Name: direct injection of a lentiviral vector highlights multiple motor pathways in the rat spinal cord
Uploaded: 2019-03-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss aus dem National Institute of Neurological Disorders und Schlaganfall R01 R01NS103481 finanziert und die Shriners Hospital für die pädiatrische Forschung gewährt SHC 84051 und SHC 86000 und dem Department of Defense (SC140089).

Alle folgenden chirurgischen und tierischen Versorgung Verfahren haben die Tier Pflege und Nutzung Ausschuss der Temple University gebilligt.
1. präoperative Vorbereitungen
<ol><li>Bereiten Sie gezogenem Glas Nadeln für virale Injektion ein paar Tage vor der Operation mit 3,5 Nanoliter Kapillare Glaspipetten für Nanoliter Injektoren entwickelt. Ziehen Sie jede Pipette auf eine zweistufige Nadel Puller gemäß den Anweisungen des Herstellers, zwei Nadel Vorlagen zu erstellen.</li>
	<li>Ver...

Genmanipulation von Neuronen im Gehirn und im Rückenmark hat Highlight sensorische, motorische und autonome Wege über fluoreszierende Tracing und nachwachsen Potenzial von neuronalen Traktaten nach Verletzungen27,28, gedient. 29 , 30 , 31 , 32 , 33. direkte Injektion von Doppelthebel trans...

Virale Vektoren sind wichtige biologische Hilfsmittel, die genetisches Material in Zellen um defekte Gene, Upregulate wichtigen Wachstumsmärkten Proteine kompensieren oder fertigen Marker-Proteine, die die Struktur und die synaptischen Verbindungen von hervorheben einführen können Ihre Ziele. Dieser Artikel konzentriert sich auf direkte Einspritzung eines hocheffizienten Doppelthebel transportable Lentivirale Vektors ins Rückenmark Ratte um großen motorischen Bahnen mit fluoreszierenden Ablaufverfolgung zu unterstreichen.  Diese Methode eignet sich auch sehr für axonalen Regeneration und nachwachsen Studien zur Einführung von interessierender Proteine in unterschiedlichen Populationen von Neuronen und wurde verwendet, um Neuronen für funktionale Zuordnung Studien1,2zum Schweigen zu bringen.
Viele anatomische Details der spinalen motorischen Bahnen wurden aufgeklärt durch Direkteinspritzung Studien mit klassischen Tracer wie BDA und Fluoro-Gold3,4,5,6,7 , 8. diese Tracer gelten als Goldstandard aber können gewisse Nachteile wie Aufnahme durch beschädigte Axone oder Axone in Durchgang in der weißen Substanz umgibt eine Injektion Seite9,10,11 . Dies könnte zu Fehlinterpretationen der Weg Konnektivität und möglicherweise ein Nachteil in Regeneration Studien wo könnte Farbstoff Absorption durch beschädigte oder abgetrennten Axone verwechselt werden, für die Regeneration der Fasern während der späteren Analyse12.
Lentivirale Vektoren sind in Gentherapiestudien, beliebt, da sie stabile, langfristige Ausdruck in neuronalen Populationen13,14,15,16,17,18 bieten ,19. Jedoch traditionell verpackte Lentivirale Vektoren können haben begrenzte retrograden Transport und Reaktion des Immunsystems bei auslösen können in Vivo4,20,21. Ein hocheffizientes retrograder Transport Vektor bezeichnet HiRet wurde produziert von Kato Et Al. durch Ändern der Virushülle mit ein Tollwut-Virus Glykoprotein, einen Hybrid-Vektor erstellen, der retrograder Transport22,23verbessert.
Retrograde Ablaufverfolgung stellt einen Vektor in den synaptischen Raum eines Ziel-Neurons, so dass sie von dieser Zelle Axon aufgegriffen und zum Zellkörper transportiert werden. Erfolgreiche Transport von HiRet wurde von neuronalen Synapsen in die Gehirne von Mäusen und Primaten23,24 und vom Muskel in Motoneuronen22nachgewiesen. Dieses Protokoll zeigt die Injektion in die Lendenwirbelsäule Rückenmark, gezielt an den synaptischen Terminals Propriospinal Interneuronen und Hirnstamm Neuronen. PNs Empfangs-Verbindungen aus vielen verschiedenen spinalen Bahnen und können so genutzt werden, um gezielt eine vielfältige Bevölkerung von Nervenzellen im Rückenmark und Hirnstamm. Beschriftete Neuronen in dieser Studie stellen Schaltungen innervieren Motoneuron Pools in Bezug auf Megalosauridae Motorik. Robuste Kennzeichnung sieht in Rückenmark und Hirnstamm, einschließlich High Fidelity Details dendritischer Dorne und Axon Klemmen. Wir haben diese Methode auch in früheren Studien innerhalb des zervikalen Rückenmarks verwendet, um Propriospinal und Hirnstamm Reticulospinal Wege25beschriften.
Dieses Protokoll zeigt Injektion von viralen Vektoren in der Lendenwirbelsäule Rückenmark einer Ratte. Wie im Film 1, richtet sich der Schnitt durch die Identifizierung des L1-Wirbels befindet sich an der letzten Rippe. Dies dient als ein kaudalen Wahrzeichen für einen ca. 3-4 cm Schnitt, die Muskulatur über das Rückenmark L1-L4 verfügbar macht. Laminektomien der dorsalen Aspekte der Wirbel T11 T13 durchgeführt und eine abgeschrägte Glasnadel richtet sich 0,8 mm seitlich von der Mittellinie und 1,5 mm abgesenkt tief in der grauen Substanz, Virus zu injizieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>#10 Scalpel Blades</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9801-10</td>
			<td>For use with the scalpel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>309659</td>
			<td>For anesthetic IP injection, potential anesthetic booster shots, and antibiotic injections.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mL Syringes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>309604</td>
			<td>For injecting saline into the animal, post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.0 Chromic Catgut Suture</td>
			<td>DemeTECH</td>
			<td>NN374-16</td>
			<td>To re-bind muscle during closing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48000 Micropipette Beveler</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>32416</td>
			<td>Used to bevel the tips of the pulled glass capillary tubes to form functional glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Iodine Solution</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>L01020-08</td>
			<td>For use in sterilzation of the surgical site.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For sterilization of newly prepared glass needles, animal models during surgical preparation, and surgeon&#39;s hands during surgery, as well as all other minor maintainances of sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic (Ketamine/Xylazine Solution)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>240048</td>
			<td>For keeping the animal in the correct plane of consciousness during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic (Cefazolin)</td>
			<td>West-Ward Pharmaceuticals</td>
			<td>NPC 0143-9924-90</td>
			<td>To be injected subcutaneously to prevent infection post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Sterilizer</td>
			<td>CellPoint</td>
			<td>5-1450</td>
			<td>To heat sterilize surgical instruments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonewax</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>19009-00</td>
			<td>To seal up bone in the case of bone bleeding.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cauterizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td>To seal any arteries or veins severed during surgery to prevent excessive blood loss.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Scale</td>
			<td>Okaus</td>
			<td>REV.005</td>
			<td>For weighing the animal during surgical preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible Needle Attachment</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MF34G-5</td>
			<td>For cleaning glass needles and loading red oil into glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>H68079</td>
			<td>To seal up bone in the case of bone bleeding.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary Tubes</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>4878</td>
			<td>For pulled glass needles - should be designed for nanoliter injectors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Clippers</td>
			<td>Oster</td>
			<td>111038-060-000</td>
			<td>For clearing the surgical site of hair.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7231</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimtech</td>
			<td>34155</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium Point Curved Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator with a Vernier Scale</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For precise targeting during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5621</td>
			<td>For cutting glass whisps off of freshly pulled glass capillary tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope with Light and Vernier Scale Ocular</td>
			<td>Leitz Wetzlar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to visualize and measure beveling of pulled glass capillary tubes into functional glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroSyringe Pump Controller</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>62403</td>
			<td>To control the rate of injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoliter 2000 Pump Head Injector</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500150</td>
			<td>To load and inject virus in a controlled fashion.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC-100</td>
			<td>To heat and pull apart glass capillary tubes to form glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalamic Ointment</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>RAC 0119</td>
			<td>To protect the animal&#39;s eyes during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td>To assist with loading virus into the nanoinjector.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needles (25G x 5/8)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>305122</td>
			<td>For use with the 1mL and 10 mL syringes to allow injection of the animal model.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Tooth Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5152</td>
			<td>For griping spinous processes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Oil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To provide a front for visualization of virus entering tissue during injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6510</td>
			<td>To hold open the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl Tablets</td>
			<td>Bio Serv</td>
			<td>MP275-050</td>
			<td>For pain management post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeurs</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8300</td>
			<td>To remove muscle from the spinal column during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Handle</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9843</td>
			<td>To slice open skin and fat pad of animal model during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5980</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steal Wound Clips</td>
			<td>CellPoint</td>
			<td>201-1000</td>
			<td>To bind the skin of the surgical wound during closing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staple Removing Forceps</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS750347</td>
			<td>To remove the staples, should they be applied incorrectly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cloth</td>
			<td>Phenix Research Products</td>
			<td>BP-989</td>
			<td>To provide a sterile surface for the operation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>806-WC</td>
			<td>To soak up blood in the surgical wound while maintaining sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>2146</td>
			<td>To clean the surgical area and surgical tools while maintaining sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>281324</td>
			<td>For use in blood clearing, and for replacing fluids post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gloves</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For use by the surgeon to maintain sterile field during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Heating Pad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For maintaining the body temperature of the animal model during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For enhanced visualization of the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Stapler</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS750546</td>
			<td>To apply the staples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T/Pump Heat Therapy Water Pump</td>
			<td>Gaymar</td>
			<td>TP500C</td>
			<td>To pump warm water into the water convection warming pad.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Convection Warming Pad</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>L1K018</td>
			<td>For use in the post-operational recovery area to maintain the body temperature of the unconscious animal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighted Hooks</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To hold open the surgical wound.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct injection of a lentiviral vector highlights multiple motor pathways in the rat spinal cord

Einführung der interessierenden Proteine in Zellen im Nervensystem ist schwierig wegen angeborenen biologischen Barrieren, die den Zugriff auf die meisten Moleküle beschränken. Injektion direkt ins Rückenmark Gewebe umgeht diese Barrieren, den Zugang zum Zellkörper oder Synapsen, wo Moleküle eingebaut werden können. Kombination von viralen Vektoren Technologie mit dieser Methode ermöglicht die Einführung von Zielgenen in Nervengewebe zum Zwecke der Gentherapie oder Trakt Ablaufverfolgung. Hier ist ein Virus entwickelt für hocheffiziente retrograder Transport (HiRet) an den Synapsen der Propriospinal Interneuronen (PNs) den spezifischen Verkehr zu Nervenzellen im Rückenmark und Hirnstamm Kerne fördern eingeführt. PNs-Targeting nutzt die zahlreichen Verbindungen erhalten sie von motorischen Bahnen wie die Rubrospinal und Reticulospinal Flächen sowie deren Verschaltung untereinander im gesamten Rückenmarkssegmente. Repräsentative Ablaufverfolgung konstitutiv aktiv grün fluoreszierendes Protein (GFP) zeigt High Fidelity Details der Zellkörper, Axone und dendritischer Dorne in thorakalen PNs und Reticulospinal Neuronen in die pontine Formatio Bildung der HiRet Vektor mit. HiRet integriert in Hirnstamm Wege und PNs sondern zeigt Alter abhängigen Integration in kortikospinalen Trakts Neuronen. Zusammenfassend lässt sich sagen ist Rückenmark Injektion mittels virale Vektoren eine geeignete Methode für die Einführung der interessierenden Proteine in Nervenzellen gezielt Tracts.

Erfolgreiche Injektion und Transport von viralen Vektoren sollten Transduktion einer robusten Bevölkerung von einseitigen Nervenzellen im Rückenmark und in bestimmten Hirnstamm Kernen führen. Abbildung 1 zeigt Stereotype Etikettierung von Neuronen und Axonen im thorakalen Rückenmark und in die pontine Formatio Bildung der Hirnstamm bei vier Wochen nach der Injektion. GFP Ausdruck sieht in Neuronen in der grauen Substanz des thorakalen Rückenmarks auf der Seite ipsila...

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Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

Dieses Protokoll zeigt Injektion von Doppelthebel transportable viralen Vektoren in Ratte Rückenmark Gewebe. Der Vektor wird an der Synapse aufgegriffen und zum Zellkörper von Neuronen Ziel transportiert. Dieses Modell eignet sich für retrograde Tracing wichtige spinalen Bahnen oder gezielt Zellen für Gen-Therapie-Anwendungen.

Direkter Einspritzung von Lentivirale Vektor zeigt mehrere motorische Bahnen im Rückenmark Ratte

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Virale Vektoren können genetisches Material in Zellen einführen, um defekte Gene zu kompensieren, wichtige Wachstumsproteine hochzuregulieren oder Marker herzustellen, die neuronale Schaltkreise verfolgen können. Die Einführung viraler Vektoren in das Nervensystem ist aufgrund angeborener biologischer Barrieren eine Herausforderung. Die direkte Injektion in das Rückenmarksgewebe umgeht diese Barrieren und ermöglicht den Zugang zu Zellkörpern oder Synapsen.Die richtige Ausrichtung der Wirbelsäulenwerte L1 bis L4 kann schwierig sein. Es ist wichtig, Markierungen zu verwenden, um das Ziel zu überprüfen und daran zu denken, dass diese Segmente zu den Wirbeln T11 bis T13 führen. Stecken Sie am Tag des Eingriffs den Injektor in die Mikropumpe und legen Sie die Mikropumpe in einen Mikromanipulator mit einer Vernierskala.Verwenden Sie eine Spritze mit einer flexiblen Nadel, um einen farbigen Farbstoff vorsichtig in eine der Glasnadeln zu laden und die Glasnadel in den Injektor einzufügen. Bestätigen Sie dann, dass die Nadel korrekt in die Unterlegscheiben gesät ist und dass die Injektorkappe fest geschraubt ist und dass die Stahlinjektornadel etwa drei Viertel der Länge der Glasnadel verlängert wird. Vor Beginn des Verfahrens mindestens einen Mikroliter auftauen, plus ein kleines Volumen an zusätzlichem Virus pro Injektion aus der Gefrierlagerung, und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion von Zehenkneifen in einer anästhesierten Ratte.Rasieren Sie entlang der dorsalen Mittellinie von den Hüften bis zum unteren Winkel des Schulterblattes des Tieres, ziehen Sie die Haut straff für eine einfachere und präzisere Rasur, und desinfizieren Sie die exponierte Haut mit sequentiellen 5%Jod und 70%Ethanol Peelings. Tragen Sie die ophthalmologische Salbe auf beide Augen auf. Dann legen Sie das Tier auf ein steriles Tuch und legen Sie Gaze unter die Blase, um jeden Urin zu sammeln.Um die Stelle des Hautschnitts zu identifizieren, drücken Sie die Finger sanft an der letzten Rippe, um den L1-Wirbel zu lokalisieren. Verwenden Sie diesen Wirbel als Meilenstein und halten Sie die Haut straff durch sanfteS Ausbreiten beim festdrücken mit dem Skalpell, verwenden Sie eine Nummer 10 chirurgische Klinge, um eine drei bis vier Zentimeter gehäutete Schnittzuschnitt endet nur unter L1, um den Muskel zu belichten. Verwenden Sie Zangen und Scheren, um für die spinösen Prozesse zu fühlen.Machen Sie kleine rostrale Schnitte, damit Sie Platz für einen sicheren Prozess mit Rattenzahnzangen schaffen. Und machen Sie zwei lange, tiefe Schnitte so nah wie möglich an den Prozessen. Nach der Sicherung der seitlichen Muskeln an Ort und Stelle, löschen Sie den Muskel um die Prozesse, um die Form ihrer Köpfe zu bestimmen.Dann visualisieren Sie die Formen der Köpfe der spinösen Prozesse, um die Laminektomie-Site zu identifizieren. Die Prozesse T11 und T12 und T13 werden der Standort der Laminektomie sein. Sobald der Zielbereich korrekt identifiziert wurde, verteilen Sie vorsichtig die Wirbel, um die Bande zu offenbaren, und verwenden Sie Rongeurs, um kleine Bisse der spinlösen Prozesse und den dorsalen Aspekt der Wirbel zu nehmen.Reinigen Sie den Knochen von der Mittellinie weg, so dass das Mittellinienblutgefäß beobachtet werden kann, so dass ein Fenster zurückbleibt, das das Rückenmarksgewebe deutlich offenbart und frei von Schmutz ist. Dann befestigen stabilisierende Zangen an den spinalen Prozessen rostral und kaudal an der Laminektomie Fenster, um das Tier in einem Wirbelsäulenhalter zu sichern. Und heben Sie den Bauch des Tieres, um die Wirkung von Atembewegungen zu negieren.Um das Virus in den Injektor zu laden, pipette etwa fünf Mikroliter des aufgetauten Lagers auf ein Stück Parafilm, und positionieren Sie die Glasnadeln, so dass die Spitze im Tropfen ist. Verwenden Sie die Mikropumpe, um bis zu vier Mikroliter Virus mit einer Rate von 20 bis 100 Nanoliter pro Sekunde abzuziehen, und stellen Sie den Controller so ein, dass er injiziert wird, bevor er eine kleine Menge Virus aus der Nadelspitze freisetzt, um sicherzustellen, dass er nicht blockiert wird. Wischen Sie überschüssige Viren mit einem Laborwisch ab und positionieren Sie die Mikromanipulatoren so, dass die Vernier-Skala sichtbar ist.Legen Sie die Nadel an die Mittellinie des Rückenmarks, und verwenden Sie die Vernier-Skala auf dem Mikromanipulator, um die Nadel seitlich 0,8 Millimeter zu lenken. Dann senken Sie die Nadel auf den Spinalakkord, bis es einrückend ist, aber nicht punktierend, die Dura, und verwenden Sie eine schnelle Drehbewegung, um die Dura mit der Nadel zu punktieren, bis die Nadelspitze auf eine Tiefe von 1,5 Millimeter gesunken ist. Sobald die Nadel an Ort und Stelle ist, programmieren Sie den Injektor, um das Virus mit einer Rate von 400 Nanoliterpro Minute zu liefern, und bestätigen Sie, dass das Virus in den Spinalakkord gelangt, indem Sie den Fortschritt der Farbfront beobachten.Sobald die Injektion abgeschlossen ist, lassen Sie die Nadel für zwei bis fünf Minuten im Rückenmark ruhen, um die Diffusion des Virus zu erleichtern, bevor Sie die Nadel langsam für die Positionierung an der nächsten Injektionsstelle zurückziehen. Nach der letzten Injektion, entfernen Sie das Tier aus dem Wirbelsäulenhalter, um die Entfernung von allen Geräten zu ermöglichen, die verwendet werden, um den Lateralmuskel zu verbreiten. Dann den Muskel mit einer 4,0 chromischen Catgut-Naht schließen und die Haut mit neun Millimeter Wundclips heften.Vier Wochen nach einer erfolgreichen Injektion wird eine signifikante GFP-Expression in den Neuronen innerhalb der grauen Substanz des Brustrückenmarks an der Seite beobachtet, ipsilateral zur Injektion. In der weißen Materie wird die GFP-Expression in den Axonen in der ipsilateralen Schnur beobachtet, insbesondere in Bereichen, die typisch für die propriospinalen Axone sind. Eine höhere Vergrößerung der Neuronen der grauen Materie zeigt ein Beispiel für eine typische Signalexpression in neuronalen Zellkörpern und Dendriten.Die GFP-Expression in Neuronen kann auch in Hirnstammkernen beobachtet werden, z. B. innerhalb der pontinen Netzhautbildung. Die Schlüsselfaktoren für ein erfolgreiches Rückenmarks-Injektionsverfahren sind korrektes Wirbel-Targeting und die Sicherstellung, dass das Virus in das Gewebe eindringt Wenn vor diesem Eingriff eine rostrale Rückenmarksverletzung durchgeführt wird, kann eine Direkteinjektion verwendet werden, um Neuronen zu verfolgen, die Verbindungen um die Verletzung wieder herstellen.

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