Name: isolating malignant and non-malignant b cells from lck:egfp zebrafish
Uploaded: 2019-02-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolating Malignant and Non-Malignant B Cells from lck:eGFP Zebrafish at JoVE.com

我们要感谢梅加马龙-佩雷斯对斑马鱼的护理, 以及 ouhsc 流式细胞仪的核心。这项工作得到了现代希望车轮、俄克拉荷马科学和技术促进中心 (hrp-067)、nihx\ igms inbre 试点项目奖 (p20 gm103447) 的资助。jkf 担任急诊室 & 西尔玛·盖洛德, 担任儿童医院基金会儿科血学-肿瘤学主席。

所有涉及斑马鱼的程序都得到了俄克拉荷马大学健康科学中心动物护理和使用机构委员会 (iacuc) 的批准。
1. 从转基因 lck 中分离非恶性 b 和 t 淋巴细胞: egfp 鱼
<ol><li>在鱼系水中使用0.02% 的滴虫 (ms-222) 对鱼类进行麻醉。</li>
	<li>检查2-6个月大的鱼荧光胸腺, 这是位于斑马鱼和其他心灵的分枝腔的背侧, 14.使用荧光显微镜 (470/40 激发波长和 25...

<ol>
	<li>Paik, E. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+development+in+the+zebrafish.">Hematopoietic development in the zebrafish.</a> International Journal of Developmental Biology. 54 (6-7), 1127-1137 (2010).</li><li>Kasheta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+T+reg-like+cells+in+zebrafish.">Identification and characterization of T reg-like cells in zebrafish.</a> Journal of Experimental Medicine. 214 (12), 3519-3530 (2017).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+B+Cell+Development+without+a+Pre-B+Cell+Stage,+Revealed+by+CD79+Fluorescence+Reporter+Transgenes.">Zebrafish B Cell Development without a Pre-B Cell Stage, Revealed by CD79 Fluorescence Reporter Transgenes.</a> Journal of Immunology. 199 (5), 1706-1715 (2017).</li><li>Page, D. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+tracking+of+T+cell+development,+ablation,+and+engraftment+in+transgenic+zebrafish.">In vivo tracking of T cell development, ablation, and engraftment in transgenic zebrafish.</a> Proceedings of National Academy of Sciences U S A. 101 (19), 7369-7374 (2004).</li><li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity.">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li><li>Frazer, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heritable+T-cell+malignancy+models+established+in+a+zebrafish+phenotypic+screen.">Heritable T-cell malignancy models established in a zebrafish phenotypic screen.</a> Leukemia. 23 (10), 1825-1835 (2009).</li><li>Rudner, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shared+acquired+genomic+changes+in+zebrafish+and+human+T-ALL.">Shared acquired genomic changes in zebrafish and human T-ALL.</a> Oncogene. 30 (41), 4289-4296 (2011).</li><li>Gutierrez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pten+mediates+Myc+oncogene+dependence+in+a+conditional+zebrafish+model+of+T+cell+acute+lymphoblastic+leukemia.">Pten mediates Myc oncogene dependence in a conditional zebrafish model of T cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Journal of Experimental Medicine. 208 (8), 1595-1603 (2011).</li><li>Borga, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+B+and+T+cell+acute+lymphoblastic+leukemias+in+zebrafish+driven+by+transgenic+MYC:+implications+for+oncogenesis+and+lymphopoiesis.">Simultaneous B and T cell acute lymphoblastic leukemias in zebrafish driven by transgenic MYC: implications for oncogenesis and lymphopoiesis.</a> Leukemia. , (2018).</li><li>Haferlach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+microarray-based+gene+expression+profiling+in+the+diagnosis+and+subclassification+of+leukemia:+report+from+the+International+Microarray+Innovations+in+Leukemia+Study+Group.">Clinical utility of microarray-based gene expression profiling in the diagnosis and subclassification of leukemia: report from the International Microarray Innovations in Leukemia Study Group.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (15), 2529-2537 (2010).</li><li>Novershtern, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Densely+interconnected+transcriptional+circuits+control+cell+states+in+human+hematopoiesis.">Densely interconnected transcriptional circuits control cell states in human hematopoiesis.</a> Cell. 144 (2), 296-309 (2011).</li><li>Menke, A. L., Spitsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P., Woutersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+anatomy+and+histology+of+the+adult+zebrafish.">Normal anatomy and histology of the adult zebrafish.</a> Toxicology Pathology. 39 (5), 759-775 (2011).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+organs+from+the+adult+zebrafish.">Dissection of organs from the adult zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2010).</li><li>Pruitt, M. M., Marin, W., Waarts, M. R., de Jong, J. L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+the+Side+Population+in+Myc-induced+T-cell+Acute+Lymphoblastic+Leukemia+in+Zebrafish.">Isolation of the Side Population in Myc-induced T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (37), (2017).</li><li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nature Immunology. 4 (12), 1238-1246 (2003).</li><li>Carmona, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+transcriptome+analysis+of+fish+immune+cells+provides+insight+into+the+evolution+of+vertebrate+immune+cell+types.">Single-cell transcriptome analysis of fish immune cells provides insight into the evolution of vertebrate immune cell types.</a> Genome Research. 27 (3), 451-461 (2017).</li><li>Tang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+hematopoietic+and+renal+cell+heterogeneity+in+adult+zebrafish+at+single-cell+resolution+using+RNA+sequencing.">Dissecting hematopoietic and renal cell heterogeneity in adult zebrafish at single-cell resolution using RNA sequencing.</a> Journal of Experimental Medicine. 214 (10), 2875-2887 (2017).</li></ol>

我们开发并提供了一种从 lck 中分离 b 细胞的协议: egfp转基因斑马鱼, 并将其添加到其他带有 b 系标签 3,4的 d . rerio 模型中。有些令人惊讶的是, 自2004年描述以来, 这一行中 gfplo b 细胞的识别没有引起注意。一般来说, lck被认为是 t 细胞特有的6, 但最近的研究发现, 自然杀手和骨髓细胞, 以及 b 细胞中的意外 lc...

斑马鱼具有强大的特性, 如遗传操纵能力、高繁殖力、光学半透明和快速发育, 有助于利用遗传方法研究脊椎动物的发育。这些优势, 再加上远端和哺乳动物造血的共同特征, 使d. rerio 成为在体内分析淋巴细胞和淋巴细胞功能的理想选择, 从它们在整个成年期间在幼虫中的最早出现。斑马鱼的血液发育依赖于与哺乳动物共享的保存良好的遗传过程, 这些过程延伸到适应性免疫系统。此外, 斑马鱼和哺乳动物之间的分子机制在淋巴发育方面得到了显著的保护。
在过去的20年里, 在这些血统中缺乏的特定血液谱系和突变系的转基因d. rerio 系已经被创造出来 2,3,4,5。其中, lck: egfp转基因线, 利用斑马鱼淋巴细胞蛋白酪氨酸激酶 (lck) 启动子来驱动 gfp 表达 6.该基因由 t 系前体和成熟的 t 淋巴细胞高度表达, 可通过流式细胞仪7在体内跟踪胸腺 t 细胞的发育和 t 系细胞的体外纯化.以前, 我们在前瞻性遗传 enu 突变屏幕中使用这条线来识别容易发生 t-all 的种系突变体, 并研究与 t 细胞肿瘤发生 8,9有关的体细胞获得的基因事件。
最近, 我们的实验室进一步扩大了lck 的效用: egfp斑马鱼。在双转基因的 rmyc (人 myc), lck:egfp d. rerio,已知开发 t-all 10,我们发现 b-血统 all 也发生11。与 t-all 在这个模型中不同的是, 由于 gfp 表达较高, t-all 荧光明亮, 由于 gfp 水平较低, 允许 b-all 的鱼与使用荧光显微镜的鱼区别开来。这种差异 gfp 表达还允许使用流式细胞管制11将 gfp lo b-all 细胞与 gfphit-all 细胞分离.此外, 低lck表达并不是斑马鱼 b-all 所独有的, 因为人类 b-all 也表达低lck11,12。同样, d. rerio、小鼠和人类的正常 b 系细胞表达的 lck/lck/lck 水平也很低, 不成熟的 b 细胞的表达最高11,13. 在每个细胞的基础上, b-沿袭细胞在lckegfp zzbrafish 或衍生物线表示1-10 尽可能多的 gfp t 淋巴细胞。这些 gfplo细胞表达典型的 b 细胞 mrna, 如pax5、 cd79b、 blnk、btk、 ighm、 ighm等, 可以从骨髓、胸腺、脾脏或外周中纯化血11。因此, b-和 t 系细胞都可以从lckegfp zebrafish 中分离, 在rag2hMYC、 lckegfp动物、b-和 t-all 细胞的情况下, 也可以分离出11。
在这里, 我们提出了我们的方案, 以有效地 facs 纯化非恶性 b 细胞从 lck: egfp斑马鱼, 和非恶性或恶性 b 细胞的 rag2hMYC; egfp鱼, 使用各种来源组织。如果需要, 这种细胞同样可以通过流式细胞术量化, 而无需流式细胞仪分离。低lck表达的发现--因此, 低 gfp 表达 b 细胞为lckegfp zzbrafish 的实验可能性打开了新的大门, 例如体内b 细胞的发育研究。因此, 这条在2004年首次报道的转基因线, 有了新的生命, 因为我们试图利用它来收集关于斑马鱼适应性免疫的新见解。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 &#181;m mesh</td>
			<td>Sefar Filter technology</td>
			<td>7050-1220-000-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Polystyrene round-Bottom tube with cell-strainer cap</td>
			<td>Falcon Corning Brand</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml conical tube</td>
			<td>VWR international</td>
			<td>525-0448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AZ APO 100 Fluorescent microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoflex</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DS-Qi1MC camara</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl 3-aminobenzoate methansesulfonate; MS-222</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E-10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSJazz</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10.2</td>
			<td>FlowJo, LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lck:eGFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>See Langeneu et al., 2004</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements software</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Version 4.13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin -Streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pestle micro-tube homogenizers</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>64788-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Transfer pippetes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rag2:hMYC-ER</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>See Gutierrez et al., 2011</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Media 1640 1X</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11835-030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolating malignant and non-malignant b cells from lck:egfp zebrafish

斑马鱼 (daio rerio)是研究淋巴细胞发育的一个强有力的模型。像哺乳动物一样, d. rerio拥有包括 b 和 t 淋巴细胞在内的适应性免疫系统。斑马鱼淋巴生成的研究是困难的, 因为抗体识别d. rerio 细胞表面标记物一般是不可用的, 使分离和表征不同的淋巴细胞群, 包括 b 系细胞。具有血统特异性荧光体表达的转基因线经常被用来规避这一挑战。转基因lck:egfp系已被用于研究d. rerio t 细胞的发育, 也被用于模型 t 细胞发育和急性淋巴细胞白血病 (t-all)。虽然lck:egfp鱼被广泛用于分析 t 系, 但它们还没有被用来研究 b 细胞。最近, 我们发现, 许多斑马鱼 b 细胞也表达了 lck, 尽管水平较低。因此, lck:egfp b 细胞同样表达低 gfp 水平。基于这一发现, 我们开发了一个从lck: egfp斑马鱼净化 b 系细胞的协议, 我们在这里报告。我们的方法描述了如何利用荧光激活细胞分选器 (facs) 从lck: egfp鱼或相关的线, 如双转基因的 ragycb 细胞纯化;egfp 鱼。在这些细胞中, b 细胞, 特别是不成熟的 b 细胞, 在较低但可检测的水平上表达 gfp, 使它们能够与 t 细胞区分开来, 从而高度表达 gfp。b 细胞可以从骨髓、胸腺、脾脏、血液或其他组织中分离出来。该方案提供了一种净化d. rerio b 细胞的新方法, 使研究的重点是 b 细胞发育和 b 淋巴细胞恶性肿瘤等主题。

我们采用流式细胞仪分析和流式细胞仪分离胸腺、肾骨髓和脾脏的 gfp lo 和 gfphi 细胞 : egfp转基因斑马鱼。对3个月大的鱼类的分析显示, 胸腺主要含有 gfp+淋巴细胞。gfp+细胞主要局限于 traver 等人先前描述的淋巴门.在胸腺中可以观察到两个不同的gfp + 种群, gfplo和 gfphi.gfphi淋?...

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Isolating Malignant and Non-Malignant B Cells from lck:eGFP Zebrafish

转基因lck: egfp斑马鱼在 t 淋巴细胞中表达 gfp 的高度, 并已被用于研究 t 细胞发育和急性淋巴细胞白血病。这条线可以用来研究 b 细胞, b 细胞在较低的水平上表达lck 。该协议描述了从lck: egfp斑马鱼的恶性和非恶性 b 细胞的纯化。

从 lck 中分离恶性和非恶性 b 细胞: egfp斑马鱼

Zebrafish (Danio rerio) are a powerful model to study lymphocyte development. Like mammals, D. rerio possess an adaptive immune system that includes B and ...

我们最近发现，LCK GFP斑马鱼中的许多B细胞表达低浓度的GP。这使得这条线成为研究B细胞和T细胞的有用工具。这项技术的主要优点是，现在我们可以研究LCK GFP斑马鱼的B细胞和T细胞，或者我们可以研究B-ALL和T-ALL细胞从鱼与癌症。这些方法支持斑马鱼的B细胞发育和B-ALL研究。与理解适应性免疫系统和小儿癌症中常见的恶性肿瘤有关。如果你从来没有做过这些解剖之前，你可能希望完善你的技术几次，直到你可以获得良好的胸腺和骨髓样本。视觉演示将帮助观看者识别鱼类中的氟化物和B-ALL细胞，并选择正确的设置来区分B细胞和T细胞的分离。在鱼系统中用0.02%三氯丁二的麻醉后，使用荧光显微镜上的GP过滤器检查两到六个月大的斑马鱼，在分支腔的侧腔内侧检查荧光胸腺。将胸腺放在培养皿中安乐死鱼的位置，并使用荧光显微镜去除GP阳性胸腺。和明亮的场显微镜设置，以收获肾骨髓和脾脏。将每个收集的器官放在含有500微升冷分拣介质的1.5毫升管中，并使用害虫微管均质器使冰上组织均质化。然后，通过35微米网格过滤器对同质组织进行应变，生成单个细胞悬浮液，将细胞放在冰上。从两到四个月开始使用荧光显微镜对双转基因抹布进行筛查2：hMYC LCK EGFP鱼，使用低曝光设置来识别明亮的T细胞急性淋巴细胞白血病或T-ALL和高暴露设置，以识别昏暗的B-ALL动物。野生类型控制和白血病前鱼类的GP仅在胸腺中局部。使用简单的三类系统，根据GP荧光的程度对鱼进行分类。一级鱼显示荧光信号作为胸腺肿瘤，只有有限的局部传播。二级鱼显示胸腺外荧光信号，涉及身体小于50%。三级鱼显示荧光信号超过身体的50%。把鱼和没有癌症的鱼分开。并且每月监测一次没有GP阳性肿瘤的白血病前鱼，以开发新的 ALL。对于T或B-ALL细胞隔离使用剃刀刀片去除安乐死三级鱼的头部和胸腺区域，并放置身体在培养皿中。使用P-1000移液器用500微升的冷分拣介质清洗鱼腹腔，在5毫升管中收集细胞和介质。使用新鲜的移液器尖端将2至3个额外的200至300微升微升的冷分拣介质注入体腔，并使用移液器的尖端向鱼体施加温和的压力，将细胞从体腔中挤出到5毫升管中。然后，通过 35 微升网状滤波器对电池悬浮液进行应变。将细胞放在冰上，直到通过流动细胞学进行分析。对于全身均质，使用害虫微管均质器使鱼体均质化，并在管中额外添加 300 微升的冷分拣介质。通过 35 微米网滤器过滤细胞悬浮液，必要时使用附加分拣介质清洗滤光片，直到过滤器上仅保留组织碎屑。然后，将细胞放在冰上，直到它们进行分析。对于分离细胞的流动细胞测量分析，根据制造商的指南设置流式细胞仪参数。并获取1万到5万个事件，以设置向前散射和侧散射参数，用于定义淋巴细胞和祖细胞门并排除细胞碎片。排除细胞双倍，并使用淋巴和/或前体门来确定GP阳性细胞的数量和百分比。使用植物红素和 GFP 强度定义 GFP 负值与 GFP 低对 GFP 高细胞的门。学习将隔离 GFP 低细胞和 GFP 高细胞的大门放置在哪里对于获得纯 B 和 T 细胞群至关重要。两个不同的GP阳性群体，GFP低B细胞和GP高T细胞可以从胸腺获得。居住在三个月大的斑马鱼肾骨髓中的B细胞表达低浓度的GP。然而，GFP高细胞是稀缺的，表明只有一小部分T淋巴细胞存在于骨髓三个月大。同样，与GP高细胞的GP低百分比显示高。在尚未发展急性淋巴细胞白血病的双转基因鱼类中，胸腺、骨髓和脾脏中的GFP表达与单转基因LCK EGFP鱼的GFP表达相似。然而，每个器官的淋巴细胞数量增加。据推测， 由于 Myc 驱动的未成熟 B 和 T 细胞群的扩展， 其中 rag2 启动子是活跃的。在双转基因鱼与B和或T-ALL已经发展了六个月荧光癌B-ALL是昏暗的荧光癌，大多含有GBP低细胞。相比之下，明亮的荧光鱼可以容纳分离的T-ALL或混合种群的GGFP低B-ALL和GGFP高T-ALL细胞。事实上，根据定量聚合酶链反应分析评估，GFP低细胞表达更高水平的B细胞转录。并且GP高细胞表达更高级别的T细胞基因，LCK和GGFP标记。学习如何通过显微镜识别具有 B-ALL 的鱼至关重要。以及如何正确定义流式细胞学门，以分离G1P低和GP高种群。按照这个程序，你可以从GP低和GP高细胞分离DNA，RNA或蛋白质PCR，测序，血液或体内移植实验。一旦我们了解到LCK GFB鱼除了T细胞之外还有荧光B细胞，我们就可以研究同一动物的两种细胞类型，以评估B和T-ALL。

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolating Malignant and Non-Malignant B Cells from lck:eGFP Zebrafish

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

Orthotopic Xenografting of Human Luciferase-Tagged Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells for in vivo Testing of Candidate Therapeutic Agents

原位Xenografting人类荧光素酶标记的恶性外周神经鞘瘤细胞在体内测试候选治疗药物

Although in vitro screens are essential for the initial identification of candidate therapeutic agents, a rigorous assessment of the drug's ability to ...

科研

医学

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

从部分Pancreatectomized患者的人类胰岛的分离

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

MAME的模型四维活细胞成像肿瘤微环境的相互作用，影响的恶性进展

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

人牙髓干细胞的分离，鉴定和比较性恒牙使用两种不同的方法，得出

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

三维文化：一种工具来研究正常腺泡结构与恶性转化的乳腺细胞

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Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

为获取原发性卵巢癌细胞固体样品的方法

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

研究胰腺癌干细胞特性开发新的治疗策略

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Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

主动脉钙化和炎症血管平滑肌细胞和成像的钙化

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