Name: inhibition of aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize expressing the &#945;-amylase inhibitor from lablab purpureus l.
Uploaded: 2019-02-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the Î±-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L. at JoVE.co

Vi takker David Meints, University of Arkansas for hans hjælp med at udvikle og analysere den transgene majs under de tidlige generationer. Dette arbejde modtaget økonomisk støtte fra USDA-ARS CRIS-projektet 6054-42000-025-00D. Omtale af handelsnavne eller kommercielle produkter i denne artikel er udelukkende til brug for specifikke oplysninger og indebærer ikke anbefaling eller godkendelse af den US Department of Agriculture. USDA-ARS' lig beskæftigelse lejlighed (EEO) politiske mandater lige muligheder for alle personer og forbyder diskrimination i alle aspekter af agenturets personalepolitik, praksis og operationer.

1. plasmid konstruktioner og majs transformation
<ol><li>PCR forstærke hjelmbønne AILP indsætte ved hjælp af primere 5'-TATCTAGAACTAGTGATTACCATGGCTCC-3 'og 5'-ATACTGCAGGATTGCATGCAGAGTAGTACTG-3'. PCR omfatter en indledende denaturering skridt på 98 ° C til 30 s (trin 1), efterfulgt af denaturering på 98 ° C i 10 s (trin 2), udglødning ved 55 ° C i 30 s (trin 3), brudforlængelse ved 72 ° C i 20 s (trin 4), 31 cyklusser af trin 2 til trin 4 , og en afsluttende brudforlængelse trin ved 72 ° C i 5 min...

<ol>
	<li>Ismaiel, A., Papenbrock, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycotoxins:+Producing+fungi+and+mechanisms+of+phytotoxicity.">Mycotoxins: Producing fungi and mechanisms of phytotoxicity.</a> Agriculture. 5 (3), 492-537 (2015).</li><li>Mitchell, N., Bowers, E., Hurburgh, C., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+economic+losses+to+the+USA+corn+industry+from+aflatoxin+contamination.">Potential economic losses to the USA corn industry from aflatoxin contamination.</a> Food Additives &amp; Contaminants: Part A. 33 (3), 540-550 (2016).</li><li>Umesha, S., Manukumar, H. M., Chandrasekhar, B., Shivakumara, P., Shiva Kumar, J., Raghava, S., Avinash, P., Shirin, M., Bharathi, T. R., Rajini, S. B., Nandhini, M., Vinaya Rani, G., Shobha, M., Prakash, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aflatoxins+and+food+pathogens:+Impact+of+biologically+active+aflatoxins+and+their+control+strategies.">Aflatoxins and food pathogens: Impact of biologically active aflatoxins and their control strategies.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. , (2016).</li><li>Brown, R. L., Menkir, A., Chen, Z. Y., Bhatnagar, D., Yu, J., Yao, H., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+aflatoxin-resistant+maize+lines+using+recent+advances+in+technologies+-+a+review.">Breeding aflatoxin-resistant maize lines using recent advances in technologies - a review.</a> Food Additives &amp; Contaminants - Part A Chemistry, Analysis, Control, Exposure &amp; Risk Assessment. 30 (8), 1382-1391 (2013).</li><li>Abbas, H., Accinelli, C., Shier, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+aflatoxin+contamination+in+U.S.+crops+and+the+use+of+bioplastic+formulations+of+Aspergillus+flavus+biocontrol+strains+to+optimize+application+strategies.">Biological control of aflatoxin contamination in U.S. crops and the use of bioplastic formulations of Aspergillus flavus biocontrol strains to optimize application strategies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65, 7081-7087 (2017).</li><li>Udomkun, P., Wiredu, A. N., Nagle, M., M&#252;ller, J., Vanlauwe, B., Bandyopadhyay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovative+technologies+to+manage+aflatoxins+in+foods+and+feeds+and+the+profitability+of+application+&#8211;+A+review.">Innovative technologies to manage aflatoxins in foods and feeds and the profitability of application &#8211; A review.</a> Food Control. 76, 127-138 (2017).</li><li>Dohroo, N. P., Bhardwaj, S. S., Shyram, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amylase+and+invertase+activity+as+influenced+by+Pythium+pleroticum+causing+rhizome+rot+of+ginger.">Amylase and invertase activity as influenced by Pythium pleroticum causing rhizome rot of ginger.</a> Plant Disease Research. 2, 106-107 (1987).</li><li>Singh, R., Saxena, V. S., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pectinolytic,+cellulolytic,+amylase+and+protease+production+by+three+isolates+of+Fusarium+solani+variable+in+their+virulence.">Pectinolytic, cellulolytic, amylase and protease production by three isolates of Fusarium solani variable in their virulence.</a> Indian Journal of Mycology and Plant Pathology. 19, 22-29 (1989).</li><li>Fakhoury, A. M., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amy1,+the+&#945;-amylase+gene+of+Aspergillus+flavus:+Involvement+in+aflatoxin+biosynthesis+in+maize+kernels.">Amy1, the &#945;-amylase gene of Aspergillus flavus: Involvement in aflatoxin biosynthesis in maize kernels.</a> Phytopathology. 89 (10), 908-914 (1999).</li><li>Bluhm, B. H., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amylopectin+induces+Fumonisin+B1+production+by+Fusarium+verticillioides+during+colonization+of+maize+kernels.">Amylopectin induces Fumonisin B1 production by Fusarium verticillioides during colonization of maize kernels.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 18 (12), 1333-1339 (2005).</li><li>Gilbert, M. K., Majumdar, R., Rajasekaran, K., Chen, Z. Y., Wei, Q., Sickler, C. M., Lebar, M. D., Cary, J. W., Frame, B. R., Wang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-based+silencing+of+the+a-amylase+(amy1)+gene+in+Aspergillus+flavus+decreases+fungal+growth+and+aflatoxin+production+in+maize+kernels.">RNA interference-based silencing of the a-amylase (amy1) gene in Aspergillus flavus decreases fungal growth and aflatoxin production in maize kernels.</a> Planta. 247 (6), 1465-1473 (2018).</li><li>Chen, Z. Y., Brown, R. L., Russin, J. S., Lax, A. R., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+corn+trypsin+inhibitor+with+antifungal+activity+inhibits+Aspergillus+flavus+&#945;-amylase.">A corn trypsin inhibitor with antifungal activity inhibits Aspergillus flavus &#945;-amylase.</a> Phytopathology. 89 (18944733), 902-907 (1999).</li><li>Fakhoury, A. M., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+growth+of+Aspergillus+flavus+and+fungal+&#945;-amylases+by+a+lectin-like+protein+from+Lablab+purpureus.">Inhibition of growth of Aspergillus flavus and fungal &#945;-amylases by a lectin-like protein from Lablab purpureus.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 14 (8), 955-961 (2001).</li><li>Mirkov, T. E., Wahlstrom, J. M., Hagiwara, K., Finardi-Filho, F., Kjemtrup, S., Chrispeels, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+relationships+among+proteins+in+the+phytohemagglutinin-arcelin-a-amylase+inhibitor+family+of+the+common+bean+and+its+relatives.">Evolutionary relationships among proteins in the phytohemagglutinin-arcelin-a-amylase inhibitor family of the common bean and its relatives.</a> Plant Molecular Biology. 26 (4), 1103-1113 (1994).</li><li>Kim, Y. H., Woloshuk, C. P., Cho, E. H., Bae, J. M., Song, Y. S., Huh, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+functional+expression+of+the+gene+encoding+an+inhibitor+against+Aspergillus+flavus+a-amylase,+a+novel+seed+lectin+from+Lablab+purpureus+(Dolichos+lablab).">Cloning and functional expression of the gene encoding an inhibitor against Aspergillus flavus a-amylase, a novel seed lectin from Lablab purpureus (Dolichos lablab).</a> Plant Cell Reports. 26 (4), 395-405 (2007).</li><li>Frame, B., Main, M., Schick, R., Wang, K., Thorpe, T. A., Yeung, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+22.">Ch. 22.</a> Plant Embryo Culture. 710, 327-341 (2011).</li><li>Rajasekaran, K., Sickler, C. M., Brown, R. L., Cary, J. W., Bhatnagar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+resistance+to+aflatoxin+contamination+in+kernels+of+maize+genotypes+using+a+GFP-expressing+Aspergillus+flavus+strain.">Evaluation of resistance to aflatoxin contamination in kernels of maize genotypes using a GFP-expressing Aspergillus flavus strain.</a> World Mycotoxin Journal. 6 (2), 151-158 (2013).</li><li>Rajasekaran, K., Sayler, R. J., Sickler, C. M., Majumdar, R., Jaynes, J. M., Cary, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Aspergillus+flavus+growth+and+aflatoxin+production+in+transgenic+maize+kernels+expressing+a+tachyplesin-derived+synthetic+peptide,+AGM182.">Control of Aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize kernels expressing a tachyplesin-derived synthetic peptide, AGM182.</a> Plant Science. , 150-156 (2018).</li><li>Shu, X., Livingston, D. P., Franks, R. G., Boston, R. S., Woloshuk, C. P., Payne, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+gene+expression+in+maize+seeds+during+colonization+by+Aspergillus+flavus+and+Fusarium+verticillioides.">Tissue-specific gene expression in maize seeds during colonization by Aspergillus flavus and Fusarium verticillioides.</a> Molecular Plant Pathology. 16 (4), 662-674 (2015).</li><li>Savary, S., Ficke, A., Aubertot, J. -. N., Hollier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crop+losses+due+to+diseases+and+their+implications+for+global+food+production+losses+and+food+security.">Crop losses due to diseases and their implications for global food production losses and food security.</a> Food Security. 4, 519-537 (2012).</li><li>Damalas, C. A., Eleftherohorinos, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pesticide+exposure,+safety+issues,+and+risk+assessment+indicators.">Pesticide exposure, safety issues, and risk assessment indicators.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 8 (5), 1402-1419 (2011).</li><li>Kowalska, A., Walkiewicz, K., Kozie&#322;, P., Muc-Wierzgo&#324;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aflatoxins:+Characterisitcs+and+impact+on+human+health.">Aflatoxins: Characterisitcs and impact on human health.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej (Online). 71, 315-327 (2017).</li><li>Rajasekaran, K., Cary, J. W., Cotty, P. J., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+GFP-expressing+Aspergillus+flavus+strain+to+study+fungal+invasion,+colonization,+and+resistance+in+cottonseed.">Development of a GFP-expressing Aspergillus flavus strain to study fungal invasion, colonization, and resistance in cottonseed.</a> Mycopathologia. 165 (2), 89-97 (2008).</li><li>Punt, P., Dingemanse, M. A., Kuyvenhoven, A., Soede, R. D., Pouwels, P. H., van den Hondel, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+elements+in+the+promoter+region+of+the+Aspergillus+nidulans+gpdA+gene+encoding+glyceraldehyde-3-phosphate+dehydrogenase.">Functional elements in the promoter region of the Aspergillus nidulans gpdA gene encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.</a> Gene. 93 (1), 101-109 (1990).</li><li>Lee, L. W., Chiou, C. H., Klomparens, K. L., Cary, J. W., Linz, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+aflatoxin+biosynthetic+enzymes+Nor-1,+Ver-1,+and+OmtA+in+time-dependent+fractionated+colonies+of+Aspergillus+parasiticus.">Subcellular localization of aflatoxin biosynthetic enzymes Nor-1, Ver-1, and OmtA in time-dependent fractionated colonies of Aspergillus parasiticus.</a> Archives of Microbiology. 181 (3), 204-214 (2004).</li><li>Bhatnagar, D., Cary, J. W., Ehrlich, K., Yu, J., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+genetics+of+regulation+of+aflatoxin+production+and+Aspergillus+flavus+development.">Understanding the genetics of regulation of aflatoxin production and Aspergillus flavus development.</a> Mycopathologia. 162, 155-166 (2006).</li><li>Williams, W. P., Krakowsky, M. D., Scully, B. T., Brown, R. L., Menkir, A., Warburton, M. L., Windham, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+and+developing+maize+germplasm+with+resistance+to+accumulation+of+aflatoxins.">Identifying and developing maize germplasm with resistance to accumulation of aflatoxins.</a> World Mycotoxin Journal. 8 (2), 193-209 (2015).</li><li>Broekaert, W. F., van Parijs, J., Leyns, F., Joos, H., Peumans, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chitin-binding+lectin+from+stinging+nettle+rhizomes+with+antifungal+properties.">A chitin-binding lectin from stinging nettle rhizomes with antifungal properties.</a> Science. 245 (4922), 1100-1102 (1989).</li><li>Vanparijs, J., Broekaert, W. F., Goldstein, I. J., Peumans, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hevein-an+antifungal+protein+from+rubber-tree+(Hevea+brasiliensis)+latex.">Hevein-an antifungal protein from rubber-tree (Hevea brasiliensis) latex.</a> Planta. 183, 258-264 (1991).</li><li>Gozia, O., Ciopraga, J., Bentia, T., Lungu, M., Zamfirescu, I., Tudor, R., Roseanu, A., Nitu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+properties+of+lectin+and+new+chitinases+from+potato+tubers.">Antifungal properties of lectin and new chitinases from potato tubers.</a> Comptes Rendus de l'Academie des Sciences - Series III. 316 (8), 788-792 (1993).</li><li>Wisessing, A., Choowongkomon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amylase+inhibitors+in+plants:+Structures,+Functions+and+Applications.">Amylase inhibitors in plants: Structures, Functions and Applications.</a> Functional Plant Science and Biotechnology. 6 (1), 31-41 (2012).</li><li>Tyagi, B., Trivedi, N., Dubey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a-amylase+inhibitor:+A+compelling+plant+defense+mechanism+against+insect/pests.">a-amylase inhibitor: A compelling plant defense mechanism against insect/pests.</a> Environment &amp; Ecology. 32 (3), 995-999 (2014).</li><li>Powers, J. R., Culbertson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effect+of+bean+amylase+inhibitor+on+insect+amylases.">In vitro effect of bean amylase inhibitor on insect amylases.</a> Journal of Food Protection. 45, 655-657 (1982).</li><li>Gatehouse, A. M. R., Fenton, K. A., Jepson, I., Pavey, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+a-amylase+inhibitors+on+insect+storage+pests:+Inhibition+of+a-amylase+in+vitro+and+effects+on+development+in+vivo.">The effects of a-amylase inhibitors on insect storage pests: Inhibition of a-amylase in vitro and effects on development in vivo.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 37, 727-734 (1986).</li><li>Blanco-Labra, A., Chagolla-Lopez, A., Martinez-Gallardo, N., Valdes-Rodriguez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Further+characterization+of+the+12-kDa+protease+a-amylase+inhibitor+present+in+maize+seeds.">Further characterization of the 12-kDa protease a-amylase inhibitor present in maize seeds.</a> Journal of Food Biochemistry. 19, 27-41 (1995).</li><li>Abdollahi, A., Buchanan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aflatoxin+biosynthesis:+Induction+of+aflatoxin+production+by+various+carbohydrates.">Regulation of aflatoxin biosynthesis: Induction of aflatoxin production by various carbohydrates.</a> Journal of Food Science. 46, 633-635 (1981).</li><li>Liu, J., Sun, L., Zhang, N., Zhang, J., Guo, J., Li, C., Rajput, S. A., Qi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+nutrients+in+substrates+of+different+grains+on+aflatoxin+B1+production+by+Aspergillus+flavus.">Effects of nutrients in substrates of different grains on aflatoxin B1 production by Aspergillus flavus.</a> BioMed Research International. 2016, (2016).</li><li>Uppala, S. S., Bowen, K. L., Woods, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-harvest+aflatoxin+contamination+and+soluble+sugars+of+peanut.">Pre-harvest aflatoxin contamination and soluble sugars of peanut.</a> Peanut Science. 40 (1), 40-51 (2013).</li></ol>

Udbyttetab i landbrugsafgrøder som følge af patogener og skadedyr er et globalt problem20. I øjeblikket, anvendelse af syntetiske fungicider og pesticider er den fremherskende metode for kontrollerende plante patogener og skadedyr, men resterende toksicitet af disse biokemikalier i fødevarer og foder kan medføre alvorlig trussel for menneskers og dyrs sundhed21. I betragtning af den økonomiske betydning af majs som fødevarer og foder afgrøder, reduktion eller elimin...

Mykotoksin kontaminering af svampe slægterne, Aspergillus, Fusarium, Penicilliumog Alternaria er et stort problem for fødevarer og foder afgrøder, der dyrkes på verdensplan1,2,3. Blandt disse plantepatogene svampe har Aspergillus den største skadelige indvirkning på afgrøde værdi og menneskers og dyrs sundhed. Aspergillus flavus (A. flavus) er en opportunistisk plante-patogen, der inficerer olie rig afgrøder såsom majs, bomuldsfrø og peanut og producerer de potent kræftfremkaldende stoffer, aflatoksiner, samt talrige giftige sekundære metabolitter (SMs). Majs er en vigtig fødevare og fodre afgrøder dyrkes på verdensplan og er meget modtagelige for forurening af A. flavus. De økonomiske konsekvenser af Aflatoksinforureningen på mister og reducerede værdi i majs kan være så meget som $686.6 mio i USA2 med forventede ændringer i globale klima, virkningen af aflatoksiner kunne resultere i større økonomiske tab i majs med skøn så højt som $1,68 milliarder pr. år i den i nærheden af fremtidige2. I betragtning af de negative økonomiske og sundhedsmæssige virkninger af aflatoksiner i mennesker og husdyr, kunne før høst aflatoksin kontrol i majs være den mest effektive måde at forhindre aflatoksinindholdet i levnedsmidler og foder produkter.
Den store før høst kontrol tilgang til aflatoksin resistens i majs, som har været udbredt i de seneste årtier er primært gennem avl, som kræver en betydelig mængde tid4. For nylig, biocontrol har haft en vis succes i aflatoksin reduktion i stor skala felt programmer5,6. Udover biocontrol, har anvendelse af avanceret Molekylær værktøjer såsom 'Vært induceret genhæmning' (HIGS) gennem RNAi og transgene udtryk for modstand-associerede proteiner haft en vis succes i reduktion af A. flavus vækst og aflatoksin produktion i lille målestok laboratorie- og undersøgelser. Disse tilgange er i øjeblikket ved at blive optimeret udover at identificere nye potentielle A. flavus gen mål for fremtidige manipulation.
Udover gener, der er direkte involveret i mykotoksin produktion som potentielle mål af transgene kontrolstrategier, har svampe amylaser vist sig at spille en afgørende rolle i at opretholde vellykket patogenese og mykotoksin produktion under vorden af værten plante infektion. Et par eksempler kan nævnes Pythium pleroticum (kausal agent af ingefær rhizom rot), Fusarium solani (kausal agent af blomkål visnesyge), hvor positive korrelationer mellem patogenicitet og α-amylase udtryk og aktivitet blev observeret 7,8. Hæmning af α-amylase aktivitet enten gennem gen knockout eller knockdown tilgange påvirker negativt svampe vækst og toksin produktion. En α-amylase knockout mutant af A. flavus var ude af stand til at producere aflatoksiner når dyrkes på stivelse substrat eller degermed majs kerner9. På samme måde i Fusarium verticillioides undladt en α-amylase knockout stamme at producere fumonisin B1 (mykotoksin) under infektion af majs kerner10. I en nyere undersøgelse viste Gilbert et al. (2018), at et RNAi-baserede banke ned af A. flavus α-amylase udtryk gennem HIGS betydeligt reduceret A. flavus vækst og aflatoksin produktion under majs kerne infektion11 .
Specifikke hæmmere af α-amylase aktivitet har også produceret lignende resultater som fremstillet af ned-regulering af α-amylase udtryk. Den første rapport om rollen af en α-amylase hæmmer i svampe modstand kom fra isolering og karakterisering af en 14-kDa trypsin-α-amylase hæmmer fra majs linjer resistente over for A. flavus12. Yderligere screening af flere hundreder af plantearter af Fakhoury og Woloshuk førte til identifikation af en 36-kDa α-amylase inhibitor-lignende protein (AILP) af frøene fra hyacinth bønner, hjelmbønne purpureus L.13. Peptid sekvensen af AILP lignede lektiner tilhører familien lektin-arcelin-α-amylase hæmmer rapporteret til fælles bean14,15. Renset AILP udviser ikke nogen hæmmende aktivitet mod pattedyr trypsin og yderligere in vitro-karakterisering viste betydelige hæmning af A. flavus vækst og conidial spiring13. Betænkninger her klart viser α-amylase kan tjene som et mål i kontrol tilgange til at begrænse patogener eller skadedyr, der afhænger af stivelse mobilisering (gennem α-amylase aktivitet) og erhvervelse af opløselige sukkerarter som energikilde under deres patogen interaktion med værtsplanter.
Alpha-amylase er kendt for at være kritiske i A. flavus patogenicitet9,10,11, og i betragtning af betydningen af AILP som en potent anti-A. flavus agent (α-amylase hæmning/antigrowth)13, Vi genereret transgene majs planter at udtrykke hjelmbønne AILP gen den konstituerende CaMV 35S promotor. Målet var at undersøge hvis heterolog ekspression af denne α-amylase hæmmer i majs er effektiv mod A. flavus patogenese og aflatoksin produktion under majs kerne infektion. Vores resultater viser, at transgene majs kerner udtrykker AILP betydeligt reduceret A. flavus vækst og aflatoksin produktion under kerne infektion.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Caisson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amazing Marine Goop</td>
			<td>Eclectic Products</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C1000 Touch CFX96 Real-Time System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Falcon Tissue Culture Dishes, 60 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf&#160;5424 Microcentrifuge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flask with stopper, 50 mL</td>
			<td>Ace Glass</td>
			<td>6999-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroQuant Afla</td>
			<td>Romer Labs</td>
			<td>COKFA1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluted Qualitative Filter Paper Circles, 15 cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-790-14E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Force Air Oven</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FQ-Reader</td>
			<td>Romer Labs</td>
			<td>EQFFM3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geno/Grinder 2010</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>SP 2010-115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Innova 44 Incubator Shaker</td>
			<td>Brunswick Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>liquid Nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Form Griffin Beakers, 100 mL</td>
			<td>DKW Life Sciences</td>
			<td>14000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene Chloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nexttec 1-step DNA Isolation Kit for Plants</td>
			<td>Nexttec</td>
			<td>47N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse E600 microscope with Nikon DS-Qi1 camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope with C-HGFI Episcopic Illuminator and Andor Zyla 4.2 sCMOS camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Square BioAssay Dishes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>240835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phire Plant Direct PCR Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>F130WH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Vials, 15 ml</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>PCRV 15-100-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potato Dextrose Broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snap Cap, 22 mm</td>
			<td>DKW Life Sciences</td>
			<td>242612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate dibasic heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrum Plant Total RNA Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>STRN50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Grinding Balls, 3/8&#39;&#39;</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>GBSS 375-1000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir Plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy 4 Fluorometer</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T100 Thermal Cycler</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V8 juice</td>
			<td>Campbell&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Qualitative Grade Plain Sheets, Grade 3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-820P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wrist-Action Shaker</td>
			<td>Burrell Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inhibition of aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize expressing the &#945;-amylase inhibitor from lablab purpureus l.

Aflatoksinforureningen i fødevare-og er en stor udfordring på verdensplan. Aflatoksiner, produceret af svampen Aspergillus flavus (A. flavus) er potent kræftfremkaldende, der væsentligt reducerer afgrøde værdi i majs og andre olie rig afgrøder som peanut udover alvorlig trussel for menneskers og dyrs sundhed. Forskellige metoder, herunder traditionelle avl, transgene udtryk for modstand knyttet proteiner og RNA-interferens (RNAi)-baseret vært-induceret genhæmning af kritiske A. flavus gen målene, evalueres for at øge aflatoksin modstand i modtagelige afgrøder. Tidligere undersøgelser har vist en vigtig rolle i α-amylase i A. flavus patogenese og aflatoksin produktion, tyder dette gen/enzym er et potentielt mål at reducere både A. flavus vækst og aflatoksin produktion. I denne forbindelse den aktuelle undersøgelse var forpligtet sig til at evaluere Heterolog ekspression (under kontrol af konstitutiv CaMV 35S -promotoren) af en hjelmbønne purpureus L. α-amylase inhibitor-lignende protein (AILP) i majs mod A. flavus. AILP er en 36-kDa protein, som er en kompetitiv inhibitor af A. flavus α-amylase enzym og tilhører lektin-arcelin-α-amylase inhibitor protein familie i fælles bønne. In vitro undersøgelser forud for det aktuelle arbejde havde vist AILP rolle i hæmning af A. flavus α-amylase aktivitet og svampevækst. Svampevækst og aflatoksin produktion i modne kerner blev overvåget i realtid ved hjælp af en normal god landbrugspraksis-udtrykker A. flavus stamme. Denne kerne screening assay (KSA) er meget enkel at sætte op og giver pålidelig og reproducerbar data på infektion og omfanget af spredning, der kunne kvantificeres for evalueringen af kimplasma og transgene linjer. Fluorescens fra stammen, normal god landbrugspraksis er tæt korreleret til svampe vækst, og i forlængelse heraf er det godt korreleret til aflatoksin værdier.  Målet med den nuværende arbejde var at gennemføre denne tidligere viden i et kommercielt vigtige afgrøder som majs til at øge aflatoksin modstand. Vores resultater viser en 35% – 72% reduktion i A. flavus vækst i AILP-udtrykker transgene majs kerner, som til gengæld oversat til en 62-88% reduktion i aflatoksinindholdet.

Majs transformation og molekylær screening af transgene planter
Umodne embryoner af majs Hi-II linjer var transformeret med Agrobacterium tumefaciens EHA101 stamme der indeholder den endelige plante destination vektor udtrykker hjelmbønne purpureus AILP genet under kontrol af CaMV 35S promotor. Fem uafhængigt transformerede majs linjer var avanceret til T6 generation for ef...

Watch this Scientific Journal Video about Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the Î±-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L. at JoVE.co

Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the &#945;-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L.

Her præsenterer vi en protokol for at analysere Aspergillus flavus vækst og aflatoksin produktion i majs kerner udtrykker en svampedræbende protein.  Ved hjælp af en normal god landbrugspraksis-udtrykker A. flavus stamme overvåges vi af infektion og spredning af svamp i modne kerner i realtid. Analysen er hurtig, pålidelig og reproducerbar.

Hæmning af Aspergillus flavus vækst og aflatoksin produktion transgene majs udtrykker α-amylase hæmmer fra hjelmbønne purpureus L.

Aflatoxin contamination in food and feed crops is a major challenge worldwide. Aflatoxins, produced by the fungus Aspergillus flavus (A. flavus) are ...

Her præsenterer vi en simpel kerne screening analyse til at analysere Aspergillus flavus vækst og aflatoksin produktion i majskerner udtrykke en svampedræbende protein. Ved hjælp af et grønt fluorescerende protein, der udtrykker Aspergillus flavus stamme, overvåger vi infektionen og spredningen af svampen i modne kerner i realtid. Denne enkle analyse giver et pålideligt middel til at vurdere majskernens evne til at modstå Aspergillus flavus infektion og aflatoksinproduktion.Resultater fra denne lab assay udføres under kontrollerede forhold på modne kerner korrelerer godt med resultater fra infektion under feltbetingelser. Demonstrere proceduren vil være Dr.Rajtilak Majumdar, en postdoc fra vores laboratorium, sammen med Christine Sickler og David Ambrosio, biologiske videnskab teknikere også fra vores laboratorium. Til at begynde lim 20 to mm snap caps i en petriskål for at skabe KSA-hætter.Limen tørrer i 48 timer, før du bruger hætterne. I et biologisk sikkerhedsskab spray en firkantet bioassay bakke med 70% ethanol i vand. Lad bakken lufttørre.Tilsæt sterilt kromatografipapir til den tørre bakke. Spray ni af KSA hætter med 70% ethanol og lad dem lufttørre. Læg derefter hætterne på bioassaybakken.For hver transgene majslinje, der afprøves, skal der vælges 20 ubeskadigede kerner og anbringes i et centrifugerør på 50 ml. Ved hjælp af en bordplade stereo mikroskop vælge kun ubeskadigede kerner til analysen. Beskadigede kerner er mere modtagelige for Aspergillus angreb og producere mere aflatoksin, og dermed skævvridning resultaterne og ikke repræsenterer de sande svampedræbende eller antimikrobielle træk af sorten.Tilsæt 70% ethanol til hvert rør. Lad kernerne sterilisere i fire minutter, mens de lejlighedsvis forsigtigt ryster dem. Efter dette forsigtigt hælde ethanol og forsigtigt skylle kernerne i sterilt deioniseret vand tre gange.Få en seks dages kultur af Aspergillus flavus pletten 70 udtrykke GFP dyrket på V8 medium. Der tilsættes 20 ml sterilt 0,02% Triton X-100 i deioniseret vand. Og brug en steril løkke til at skrabe sporerne af.Pipette ud inokulum og overføre det til en 300 ml steril bægerglas. Forbered en femdredt fortynding med 0,02% Triton X-100 og bruge et hæmocytometer til at udføre en spore tæller. Fortyndes igen, hvis det er nødvendigt for at opnå 100 ml med en koncentration på fire millioner sporer pr. ml.Hæld inokulumet i et tomt bægerglas. Kernerne sættes i et sterilt 300 ml bægerglas med en rørestang, og omrøres i tre minutter. Brug af snævle overfører kernerne til bioassayskålen, og sørg for kun at placere én kerne i hver hætte.Der tilsættes 30 ml deioniseret vand til bunden af hver bioassaybakke. Og inkubere ved 31 grader Celsius i syv dage. Efter syv dages vaccination med A.flavus, tage billeder af fire kerner, der var udpeget til mikroskopisk analyse og fotografering.Brug derefter et blødt væv og deioniseret vand til at rense ydersiden af kerner. Udfør langsgående dele af kerner og straks tage billeder under fluorescerende mikroskop. For at forberede kernerne til analyse, rense ydersiden af de resterende kerner med et blødt væv og deioniseret vand.Der anvendes fire kerner, som udgør en rep, i et 15 ml skruedæksel polycarbonathætteglas med to kugler i rustfrit stål. Straks fryse hætteglassene i flydende nitrogen og opbevares ved 80 grader Celsius, indtil klar til at gå videre med yderligere forarbejdning og analyse. Når du er klar, skal du fjerne kernerne fra fryseren og bruge en homogenisator til at slibe dem ved 1500 omdrejninger i tre minutter.Brug de samme jordmaterialer til GFP-analyse, aflatoksinbestemmelse og molekylær analyse, så alle værdier er repræsentative for prøverne. Mens mindst tre replikater anbefales, mere er altid bedre afhængigt af tilgængeligheden af god kvalitet kerner. I denne undersøgelse omdannes umodne embryoner fra majs HI-II-linjer ved hjælp af Agrobacterium tumefaciens EHA101-stamme, der indeholder den endelige vektor for anlæggets destination, der udtrykker Lablab purpureus AILP-genet under kontrol af 35S-promotoren fra blomkålsmosaikvirussen.PCR forstærkning af målet AILP genet viste en 548 bp amplicon observeret kun i de transgene majs linjer. AILP-genet viste udtryk i de transgene linjer, mens der ikke blev observeret noget AILP-udtryk i kontrolanlæggene. Tidlige stadier spiresporer udsættes for rå blade ekstrakter fra unge transgene majsplanter i 20 timer.Høj fuld længde fra sporer udsat for transgene blade ekstrakter viser en 58 til 80% reduktion i forhold til den negative kontrol. A.flavus stamme, der anvendes indeholder en GFP reporter, som gør det muligt at overvåge og kvantificere svampevækst i realtid. Der observeres signifikant reduktion i GFP-fluorescens i transgene AILP-kerner sammenlignet med den isogene negative kontrol.En betydelig reduktion ses i svampevækst for AILP linje fire og fem, 69% og 72%. De øvrige linjer viser en reduktion på 35-60 % i forhold til kontrolkernerne. Der blev observeret en reduktion på 62-88 % i aflatoksinindholdet i AILP-kernerne sammenlignet med kontrollen.Linje fire ses at have det laveste aflatoksinindhold på 486 ng pr. g, efterfulgt af andre linjer, der varierede, og som havde et indhold på mellem 640 og 1498 ng pr. g i kernerne. Efter denne procedure, yderligere metoder kan udføres såsom ved hjælp af et fluorometer til at kvantificere GFP og som dens svampevækst. Immunobased kommercielle kits eller HPLC eller EPLC kan bruges til at udføre aflatoksinantending.Tilgængeligheden af KSA giver en hurtig og enkel måde at bestemme resistens over for aflatoksinforurening. De forskellige majsavlslinjer kan hurtigt vurderes ved hjælp af denne teknik. Mens kernescreeningsanalysen ikke er farlig, bør operatøren beskytte sig mod at blive udsat for Aspergillus flavus sporer, bruge passende beskyttelsesudstyr.

Research

JoVE Journal

Environment

Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the &#945;-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L.

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Masseproduktion af genetisk modificerede Aedes aegypti til feltudgivelser i Brasilien

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Bestemmelse af Mikrobiel Extracellular enzymaktivitet i Vand, Jord og sediment ved hjælp af High Throughput Mikropladekrav Analyser

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Optimize Flue Gas Settings to Promote Microalgae Growth in Photobioreactors via Computer Simulations

Optimer Røggas indstillinger for at fremme mikroalger Vækst i fotobioreaktorer via computersimuleringer

Flue gas from power plants can promote algal cultivation and reduce greenhouse gas emissions1. Microalgae not only capture solar energy more efficiently ...

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

Metoder til Lettere Mikrobiel vækst på cellulosefabrikken affaldsstrømme og karakterisering af Bionedbrydningspotentialet af Kulturperler Mikrober

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

RNAi-mediated Control of Aflatoxins in Peanut: Method to Analyze Mycotoxin Production and Transgene Expression in the Peanut/Aspergillus Pathosystem

RNAi-mediated Control of Aflatoxins in Peanut: Method to Analyze Mycotoxin Production and Transgene Expression in the Peanut/Aspergillus Pathosystem

RNAi-medieret Kontrol af aflatoksiner i Peanut: metode til at analysere Mykotoksin Produktion og transgenekspression i Peanut /<em&gt; Aspergillus</em&gt; Pathosystem

The Food and Agriculture Organization of the United Nations estimates that 25% of the food crops in the world are contaminated with aflatoxins. That ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Ekstraktion og analyse af Mikrobiel Phospholipid fedtsyrer i Jordbunden

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

En gusseted Thermogradient Table at styre Jord Temperaturer for Evaluering plantevækst og jordbundsovervågning Processer

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Production and Measurement of Organic Particulate Matter in the Harvard Environmental Chamber

Produktion og måling af organiske partikler i Harvard miljømæssige kammer

The production and the evolution of atmospheric organic particulate matter (PM) are insufficiently understood for accurate simulations of atmospheric ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plante infektion Test: Spray og sår-medieret podning med plante patogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize (Zea mays L.)

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize Zea mays L.

Høj overførselshastighed, individuel protokol for analyse af behandling parametre og ernæringsmæssige kvaliteter i majs (Zea mays L.)

Maize is an important grain crop in the United States and worldwide. However, maize grain must be processed prior to human consumption. Furthermore, whole ...