Name: combined nucleotide and protein extractions in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2019-03-17T14:00:00
Duration: 10 min 37 s
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L.R.L. NIH/NIA (R00 AG042494 और R01 AG051810) से अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था, उंर बढ़ने के जैविक तंत्र में अनुसंधान के लिए एक ग्लेन फाउंडेशन चिकित्सा अनुसंधान पुरस्कार के लिए और अमेरिकी फेडरेशन से बुढ़ापे अनुसंधान के लिए एक कनिष्ठ संकाय अनुदान । लेखक इस पांडुलिपि के लेखन में अपनी उपयोगी प्रतिक्रिया के लिए अनीता कुमार और शि क्तान वोंग का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं ।

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	<li>Rotroff, D. M., Motsinger-Reif, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embracing+Integrative+Multiomics+Approaches.">Embracing Integrative Multiomics Approaches.</a> International Journal of Genomics. 2016, 1715985 (2016).</li><li>Chen, R., Snyder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promise+of+personalized+omics+to+precision+medicine.">Promise of personalized omics to precision medicine.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: System Biology and Medicine. 5 (1), 73-82 (2013).</li><li>Anderson, L., Seilhamer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+selected+mRNA+and+protein+abundances+in+human+liver.">A comparison of selected mRNA and protein abundances in human liver.</a> Electrophoresis. 18 (3-4), 533-537 (1997).</li><li>Harvald, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-omics+Analyses+of+Starvation+Responses+Reveal+a+Central+Role+for+Lipoprotein+Metabolism+in+Acute+Starvation+Survival+in+C.+elegans.">Multi-omics Analyses of Starvation Responses Reveal a Central Role for Lipoprotein Metabolism in Acute Starvation Survival in C. elegans.</a> Cell Systems. 5 (1), (2017).</li><li>Griffin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+profiling+of+gene+expression+at+the+transcriptome+and+proteome+levels+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Complementary profiling of gene expression at the transcriptome and proteome levels in Saccharomyces cerevisiae.</a> Molecular and Cell Proteomics. 1 (4), 323-333 (2002).</li><li>Greenbaum, D., Colangelo, C., Williams, K., Gerstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+protein+abundance+and+mRNA+expression+levels+on+a+genomic+scale.">Comparing protein abundance and mRNA expression levels on a genomic scale.</a> Genome Biology. 4 (9), 117 (2003).</li><li>Lapierre, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TFEB+orthologue+HLH-30+regulates+autophagy+and+modulates+longevity+in+Caenorhabditis+elegans.">The TFEB orthologue HLH-30 regulates autophagy and modulates longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Communications. 4, 2267 (2013).</li><li>Doherty, C. J., Kay, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+control+of+global+gene+expression+patterns.">Circadian control of global gene expression patterns.</a> Annual Reviews Genetics. 44, 419-444 (2010).</li><li>Goya, M. E., Romanowski, A., Caldart, C. S., Benard, C. Y., Golombek, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+identified+in+Caenorhabditis+elegans+by+in+vivo+long-term+monitoring+of+a+bioluminescent+reporter.">Circadian rhythms identified in Caenorhabditis elegans by in vivo long-term monitoring of a bioluminescent reporter.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 113 (48), E7837-E7845 (2016).</li><li>Dalvin, L. A., Fautsch, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Circadian+Rhythm+Gene+Expression+With+Reference+to+Diurnal+Pattern+of+Intraocular+Pressure+in+Mice.">Analysis of Circadian Rhythm Gene Expression With Reference to Diurnal Pattern of Intraocular Pressure in Mice.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (4), 2657-2663 (2015).</li><li>Narayanan, A., Jacobson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+studies+of+protein+regulation+by+post-translational+phosphorylation.">Computational studies of protein regulation by post-translational phosphorylation.</a> Current Opinion in Structural Biology. 19 (2), 156-163 (2009).</li><li>Swatek, K. N., Komander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ubiquitin+modifications.">Ubiquitin modifications.</a> Cell Research. 26 (4), 399-422 (2016).</li><li>Cech, T. R., Steitz, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+noncoding+RNA+revolution-trashing+old+rules+to+forge+new+ones.">The noncoding RNA revolution-trashing old rules to forge new ones.</a> Cell. 157 (1), 77-94 (2014).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Analytical Biochemistry. 162 (1), 156-159 (1987).</li><li>Triant, D. A., Whitehead, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Extraction+of+High-Quality+RNA+and+DNA+from+Small+Tissue+Samples.">Simultaneous Extraction of High-Quality RNA and DNA from Small Tissue Samples.</a> Journal of Heredity. 100 (2), 246-250 (2009).</li><li>Liu, X., Harada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Isolation+from+Mammalian+Samples.">RNA Isolation from Mammalian Samples.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 103 (1), 11-14 (2013).</li><li>Hummon, A. B., Lim, S. R., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+solubilization+of+proteins+after+TRIzol+extraction+of+RNA+and+DNA+from+patient+material+following+prolonged+storage.">Isolation and solubilization of proteins after TRIzol extraction of RNA and DNA from patient material following prolonged storage.</a> Biotechniques. 42 (4), 467-470 (2007).</li><li>Kopec, A. M., Rivera, P. D., Lacagnina, M. J., Hanamsagar, R., Bilbo, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+solubilization+of+TRIzol-precipitated+protein+permits+Western+blotting+analysis+to+maximize+data+available+from+brain+tissue.">Optimized solubilization of TRIzol-precipitated protein permits Western blotting analysis to maximize data available from brain tissue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 280, 64-76 (2017).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li><li>Hoogewijs, D., Houthoofd, K., Matthijssens, F., Vandesompele, J., Vanfleteren, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+and+validation+of+a+set+of+reliable+reference+genes+for+quantitative+sod+gene+expression+analysis+in+C.+elegans.">Selection and validation of a set of reliable reference genes for quantitative sod gene expression analysis in C. elegans.</a> BMC Molecular Biology. 9 (1), 9 (2008).</li><li>Mahmood, T., Yang, P. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Western+blot:+technique,+theory,+and+trouble+shooting.">Western blot: technique, theory, and trouble shooting.</a> North American Journal of Medical Sciences. 4 (9), 429-434 (2012).</li><li>Peach, M., Marsh, N., MacPhee, D. J., Kurien, B. T., Scofield, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+solubilization:+Attend+to+the+choice+of+lysis+buffer.">Protein solubilization: Attend to the choice of lysis buffer.</a> Protein Electrophoresis: Methods and Protocols. , 37-47 (2012).</li><li>Lakowski, B., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+caloric+restriction+in+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of caloric restriction in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 95 (22), 13091-13096 (1998).</li><li>Pan, K. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+mRNA+translation+extends+lifespan+in+Caenorhabditis+elegans.">Inhibition of mRNA translation extends lifespan in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 6 (1), 111-119 (2007).</li><li>Gaudet, P., Livstone, M. S., Lewis, S. E., Thomas, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylogenetic-based+propagation+of+functional+annotations+within+the+Gene+Ontology+consortium.">Phylogenetic-based propagation of functional annotations within the Gene Ontology consortium.</a> Briefings in Bioinformatics. 12 (5), 449-462 (2011).</li><li>Broeks, A., Gerrard, B., Allikmets, R., Dean, M., Plasterk, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologues+of+the+human+multidrug+resistance+genes+MRP+and+MDR+contribute+to+heavy+metal+resistance+in+the+soil+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Homologues of the human multidrug resistance genes MRP and MDR contribute to heavy metal resistance in the soil nematode Caenorhabditis elegans.</a> The EMBO Journal. 15 (22), 6132-6143 (1996).</li><li>Hadwiger, G., Dour, S., Arur, S., Fox, P., Nonet, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Monoclonal+Antibody+Toolkit+for+C.+elegans.">A Monoclonal Antibody Toolkit for C. elegans.</a> PLoS One. 5 (4), e10161 (2010).</li><li>Kostich, M., Fire, A., Fambrough, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+molecular-genetic+characterization+of+a+LAMP/CD68-like+protein+from+Caenorhabditis+elegans.">Identification and molecular-genetic characterization of a LAMP/CD68-like protein from Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Cell Science. 113 (14), 2595 (2000).</li><li>Firestein, B. L., Rongo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLG-1+is+a+MAGUK+similar+to+SAP97+and+is+required+for+adherens+junction+formation.">DLG-1 is a MAGUK similar to SAP97 and is required for adherens junction formation.</a> Molecular Biology of the Cell. 12 (11), 3465-3475 (2001).</li><li>Heschl, M. F., Baillie, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+hsp70+multigene+family+of+Caenorhabditis+elegans.">Characterization of the hsp70 multigene family of Caenorhabditis elegans.</a> DNA. 8 (4), 233-243 (1989).</li><li>Yoneda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartment-specific+perturbation+of+protein+handling+activates+genes+encoding+mitochondrial+chaperones.">Compartment-specific perturbation of protein handling activates genes encoding mitochondrial chaperones.</a> Journal of Cell Science. 117 (18), 4055 (2004).</li><li>Takahashi, M., Iwasaki, H., Inoue, H., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+Genetic+Analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+26S+Proteasome+Subunits+by+RNA+Interference.">Reverse Genetic Analysis of the Caenorhabditis elegans 26S Proteasome Subunits by RNA Interference.</a> Biological Chemistry. 383, 1263 (2002).</li><li>Le Bot, N., Tsai, M. C., Andrews, R. K., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAC-1,+a+regulator+of+microtubule+length+in+the+C.+elegans+embryo.">TAC-1, a regulator of microtubule length in the C. elegans embryo.</a> Current Biology. 13 (17), 1499-1505 (2003).</li><li>McQuary, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+S6K+Mutants+Require+a+Creatine-Kinase-like+Effector+for+Lifespan+Extension.">C. elegans S6K Mutants Require a Creatine-Kinase-like Effector for Lifespan Extension.</a> Cell Reports. 14 (9), 2059-2067 (2016).</li><li>Larance, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Proteomics+Analysis+of+the+Response+to+Starvation+in+C.+elegans+.">Global Proteomics Analysis of the Response to Starvation in C. elegans .</a> Molecular and Cell Proteomics. 14 (7), 1989-2001 (2015).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+energy+metabolism+contributes+to+the+extended+life+span+of+calorie-restricted+Caenorhabditis+elegans.">Enhanced energy metabolism contributes to the extended life span of calorie-restricted Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 287 (37), 31414-31426 (2012).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

ऐसे डीएनए, आरएनए, और प्रोटीन के रूप में biomolecule आइसोलेशंस के लिए तरीकों, अक्सर तकनीकी ओवरलैप या संयोजन के बिना अनुकूलित कर रहे हैं । यह विशेष रूप से हानिकारक है जब नमूनों को प्राप्त करने के लिए मुश्किल है, जो अलग समय पर एक ही शर्तों के तहत फसल के नमूनों को जंम दे सकता है । सेलुलर रास्ते पर निर्भर करता है, विभिंन समय पर एकत्र प्रतिकृति भिंनता उत्पंन कर सकते हैं । इस पांडुलिपि एक प्रक्रिया के लिए समवर्ती अलगाव और कीड़े का एक ही नमूना से प्रत्येक biomolecule के शोधन को सक्षम करने के द्वारा इस बाधा दरकिनार, अलग अलगाव तकनीकों द्वारा शुरू की विविधताओं को कम करने, नमूना फसल के समय, प्रदान करता है या असमान संचयन । इन चर को नियंत्रित न केवल समय और संसाधनों की बचत होती है, लेकिन यह भी reproducibility की सुविधा । यहां, हम एक मिश्रित दृष्टिकोण है कि rna और प्रोटीन की गुणवत्ता समझौता से बचा जाता है, हालांकि डीएनए के साथ चर परिणामों के साथ प्रदर्शन । तैयारी आगे डीएनए सफाई प्रक्रियाओं का उपयोग कर अनुकूलित किया जा सकता है । हम सूत्रकृमि C. एलिगेंस और HeLa कोशिकाओं से सामग्री का उपयोग कर दृष्टिकोण का प्रदर्शन किया ।
पिछला काम N2 wt पशुओं के transcriptome और proteome की खोज और खाओ-2 और rsks-1 ंयूटेंट तंत्र है कि उंर4,३४,३५ का विस्तार सहित विभिंन मार्ग, में अंतर्दृष्टि की पेशकश की है ,३६. उंर के विस्तार में गरमी प्रतिबंध के तंत्र की जांच करने के प्रयास में, एक स्थिर आइसोटोप सेल संस्कृति (SILAC) विश्लेषण में अमीनो एसिड के साथ लेबलिंग ने पाया कि खाओ-2 कीड़े वैश्विक प्रोटीन संश्लेषण का एक समग्र downregulation है ३६. यहाँ प्रस्तुत किया गया डाटा इस खोज के अनुरूप है, यहां तक कि समान लक्ष्यों का एमआरएनए स्तर बहुत बढ़ जाता है. एक अन्य समूह S6K-mediated लंबी उंर के effectors की पहचान करने के उद्देश्य से और, इस प्रकार, rsks के एक proteomic स्क्रीन-1 कीड़े३४प्रदर्शन किया । वर्तमान अध्ययन के साथ पाया RNAseq डेटा से, हम कम से तीन जीन है कि इस स्क्रीन से पहचाना प्रोटीन के साथ पुष्टि की पहचान; सीपीए और न्यूरोलिगिन (F07C 4.12) के MRP-1 और homologs के रूप में की खोज की जा रही है अलग से rsks-1 कीड़े में व्यक्त के रूप में Wt N2३४की तुलना में ।
इस विधि का उपयोग कर जनरेट किया गया डेटा पिछले multiomic जांच के साथ संगत है । प्रत्येक नमूने में प्रोटीन के स्तर की भविष्यवाणी करने के लिए नौ लक्ष्यों का एमआरएनए स्तर इस्तेमाल किया गया था । इन लक्ष्यों में से कई ने एमआरएनए स्तरों पर आधारित प्रोटीन के स्तर का पूर्वानुमान लगाया । फिर भी, एमआरएनए और प्रोटीन के स्तर के बीच उल्लेखनीय विसंगतियां थीं । महत्वपूर्ण बात, प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत वैज्ञानिकों आत्मविश्वास से मूल्यांकन करने के लिए और एक ही नमूना से mRNA और प्रोटीन इकट्ठा करके intersample परिवर्तनशीलता को हटाने के द्वारा इन मतभेदों की व्याख्या करने की अनुमति देता है । इसके अलावा, हम एक ही नमूना से एकत्र की है या एक समान लेकिन विभिन्न नमूना RIPA के साथ काटा से एकत्र प्रोटीन के स्तर के लिए mRNA के स्तर की तुलना में । हमें पता चला है कि लक्ष्यों की एक संख्या के लिए, रिपा-निकाले गए नमूने में प्रोटीन के काफी निचले स्तर थे । intersample भिन्नता के लिए नियंत्रित किए बिना, यह अंतर mRNA और प्रोटीन के अंतर नियमन के कारण किया गया था, तो यह जानना असंभव होगा.
यह ध्यान में रखना है कि वहां प्रोटोकॉल इन विभिंन macromolecules के लिए विशेष रूप से अनुकूलित कर रहे है महत्वपूर्ण है, इसलिए यदि एक क्रॉस अनुभागीय विश्लेषण प्रयोग के अंतिम लक्ष्य नहीं है, तो यह उन तरीकों को रोजगार के बजाय उचित होगा । GTCp का उपयोग करने के लिए डीएनए और प्रोटीन को अलग करने का कारण बनता है उंहें कम घुलनशील बनने के लिए, एक कमजोर आधार में डीएनए के पुनर्गठन की आवश्यकता होती है, जैसे NaOH, और एक बफर में प्रोटीन घुलनकारी हीटिंग के साथ डिटर्जेंट की एक उच्च एकाग्रता के साथ, अधूरा के जोखिम पर विलेयीकरण. इसके अतिरिक्त, GTCp गुनिडीनियम थायोजाइनेट और अम्लीय phenol है, जो ऐसे proteases के रूप में एंजाइम को निष्क्रिय करता है, लेकिन धीरे समय पर प्रोटीन नीचा होगा जब तक जमे हुए । यह शोधकर्ता के विवेक को तय करना होगा कि यदि इन सीमाओं का छल सार्थक होगा.
महत्वपूर्ण बात, जब आरएनए, एक तकनीक के साथ काम कर रहे हैं, जब तक अंयथा नोट बर्फ पर नमूना रखते हुए, और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध विसंदूषण अभिकर्मक के उपयोग के लिए rna बरकरार रखने की सिफारिश की है । विशेष रूप से, बड़े नमूनों के साथ शुरू करने के लिए और अधिक GTCp की आवश्यकता होगी, जिसमें प्रत्येक निष्कर्षण विलायक भी ऊपर बढ़ाया जा करने की आवश्यकता होगी । इस प्रोटोकॉल की आवश्यकता नहीं है किसी भी मैनुअल homogenization के कीड़ा या सेल के नमूने जब सही मात्रा GTCp का उपयोग किया जाता है । डीएनए अलगाव के संदर्भ में, उपज कार्बनिक (गुलाबी) परत को ठीक करने के लिए प्रवीणता पर अत्यधिक निर्भर है । अंत में, अलगाव के दौरान प्रोटीन के घुलनकरण में सुधार करने के लिए, रिज़ॉल्बिलाइजेशन बफर की मात्रा में वृद्धि या एसडीएस के अलावा अन्य डिटर्जेंट जोड़ने के लिए आवश्यक हो सकता है । दरअसल, वयस्कों, लार्वा, और अंडों के मिश्रण के बजाय केवल वयस्क-कीड़े की आबादी वाले प्रोटीनों को रिज़ॉल्बिनीज करना बहुत आसान है ।
कुल मिलाकर, इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर जैव अणु आइसोलेशंस के लिए एक एकीकृत दृष्टिकोण प्रदान करता है और correlations की व्याख्या की सुविधा, या उसके अभाव, एमआरएनए और प्रोटीन के स्तर के बीच है कि अलग से विभिन्न जैव अणुओं के संचयन से पैदा कर सकते हैं नमूने. इस पद्धति का उपयोग करने से वैज्ञानिकों को सही ढंग से मामलों की पहचान करने में मदद मिल सकती है, जहां एमएनए का अनुवाद प्रोटीन से संबंधित नहीं है और यह विभिन्न शर्तों के तहत posttransअपंग और posttranscriptional नियामक तंत्र की गहरी जांच करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं ।

Multiomics, विश्लेषणात्मक दृष्टिकोण है कि इस तरह के जीनोम, proteome, transcriptome, एपिजीनोम, माइक्रोबायोम, या lipidome के रूप में omics का एक संयोजन का उपयोग करता है, तेजी से लोकप्रिय हो गया है जब रोग लक्षण वर्णन1के लिए बड़े डेटा सेट प्रसंस्करण, 2. बढ़ते सबूत दिखाया गया है कि एक एकल "ome" के लिए सीमित दृष्टिकोण एक अपूर्ण आणविक विश्लेषण प्रदान करता है (Rotroff और Motsinger द्वारा की समीक्षा की-फिर से1) । बड़े डेटा सेट, विशेष रूप से जब उच्च थ्रॉपुट तकनीकों का उपयोग कर स्क्रीन प्रदर्शन उत्पन्न होते हैं, लेकिन एक पूरी तस्वीर पेंट करने के लिए या सबसे प्रासंगिक लक्ष्यों की पहचान करने के लिए, multiomic दृष्टिकोण बेहतर कर रहे हैं. multiomics दृष्टिकोण के उपयोग के साथ, तथापि, वहां mrna और प्रोटीन के स्तर3,4,5,6के बीच विसंगतियों की अक्सर अवलोकन है । विशेष रूप से आरएनए अनुक्रमण (RNAseq) और तरल क्रोमेटोग्राफी-टैंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS/MS) के साथ साथ-साथ transcriptomic और proteomic विश्लेषण के लिए प्रयोग किया जाता है, एमआरएनए और प्रोटीन अक्सर इसी तरह से इलाज के नमूनों से प्राप्त कर रहे हैं भिन्न replicates, संभावित रूप से एक ही स्थिति3,4,5,6के बीच भिन्नता शुरू । harvald एट अल. एक सुरुचिपूर्ण सी एलिगेंस भुखमरी समय-पाठ्यक्रम का अध्ययन है कि transcriptome और जंगली प्रकार (wt) कीड़े की है कि hlh के लिए-30 उत्परिवर्ती कीड़े की तुलना में है कि लंबी उंर में एक महत्वपूर्ण ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर का प्रदर्शन किया 7. नोट की, आरएनए और प्रोटीन से काटी गई एक ही हालत replicates, तो एक ही नमूने से नहीं । उनके निष्कर्षों हर समय बिंदु (r = ०.५५९ से ०.६२८) पर mrna स्तर और प्रोटीन के स्तर के बीच एक कम सहसंबंध दिखा । वास्तव में, उनके हीटमैप चार समूहों का गठन: क्लस्टर मैं mrna स्तरों में एक बड़ी कमी थी, लेकिन इसी प्रोटीन के स्तर में कम या कोई कमी, क्लस्टर द्वितीय था कम या कोई mrna स्तर में वृद्धि लेकिन प्रोटीन के स्तर में वृद्धि हुई थी, क्लस्टर III mrna में वृद्धि हुई थी स्तर लेकिन प्रोटीन के स्तर में कमी, और क्लस्टर चतुर्थ mRNA स्तरों में वृद्धि हुई थी, लेकिन केवल प्रोटीन के स्तर4में एक सूक्ष्म परिवर्तन । इसके अलावा, यह intersample भिन्नता मामलों में जहाँ एक ही स्थिति के नमूने ठीक उसी समय एकत्र नहीं हैं में प्रस्तुत किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, एमआरएनए और सिरोकाडियन चक्र द्वारा विनियमित प्रोटीन8,9, या, अधिक विशेष रूप से, सी. एलिगेंस के प्रकाश9के लिए जोखिम दिन के समय के आधार पर बदलेंगी; इन circadian प्रोटीन की अभिव्यक्ति जीन अभिव्यक्ति प्रेरण10के बाद 8 एच तक देरी हो सकती है । फिर भी, इस प्रेक्षण की व्यापकता का अर्थ यह नहीं है कि यह गलत है; वास्तव में, यह जानकारीपूर्ण साबित हो सकता है । प्रोटीन और एमआरएनए गठन और क्षरण के बीच एक निरंतर गतिशील अवस्था में हैं । इसके अलावा, प्रोटीन अक्सर posttranslationally को स्थिरता में वृद्धि या उनके11क्षरण प्रेरित संशोधित कर रहे हैं । उदाहरण के लिए, उनके बैबैरिनेशन स्थिति या तो सक्रियण या12क्षरण के लिए proteasome या लयनकाय को लक्षित करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । इसके अतिरिक्त, गैर कोडिंग RNAs transअपंग और posttranscriptional13चरणों में जीन अभिव्यक्ति को विनियमित करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं । इस प्रकार, प्रश्न यह है कि यह पुष्टि करने के लिए चरों को कैसे सीमित करें कि इन सूत्रकृमि अध्ययनों में हम जिन विसंगतियों का प्रेक्षण करते हैं वे वास्तविक हैं ।
यहां, हम एक विधि है कि एक ही नमूने से अलग अणुओं के विश्लेषण की अनुमति देकर intersample चर निकालता है प्रस्ताव । इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य एक विधि के लिए लगातार अलग डीएनए, आरएनए, और सी एलिगेंस के एक नमूने से प्रोटीन (भी कीड़े के रूप में संदर्भित) के लिए एक के लिए भिंनता को कम करने के प्रयास में, reproducibility में सुधार, और व्याख्याओं की सुविधा की पेशकश है । एक ही नमूने का उपयोग करने के अतिरिक्त लाभ नमूना संग्रह के दौरान समय और संसाधनों की बचत शामिल हैं, मूल्यवान और सीमित नमूनों के क्रॉस-सेक्शनल विश्लेषण को सुविधाजनक बनाना, जो कि बढ़ने और बनाए रखने के लिए कठिन हैं, और प्राप्त करना एमआरएनए और प्रोटीन के स्तर में intrasample विविधताओं के आधार पर अणुओं के अंतर नियमन में अंतर्दृष्टि ।
इस विधि के कीड़े का एक नमूना से जीन भाव और प्रोटीन के स्तर का आकलन करने के लिए उपयुक्त है, आणविक प्रसंस्करण के कई स्तरों के एक अधिक व्यापक मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है । ग्वानिडीनियम थायोसायनेट-phenol-chloroform (GTCp) अभिकर्मक14, आरएनए को अलग करने के लिए एक आमतौर पर इस्तेमाल किया रासायनिक, न्यूकोइक एसिड और कीड़े से प्रोटीन के निष्कर्षण के लिए प्रयोग किया जाता है, बाद में वर्षा के साथ, धोने, और प्रत्येक का घुलनकीकरण. इस प्रोटोकॉल के विभिंन प्रोटोकॉल का एक संकलन है15,16 मामूली संशोधनों के साथ, सी एलिगेंसपर ध्यान केंद्रित के साथ बनाया गया है, लेकिन हम भी सफलतापूर्वक rna, प्रोटीन अलग है, और डीएनए के एक गोली से HeLa कोशिकाओं के बाद एक ही कदम । हालांकि यहां परीक्षण नहीं, इस प्रोटोकॉल के ऊतकों पर काम करने के रूप में अच्छी तरह से17,18की संभावना है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4&#8211;15% Mini-PROTEAN&#174; TGX Stain-Free&#8482; Protein Gels</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>4568084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CePAS7-s</td>
			<td>DHSB- U of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CeTAC1-s</td>
			<td>DHSB- U of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DLG1-s</td>
			<td>DHSB- U of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GRP78</td>
			<td>Novus Bio.</td>
			<td>NBp1-06274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Goat Anti-Mouse</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>926-80010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Goat Anti-Rabbit</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>92680011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HSP60-s</td>
			<td>DHSB- U of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LMP1-s</td>
			<td>DHSB- U of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRP-1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab24102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neuroligin 3</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab172798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1501R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChemiDoc MP Imaging System</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C298-500</td>
			<td>Health hazard, Irritant, Toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant Blue</td>
			<td>ThermoSci</td>
			<td>20279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Protein assay</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>500-0116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoch 2 microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (200 proof)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>04-355-223</td>
			<td>Flammable, health hazard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeLa cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-2</td>
			<td>BSL2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript Reverse Transcription Supermix</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1708840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydra microdispenser: Matrix Hydra</td>
			<td>Robbins/ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A516-4</td>
			<td>Flammable, health hazard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M9 buffer: 
			3 g KH2PO4 
			6 g Na2HPO4 
			5 g NaCl 
			Add H2O to 1 liter. Sterilize by autoclaving. 
			After solution cools down, add 1 mL sterile 1 M MgSO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laemmli Sample Buffer (2x)</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>161-0737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>ThermoSci</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAGE apparatus</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ponceau S</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J60744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td>25 nmole DNA Oligo with Standard Desalting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dlg-1: F (5&#39;-GGTCCTACCA GGCAGTTGAG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CACGTCCGTT AACCTCTCCC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hsp-4: F (5&#39;-AGAGGGCTTT GTCAACCCAG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-TCGTCAGGGT TGATTCCACG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hsp-70: F (5&#39;-CGGCATGTGA ACGTGCTAAG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-GAGCAGTTGA GGTCCTTCCC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hsp-60: F (5&#39;-ATTGAGCAAT CGACGAGCGA-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CAACACCTCC TCCTGGAACG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lmp-1: F (5&#39;-ACAACAACAC CGGACTCACG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-ATCGAGCTCC CACTCTTTGG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tac-1: F (5&#39;-AGTGGCAGGC AAAGTTCCTC-3&#39;) 
			 R (5&#39;-TGAGCACCTT GATCTCGTCG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pas-7: F (5&#39;-GTACGCTCAA AAGGCTGTCG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CTGAATCGGC ATTGGCTCAC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mrp-1: F (5&#39;-TTTGCCTTGC GCTTGTTCTG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-AGTTCCAGTG CGGAGCATAC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F07C4.12: F (5&#39;-TGCTGAGCAT GAAGGACTGT-3&#39;) 
			 R (5&#39;-TGGCAATAGC TCCTCCGTTG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HK Actin: F (5&#39;-CTACGAACTT CCTGACGGACAAG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CCGGCGGACT CCATACC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HK cyn-1: F (5&#39;-GTGTCACCAT GGAGTTGTTC-3&#39;) 
			 R (5&#39;-TCCGTAGATT GATTCACCAC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HK nhr-23: F (5&#39;-CAGAAACACT GAAGAACGCG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CGATCTGCAG TGAATAGCTC-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HK ama-1: F (5&#39;-TGGAACTCTG GAGTCACACC-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CATCCTCCTT CATTGAACGG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HK cdc-42: F (5&#39;-CTGCTGGACA GGAAGATTACG-3&#39;) 
			 R (5&#39;-CTCGGACATT CTCGAATGAAG-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HK pmp-3: F (5&#39;-GTTCCCGTGT TCATCACTCAT-3&#39;) 
			 R (5&#39;-ACACCGTCGA GAAGCTGTAGA-3&#39;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LightCycler 96 qPCR machine</td>
			<td>Roche</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA buffer: 10 mM Tris-Cl (pH 8.0) 
			1 mM EDTA 
			1% Triton X-100 
			0.2% SDS 
			140 mM NaCl 
			1 tablet of Roche protease inhibitor per 20 ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SsoAdvanced Universal SYBR Supermix</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1725274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal West Femto Max Sens Substrate</td>
			<td>ThermoSci</td>
			<td>34095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans-Blot Transfer apparatus</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans-Blot Turbo Transfer Pack</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>170-4159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td>Health hazard (skin, eyes)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm strains:</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 (wild type)</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eat-2 (MAH95)</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rsks-1 (VB633)</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combined nucleotide and protein extractions in caenorhabditis elegans

एक एकल जैविक नमूना जानकारी की अधिकता रखती है, और यह अब एक साथ कई अणुओं आणविक प्रसंस्करण और विभिन्न स्थितियों के बीच परिवर्तन के कई स्तरों की एक पूरी तस्वीर पर कब्जा करने के लिए जांच करने के लिए आम प्रथा है. यह प्रोटोकाल, डीएनए, आरएनए और प्रोटीन को आइसोलेट करने की विधि प्रस्तुत करता है, जो निमैटोड केनोहैबडिटिस एलिगेंस के उसी नमूने से होता है जब ये जैव अणु इसी प्रकार के उपचारित की प्रतिकृति से अलग किए जाते हैं, लेकिन अंततः विभिंन नमूनों । नाभिकीय अम्ल और प्रोटीन को अम्ल ग्वानिडीनियम थायोसिनेट-फीनॉल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि का उपयोग करके सूत्रकृमि से निकाला जाता है, जिसके बाद वर्षण, धुलाई, और प्रत्येक का घुलनकरण होता है । हम एक नमूना से आरएनए, डीएनए, और प्रोटीन के सफल अलगाव सूत्रकृमि और HeLa कोशिकाओं के तीन उपभेदों से, वयस्क जानवरों में बेहतर प्रोटीन अलगाव परिणाम के साथ दिखा । इसके अतिरिक्त, ग्वानिडिनियम थायोक्यानेट-phenol-chloroform-सूत्रकृमि से निकाले प्रोटीन बड़े प्रोटीन के संकल्प को बेहतर बनाता है, के रूप में बढ़ाया detectable स्तर के साथ immunoblotting द्वारा मनाया, प्रोटीन की पारंपरिक RIPA निष्कर्षण की तुलना में ।
विधि यहां प्रस्तुत उपयोगी है जब एक multiomic दृष्टिकोण का उपयोग कर नमूनों की जांच, विशेष रूप से proteome और transcriptome की खोज के लिए । तकनीक है कि एक साथ मूल्यांकन multiomics अपील कर रहे है क्योंकि आणविक संकेतन जटिल जैविक घटना के लिए पूरक स्तर पर होने लगा है संकेत; हालांकि, यह देखने के लिए तेजी से आम हो गया है कि mRNA के स्तर में परिवर्तन हमेशा प्रोटीन के स्तर में एक ही परिवर्तन को प्रतिबिंबित नहीं करते और संग्रह के समय circadian विनियमों के संदर्भ में प्रासंगिक है । एक ही नमूना (intrasample.) के भीतर भिन्न सामग्री की असेइंग जब इस विधि किसी भी intersample भिन्नता निकालता है

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Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

यहां, हम एक ही नमूने से आरएनए, डीएनए, और प्रोटीन के अलगाव के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद है, एक के लिए भिंनता को कम करने के प्रयास में, reproducibility में सुधार, और व्याख्याओं की सुविधा ।

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