديدة التي يتلقونها من مسارات السيارات مثل مساحات روبروسبينال وريتيكولوسبينال، فضلا عن بالترابط مع بعضها البعض في جميع أنحاء أجزاء الحبل الشوكي. الممثل التتبع باستخدام ناقلات هيريت مع تفاصيل عالية الدقة يظهر البروتين active مؤثرا الفلورية الخضراء (بروتينات فلورية خضراء) الهيئات الخلية ومحاور عصبية والعرش الجذعية في السندات الإذنية والصدر وفي الخلايا العصبية ريتيكولوسبينال في تشكيل شبكي البوتانية. حرية جيدا ودمج مسارات جذع الدماغ والجهاز العصبي المحيطي ولكن يظهر الاندماج يتوقف العمر في المسالك كورتيكوسبينال الخلايا العصبية. وخلاصة القول، حقن الحبل الشوكي باستخدام النواقل الفيروسية طريقة مناسبة لإدخال البروتينات ذات الاهتمام في الخلايا العصبية لمساحات محددة الأهداف.

ينبغي أن يؤدي الحقن ناجحة والنقل من النواقل الفيروسية في توصيل السكان قوية أحادية الخلايا العصبية في الحبل الشوكي وبعض نوى جذع الدماغ. يوضح الشكل 1 وسم النمطية من الخلايا العصبية ومحاور عصبية في الحبل الشوكي الصدري وفي تشكيل شبكي البوتانية الدماغ في حقن بعد أرب?...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord at JoVE.com

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

هذا البروتوكول يوضح حقن ناقل فيروسي ريتروجراديلي قابلة للنقل في أنسجة النخاع الشوكي الفئران. تناولها في المشبك الناقل ونقلها إلى الجسم خلية من الخلايا العصبية المستهدفة. هذا النموذج مناسبة لاقتفاء أثر رجعي مسارات العمود الفقري هامة أو استهداف الخلايا لتطبيقات العلاج الجيني.

الحقن المباشر لناقل لينتيفيرال يسلط الضوء على عدة مسارات الحركية في الحبل الشوكي الفئران

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

يمكن أن تدخل النواقل الفيروسية مواد وراثية إلى الخلايا للتعويض عن الجينات المعيبة، أو لتنظيم بروتينات النمو الهامة، أو لتصنيع علامات يمكن أن تتبع الدوائر العصبية. إدخال ناقلات الفيروسية في الجهاز العصبي هو التحدي بسبب الحواجز البيولوجية الفطرية. الحقن المباشر في أنسجة الحبل الشوكي يتجاوز هذه الحواجز، مما يسمح بالوصول إلى أجسام الخلايا أو نقاط الاشتباك العصبي.استهداف مستويات العمود الفقري L1 إلى L4 بشكل صحيح قد يكون صعباً. من المهم استخدام المعالم للتحقق من الهدف وتذكر أن هذه الأجزاء خط إلى T11 إلى T13 الفقرات. في يوم الإجراء، قم بتوصيل المحاقن بالمضخة الدقيقة ووضع المضخة الصغيرة في ميكرو مانايبولاتور مع مقياس فيرنييه.استخدام حقنة مع إبرة مرنة لتحميل بعناية صبغة ملونة في واحدة من الإبر الزجاجية وإدراج إبرة الزجاج في حاقن. ثم تأكد من أن الإبرة هي المصنفة بشكل صحيح في غسالات، وأن هو مشدود غطاء حاقن على ضيق، ويتم تمديد الإبرة حاقن الصلب ما يقرب من ثلاثة أرباع طول إبرة الزجاج. قبل البدء في الإجراء ، ذوبان ما لا يقل عن ميكرولتر واحد ، بالإضافة إلى حجم صغير من الفيروس الإضافي لكل حقنة من تخزين الفريزر ، وتأكيد عدم استجابة قرصة إصبع في فأر مُجرّد.حلق على طول خط الوسط الظهري من الوركين إلى الزاوية السفلية للكمية من الحيوان، وسحب مشدود الجلد لحلاقة أسهل وأكثر دقة، وتطهير الجلد المكشوف مع 5٪ من اليود متتابعة و 70٪ الإيثانول الدعك. تطبيق مرهم العيون على كلتا العينين. ثم ضع الحيوان على قطعة قماش معقمة ووضع الشاش تحت المثانة لجمع أي البول.لتحديد موقع شق الجلد، اضغط على الأصابع بلطف في الضلع الأخير لتحديد موقع الفقرات L1. باستخدام هذه الفقرات كمعلم وعقد الجلد مشدود من قبل انتشار لطيف في حين الضغط بحزم مع مشرط، واستخدام شفرة جراحية رقم 10 لجعل شق من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات من الجلد تنتهي أدنى فقط إلى L1 لفضح العضلات. استخدام ملقط ومقص ليشعر للعمليات spinous.جعل تخفيضات صغيرة من التخفيضات الرسترالية للسماح فسحة للاستيلاء بشكل آمن على عملية العلوي مع ملقط الأسنان الفئران. وجعل اثنين من التخفيضات طويلة وعميقة أقرب إلى العمليات ممكن. بعد تأمين العضلات الجانبي في مكانها، واضحة العضلات حول العمليات لتحديد شكل رؤوسهم.ثم تصور أشكال رؤساء العمليات العرضية من أجل تحديد موقع استئصال لاميني. T11 والانضمام T12 و T13 العمليات ستكون موقع استئصال لامينك. بمجرد تحديد المنطقة المستهدفة بشكل صحيح ، انتشر الفقرات بلطف للكشف عن الأربطة الفقرية ، واستخدام الرانكورات لأخذ لدغات صغيرة من العمليات العرضية والجانب الظهري من الفقرات.اخلي العظم بعيدا عن خط الوسط بحيث يمكن ملاحظة الأوعية الدموية المتوسطة، تاركة نافذة تكشف بوضوح عن أنسجة الحبل الشوكي وخالية من الحطام. ثم ربط ملقط تثبيت للعمليات العرضية الرسترالية وcaudal إلى نافذة استئصال لامينك لتأمين الحيوان في حامل العمود الفقري. ورفع بطن الحيوان لنفي تأثير حركات التنفس.لتحميل الفيروس في حاقن، ما يقرب من خمسة ميكرولترات من المخزون المذاب على قطعة من بارا فيلم، ووضع الإبر الزجاجية بحيث تلميح هو داخل قطرة. استخدام مضخة صغيرة لسحب ما يصل إلى أربعة ميكروليترس من الفيروس بمعدل 20 إلى 100 نانولتر في الثانية الواحدة، وتعيين وحدة تحكم لحقن قبل الإفراج عن كمية صغيرة من الفيروس من طرف إبرة لضمان عدم حظره. مسح أي فيروس الزائدة مع مسح المختبر ووضع micromanipulators بحيث مقياس vernier مرئية.ضع الإبرة في خط الوسط في الحبل الشوكي، واستخدم مقياس vernier على المايكروmanipulator لتوجيه الإبرة بشكلٍ جزئي 0.8 ملليمتر. ثم خفض الإبرة إلى وتر العمود الفقري حتى يتم المسافات البادئة، ولكن ليس ثقب، dura، واستخدام حركة التواء سريعة لثقب دورا مع الإبرة حتى غرقت طرف إبرة إلى عمق 1.5 ملليمتر. وبمجرد أن تكون الإبرة في مكانها، قم ببرمجة المحاقن لتوصيل الفيروس بمعدل 400 نانولتر في الدقيقة، وتأكد من دخول الفيروس إلى وتر العمود الفقري من خلال مراقبة تقدم جبهة الصبغة.بمجرد الانتهاء من الحقن ، اسمح للإبرة بالراحة في الحبل الشوكي لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق لتسهيل انتشار الفيروس ، قبل سحب الإبرة ببطء لتحديد المواقع في موقع الحقن التالي. بعد الحقن الأخير، قم بإزالة الحيوان من حامل العمود الفقري للسماح بإزالة أي أجهزة تستخدم لنشر العضلات الجانبي. ثم أغلق العضلات بخياطة 1.4 كروميك وتدبّر الجلد بمقطّط جرح من عيار 9 ملليمترات.بعد أربعة أسابيع من الحقن الناجح ، لوحظ تعبير GFP كبير في الخلايا العصبية داخل المادة الرمادية من الحبل الشوكي الصدري على الجانب ، وipsilateral للحقن. في المادة البيضاء ، ويلاحظ تعبير GFP في محاور في الحبل الإبسي، وخاصة في المناطق النموذجية لمحور عصبي propriospinal. التكبير أعلى من الخلايا العصبية المادة الرمادية يكشف عن مثال على تعبير إشارة نموذجية في أجسام الخلايا العصبية وdendrites.ويمكن أيضا أن يلاحظ تعبير GFP في الخلايا العصبية في النوى جذع الدماغ، مثل داخل تكوين النتينة. العوامل الرئيسية لنجاح عملية حقن الحبل الشوكي هي استهداف العمود الفقري الصحيح وضمان أن الفيروس يدخل الأنسجة إذا تم إجراء إصابة الحبل الشوكي الرسترالي قبل هذا الإجراء، يمكن استخدام الحقن المباشر لتتبع الخلايا العصبية التي تعيد إنشاء اتصالات حول الإصابة.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

Functions of the Central and Peripheral Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

وحدة للسيارات وظيفية في صحن الثقافة: شارك في ثقافة Explants النخاع الشوكي وخلايا العضلات

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Stereotaxic Injection of a Viral Vector for Conditional Gene Manipulation in the Mouse Spinal Cord

التجسيمي حقن ناقل للتلاعب الجيني الفيروسي شرطي في الحبل الشوكي ماوس

Intraparenchymal injection of a viral vector enables conditional gene manipulation in distinct populations of neurons or particular regions of the central ...

Production of RNA for Transcriptomic Analysis from Mouse Spinal Cord Motor Neuron Cell Bodies by Laser Capture Microdissection

إنتاج الحمض النووي الريبي لتحليل النسخ من الماوس النخاع الشوكي خلية الخلايا العصبية الحركية الهيئات بواسطة الليزر التقاط الالتصاع الدقيق

Preparation of high-quality RNA from cells of interest is critical to precise and meaningful analysis of transcriptional differences among cell types or ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Transection الحبل الشوكي في اليرقات الزرد

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

Diffusion Imaging in the Rat Cervical Spinal Cord

التصوير نشر في الحبل الشوكي الجرذ عنق الرحم

Magnetic resonance imaging (MRI) is the state of the art approach for assessing the status of the spinal cord noninvasively, and can be used as a ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

الزرد<em&gt; في الموقع</em&gt; الحبل الشوكي التحضير للتسجيلات الكهربية من العمود الفقري الحسية والحركية العصبية

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

استئصال الصفيحة الفقرية وغرس نافذه الحبل الشوكي في الماوس

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Thoracic Spinal Cord Hemisection Surgery and Open-Field Locomotor Assessment in the Rat

جراحة استئصال النخاع الشوكي للحبل الشوكي وتقييم المحرك الحركي المفتوح في الفئران

Spinal cord injury (SCI) causes disturbances in motor, sensory, and autonomic function below the level of the lesion. Experimental animal models are ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

التسليم داخل الشرايين للخلايا الجذعية العصبية إلى الدماغ الفئران والفأر: تطبيق على الإقفاري الدماغي

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

In Vivo Intracellular Recording of Type-Identified Rat Spinal Motoneurons During Trans-Spinal Direct Current Stimulation

في تسجيل داخل الخلايا في الجسم من نوع تحديد الفئران موتونيورونات العمود الفقري خلال عبر العمود الفقري التحفيز المباشر للتيار

Intracellular recording of spinal motoneurons in vivo provides a &#8220;gold standard&#8221; for determining the cells&#8217; electrophysiological ...