Name: intramucosal inoculation of squamous cell carcinoma cells in mice for tumor immune profiling and treatment response assessment
Uploaded: 2019-04-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment at JoVE.com

כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו בהתאם שאושרו מוסדיים בעלי חיים טיפול ושימוש הוועדה (IACUC) פרוטוקול דנבר אוניברסיטת קולורדו (פרוטוקול # 00250).
1. גידול תרבית תאים
הערה: שורות תאים B4B8 ו- LY2 שימשו ליצירת גידולים HNSCC orthotopic: תאים סרטניים B4B8 נגזר הפך גורם מסרטן keratinocytes...

<ol>
	<li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worldwide+trends+in+incidence+rates+for+oral+cavity+and+oropharyngeal+cancers.">Worldwide trends in incidence rates for oral cavity and oropharyngeal cancers.</a> Journal of Clinical Oncology. 31 (36), 4550-4559 (2013).</li><li>Ang, K. K., Sturgis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+as+a+marker+of+the+natural+history+and+response+to+therapy+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Human papillomavirus as a marker of the natural history and response to therapy of head and neck squamous cell carcinoma.</a> Seminars in Radiation Oncology. 22 (2), 128-142 (2012).</li><li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eighth+Edition+AJCC+Cancer+Staging+Manual:+Continuing+to+build+a+bridge+from+a+population-based+to+a+more+&amp;#34;personalized&amp;#34;+approach+to+cancer+staging.">The Eighth Edition AJCC Cancer Staging Manual: Continuing to build a bridge from a population-based to a more &amp;#34;personalized&amp;#34; approach to cancer staging.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (2), 93-99 (2017).</li><li>Salley, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+carcinogenesis+in+the+cheek+pouch+of+the+Syrian+hamster.">Experimental carcinogenesis in the cheek pouch of the Syrian hamster.</a> Journal of Dental Research. 33 (2), 253-262 (1954).</li><li>Morris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+experimental+carcinogensis+in+the+hamster+cheek+pouch.">Factors influencing experimental carcinogensis in the hamster cheek pouch.</a> Journal of Dental Research. 40, 3-15 (1961).</li><li>MacDonald, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+epithelial+dysplasia+in+hamster+cheek+pouch+carcinogenesis+and+human+oral+mucosa.">Comparison of epithelial dysplasia in hamster cheek pouch carcinogenesis and human oral mucosa.</a> Journal of Oral Pathology &amp; Medicine. 10 (3), 186-191 (1981).</li><li>Hawkins, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4NQO+carcinogenesis:+a+mouse+model+of+oral+cavity+squamous+cell+carcinoma.">4NQO carcinogenesis: a mouse model of oral cavity squamous cell carcinoma.</a> Head &amp; Neck. 16 (5), 424-432 (1994).</li><li>Tang, X. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice.">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10 (1 Pt 1), 301-313 (2004).</li><li>Vered, M., Yarom, N., Dayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4NQO+oral+carcinogenesis:+animal+models,+molecular+markers+and+future+expectations.">4NQO oral carcinogenesis: animal models, molecular markers and future expectations.</a> Oral Oncology. 41 (4), 337-339 (2005).</li><li>Bornstein, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smad4+loss+in+mice+causes+spontaneous+head+and+neck+cancer+with+increased+genomic+instability+and+inflammation.">Smad4 loss in mice causes spontaneous head and neck cancer with increased genomic instability and inflammation.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (11), 3408-3419 (2009).</li><li>Thomas, G. R., Chen, Z., Oechsli, M. N., Hendler, F. J., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+expression+of+CD80+is+a+marker+for+increased+tumorigenicity+in+a+new+murine+model+of+oral+squamous-cell+carcinoma.">Decreased expression of CD80 is a marker for increased tumorigenicity in a new murine model of oral squamous-cell carcinoma.</a> International Journal of Cancer. 82 (3), 377-384 (1999).</li><li>Yuspa, S. H., Hawley-Nelson, P., Koehler, B., Stanley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+transformation+markers+in+differentiating+epidermal+cell+lines+in+culture.">A survey of transformation markers in differentiating epidermal cell lines in culture.</a> Cancer Research. 40 (12), 4694-4703 (1980).</li><li>Chen, Z., Smith, C. W., Kiel, D., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+variants+derived+following+in+vivo+tumor+progression+of+an+in+vitro+transformed+squamous+cell+carcinoma+line+acquire+a+differential+growth+advantage+requiring+tumor-host+interaction.">Metastatic variants derived following in vivo tumor progression of an in vitro transformed squamous cell carcinoma line acquire a differential growth advantage requiring tumor-host interaction.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 15 (5), 527-537 (1997).</li><li>Euhus, D. M., Hudd, C., LaRegina, M. C., Johnson, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+measurement+in+the+nude+mouse.">Tumor measurement in the nude mouse.</a> Journal of Surgical Oncology. 31 (4), 229-234 (1986).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Yushkevich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=User-guided+3D+active+contour+segmentation+of+anatomical+structures:+significantly+improved+efficiency+and+reliability.">User-guided 3D active contour segmentation of anatomical structures: significantly improved efficiency and reliability.</a> NeuroImage. 31 (3), 1116-1128 (2006).</li><li>Dutta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+tumour+necrosis,+tumour+proliferation,+local+and+systemic+inflammation,+microvessel+density+and+survival+in+patients+undergoing+potentially+curative+resection+of+oesophageal+adenocarcinoma.">The relationship between tumour necrosis, tumour proliferation, local and systemic inflammation, microvessel density and survival in patients undergoing potentially curative resection of oesophageal adenocarcinoma.</a> Britisch Journal of Cancer. 106 (4), 702-710 (2012).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+lines+and+human+tumors:+a+rational+approach+to+preclinical+model+selection.">Genomic analysis of head and neck squamous cell carcinoma cell lines and human tumors: a rational approach to preclinical model selection.</a> Molecular Cancer Research. 12 (4), 571-582 (2014).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionizing+radiation+sensitizes+tumors+to+PD-L1+immune+checkpoint+blockade+in+orthotopic+murine+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Ionizing radiation sensitizes tumors to PD-L1 immune checkpoint blockade in orthotopic murine head and neck squamous cell carcinoma.</a> OncoImmunology. 6 (10), e1356153 (2017).</li><li>Ferris, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Further+evaluations+of+nivolumab+(nivo)+versus+investigator&#8217;s+choice+(IC)+chemotherapy+for+recurrent+or+metastatic+(R/M)+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+(SCCHN):+CheckMate+141.">Further evaluations of nivolumab (nivo) versus investigator&#8217;s choice (IC) chemotherapy for recurrent or metastatic (R/M) squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN): CheckMate 141.</a> Journal of Clinical Oncology. 34, (2016).</li><li>Ferris, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nivolumab+for+Recurrent+Squamous-Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck.">Nivolumab for Recurrent Squamous-Cell Carcinoma of the Head and Neck.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1856-1867 (2016).</li><li>Harrington, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nivolumab+versus+standard,+single-agent+therapy+of+investigator's+choice+in+recurrent+or+metastatic+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+(CheckMate+141):+health-related+quality-of-life+results+from+a+randomised,+phase+3+trial.">Nivolumab versus standard, single-agent therapy of investigator's choice in recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (CheckMate 141): health-related quality-of-life results from a randomised, phase 3 trial.</a> The Lancet Oncology. 18 (8), 1104-1115 (2017).</li><li>Kiyota, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+open-label,+Phase+III+clinical+trial+of+nivolumab+vs.+therapy+of+investigator's+choice+in+recurrent+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck:+A+subanalysis+of+Asian+patients+versus+the+global+population+in+checkmate+141.">A randomized, open-label, Phase III clinical trial of nivolumab vs. therapy of investigator's choice in recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck: A subanalysis of Asian patients versus the global population in checkmate 141.</a> Oral Oncology. 73, 138-146 (2017).</li><li>Ling, D. C., Bakkenist, C. J., Ferris, R. L., Clump, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Immunotherapy+in+Head+and+Neck+Cancer.">Role of Immunotherapy in Head and Neck Cancer.</a> Seminars in Radiation Oncology. 28 (1), 12-16 (2018).</li><li>Perri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma:+Biological+bases+and+therapeutic+implications.">Radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma: Biological bases and therapeutic implications.</a> Head &amp; Neck. 37 (5), 763-770 (2015).</li><li>Yamamoto, V. N., Thylur, D. S., Bauschard, M., Schmale, I., Sinha, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Overcoming radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 63, 44-51 (2016).</li><li>Bonner, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+cetuximab+for+locoregionally+advanced+head+and+neck+cancer:+5-year+survival+data+from+a+phase+3+randomised+trial,+and+relation+between+cetuximab-induced+rash+and+survival.">Radiotherapy plus cetuximab for locoregionally advanced head and neck cancer: 5-year survival data from a phase 3 randomised trial, and relation between cetuximab-induced rash and survival.</a> The Lancet Oncology. 11 (1), 21-28 (2010).</li><li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+EphB4-Ephrin-B2+Signaling+Enhances+Response+to+Cetuximab-Radiation+Therapy+in+Head+and+Neck+Cancers.">Inhibition of EphB4-Ephrin-B2 Signaling Enhances Response to Cetuximab-Radiation Therapy in Head and Neck Cancers.</a> Clinical Cancer Research. 24 (18), 4539-4550 (2018).</li><li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+radiosensitization+in+EphB4+receptor-expressing+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinomas.">Enhancing radiosensitization in EphB4 receptor-expressing Head and Neck Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 6, 38792 (2016).</li><li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+radiation+and+immunotherapy:+a+new+systemic+therapy+for+solid+tumors?.">Combining radiation and immunotherapy: a new systemic therapy for solid tumors?.</a> Cancer Immunology Research. 2 (9), 831-838 (2014).</li><li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+radiotherapy+and+PD-L1+blockade+is+mediated+by+TIM-3+upregulation+and+regulatory+T-cell+infiltration.">Resistance to radiotherapy and PD-L1 blockade is mediated by TIM-3 upregulation and regulatory T-cell infiltration.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li></ol>

הניתוח הקפדני, אפיון microenvironment הגידול מייצגים לאסטרטגיה חשובה ההבנה מנגנוני התפתחות גידולים, התקדמות, גרורות ועבור ההתפתחות של טיפולים יעילים. סרטן הראש והצוואר היא מחלה מורכבת יכולה שמקורן באתרים אנטומי מרובים באזור הראש והצוואר. מכשול מרכזי להבנת מנגנוני מחלות, שיפור טיפול כבר מחסור של...

HNSCC ממאירות החמישי הנפוצים ברחבי העולם, עם-600,000 חולים מאובחנים מדי שנה1. למרות טיפול אגרסיבי מעורבים כימותרפיה והקרנות (RT), שיעור ההישרדות (OS) הכולל לחולים HNSCC ללא זיהום וירוס הפפילומה האנושי (HPV) נשאר מתחת ל 50% לאחר 5 שנים2. זו במידה רבה מיוחסת microenvironment הגידול מורכב כמו גידולים יכול לנבוע במספר אתרים אנטומי ברורים בתוך אזור הראש והצוואר, לרבות buccal רירית, הלשון, הרצפה של הפה, חלל האף, חלל הפה, הלוע, oropharynx, hypopharynx. בנוסף, באזור הראש והצוואר מאוד vascularized והוא מכיל כמעט מחצית כל בלוטות הלימפה הגוף3. רוב של מחקרים חוקרת ביולוגיה סרטן הראש והצוואר להסתמך על מודלים הגידול באזור האגף. מודל שכזה יכול להציע תובנה מנגנונים פנימיים-הגידול, אך חוסר microenvironment מקורית הראש והצוואר יכול להשפיע באופן משמעותי את הפוטנציאל translational של ממצאים כאלה. אחת השיטות שבה נעשה שימוש כדי לעודד גידולים אוראלי היא באמצעות חשיפה מסרטן 9,10-דימתיל-1, 2-benzanthracene (DMBA)4. עם זאת, שיטה זו מזוהה עם תהליך ארוך, גורם גידולים חולדות, אוגרים, אבל לא אצל עכברים, גידולים וכתוצאה מכך לא ניחנת רבות מהתכונות היסטולוגית של SCCs הבדיל5,6. המבוא של carcinogen4-nitroquinoline 1-אוקסיד (4-NQO), נגזרת quinolone מסיסים במים, גרמו גידולים אוראלי העכבר בעת החלת דרך הפה אבל גם סבלה הרבה פעמים חשיפה (16 שבועות) ומוגבל לקחת שיעור בתוך ובין אצוות של עכברים7,8,9. כדי לפתח מודלים הרלוונטית קלינית, מספר קבוצות מנוצל מודלים מהונדס גנטית מעורבים המניפולציה של נהג oncogenes או גנים משתיק קול של גידול, כולל TP53, TGFB, קראס, HRAS ו SMAD410. מודלים אלה יכולים להציע תובנה גידולים עם הגנים הנהג ידועה אך לא מסכם את הדברים של הטרוגניות מורכבים של האדם HNSCCs.
בעבודה זאת, נדגים את הכדאיות של ביצוע חיסון intramucosal של קרצינומה של תאים קשקשיים התאים בעכברים. תאים חוסנו להתפתח גידולים אגרסיביים בתוך שבוע אחד של הזרקת. בדומה HNSCCs האנושי, הגידולים גרורות לבלוטות הלימפה האזוריות. לאפיין תכונות היסטולוגית וקלינית של המחלה ואנו מספקים תובנה microenvironment המערכת החיסונית הגידול. אנו מציעים כי מודל זה orthotopic של HNSCC יש יישומים וביולוגיה של סרטן, הגידול אימונולוגיה, ולימודים פרה. מנגנונים של התחמקות המערכת החיסונית, התקדמות הגידול, טיפול ההתנגדות גרורות מייצגים תחומי משמעות קלינית שיכול הליות ממוען באמצעות המודל המוצע.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:991px;" width="991">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:327px;">Collagenase III</td>
			<td style="width:217px;">Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td style="width:120px;">LS004183</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNase I</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS006328</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fc Block (CD16/32)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553141</td>
			<td style="width:327px;">&#160;Clone 2.4G2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Flow Cytometry Staining Buffer</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-4222-26</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HBSS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td style="width:327px;">no calcium, no magnesium, no pheno red</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Helois mass cytometer</td>
			<td>Fluidigm</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel membrane matrix</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>CB-40234B</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MRI Scanner</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>NA</td>
			<td>7.4 Tesla</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RBC lysis buffer</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420301</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS002830</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intramucosal inoculation of squamous cell carcinoma cells in mice for tumor immune profiling and treatment response assessment

הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים (HNSCC) היא מחלה מתישה וקטלנית עם שכיחות גבוהה של מופע חוזר, כישלון הטיפול. לפתח אסטרטגיות טיפוליות כדאי, חשוב הבנה הגידול microenvironmental גורמים שתורמים עמידות לטיפול. מכשול מרכזי להבנת מנגנוני מחלות, שיפור טיפול כבר מחסור של שורות תאים מאתר הדומות הטבע אגרסיבי ולא גרורתי של האדם HNSCCs. יתר על כן, רוב דגמי מאתר מעסיקים השתלות תת עורית של גידולים שחסרה חשוב תכונות פיזיולוגיות של אזור הראש והצוואר, לרבות צפיפות כלי דם, להערכת הלימפה נרחב תושב פלורה הרירית. מטרת מחקר זה היא לפתח, לאפיין את מודל orthotopic של HNSCC. אנו מעסיקים שני קווים ברורים גנטית תא מאתר וגידולים הוקמה רירית buccal של עכברים. אנו לייעל שיטות גידול מבוססי collagenase עיכול להתאוששות האופטימלית של תאים בודדים גידולים הוקמה. הנתונים המוצגים כאן מראים כי עכברים לפתח גידולים מאוד vascularized גרורות לבלוטות הלימפה האזוריות. ניתוח cytometry המוני multiparametric תא בודד מראה הנוכחות של אוכלוסיות מגוונות מחוסן עם התאים מיאלואידית המייצג את הרוב של תאים חיסוניים כל. המודל המוצע במחקר זה יש יישומים וביולוגיה של סרטן, הגידול אימונולוגיה ו פיתוח טרום-קליניים של הריפוי. הדמיון של המודל orthotopic על המאפיינים הקליניים של מחלות אנושיות תספק כלי תרגום משופרת, שיפור תוצאות המטופל.

ההערכה במבחנה של התפשטות תאים LY2 ו- B4B8 הראו שיש שתי שורות תאים דומים פעמים ההכפלה (21 h ו- 23 h, בהתאמה). In vivo, שתי שורות תאים יצרו מסה יחידה, גלוי, מוחשי בתוך שבוע אחד של חיסון (איור 1 א'). בעכברים הנושאת LY2 גידולים, הלסת היה שנעקרו על ידי 3 שבועות עקב גידול הנטל (<strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment at JoVE.com

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

סרטן של אזור הראש והצוואר הופכים נפוצים יותר ויותר. עם זאת, יש הבנה מוגבלת של microenvironment הגידול ואת המנגנונים של עמידות לטיפול באזור זה. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לסכם מחדש את microenvironment המקומי של גידולים בראש / צוואר באופן נגיש ומייצר ביטויים קליניים דומים לאלה שנראו בבני אדם.כאשר תרבות התאים הגידול הגיע 70%confluency, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS קר לכל לשטוף ולצרף את התאים עם מספיק 0.25% טריפסין כדי לכסות את המשטח התחתון של בקבוק התרבות. לאחר שלוש עד ארבע דקות באינקובטור תרבות התא, לאשר ניתוק תחת מיקרוסקופ אור ולנטרל את טריפסין עם 12 מיליליטר של אמצעי DMEM F12, בתוספת סרום חזיר עוברי. מעבירים את ההשעיה התא לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר ומערבבים את התאים שלוש עד ארבע פעמים על ידי היפוך.ואז לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה מחדש להשעות את גלולה בסרום ו DMEM ללא אנטיביוטיקה באחת פעמים 10 לתאי הגידול השישי לכל 50 microliters של ריכוז בינוני על הקרח. מיד לפני ההזרקה, מערבבים את התאים בהשעיית תאים סרטניים אחד לאחד ליחס מטריצת קרום מרתף על קרח. לטעון מזרק אחד 0.5 מיליליטר מצויד מחט 23-מד עם 100 microliters של תאים לכל בעל חיים הנמען.מניחים את המזרקים על קרח ומאשרים חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר הרדמה. לאחר מכן, להכניס את המחט לתוך אזור buccal ימין או שמאל דרך השטח הפתוח הזמין משני צדי הפה שמירה על המזרק במקביל לאזור buccal בזמן שהוא בתוך חלל הפה כדי להקל על הזרקה של נפח 100 microliter מלא של ההשעיה מטריצת קרום מרתף התא על פני תקופה של חמש שניות. שמור את המזרק במקום במשך חמש שניות נוספות כדי להבטיח שכל החומר הוזרק לפני משיכת המזרק בעדינות.הגידולים יהיו גלויים בגסות בעוד כשבוע. שבוע לאחר ההזרקה, השתמש calipers כדי למדוד את האורך והרוחב של כל גידול כדי לקבוע את נפח הגידול פעם עד פעמיים בשבוע. ולמדוד את המשקל של כל בעל חיים כדי להעריך את ההשפעות של הגידול על האכלה.בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, השתמש במספריים חדים ומדפים קהים כדי לבצע חתך בעור דרך קו האמצע בצוואר. ולהכניס את המספריים בעדינות מתחת לעור המכסה את הגידול כדי ליצור כיסי אוויר על ידי דחיפת המספריים לרוחב ולתוך העור. ברגע שהעור מנותק מספיק מהגידול, בלו את בלוטות הלימפה המתנקזות כדי למנוע את רקמת הגידול מבולבלת על ידי נוכחות של רקמת הלימפה לחתוך דרך גבולות הגידול עד נפח כולו מנותק.כדי לעבד את הגידול לניתוח במורד הזרם, לחתוך את הגידול לחתיכות בגודל 1 עד 2 מילימטר ולמקום את החלקים לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר המכיל קולגן שלוש, DNAs אחד, מעכב טריפסין. לאחר דגירה חתיכות הגידול ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות, עם רועד כל 10 דקות, להוסיף 20 מיליליטר של HBSS לצינור ולהעביר את ההשעיה המכילה את חתיכות הגידול דרך מסננת ניילון לשפוך 70 מיקרומטר. השתמש בוכנה מזרק חמישה מיליליטר כדי לרסק את חתיכות הגידול מסננת ולהוסיף 10 מיליליטר נוספים של HBSS דרך מסננת.סובב את התאים על ידי צנטריפוגה. להשעות מחדש את גלולה לשניים עד שלושה מיליליטר של חיץ תות דם אדום עם צינורות קפדניים, נטרול תזה עם 20 מיליליטר של HBSS טרי לאחר שתי דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן להשעות מחדש את התאים ב 20 מיליליטר נוספים של HBSS עבור צנטריפוגה נוספת מאמץ את התאים באמצעות מסנן לשפוך 40 מיקרומטר כדי להסיר את כל הפסולת הסופית מן ההשעיה תא הגידול.גידולים LY2 לגדול בקצב גבוה יותר, לעומת גידולים B4B8. ועכברים המציגים עקירת לסת במהירות לפתח ירידה במשקל, עקב דיספאגיה. ההישרדות החציונית בעכברים LY2 הוא גם פחות ממחצית שנצפה עבור עכברים נושאי גידול B4B8.הדמיית תהודה מגנטית של עכברים נושאי גידולים מראה גידולים המסומן היטב המשתרעים לשכבה הפנימית של רירית הבוקל, אך לא ללשון או לאיברים סמוכים אחרים. בדיקה היסטולוגית עולה כי כל העכברים נושאי הגידול LY2 לפתח קרצינומה של תאים קשקשיים מובחנים היטב, בעוד עכברים הנושאים גידולי B4B8 לפתח קרצינומה של תאים קשקשיים מובחנים בינונית. כל העכברים נושאי הגידול LY2 יש גם נמק אישר היסטולוגית, עם הרוב מדגים נמק בינוני עד חמור.בניסוי מייצג זה, גידול LY2 נקצר ומעובד שלושה שבועות לאחר הזרקת תא הגידול באזור buccal, כפי שהוכח. תאים חיסוניים חיוביים CD45 ייצגו 7.3% מכלל אוכלוסיית תאי הגידול. תאים מיאלואידיים חיוביים CD11b ייצגו 37.8% מכל התאים החיוביים CD45, שרובם נקבעו להיות מקרופאגים חיוביים F480, עם אוכלוסיות קטנות של נויטרופילים ותאי מדכא שמקורם במיאלואידים נצפו גם.תאי T היוו 15.9% מאוכלוסיית תאי החיסון החיוביים ל-CD45, 53.4% מהם היו תאי T רגולטוריים חיוביים ל-CD4. תאים קטלניים טבעיים היוו פחות מ-2% מכלל התאים החיוביים ל-CD45. חשוב לתרגל הזרקה על מנת לפתח ביטחון ונוחות בהחזקת המחט והעכבר המטופל ובחשיפת הפה של החיה.לאחר שההליך בוצע בהצלחה, ניתן לבצע ניסויים הכוללים הערכה של תגובת הגידול לטיפול או הערכה של הגורמים המהותיים והמיקרו-וירוסים של הגידול. טכניקה זו סללה את הדרך בתכנון ניסוי קליני ביוזמת חוקר, הערכת ההשפעות של שילוב הקרנות עם טיפול אנטי PL1 בחולים בסרטן הראש והצוואר.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

השתלת דג הזברה גידולים מוחיים במוח לתוך מארחים המוסמכת החיסונית עבור מחקר לטווח ארוך של התנהגות תאים סרטניים והתגובה לסמים

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

טיפול בדיקות במודל תרבות המבוסס ספרואיד Cell תלת-ממד עבור קרצינומה של תאים קשקשיים בצוואר ואחראי

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

ייצור של הלשון מטריצה חוץ-תאית, שיחזור של הלשון קרצינומה של תאים קשקשיים במבחנה

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

זיהוי בזמן אמת של הגידול Vitro תאים אפופטוזיס שנגזרות CD8+ T תאים ללמוד פונקציות החיסונית מדכא גידולים הסתננות התאים מיאלואידית

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Multidimensional Coculture System to Model Lung Squamous Carcinoma Progression

מערכת מרב התרבות Coculture מודל ריאות קשקש התקדמות קרצינומה

Tumor-stroma interactions play a critical role in the development of lung squamous carcinoma (LUSC). However, understanding how these dynamic interactions ...

Modeling Oral-Esophageal Squamous Cell Carcinoma in 3D Organoids

מידול קרצינומה של תאי קשקש אוראליים-ושטיים באורגנואידים תלת-ממדיים

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is prevalent worldwide, accounting for 90% of all esophageal cancer cases each year, and is the deadliest of all ...