Name: inhibition of aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize expressing the &#945;-amylase inhibitor from lablab purpureus l.
Uploaded: 2019-02-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the Î±-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L. at JoVE.co

Vi takker David Meints, University of Arkansas for hans hjelp i utviklingen og analysere transgene mais under tidlig generasjoner. Dette arbeidet mottok økonomisk støtte av USDA-ARS CRIS prosjektet 6054-42000-025-00D. Omtale av varemerker eller kommersielle produkter i denne artikkelen er utelukkende for å gi informasjon, og innebærer ikke anbefaling eller oppfordring av det oss Department of Agriculture. USDA-ARS' lik sysselsetting mulighet (EEO) mandater likestilling for alle personer og forbyr diskriminering i alle aspekter av byrået personell politikk, praksis og operasjoner.

1. plasmider konstruksjoner og mais transformasjon
<ol><li>PCR forsterke Lablab AILP sett med primerne 5'-TATCTAGAACTAGTGATTACCATGGCTCC-3 "og 5'-ATACTGCAGGATTGCATGCAGAGTAGTACTG-3". PCR betingelsene inkluderer et innledende rødsprit skritt på 98 ° C for 30 s (trinn 1), etterfulgt av rødsprit 98 ° c for 10 s (trinn 2), annealing ved 55 ° C for 30 s (trinn 3), forlengelse ved 72 ° C for 20 s (trinn 4), 31 sykluser av trinn 2 til 4 , og en siste forlengelse trinn ved 72 ° C i 5 min. klone PCR produktet i e...

<ol>
	<li>Ismaiel, A., Papenbrock, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycotoxins:+Producing+fungi+and+mechanisms+of+phytotoxicity.">Mycotoxins: Producing fungi and mechanisms of phytotoxicity.</a> Agriculture. 5 (3), 492-537 (2015).</li><li>Mitchell, N., Bowers, E., Hurburgh, C., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+economic+losses+to+the+USA+corn+industry+from+aflatoxin+contamination.">Potential economic losses to the USA corn industry from aflatoxin contamination.</a> Food Additives &amp; Contaminants: Part A. 33 (3), 540-550 (2016).</li><li>Umesha, S., Manukumar, H. M., Chandrasekhar, B., Shivakumara, P., Shiva Kumar, J., Raghava, S., Avinash, P., Shirin, M., Bharathi, T. R., Rajini, S. B., Nandhini, M., Vinaya Rani, G., Shobha, M., Prakash, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aflatoxins+and+food+pathogens:+Impact+of+biologically+active+aflatoxins+and+their+control+strategies.">Aflatoxins and food pathogens: Impact of biologically active aflatoxins and their control strategies.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. , (2016).</li><li>Brown, R. L., Menkir, A., Chen, Z. Y., Bhatnagar, D., Yu, J., Yao, H., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+aflatoxin-resistant+maize+lines+using+recent+advances+in+technologies+-+a+review.">Breeding aflatoxin-resistant maize lines using recent advances in technologies - a review.</a> Food Additives &amp; Contaminants - Part A Chemistry, Analysis, Control, Exposure &amp; Risk Assessment. 30 (8), 1382-1391 (2013).</li><li>Abbas, H., Accinelli, C., Shier, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+control+of+aflatoxin+contamination+in+U.S.+crops+and+the+use+of+bioplastic+formulations+of+Aspergillus+flavus+biocontrol+strains+to+optimize+application+strategies.">Biological control of aflatoxin contamination in U.S. crops and the use of bioplastic formulations of Aspergillus flavus biocontrol strains to optimize application strategies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65, 7081-7087 (2017).</li><li>Udomkun, P., Wiredu, A. N., Nagle, M., M&#252;ller, J., Vanlauwe, B., Bandyopadhyay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innovative+technologies+to+manage+aflatoxins+in+foods+and+feeds+and+the+profitability+of+application+&#8211;+A+review.">Innovative technologies to manage aflatoxins in foods and feeds and the profitability of application &#8211; A review.</a> Food Control. 76, 127-138 (2017).</li><li>Dohroo, N. P., Bhardwaj, S. S., Shyram, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amylase+and+invertase+activity+as+influenced+by+Pythium+pleroticum+causing+rhizome+rot+of+ginger.">Amylase and invertase activity as influenced by Pythium pleroticum causing rhizome rot of ginger.</a> Plant Disease Research. 2, 106-107 (1987).</li><li>Singh, R., Saxena, V. S., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pectinolytic,+cellulolytic,+amylase+and+protease+production+by+three+isolates+of+Fusarium+solani+variable+in+their+virulence.">Pectinolytic, cellulolytic, amylase and protease production by three isolates of Fusarium solani variable in their virulence.</a> Indian Journal of Mycology and Plant Pathology. 19, 22-29 (1989).</li><li>Fakhoury, A. M., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amy1,+the+&#945;-amylase+gene+of+Aspergillus+flavus:+Involvement+in+aflatoxin+biosynthesis+in+maize+kernels.">Amy1, the &#945;-amylase gene of Aspergillus flavus: Involvement in aflatoxin biosynthesis in maize kernels.</a> Phytopathology. 89 (10), 908-914 (1999).</li><li>Bluhm, B. H., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amylopectin+induces+Fumonisin+B1+production+by+Fusarium+verticillioides+during+colonization+of+maize+kernels.">Amylopectin induces Fumonisin B1 production by Fusarium verticillioides during colonization of maize kernels.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 18 (12), 1333-1339 (2005).</li><li>Gilbert, M. K., Majumdar, R., Rajasekaran, K., Chen, Z. Y., Wei, Q., Sickler, C. M., Lebar, M. D., Cary, J. W., Frame, B. R., Wang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-based+silencing+of+the+a-amylase+(amy1)+gene+in+Aspergillus+flavus+decreases+fungal+growth+and+aflatoxin+production+in+maize+kernels.">RNA interference-based silencing of the a-amylase (amy1) gene in Aspergillus flavus decreases fungal growth and aflatoxin production in maize kernels.</a> Planta. 247 (6), 1465-1473 (2018).</li><li>Chen, Z. Y., Brown, R. L., Russin, J. S., Lax, A. R., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+corn+trypsin+inhibitor+with+antifungal+activity+inhibits+Aspergillus+flavus+&#945;-amylase.">A corn trypsin inhibitor with antifungal activity inhibits Aspergillus flavus &#945;-amylase.</a> Phytopathology. 89 (18944733), 902-907 (1999).</li><li>Fakhoury, A. M., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+growth+of+Aspergillus+flavus+and+fungal+&#945;-amylases+by+a+lectin-like+protein+from+Lablab+purpureus.">Inhibition of growth of Aspergillus flavus and fungal &#945;-amylases by a lectin-like protein from Lablab purpureus.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 14 (8), 955-961 (2001).</li><li>Mirkov, T. E., Wahlstrom, J. M., Hagiwara, K., Finardi-Filho, F., Kjemtrup, S., Chrispeels, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+relationships+among+proteins+in+the+phytohemagglutinin-arcelin-a-amylase+inhibitor+family+of+the+common+bean+and+its+relatives.">Evolutionary relationships among proteins in the phytohemagglutinin-arcelin-a-amylase inhibitor family of the common bean and its relatives.</a> Plant Molecular Biology. 26 (4), 1103-1113 (1994).</li><li>Kim, Y. H., Woloshuk, C. P., Cho, E. H., Bae, J. M., Song, Y. S., Huh, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+functional+expression+of+the+gene+encoding+an+inhibitor+against+Aspergillus+flavus+a-amylase,+a+novel+seed+lectin+from+Lablab+purpureus+(Dolichos+lablab).">Cloning and functional expression of the gene encoding an inhibitor against Aspergillus flavus a-amylase, a novel seed lectin from Lablab purpureus (Dolichos lablab).</a> Plant Cell Reports. 26 (4), 395-405 (2007).</li><li>Frame, B., Main, M., Schick, R., Wang, K., Thorpe, T. A., Yeung, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+22.">Ch. 22.</a> Plant Embryo Culture. 710, 327-341 (2011).</li><li>Rajasekaran, K., Sickler, C. M., Brown, R. L., Cary, J. W., Bhatnagar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+resistance+to+aflatoxin+contamination+in+kernels+of+maize+genotypes+using+a+GFP-expressing+Aspergillus+flavus+strain.">Evaluation of resistance to aflatoxin contamination in kernels of maize genotypes using a GFP-expressing Aspergillus flavus strain.</a> World Mycotoxin Journal. 6 (2), 151-158 (2013).</li><li>Rajasekaran, K., Sayler, R. J., Sickler, C. M., Majumdar, R., Jaynes, J. M., Cary, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Aspergillus+flavus+growth+and+aflatoxin+production+in+transgenic+maize+kernels+expressing+a+tachyplesin-derived+synthetic+peptide,+AGM182.">Control of Aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize kernels expressing a tachyplesin-derived synthetic peptide, AGM182.</a> Plant Science. , 150-156 (2018).</li><li>Shu, X., Livingston, D. P., Franks, R. G., Boston, R. S., Woloshuk, C. P., Payne, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+gene+expression+in+maize+seeds+during+colonization+by+Aspergillus+flavus+and+Fusarium+verticillioides.">Tissue-specific gene expression in maize seeds during colonization by Aspergillus flavus and Fusarium verticillioides.</a> Molecular Plant Pathology. 16 (4), 662-674 (2015).</li><li>Savary, S., Ficke, A., Aubertot, J. -. N., Hollier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crop+losses+due+to+diseases+and+their+implications+for+global+food+production+losses+and+food+security.">Crop losses due to diseases and their implications for global food production losses and food security.</a> Food Security. 4, 519-537 (2012).</li><li>Damalas, C. A., Eleftherohorinos, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pesticide+exposure,+safety+issues,+and+risk+assessment+indicators.">Pesticide exposure, safety issues, and risk assessment indicators.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 8 (5), 1402-1419 (2011).</li><li>Kowalska, A., Walkiewicz, K., Kozie&#322;, P., Muc-Wierzgo&#324;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aflatoxins:+Characterisitcs+and+impact+on+human+health.">Aflatoxins: Characterisitcs and impact on human health.</a> Post&#281;py Higieny i Medycyny Do&#347;wiadczalnej (Online). 71, 315-327 (2017).</li><li>Rajasekaran, K., Cary, J. W., Cotty, P. J., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+GFP-expressing+Aspergillus+flavus+strain+to+study+fungal+invasion,+colonization,+and+resistance+in+cottonseed.">Development of a GFP-expressing Aspergillus flavus strain to study fungal invasion, colonization, and resistance in cottonseed.</a> Mycopathologia. 165 (2), 89-97 (2008).</li><li>Punt, P., Dingemanse, M. A., Kuyvenhoven, A., Soede, R. D., Pouwels, P. H., van den Hondel, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+elements+in+the+promoter+region+of+the+Aspergillus+nidulans+gpdA+gene+encoding+glyceraldehyde-3-phosphate+dehydrogenase.">Functional elements in the promoter region of the Aspergillus nidulans gpdA gene encoding glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.</a> Gene. 93 (1), 101-109 (1990).</li><li>Lee, L. W., Chiou, C. H., Klomparens, K. L., Cary, J. W., Linz, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+aflatoxin+biosynthetic+enzymes+Nor-1,+Ver-1,+and+OmtA+in+time-dependent+fractionated+colonies+of+Aspergillus+parasiticus.">Subcellular localization of aflatoxin biosynthetic enzymes Nor-1, Ver-1, and OmtA in time-dependent fractionated colonies of Aspergillus parasiticus.</a> Archives of Microbiology. 181 (3), 204-214 (2004).</li><li>Bhatnagar, D., Cary, J. W., Ehrlich, K., Yu, J., Cleveland, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+genetics+of+regulation+of+aflatoxin+production+and+Aspergillus+flavus+development.">Understanding the genetics of regulation of aflatoxin production and Aspergillus flavus development.</a> Mycopathologia. 162, 155-166 (2006).</li><li>Williams, W. P., Krakowsky, M. D., Scully, B. T., Brown, R. L., Menkir, A., Warburton, M. L., Windham, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+and+developing+maize+germplasm+with+resistance+to+accumulation+of+aflatoxins.">Identifying and developing maize germplasm with resistance to accumulation of aflatoxins.</a> World Mycotoxin Journal. 8 (2), 193-209 (2015).</li><li>Broekaert, W. F., van Parijs, J., Leyns, F., Joos, H., Peumans, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chitin-binding+lectin+from+stinging+nettle+rhizomes+with+antifungal+properties.">A chitin-binding lectin from stinging nettle rhizomes with antifungal properties.</a> Science. 245 (4922), 1100-1102 (1989).</li><li>Vanparijs, J., Broekaert, W. F., Goldstein, I. J., Peumans, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hevein-an+antifungal+protein+from+rubber-tree+(Hevea+brasiliensis)+latex.">Hevein-an antifungal protein from rubber-tree (Hevea brasiliensis) latex.</a> Planta. 183, 258-264 (1991).</li><li>Gozia, O., Ciopraga, J., Bentia, T., Lungu, M., Zamfirescu, I., Tudor, R., Roseanu, A., Nitu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+properties+of+lectin+and+new+chitinases+from+potato+tubers.">Antifungal properties of lectin and new chitinases from potato tubers.</a> Comptes Rendus de l'Academie des Sciences - Series III. 316 (8), 788-792 (1993).</li><li>Wisessing, A., Choowongkomon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amylase+inhibitors+in+plants:+Structures,+Functions+and+Applications.">Amylase inhibitors in plants: Structures, Functions and Applications.</a> Functional Plant Science and Biotechnology. 6 (1), 31-41 (2012).</li><li>Tyagi, B., Trivedi, N., Dubey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a-amylase+inhibitor:+A+compelling+plant+defense+mechanism+against+insect/pests.">a-amylase inhibitor: A compelling plant defense mechanism against insect/pests.</a> Environment &amp; Ecology. 32 (3), 995-999 (2014).</li><li>Powers, J. R., Culbertson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effect+of+bean+amylase+inhibitor+on+insect+amylases.">In vitro effect of bean amylase inhibitor on insect amylases.</a> Journal of Food Protection. 45, 655-657 (1982).</li><li>Gatehouse, A. M. R., Fenton, K. A., Jepson, I., Pavey, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+a-amylase+inhibitors+on+insect+storage+pests:+Inhibition+of+a-amylase+in+vitro+and+effects+on+development+in+vivo.">The effects of a-amylase inhibitors on insect storage pests: Inhibition of a-amylase in vitro and effects on development in vivo.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 37, 727-734 (1986).</li><li>Blanco-Labra, A., Chagolla-Lopez, A., Martinez-Gallardo, N., Valdes-Rodriguez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Further+characterization+of+the+12-kDa+protease+a-amylase+inhibitor+present+in+maize+seeds.">Further characterization of the 12-kDa protease a-amylase inhibitor present in maize seeds.</a> Journal of Food Biochemistry. 19, 27-41 (1995).</li><li>Abdollahi, A., Buchanan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aflatoxin+biosynthesis:+Induction+of+aflatoxin+production+by+various+carbohydrates.">Regulation of aflatoxin biosynthesis: Induction of aflatoxin production by various carbohydrates.</a> Journal of Food Science. 46, 633-635 (1981).</li><li>Liu, J., Sun, L., Zhang, N., Zhang, J., Guo, J., Li, C., Rajput, S. A., Qi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+nutrients+in+substrates+of+different+grains+on+aflatoxin+B1+production+by+Aspergillus+flavus.">Effects of nutrients in substrates of different grains on aflatoxin B1 production by Aspergillus flavus.</a> BioMed Research International. 2016, (2016).</li><li>Uppala, S. S., Bowen, K. L., Woods, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-harvest+aflatoxin+contamination+and+soluble+sugars+of+peanut.">Pre-harvest aflatoxin contamination and soluble sugars of peanut.</a> Peanut Science. 40 (1), 40-51 (2013).</li></ol>

Gi tap i jordbruksprodukter patogener og skadedyr er et globalt problem20. Foreløpig anvendelse av syntetiske soppmidler og plantevernmidler er dominerende kontroll plante-patogener og skadedyr, men gjenværende giftigheten av disse biokjemikalier i mat og feed kan utgjøre alvorlig trussel mot mennesker og dyr helse21. Den økonomiske betydningen av mais mat og fôr beskjære, reduksjon eller eliminasjon av aflatoxin forurensning er av største betydning...

Mycotoxin forurensning av sopp slektene, Aspergillus, Fusarium, penicillinog Alternaria er et stort problem av næringen og mate avlinger vokst verdensomspennende1,2,3. Blant disse phytopathogenic sopp har Aspergillus størst ugunstig innvirkning på beskjære verdi og dyrs og helse. Aspergillus flavus (A. flavus) er en opportunistisk anlegget patogen som infiserer olje rike avlinger som mais, bomullsfrøolje og peanut og produserer potente kreftfremkallende stoffer, aflatoxins, samt mange giftige sekundære metabolitter (SMs). Mais er et viktig mat og mate avling dyrkes over hele verden og er svært utsatt for forurensning av A. flavus. Den økonomiske virkningen av aflatoxin forurensning på taper og redusert verdien i mais kan være så mye som $686.6 millioner/år i USA2 anslåtte endringer i globale klima, virkningen av aflatoxins kan resultere i større økonomiske tap i mais med estimater så høyt som $1.68 milliarder i året i nær fremtid2. Gitt de negative økonomiske og helsemessige effektene av aflatoxins hos mennesker og husdyr, kan før innhøsting aflatoxin kontroll i mais være den mest effektive måten å hindre aflatoxin forurensning i mat og fôr produkter.
Den store før innhøsting kontroll tilnærmingen for aflatoxin motstand i mais som har vært brukt mye i de siste tiårene er primært gjennom formering, som krever en betydelig mengde tid4. Nylig har biocontrol hatt suksess i aflatoxin reduksjon i stor skala feltet programmer5,6. Foruten biocontrol, har bruken av banebrytende molekylære verktøy som 'Host indusert Gene Silencing' (HIGS) gjennom RNAi og transgene uttrykk for motstand-assosiert proteiner hatt suksess i reduksjon av A. flavus vekst og aflatoxin produksjon i liten skala laboratory og felt studier. Disse metodene er optimaliseres i tillegg til å identifisere nye potensielle A. flavus genet mål for fremtidige manipulasjon.
Foruten gener som er direkte involvert i mycotoxin produksjon som potensielle mål av transgene kontroll strategier, har sopp amylases vist seg å spille en avgjørende rolle i å opprettholde vellykket patogenese og mycotoxin produksjon i tidlige fasen verten anlegget infeksjon. Noen eksempler er Pythium pleroticum (kausal agent av ingefær rhizome råte), Fusarium solani (kausal agent av blomkål wilt), der positive sammenhenger mellom virusets og α-amylase uttrykk og aktivitet ble observert 7,8. Hemming av α-amylase aktivitet enten gjennom genet knockout eller pusse tilnærminger påvirker negativt fungal vekst og gift produksjon. En α-amylase knockout mutant av A. flavus klarte ikke å produsere aflatoxins når dyrket på stivelse substrat eller degermed mais kjerner9. Tilsvarende i Fusarium verticillioides mislyktes en α-amylase knockout belastning å produsere fumonisin B1 (mycotoxin) under infeksjon mais kjerner10. En nyere studie viste Gilbert et al. (2018) at en RNAi-baserte slå ned A. flavus α-amylase uttrykk, via HIGS betydelig redusert A. flavus vekst og aflatoxin produksjon under mais kjernen infeksjon11 .
Bestemt hemmere α-amylase aktivitet har også produsert lignende resultater som hentes fra ned-regulering av α-amylase uttrykk. Den første rapporten om rollen som en α-amylase hemmer i fungal motstand kom fra isolering og karakterisering av en 14-kDa trypsin-α-amylase hemmer fra mais linjer motstandsdyktig mot A. flavus12. Ytterligere screening av flere hundre av plantearter av Fakhoury og Woloshuk førte til identifisering av en 36-kDa α-amylase inhibitor som protein (AILP) fra frø av Jacinto bønner, Lablab purpureus L.13. Peptid sekvensen av AILP lignet lectins Lektiner-arcelin-α-amylase hemmer gultrefamilien rapportert felles bønne14,15. Renset AILP viser ikke noen hemmende aktivitet mot pattedyr trypsin og videre i vitro karakterisering viste betydelig hemming av A. flavus vekst og conidial spiring13. Rapporter presentert her tydelig viser α-amylase kan fungere som et mål i kontroll tilnærminger til begrense patogener eller skadedyr som avhenger av stivelse mobilisering (gjennom α-amylase aktivitet) og oppkjøpet av løselig sukker som energikilde under deres patogene interaksjon med verten planter.
Alpha-amylase er kjent for å være kritisk i A. flavus virusets9,10,11, og betydningen av AILP som en potent anti-A. flavus agent (α-amylase hemming/antigrowth)13, Vi generert transgene mais planter uttrykke Lablab AILP gen under konstituerende CaMV 35S arrangøren. Målet var å undersøke om heterologous uttrykk for denne α-amylase hemmer i mais er effektiv mot A. flavus patogenese og aflatoxin produksjon under mais kjernen infeksjon. Våre resultater viser at transgene mais kjerner uttrykke AILP betydelig redusert A. flavus vekst og aflatoxin produksjon under kjernen infeksjon.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Caisson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amazing Marine Goop</td>
			<td>Eclectic Products</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C1000 Touch CFX96 Real-Time System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Falcon Tissue Culture Dishes, 60 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf&#160;5424 Microcentrifuge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flask with stopper, 50 mL</td>
			<td>Ace Glass</td>
			<td>6999-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroQuant Afla</td>
			<td>Romer Labs</td>
			<td>COKFA1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluted Qualitative Filter Paper Circles, 15 cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-790-14E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Force Air Oven</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FQ-Reader</td>
			<td>Romer Labs</td>
			<td>EQFFM3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geno/Grinder 2010</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>SP 2010-115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Innova 44 Incubator Shaker</td>
			<td>Brunswick Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>liquid Nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Form Griffin Beakers, 100 mL</td>
			<td>DKW Life Sciences</td>
			<td>14000-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene Chloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nexttec 1-step DNA Isolation Kit for Plants</td>
			<td>Nexttec</td>
			<td>47N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse E600 microscope with Nikon DS-Qi1 camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon SMZ25 stereomicroscope with C-HGFI Episcopic Illuminator and Andor Zyla 4.2 sCMOS camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Square BioAssay Dishes</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>240835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phire Plant Direct PCR Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>F130WH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Vials, 15 ml</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>PCRV 15-100-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potato Dextrose Broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snap Cap, 22 mm</td>
			<td>DKW Life Sciences</td>
			<td>242612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate dibasic heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrum Plant Total RNA Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>STRN50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Grinding Balls, 3/8&#39;&#39;</td>
			<td>OPS Diagnostics</td>
			<td>GBSS 375-1000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir Plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy 4 Fluorometer</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T100 Thermal Cycler</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V8 juice</td>
			<td>Campbell&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman Qualitative Grade Plain Sheets, Grade 3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-820P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wrist-Action Shaker</td>
			<td>Burrell Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inhibition of aspergillus flavus growth and aflatoxin production in transgenic maize expressing the &#945;-amylase inhibitor from lablab purpureus l.

Aflatoxin forurensning i mat og fôret avlingene er en stor utfordring over hele verden. Aflatoxins, produsert av soppen Aspergillus flavus (A. flavus) er potente kreftfremkallende som betydelig reduserer beskjære verdien i mais og andre olje rike avlinger som peanut foruten posing alvorlig trussel mot mennesker og dyr sunnhet. Ulike tilnærminger, inkludert tradisjonelle avl, transgene uttrykket av motstanden forbundet proteiner og RNA-interferens (RNAi)-basert vert-indusert genet stanse kritiske A. flavus genet mål, evalueres for å øke aflatoxin motstand i utsatt avlinger. Tidligere studier har vist en viktig rolle for α-amylase i A. flavus patogenesen og aflatoxin, antyder dette genet/enzymet er et mulig mål å redusere både A. flavus vekst og aflatoxin produksjon. I denne forbindelse, ble denne studien gjennomført for å vurdere heterologous uttrykk (under kontroll konstituerende CaMV 35S ) for en Lablab purpureus L. α-amylase inhibitor som protein (AILP) i mais mot A. flavus. AILP er en 36-kDa protein, som er en konkurransedyktig hemmer av A. flavus α-amylase enzym og tilhører Lektiner-arcelin-α-amylase hemmer protein familien felles bønne. In vitro studier før arbeidet hadde vist AILP rolle i Hemming av A. flavus α-amylase aktivitet og soppvekst. Soppvekst og aflatoxin produksjon i eldre kjerner ble kartlagt i sanntid ved hjelp av en GFP-uttrykke A. flavus belastning. Denne kjernen screening analysen (KSA) er svært enkelt å sette opp og gir pålitelig og reproduserbar infeksjon og omfanget av spredning som kan kvantifiseres for evaluering av germplasm og transgene linjer. Fluorescens fra GFP stammen er nært korrelert til sopp vekst, og dermed er det godt korrelert til aflatoxin verdier.  Målet med arbeidet var å implementere denne forkunnskaper i en kommersielt viktig avling som mais å øke aflatoxin motstand. Våre resultater viser en 35%-72% reduksjon i A. flavus vekst i AILP-uttrykke transgene mais kjerner som igjen oversettes til 62%-88% reduksjon i aflatoxin nivåer.

Mais transformasjon og molekylære screening av transgene planter
Umodne embryo mais Hi-II linjer ble forvandlet ved hjelp av Agrobacterium tumefaciens EHA101 belastning som inneholder siste anlegget destinasjon vektoren uttrykke Lablab purpureus AILP genet under kontroll av CaMV 35S arrangøren. Fem uavhengig transformert mais linjer var avansert T6 generasjon for studier. Tr...

Watch this Scientific Journal Video about Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the Î±-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L. at JoVE.co

Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the &#945;-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L.

Her presenterer vi en protokoll for å analysere Aspergillus flavus vekst og aflatoxin produksjon i mais kjerner uttrykke en soppdrepende protein.  Bruke en GFP-uttrykke A. flavus belastning overvåket vi infeksjon og spredning av soppen i eldre kjerner i sanntid. Analysen er rask, pålitelig og reproduserbar.

Hemming av Aspergillus flavus vekst og Aflatoxin produksjon i transgene mais uttrykke den α-amylase Inhibitor fra Lablab purpureus L.

Aflatoxin contamination in food and feed crops is a major challenge worldwide. Aflatoxins, produced by the fungus Aspergillus flavus (A. flavus) are ...

Her presenterer vi en enkel kjernescreeningsanalyse for å analysere Aspergillus flavus vekst og Aflatoxin produksjon i maiskjerner som uttrykker et antifungalt protein. Ved hjelp av et grønt fluorescerende protein som uttrykker Aspergillus flavus belastning, overvåker vi infeksjonen og spredningen av soppen i modne kjerner i sanntid. Denne enkle analysen gir en pålitelig måte å evaluere maiskjernens evne til å motstå Aspergillus flavus infeksjon og Aflatoxin produksjon.Resultater fra denne laboratorieanalysen utført under kontrollerte forhold på modne kjerner korrelerer godt med resultater fra infeksjon under feltforhold. Demonstrere prosedyren vil være Dr.Rajtilak Majumdar, en postdoc fra vårt laboratorium, sammen med Christine Sickler og David Ambrosio, biologiske vitenskap teknikere også fra vårt laboratorium. Til å begynne med lim 20 to mm snap caps i en petriskål for å lage KSA caps.La limet tørke i 48 timer før du bruker hettene. I et biologisk sikkerhetsskap spray et firkantet bioanalysebrett med 70% etanol i vann. La brettet lufttørke.Tilsett sterilt kromatografipapir i det tørre brettet. Spray ni av KSA caps med 70% etanol og la dem lufttørke. Plasser deretter hettene på bioanalysebrettet.For hver transgene maislinje som testes, velger du 20 uskadede kjerner og plasserer dem i et 50 ml sentrifugerør. Ved hjelp av et stereomikroskop på bordplaten velger du bare uskadede kjerner for analysen. Skadede kjerner er mer utsatt for Aspergillus angrep og produsere mer Aflatoxin, og dermed skjev resultatene og ikke representerer de sanne antifungale eller antimikrobielle trekk av variasjonen.Legg til 70% etanol i hvert rør. La kjernene sterilisere i fire minutter mens noen ganger forsiktig rister dem. Etter dette forsiktig hell av etanol og skyll forsiktig kjernene i sterilt deionisert vann tre ganger.Få en seks dagers kultur av Aspergillus flavus flekk 70 uttrykker GFP dyrket på V8 medium. Tilsett 20 ml sterilt 0,02% Triton X-100 i deionisert vann. Og bruk en steril løkke for å skrape av sporene.Pipette av inokulen og overfør den til et 300 ml sterilt beger. Forbered en femdobling med 0,02% Triton X-100 og bruk et hemocytometer for å utføre en spore telling. Fortynn igjen om nødvendig for å oppnå 100 ml med en konsentrasjon på fire millioner sporer per ml.Hell av inokulumet i et tomt beger. Legg kjernene i et sterilt 300 ml beger med rørestang og rør i tre minutter. Ved hjelp av tang overføre kjernene til bioassay parabolen, sørg for å bare plassere en kjerne i hver cap.Tilsett 30 ml avionisert vann til bunnen av hvert bioanalysebrett. Og inkubere ved 31 grader Celsius i syv dager. Etter syv dager med inokulasjon med A.flavus, ta bilder av fire kjerner som ble utpekt for mikroskopisk analyse og fotografering.Bruk deretter et mykt vev og deionisert vann for å rense utsiden av kjerner. Utfør langsgående deler av kjerner og ta umiddelbart bilder under det fluorescerende mikroskopet. For å forberede kjernene for analyse, rengjør utsiden av de gjenværende kjernene med bløtvev og deionisert vann.Plasser fire kjerner, som utgjør en rep, i en 15 ml skrue cap polykarbonat hetteglass som inneholder to rustfritt stål baller. Umiddelbart fryse hetteglassene i flytende nitrogen og lagre på 80 grader Celsius til klar til å fortsette med videre behandling og analyse. Når du er klar, fjern kjernene fra fryseren og bruk en homogenisator til å male dem ved 1500 o/min i tre minutter.Bruk de samme grunnmaterialene for GFP-analyse, aflatoxinbestemmelse og molekylær analyse, slik at alle verdier er representative for prøvene. Mens minst tre replikere anbefales, er mer alltid bedre avhengig av tilgjengeligheten av kjerner av god kvalitet. I denne studien forvandles umodne embryoer av mais HI-II-linjer ved hjelp av Agrobacterium tumefaciens EHA101-stamme som inneholder den endelige plantedestinasjonsvektoren som uttrykker Lablab purpureus AILP-genet under kontroll av 35S-promotoren fra blomkålmosaikkviruset.PCR-forsterkning av målet AILP genet viste en 548 bp amplicon observert bare i transgene mais linjer. AILP-genet viste uttrykk i de transgene linjene, mens det ikke ble observert AILP-uttrykk i kontrollanleggene. Tidlig stadium sspiring sporer er utsatt for rå blad ekstrakter fra unge transgene mais planter i 20 timer.Høy full lengde fra sporer utsatt for transgene bladekstrakter viser en 58 til 80% reduksjon sammenlignet med den negative kontrollen. A.flavus-stammen som brukes inneholder en GFP-reporter som muliggjør overvåking og kvantifisering av soppvekst i sanntid. Signifikant reduksjon i GFP-fluorescens observeres i transgene AILP-kjerner sammenlignet med isogen negativ kontroll.En betydelig reduksjon er sett i soppvekst for AILP linjer fire og fem, 69% og 72%. De andre linjene viser en reduksjon på 35 til 60% reduksjon i forhold til kontrollkjernene. En reduksjon på 62 til 88% i Aflatoxin-innhold ble observert i AILP-kjernene sammenlignet med kontrollen.Linje fire er sett å ha det laveste Aflatoxin-innholdet på 486 ng per g, etterfulgt av andre linjer som var alt mellom 640 og 1498 ng per g i kjernene. Etter denne prosedyren kan flere metoder utføres som å bruke et fluorometer for å kvantifisere GFP og som soppvekst. Immunobaserte kommersielle sett eller HPLC eller EPLC kan brukes til å utføre Aflatoxin-kvantitet.Tilgjengeligheten av KSA gir en rask og enkel måte å bestemme motstand mot Aflatoxin forurensning. De forskjellige maisavlslinjene kan vurderes raskt ved hjelp av denne teknikken. Selv om kjernescreeningsanalysen ikke er farlig, bør operatøren beskytte seg mot eksponering for Aspergillus flavus sporer, bruk riktig verneutstyr.

Research

JoVE Journal

Environment

Inhibition of Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production in Transgenic Maize Expressing the &#945;-amylase Inhibitor from Lablab purpureus L.

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Masseproduksjon av genmodifiserte Aedes aegypti for feltutgivelser i Brasil

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Fastsettelse av Microbial Ekstracellulær enzymaktivitet i Waters, jord og sedimenter ved hjelp av høy gjennomstrømming for mikro Analyser

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Optimize Flue Gas Settings to Promote Microalgae Growth in Photobioreactors via Computer Simulations

Optimalisere Røykgass Innstillinger for å fremme Mikroalger Vekst i fotobioreaktorer via datasimulering

Flue gas from power plants can promote algal cultivation and reduce greenhouse gas emissions1. Microalgae not only capture solar energy more efficiently ...

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

RNAi-mediated Control of Aflatoxins in Peanut: Method to Analyze Mycotoxin Production and Transgene Expression in the Peanut/Aspergillus Pathosystem

RNAi-mediated Control of Aflatoxins in Peanut: Method to Analyze Mycotoxin Production and Transgene Expression in the Peanut/Aspergillus Pathosystem

RNAi-mediert Kontroll av Aflatoksiner i Peanut: Metode for å analysere mykotoksin Produksjon og transgene uttrykk i Peanut /<em&gt; Aspergillus</em&gt; Pathosystem

The Food and Agriculture Organization of the United Nations estimates that 25% of the food crops in the world are contaminated with aflatoxins. That ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Utvinning og analyse av Microbial fosfolipid fettsyrer i jordsmonn

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

En folde Thermogradient Table å kontrollere jordtemperaturer for Vurderer Plantevekst og overvåking Jord Prosesser

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Production and Measurement of Organic Particulate Matter in the Harvard Environmental Chamber

Produksjon og måling av organiske partikler i Harvard miljømessige kammeret

The production and the evolution of atmospheric organic particulate matter (PM) are insufficiently understood for accurate simulations of atmospheric ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Anlegget infeksjon testen: Spray og såret-mediert Inoculation med anlegget patogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize (Zea mays L.)

High-throughput, Microscale Protocol for the Analysis of Processing Parameters and Nutritional Qualities in Maize Zea mays L.

Høy gjennomstrømming, Mikroskala protokollen for analyse av behandling parametere og ernæringsmessige egenskaper i mais (Zea mays L.)

Maize is an important grain crop in the United States and worldwide. However, maize grain must be processed prior to human consumption. Furthermore, whole ...