Name: inhibition of aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize expressing the &#945;-amylase inhibitor from lablab purpureus l.
Uploaded: 2019-02-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the Î±-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L. at JoVE.co

우리는 데이비드 Meints, 알칸사 스의 대학 초기 세대 중 유전자 변형 옥수수를 분석에 그의 원조에 대 한 감사 합니다. 이 작품 미국 농 무부-ARS 크리스틴 프로젝트 6054-42000-025-00D의 재정 지원을 받았다. 상호 또는이 문서에서 상용 제품의 언급만을 목적으로 특정 정보를 제공 하 고 미국 농 무부에 의해 승인 또는 추천을 의미 하지는 않습니다. 미국 농 무부-ARS의 동등한 고용 기회 (EEO) 정책 모든 사람을 위한 기회 균등을 명령 하 고 기관의 인사 정책, 관행 및 작업의 모든 측면에서 차별 금지.

1. 플라스 미드 구조와 옥수수 변환
<ol><li>PCR 증폭 Lablab AILP 5'-TATCTAGAACTAGTGATTACCATGGCTCC-3 '와 5'-ATACTGCAGGATTGCATGCAGAGTAGTACTG-3' 뇌관을 사용 하 여 삽입. PCR 조건 포함 30 98 ° C에 초기 변성 단계 s (1 단계), 뒤에 98 ° C 10에서 변성 s (2 단계), 55 ° C 30에서 어 닐 링 s (3 단계), 신장 20 72 ° C에서 s (4 단계), 4 단계로 2 단계 31 주기 그리고 내가 및 Pst최종 신장 5 분 수정된 pCAMBIA 1300으로 PCR 제품 벡터 <e...

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	<li>Ismaiel, A., Papenbrock, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycotoxins:+Producing+fungi+and+mechanisms+of+phytotoxicity.">Mycotoxins: Producing fungi and mechanisms of phytotoxicity.</a> Agriculture. 5 (3), 492-537 (2015).</li><li>Mitchell, N., Bowers, E., Hurburgh, C., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+economic+losses+to+the+USA+corn+industry+from+aflatoxin+contamination.">Potential economic losses to the USA corn industry from aflatoxin contamination.</a> Food Additives &amp; Contaminants: Part A. 33 (3), 540-550 (2016).</li><li>Umesha, S., Manukumar, H. M., Chandrasekhar, B., Shivakumara, P., Shiva Kumar, J., Raghava, S., Avinash, P., Shirin, M., Bharathi, T. R., Rajini, S. B., Nandhini, M., Vinaya Rani, G., Shobha, M., Prakash, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aflatoxins+and+food+pathogens:+Impact+of+biologically+active+aflatoxins+and+their+control+strategies.">Aflatoxins and food pathogens: Impact of biologically active aflatoxins and their control strategies.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. , (2016).</li><li>Brown, R. L., Menkir, A., Chen, Z. Y., Bhatnagar, D., Yu, J., Yao, H., Cleveland, T. 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병원 균과 해충 농업 작물에서 수확량 손실 글로벌 문제20이다. 현재, 합성 살 균 제와 살충제의 응용 프로그램 제어 식물 병원 균과 해충에 대 한 주된 수단 이지만 이러한 바이오 식품 및 사료의 잔류 독성21인간과 동물 건강 심각한 위협을 제기할 수 있다. 식품 및 사료 작물 옥수수의 경제 중요성, 고려에 감소 또는 아플 라 톡 신 오염 제거 가장 중요<sup class="x...

Aspergillus, 강했다 Fusarium, 푸른 곰 팡이, 곰 팡이 속으로 mycotoxin 오염 식품의 중요 한 문제 이며, 사료 작물 재배 전세계1,2,3. 이러한 phytopathogenic 버섯 중 Aspergillus 자르기 값과 인간과 동물 건강에 가장 불리 한 충격이 있다. Aspergillus flavus (A. flavus)은 옥수수, 면 실 등 땅콩 기름 풍부한 작물을 감염 하 고 수많은 독성 2 차 대사 산물 (SMs) 뿐만 아니라 강력한 발암 물질, aflatoxins, 생성 한 기회주의적 식물 병원 체 이다. 옥수수는 중요 한 음식 및 전세계 재배 작물을 먹이 이며 A. flavus에의해 오염에 매우 쉽습니다. 아플 라 톡 신 오염에의 경제적 영향을 잃고 및 옥수수에 감소 값으로 686.6 백만 달러/년 미국2 예측 변화 글로벌 기후에, aflatoxins의 영향으로 옥수수에 큰 경제적 손실을 초래할 수 있습니다. 평가 높은 1.68 십억 달러/년 가까운 미래2. 인간과 가축에 aflatoxins의 불리 한 경제 및 건강 효과 감안할 때, 옥수수에 사전 수확 아플 라 톡 신 제어 식품의 아플 라 톡 신 오염 방지 제품을 공급 하는 가장 효율적인 방법을 수 있습니다.
지난 몇 십년에 광범위 하 게 사용 된 옥수수의 아플 라 톡 신 저항에 대 한 주요 사전 수확 제어 접근 시간4의 상당한 금액을 요구 하는 번 식 통해 주로 이다. 최근, biocontrol 대규모 필드 응용 프로그램5,6에서 아플 라 톡 신 감소에서 약간의 성공을 했다. Biocontrol, 게다가 최첨단 분자 도구 ' 호스트 유도 유전자 침묵 ' RNAi 통해 (HIGS) 등의 응용 프로그램 및 저항 관련 단백질의 유전자 변형 식 몇 가지 성공을 했다 A. flavus 성장과 아플 라 톡 신에의 감소에 작은 규모의 실험실 및 현장 연구에 있는 생산. 이러한 접근은 현재 미래 조작 위한 새로운 잠재적인 A. flavus 유전자 표적 식별 이외에 최적화 되 고 있습니다.
유전자 유전자 변형 제어 전략의 잠재적인 대상으로 mycotoxin 생산에 직접 관련 되는, 게다가 곰 팡이 amylases 성공적인 pathogenesis 및 mycotoxin 생산 초기 단계를 유지 하는 중요 한 역할을 재생 표시 되었습니다. 호스트 공장 감염. 몇 가지 예로 Pythium pleroticum (생강 rhizome 부패의 인과 대리인), Fusarium solani (콜리플라워 윌 트의 인과 대리인), 긍정적인 상관 관계 pathogenicity와 α-아 밀라 제 식 및 활동 사이 를 관찰 했다 7,8. 유전자 녹아웃 또는 최저의 방법을 통해 α-아 밀라 제 활동의 금지는 곰 팡이 성장과 독 소 생산을 부정적인 영향을 줍니다. A. flavus 의 α-아 밀라 제 녹아웃 돌연변이 aflatoxins 전 기판 또는 degermed 옥수수 커널9에 성장 될 때 생산 하지 못했습니다. 마찬가지로, Fusarium verticillioides 에 α-아 밀라 제 녹아웃 스트레인 옥수수 커널10의 감염 시 fumonisin B1 (mycotoxin)을 생산 하지 못했습니다. 더 최근의 연구에서 길버트 외. (2018) 시연 HIGS 통해 A. flavus α-아 밀라 제 식의 아래로 RNAi 기반 노크 크게 감소 옥수수 커널 감염11 시 A. flavus 성장과 아플 라 톡 신 생산 .
또한 α-아 밀라 제 활동의 특정 억제제는 α-아 밀라 제 식의 다운 레 귤 레이 션으로 비슷한 결과 생산 했습니다. 곰 팡이 저항에는 α-아 밀라 아 제 억제제의 역할에 첫 번째 보고서는 분리와 옥수수 라인 저항 A. flavus12에서 14 kDa 트립 신-α-아 밀라 아 제 억제제의 특성에서 왔다. 더 Lablab purpureus L.13, 히 아 신 스 콩의 씨앗에서 Fakhoury 및 Woloshuk 36 kDa α-아 밀라 아 제 억제제와 같은 단백질 (AILP)의 식별에 의해 식물 종의 수백의 상영. Lectin-arcelin-α-아 밀라 아 제 억제 물 가족에 속하는 AILP 닮은 lectins의 펩 티 드 순서 일반적인 콩14,15보고. 순화 AILP 포유류 trypsin 및 A. flavus 성장 및 conidial 발 아13의 중요 한 금지를 보여주었다 생체 외에서 특성 추가 금지 행위를 발생 하지 않습니다. 제시 하는 보고서 여기 명확 하 게 쇼 α-아 밀라 제 역할을 할 수 제한 하는 병원 체 또는 전 분 (α-아 밀라 제 활동)을 통해 동원 및 중 에너지 원으로 녹는 설탕의 수집에 의존 하는 해충을 제어 방식에서 대상 들 호스트 식물 병원 성 상호 작용입니다.
알파-아 밀레이 스 A. flavus pathogenicity9,,1011, 그리고 강력한 안티-A. flavus 에이전트 (α-아 밀라 제 억제/antigrowth)13, AILP의 중요성을 감안할 때 중요 한 것으로 알려져 있다 Lablab AILP 을 표현 하는 유전자 변형 옥수수 식물 생성 제정 CaMV 35S 발기인에서 유전자. 목표는 옥수수에이 α-아 밀라 아 제 억제 물의 분리 표현식이 A. flavus pathogenesis 및 아플 라 톡 신 생산 옥수수 커널 감염에 대 한 효과 조사 했다. 우리의 결과 AILP를 크게 표현 하는 유전자 변형 옥수수 커널 커널 감염 시 A. flavus 성장과 아플 라 톡 신 생산 감소를 보여 줍니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Caisson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amazing Marine Goop</td>
			<td>Eclectic Products</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C1000 Touch CFX96 Real-Time System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Falcon Tissue Culture Dishes, 60 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf&#160;5424 Microcentrifuge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flask with stopper, 50 mL</td>
			<td>Ace Glass</td>
			<td>6999-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroQuant Afla</td>
			<td>Romer Labs</td>
			<td>COKFA1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluted Qualitative Filter Paper Circles, 15 cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-790-14E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Force Air Oven</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FQ-Reader</td>
			<td>Romer Labs</td>
			<td>EQFFM3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geno/Grinder 2010</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>SP 2010-115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Innova 44 Incubator Shaker</td>
			<td>Brunswick Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>liquid Nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Form Griffin Beakers, 100 mL</td>
			<td>DKW Life Sciences</td>
			<td>14000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene Chloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nexttec 1-step DNA Isolation Kit for Plants</td>
			<td>Nexttec</td>
			<td>47N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse E600 microscope with Nikon DS-Qi1 camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope with C-HGFI Episcopic Illuminator and Andor Zyla 4.2 sCMOS camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Square BioAssay Dishes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>240835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phire Plant Direct PCR Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>F130WH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Vials, 15 ml</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>PCRV 15-100-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potato Dextrose Broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snap Cap, 22 mm</td>
			<td>DKW Life Sciences</td>
			<td>242612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate dibasic heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrum Plant Total RNA Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>STRN50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Grinding Balls, 3/8&#39;&#39;</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>GBSS 375-1000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir Plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy 4 Fluorometer</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T100 Thermal Cycler</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V8 juice</td>
			<td>Campbell&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Qualitative Grade Plain Sheets, Grade 3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-820P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wrist-Action Shaker</td>
			<td>Burrell Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inhibition of aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize expressing the &#945;-amylase inhibitor from lablab purpureus l.

아플 라 톡 신 오염 식품 및 사료 작물은 전세계 주요 도전 이다. Aflatoxins, Aspergillus flavus (A. flavus) 균에 의해 생산은 실질적으로 옥수수와 인간과 동물 건강에 심각한 위협이 포즈 외 땅콩 같은 다른 기름 풍부한 작물 자르기 값을 줄일 수 있는 강력한 발암 물질. 전통적인 번 식, 저항 관련 된 단백질과 RNA 간섭 (RNAi)의 유전자 변형 식을 포함 하 여 다른 접근-호스트 유도 유전자 침묵의 중요 한 A. flavus 기반 유전자 대상, 평가 되 고 증가 하 아플 라 톡 신 취약 작물에 저항입니다. 과거 연구 A. flavus pathogenesis 및 아플 라 톡 신 생산,이 유전자/효소 제안에 α-아 밀라 아 제의 중요 한 역할은 A. flavus 성장과 아플 라 톡 신 생산을 줄이기 위해 잠재적인 대상으로 나타났습니다. 이와 관련, 현재 연구 A. flavus에 대 한 옥수수에 Lablab purpureus L. α-아 밀라 아 제 억제제와 같은 단백질 (AILP)의 (제정 CaMV 35S 발기인 통제) 분리 식 평가에 착수 했다. AILP A. flavus α-아 밀라 제 효소의 경쟁적 억제제 이며 콩 공통 lectin-arcelin-α-아 밀라 아 제 억제 물 단백질 가족에 속하는 36 kDa 단백질 이다. 현재 작업 전에 생체 외에서 연구 A. flavus α-아 밀라 제 활동 및 곰 팡이 성장 억제에 AILP의 역할을 시연 했다. 곰 팡이 성장 및 성숙한 커널에서 아플 라 톡 신 생산 GFP 표현 A. flavus 긴장을 사용 하 여 실시간으로에서 감시 되었다. 이 커널 분석 (KSA) 상영은 매우 간단 합니다을 설정 하 고 germplasm 및 유전자 변형 라인의 평가 대 한 감염 및 측정할 수 있는 확산의 범위에 안정적이 고 재현 가능한 데이터를 제공 합니다. GFP 긴장에서 형광 곰 팡이를 밀접 하 게 연관 된 성장 이며, 확장 하 여, 그것은 아플 라 톡 신 값을 잘 상관.  현재 작업의 목표는 아플 라 톡 신 저항을 증가 하는 옥수수 처럼 상업적으로 중요 한 작물에서이 이전 지식을 구현 했다. 우리의 결과 표현 하는 AILP 유전자 변형 옥수수 알갱이, 차례 차례로, 아플 라 톡 신 레벨 62%-88% 감소에 번역에 A. flavus 성장에 35%-72% 감소를 보여 줍니다.

옥수수 변환 및 유전자 변형 식물의 분자 검사
옥수수이 II 라인의 미 성숙한 배아 최종 공장 대상 벡터 CaMV 35S 의 통제 Lablab purpureus AILP 유전자 표현 포함 Agrobacterium tumefaciens EHA101 긴장을 사용 하 여 변형 되었다 발기인입니다. 5 독립적으로 변형 된 옥수수 라인 후속 연구에 대 한 t 6 세대...

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Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the &#945;-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L.

여기 선물이 분석 Aspergillus flavus 성장과 아플 라 톡 신 생산 옥수수 커널에서 항진균 단백질을 표현 하는 프로토콜.  우리는 감염 및 실시간으로 성숙한 커널에 곰 팡이의 확산을 모니터링 GFP 표현 A. flavus 긴장을 사용 하 여. 분석 결과 신속 하 고 신뢰할 수 있는, 재현.

Aspergillus flavus 성장 및 유전자 변형 옥수수 표현 Lablab purpureus L.에서에서 α-아 밀라 아 제 억제제에서 아플 라 톡 신 생산의 억제

Aflatoxin contamination in food and feed crops is a major challenge worldwide. Aflatoxins, produced by the fungus Aspergillus flavus (A. flavus) are ...

여기서 우리는 항진균 단백질을 표현하는 옥수수 커널에서 아스퍼길러스 플라부스 성장과 아플라톡신 생산을 분석하기 위해 간단한 커널 스크리닝 분석을 제시합니다. 아스퍼질러스 플라부스 균주를 표현하는 녹색 형광 단백질을 사용하여, 우리는 실시간으로 성숙한 커널에서 곰팡이의 감염과 확산을 모니터링합니다. 이 간단한 분석법은 아스퍼길러스 플라부 감염 및 아플라톡신 생산에 저항하는 옥수수 커널의 능력을 평가하는 신뢰할 수있는 수단을 제공합니다.성숙한 커널에 통제된 조건하에서 수행된 이 실험실 분석의 결과는 필드 조건 하에서 감염의 결과와 잘 상관관계가 있습니다. 이 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 후법인 Rajtilak Majumdar 박사와 크리스틴 시틀러 및 데이비드 암브로시오(David Ambrosio) 연구실의 생물 과학 기술자이기도 합니다. 먼저 페트리 접시에 20mm 스냅 캡을 붙이면 KSA 캡을 만듭니다.캡을 사용하기 전에 접착제를 48 시간 동안 건조시키십시오. 생물학적 안전 캐비닛에서 물에 70 %에탄올사각형 바이오 아세이 트레이를 스프레이합니다. 트레이를 공기건조시키십시오.멸균 크로마토그래피 페이퍼를 드라이 트레이에 넣습니다. KSA 캡 9개를 70%에탄올로 스프레이하고 공기 건조시키세요. 그런 다음 생물 분석 트레이에 캡을 놓습니다.테스트 중인 각 형질전환 옥수수 라인에 대해 손상되지 않은 커널 20개를 선택하고 50ml 원심분리기 튜브에 넣습니다. 탁상 스테레오 현미경을 사용하여 분석에 손상되지 않은 커널만 선택합니다. 손상된 커널은 아스퍼질러스 공격에 더 취약하고 더 많은 아플라톡신을 생성하여 결과를 왜곡하고 다양한 진정한 항진균 또는 항균 특성을 나타내지 않습니다.각 튜브에 70%에탄올을 추가합니다. 커널을 4분 간 소독하는 동시에 가끔씩 부드럽게 흔들어 줍니다. 이 후 부드럽게 에탄올을 부어 부드럽게 멸균 된 물에 커널을 세 번 헹구십시오.V8 배지에서 재배된 GFP를 표현하는 아스퍼길러스 플라부스 얼룩 70의 6일 문화를 획득한다. 멸균 0.02% 트리톤 X-100을 디온화 물에 20ml를 넣습니다. 그리고 포자를 긁어 멸균 루프를 사용합니다.피펫을 접종한 후 300ml멸균 비커로 옮기습니다. 0.02%의 Triton X-100으로 5배 희석을 준비하고 혈전계를 사용하여 포자 수를 수행합니다. 필요한 경우 다시 희석하여 ml당 4백만 포자의 농도로 100ml를 얻습니다.빈 비커에 접종을 부어. 커널을 멸균 300ml 비커에 넣고 저어주세요. 집게를 사용하여 커널을 생체 분석 접시로 옮기고 커널을 각 캡에 하나만 배치합니다.각 바이오아세이 트레이의 바닥에 30ml의 탈이온화된 물을 넣습니다. 그리고 7 일 동안 섭씨 31도에서 배양하십시오. A.flavus와 접종7 일 후, 현미경 분석 및 사진 촬영에 지정된 네 커널의 사진을 찍어.그런 다음 연조직과 탈이온된 물을 사용하여 커널의 외관을 청소합니다. 커널의 세로 섹션을 수행하고 즉시 형광 현미경으로 사진을 찍습니다. 분석을 위해 커널을 준비하려면 나머지 커널의 바깥쪽을 연조직과 탈온화된 물로 청소하십시오.1개의 담당자를 구성하는 4개의 커널을 스테인리스 스틸 볼 2개가 들어 있는 15ml 스크류 캡 폴리카보네이트 바이알에 넣습니다. 액체 질소에 바이알을 즉시 동결하고 추가 처리 및 분석을 진행할 준비가 될 때까지 섭씨 80도에 보관하십시오. 준비가 되면 냉동고에서 커널을 제거하고 균질화기를 사용하여 1500 rpm에서 3 분 동안 갈아 드시면 됩니다.모든 값이 시료를 대표할 수 있도록 GFP 분석, Aflatoxin 결정 및 분자 분석에 동일한 접지 재료를 사용합니다. 최소 세 개의 복제본을 권장하지만 양질의 커널의 가용성에 따라 항상 더 좋습니다. 이 연구에서 옥수수 HI-II 라인의 미성숙 배아는 콜리플라워 모자이크 바이러스로부터 35S 프로모터의 통제하에 Lablab purpureus AILP 유전자를 발현하는 최종 식물 대상 벡터를 포함하는 Agrobacterium tumefaciens EHA101 균주를 사용하여 변형된다.표적 AILP 유전자의 PCR 증폭은 형질전환 옥수수 라인에서만 관찰된 548bp 앰플리턴을 나타냈다. AILP 유전자는 대조군 식물에서 AILP 발현이 관찰되지 않은 반면 형질전환선에서 발현을 보였다. 초기 단계 발아 포자는 20 시간 동안 젊은 형질 전환 옥수수 식물에서 조잡한 잎 추출물에 노출됩니다.형질전환 잎 추출물에 노출된 포자로부터의 전체 길이가 높을수록 음극에 비해 58~80% 감소한다. 사용되는 A.flavus 균주는 실시간으로 곰팡이 성장의 모니터링 및 정량화를 가능하게 하는 GFP 리포터가 포함되어 있습니다. GFP 형광의 현저한 감소는 동종 음성 대조군과 비교하여 형질전환 AILP 커널에서 관찰된다.AILP 라인 4호선과 5호선, 69%, 72%의 성장률이 크게 감소했습니다. 다른 라인은 제어 커널에 비해 35 ~60 % 감소의 감소를 보여줍니다. 아플라톡신 함량에서 62~88%의 감소가 대조군과 비교하여 AILP 커널에서 관찰되었다.4호선은 g당 486ng에서 가장 낮은 아플라톡신 함량을 보이며, 커널에서 g당 640~1498ng 사이의 내용이 포함된 다른 라인들이 그 뒤를 잇는 것으로 나타났습니다. 이 절차에 따라, GFP를 정량화하고 곰팡이 성장으로 불소계를 사용하는 것과 같은 추가 방법을 수행 할 수 있습니다. 면역 기반 상용 키트 또는 HPLC 또는 EPLC는 Aflatoxin 수량을 수행하는 데 사용할 수 있습니다.KSA의 가용성은 Aflatoxin 오염에 대한 저항을 결정하는 빠르고 간단한 수단을 제공합니다. 다른 옥수수 사육 라인의 이 기술을 사용하여 신속하게 평가할 수 있습니다. 커널 스크리닝 분석은 위험하지 않지만, 운영자는 아스퍼길러스 플라부 포자에 노출되지 않도록 자신을 보호해야 하며 적절한 보호 장비를 사용해야 합니다.

Research

JoVE Journal

Environment

Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the &#945;-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L.

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

연구

환경과학

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

높은 처리량 마이크로 분석 실험을 사용하여 워터스, 토양 및 퇴적물에있는 미생물 세포 외 효소 활성의 결정

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Optimize Flue Gas Settings to Promote Microalgae Growth in Photobioreactors via Computer Simulations

컴퓨터 시뮬레이션을 통해 광 바이오 반응기에서 미세 조류의 성장을 촉진하기 위해 연소 가스 설정을 최적화

Flue gas from power plants can promote algal cultivation and reduce greenhouse gas emissions1. Microalgae not only capture solar energy more efficiently ...

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

RNAi-mediated Control of Aflatoxins in Peanut: Method to Analyze Mycotoxin Production and Transgene Expression in the Peanut/Aspergillus Pathosystem

RNAi-mediated Control of Aflatoxins in Peanut: Method to Analyze Mycotoxin Production and Transgene Expression in the Peanut/Aspergillus Pathosystem

땅콩에서 아플라톡신의 RNAi를 매개 제어 : 방법은 땅콩에 곰팡이 독소 생산 및 형질 전환 유전자 발현을 분석 /<em&gt; 아스 페르 길 루스</em&gt; Pathosystem

The Food and Agriculture Organization of the United Nations estimates that 25% of the food crops in the world are contaminated with aflatoxins. That ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

추출 및 토양의 미생물 인지질 지방산의 분석

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

거싯 Thermogradient 표는 토양 프로세스 식물 성장 평가 및 모니터링을위한 토양 온도를 제어하는

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Production and Measurement of Organic Particulate Matter in the Harvard Environmental Chamber

생산 및 하버드 환경 챔버에 유기 미 립 자 물질의 측정

The production and the evolution of atmospheric organic particulate matter (PM) are insufficiently understood for accurate simulations of atmospheric ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

식물 감염 테스트: 스프레이 식물 병원 체 Magnaporthe Grisea 와 상처-중재 접종

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize (Zea mays L.)

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize Zea mays L.

높은 처리량, 처리 파라미터 분석 및 옥수수 (지 시 메이 스 L.) 영양 자질에 대 한 미 프로토콜

Maize is an important grain crop in the United States and worldwide. However, maize grain must be processed prior to human consumption. Furthermore, whole ...