Name: data acquisition and analysis in brainstem evoked response audiometry in mice
Uploaded: 2019-05-10T14:00:00
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Gli autori desiderano ringraziare la Dott.ssa Christina Kolb (Centro tedesco per le malattie neurodegenerative[D-NE]) e il Dr. Robert Stark per l'assistenza nell'allevamento degli animali e nell'assistenza sanitaria degli animali. Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente dall'Istituto federale per la droga e i dispositivi medici (Bundesinstitut fàr Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, Bonn, Germania).

Tutte le procedure sugli animali sono state eseguite secondo le linee guida del Consiglio tedesco sulla cura degli animali e tutti i protocolli sono stati approvati dal comitato istituzionale e nazionale locale per la cura degli animali (Landesamt fàr Natur, Umwelt, und Verbraucherschutz, Stato Ufficio della Renania Settentrionale-Vestfalia, Dipartimento della Natura, dell'Ambiente e del Consumismo [LANUV NRW], Germania). Gli autori certificano inoltre che tutta la sperimentazione animale è stata effettuata in conformi...

Questo protocollo fornisce una descrizione dettagliata e integrativa di come registrare le risposte del tronco encefalico evocato uditivo nei topi. Si pone un'attenzione specifica sul pretrattamento degli animali, l'anestesia e i potenziali fattori di confusione metodologica. Questi ultimi includono, tra gli altri, il sesso, la linea del mouse, l'età e le condizioni abitative. Va notato che tutti questi fattori possono avere un impatto sulla perdita dell'udito sensoriale e sugli aspetti fondamentali dell'elaborazione ud...

Un aspetto centrale della fisiologia cerebrale è la sua capacità di elaborare le informazioni ambientali con conseguente produzione intrinseca o estrinseca diversa, come l'apprendimento, la memoria, le reazioni emotive o le risposte motorie. Vari approcci sperimentali e diagnostici possono essere utilizzati per caratterizzare la reattività elettrofisiologica dei singoli tipi di cellule neuronali o ammassi/insiemi di neuroni all'interno di un circuito neuronale correlato allo stimolo. Queste tecniche elettrofisiologiche coprono diverse dimensioni spatiotemporali su micro, meso e macroscala1. Il livello di microscala comprende la tensione e gli approcci di morsetto di corrente in diverse modalità patch-clamp utilizzando, ad esempio, neuroni coltivati o acutamente dissociati1. Queste tecniche in vitro consentono la caratterizzazione delle singole entità attuali e la loro modulazione farmacologica2,3. Un inconveniente essenziale, tuttavia, è la mancanza di informazioni sistemiche per quanto riguarda l'integrazione e l'elaborazione delle informazioni micro e macrocircuitiche. Questa menomazione è parzialmente superata da tecniche in vitro del mesoscalato, come gli array multielettrodi che consentono registrazioni simultanee di multielettrodi extracellulari non solo nei neuroni coltivati, ma anche nelle fette acute del cervello4, 5. Mentre i microcircuiti possono essere conservati nelle fette di cervello in misura specifica (ad esempio, nell'ippocampo), le interconnessioni a lungo raggio sono in genere perse6. In definitiva, per studiare le interconnessioni funzionali all'interno dei circuiti neuronali, le tecniche elettrofisiologiche sistemiche in vivo sulla macroscala sono il metodo di scelta7. Questi approcci includono, tra le altre cose, le registrazioni EEG di superficie (epidurale) e profonde (intracerebrali) che vengono effettuate sia nell'uomo che nei modelli animali1. I segnali EEG sono prevalentemente basati sull'input sinaptico sincronizzato sui neuroni piramidali in diversi strati corticali che possono essere inibitori o eccitatori in principale, nonostante la predominanza generale dell'input eccitatorio8. Dopo la sincronizzazione, gli eccitatori spostamenti post-based potenziali nei campi elettrici extracellulari vengono riassunti per formare un segnale di forza sufficiente per essere registrati sul cuoio capelluto utilizzando elettrodi di superficie. In particolare, una registrazione del cuoio capelluto rilevabile da un singolo elettrodo richiede l'attività di diecimila neuroni piramidali e un complesso armamentario di dispositivi tecnici e strumenti di lavorazione, tra cui un amplificatore, processi di filtraggio (filtro a passa-basso, filtro passa-alto, filtro tacca) ed elettrodi con proprietà specifiche del conduttore.
Nella maggior parte delle specie animali sperimentali (ad esempio topi e ratti), l'approccio EEG del cuoio capelluto basato sull'uomo non è tecnicamente applicabile, in quanto il segnale generato dalla corteccia sottostante è troppo debole a causa del numero limitato di neuroni piramidali sincronizzati9, 10,11. Nei roditori, gli elettrodi superficiali (scalp) o gli elettrodi subdermici sono quindi gravemente contaminati da elettrocardiogramma e prevalentemente artefatti elettromiogramma che rendono impossibili le registrazioni EEG di alta qualità9,11, 12. Quando si utilizzano topi e ratti in movimento libero senza soscia, è quindi obbligatorio registrare direttamente dalla corteccia tramite elettrodi epidurali o dalle strutture profonde e intracerebrali per garantire il collegamento fisico diretto della punta di rilevamento dell'elettrodo piombo/impiantato ai cluster di cellule neuronali che generano segnale. Questi approcci EEG possono essere eseguiti sia in una configurazione di sistema legato restrittivo o utilizzando l'approccio di telemetria radio EEG impiantabile non restraining9,10,11. Entrambe le tecniche hanno i loro pro e contro e possono essere un approccio prezioso nella caratterizzazione qualitativa e quantitativa della suscettibilità/sequestro delle crisi epilettiche, della ritmicità circadiana, dell'architettura del sonno, dell'attività oscillatoria e della sincronizzazione, compresa l'analisi della frequenza temporale, l'analisi delle fonti, ecc.9,10,13,14,15,16,17.
Mentre i sistemi di tetheing e la telemetria radio consentono rispettivamente le registrazioni EEG in condizioni di contenimento/semirestraining o non di addestramento, le condizioni sperimentali correlate non corrispondono ai requisiti per le registrazioni ABR. Quest'ultima richiesta di stimoli acustici definiti che vengono presentati ripetutamente nel tempo con posizioni definite di un altoparlante e livelli di pressione sonora sperimentale e controllati (SPL). Questo può essere ottenuto sia con la fissazione della testa in condizioni di contenimento o in seguito all'anestesia18,19. Per ridurre lo stress sperimentale, gli animali sono normalmente anestesizzati durante la sperimentazione ABR, ma va considerato che l'anestesia può interferire con gli ABR19,20.
Come caratteristica generale, l'EEG è costituito da frequenze diverse in un intervallo di tensione di 50-100 - V. Frequenze di sfondo e ampiezze dipendono fortemente dallo stato fisiologico dell'animale sperimentale. Nello stato di veglia predominano le frequenze beta e gamma (z) con ampiezza inferiore. Quando gli animali si addormentano, si verificano frequenze alfa (z), theta (z) e delta (z) , che presentano una maggiore ampiezza EEG21. Una volta stimolato un canale sensoriale (ad esempio, il percorso acustico), la propagazione delle informazioni viene mediata attraverso l'attività neuronale attraverso il sistema nervoso periferico e centrale. Tale stimolazione sensoriale (ad esempio acustica) attiva i cosiddetti EP o risponde alle risposte evocate. In particolare, i potenziali legati agli eventi (ERP) sono molto più bassi rispetto all'EEG (cioè solo alcuni microvolt). Pertanto, ogni singolo ERP basato su un singolo stimolo andrebbe perso in un contesto EEG ad alta ampiezza. Pertanto, una registrazione di un ERP richiede l'applicazione ripetitiva di stimoli identici (ad esempio, clic nelle registrazioni ABR) e la successiva media per eliminare qualsiasi attività e artefatti in background EEG. Se le registrazioni ABR vengono eseguite in animali anestesizzati, è facile usare elettrodi subdermici qui.
Principalmente, gli AEP includono EP a breve latenza, che sono normalmente correlati ad ATAR o BERA, e ulteriori potenziali successivi come eP di midlatency (risposte di midlatency [MLR]) e EP a lunga latenza22. È importante sottolineare che il disturbo nell'elaborazione delle informazioni uditive è spesso una caratteristica centrale delle malattie neuropsichiatriche (malattie demielinanti, schizofrenia, ecc.) e associato a alterazioni AEP23,24 ,25. Mentre le indagini comportamentali sono in grado di rivelare solo un danno funzionale, gli studi AEP consentono un'analisi spatiotemporale precisa della disfunzione uditiva relativa a specifiche strutture neuroanatomiche26.
ADR come primi, breve latenza acusticamente EP sono normalmente rilevati su applicazione di click da moderata ad alta intensa, e ci possono verificarsi fino a sette picchi ABR (WI-WVII). Le onde più importanti (WI-WV)sono legate alle seguenti strutture neuroanatomiche: WI al nervo uditivo (porzione distale, all'interno dell'orecchio interno); WII al nucleo cocleare (parte prossimale del nervo uditivo, terminazione del tronco encefalico); WIII al complesso olivastico superiore (SOC); WIV al lemniscus laterale (LL); WV alla terminazione del lemniscus laterale (LL) all'interno del collicolo inferiore (IC) sul lato contralaterale27 (supplementari Figura 1). Va notato che WII-WV hanno probabilmente più di una struttura anatomica del percorso uditivo ascendente che li contribuisce. In particolare, l'esatta correlazione dei picchi e delle strutture sottostanti del tratto uditivo non è ancora completamente chiarita.
In audiologia, gli ADR possono essere utilizzati come strumento di screening e diagnostica e per il monitoraggio chirurgico28,29. È molto importante per l'identificazione di disacusis, ipacusi e anacusie (ad esempio, nella perdita dell'udito legata all'età, perdita dell'udito indotta dal rumore, perdita dell'udito metabolica e congenita e perdita uditiva asimmetrica e deficit uditivi a causa di deformità o malformazioni, lesioni e neoplasmi)28. Gli ADR sono rilevanti anche come test di screening per bambini iperattivi, con disturbi dell'intestino o per altri bambini che non sarebbero in grado di rispondere all'audiometria convenzionale (ad esempio, in malattie neurologiche/psichiatriche come ADHD, SM, autismo ecc.29 , 30) e nello sviluppo e nell'allestimento chirurgico di impianti cocleari28. Infine, le ADR possono fornire preziose informazioni sui potenziali effetti collaterali ototossici dei neuropsicofarmaci, come gli antiepilelettici31,32.
Il valore della traduzione delle conoscenze neurofisiologiche ottenute da modelli murini farmacologici o transgenici all'uomo è stato dimostrato in numerosi ambienti, in particolare sul livello di ERP nei paradigmi uditivi nei topi e nei ratti33, 34,35. Nuove informazioni sui primi AEP alterati e sui cambiamenti associati nell'elaborazione delle informazioni uditive nei topi e nei ratti possono quindi essere tradotti nell'uomo ed è di importanza centrale nella caratterizzazione e nell'endofenotipizzazione uditiva, neurologica e neuropsichiatriche in futuro. Qui forniamo una descrizione dettagliata di come gli ADR possono essere registrati e analizzati con successo nei topi per scopi scientifici, tossicologici e farmacologici di base.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AEP/OAE Software for RZ6 (BioSigRZ software)</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>BioSigRZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Binocular surgical magnification microscope</td>
			<td>Zeiss Stemi 2000</td>
			<td>0000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cages (Macrolon)</td>
			<td>Techniplast</td>
			<td>1264C, 1290D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprox vet, 50mg/ml</td>
			<td>Virbac Tierarzneimittel GmbH</td>
			<td>PZN 11149509</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold light source</td>
			<td>Schott KL2500 LCD</td>
			<td>9.705 202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tip applicators (sterile)</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>EH12.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custom made meshed metal Faraday cage (stainless steel, 2 mm thickness, 1 cm mesh size)</td>
			<td>custom made</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Dexpanthenole (Bepanthen eye and nose creme)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>PZN: 01578681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Subdermal stainless steel Needle 
			electrodes, 27GA, 12mm</td>
			<td>Rochester Electro-Medical, Inc.</td>
			<td>S03366-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape sheets (sterile)</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>PZN 0366787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 70%</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>9065.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#39;&#39; Free Field Measure Calibration Mic Kit</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>PCB-378C0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves (sterile)</td>
			<td>Unigloves</td>
			<td>1570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps-curved, serrated</td>
			<td>FST</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 6 Software, V6.07</td>
			<td>GraphPad Prism Software, Inc.</td>
			<td>https://www.graphpad.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat-based surgical instrument sterilizer</td>
			<td>FST</td>
			<td>18000-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic 
			heating blanked</td>
			<td>ThermoLux</td>
			<td>461265 / -67</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketanest S (Ketamine), 25mg/ml</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>PZN 08707288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer&#8217;s solution (sterile)</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>PZN 01471434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab software</td>
			<td>MathWorks, Inc.</td>
			<td>https://de.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medusa 4-Channel Low Imped. Headstage</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>RA4LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medusa 4-Channel Pre-Amp/Digitizer</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>RA4PA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microphone</td>
			<td>PCB Pieztronics</td>
			<td>378C01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi Field Speaker- Stereo</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>MF1-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscilloscope</td>
			<td>Tektronix</td>
			<td>DPO3012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical PC1 express card for Optibit Interface)</td>
			<td>Tucker-Davis Systems (TDT)</td>
			<td>PO5e</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Askina Braucel pads (cellulose absorbet pads)</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>PZN 8473637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preamplifier</td>
			<td>PCB Pieztronics</td>
			<td>480C02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RZ6 Multi I/O Processor system (BioSigRZ)</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>RZ6-A-PI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline (NaCl, sterile)</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>PZN:8609255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SigGenRZ software</td>
			<td>Tucker-Davis Technologies (TDT)</td>
			<td>https://www.tdt.com/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software R (version 3.2.1) + Reshape 2 (Version 1.4.1) + ggplot 2 (version 1.0.1) + datatable (version 1.9.4), + gdata (version 2.13.3), + pastecs (version 1.3.18), + waveslim (version 1.7.5), + MassSpecWavelet (version 1.30.0)</td>
			<td>The R Foundation, R Core Team 2015</td>
			<td>Open Source Software (freely distributable)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sound attenuating cubicle</td>
			<td>Med Associates Inc.</td>
			<td>ENV-018V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Pattern Forceps, 12cm and 14.5 cm length</td>
			<td>FST</td>
			<td>11000-12, 11000-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leukosilk tape</td>
			<td>BSN medical GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>PZN 00397109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Forceps- 1x2 Teeth 12 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>11021-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uniprotect ventilated cabinet</td>
			<td>Bioscape</td>
			<td>THF3378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ventilated cabinet</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>9AV125P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (Rompun), 2%</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>PZN 1320422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

data acquisition and analysis in brainstem evoked response audiometry in mice

Cervello evocato risposta audiometria (BERA) è di rilevanza centrale nella neurofisiologia clinica. Come altre tecniche di potenziale evocato (EP), come potenziali evocati visivamente (VEP) o somatosensoriali, i potenziali uditivi evocati (AImp) sono innescati dalla presentazione ripetitiva di stimoli identici, risposta elettroencefalografica (EEG) di cui viene successivamente mediata con conseguente distinte deviazioni positive (p) e negative (n). Nell'uomo, sia l'ampiezza che la latenza dei singoli picchi possono essere utilizzate per caratterizzare le alterazioni nella sincronizzazione e nella velocità di conduzione nei circuiti neuronali sottostanti. È importante sottolineare che gli AEP sono applicati anche nella scienza di base e preclinica per identificare e caratterizzare la funzione uditiva nei modelli animali farmacologici e genetici. Ancora di più, vengono utilizzati modelli animali in combinazione con test farmacologici per studiare potenziali benefici nel trattamento della perdita dell'udito neurosensoriale (ad esempio, deficit uditivi indotta dall'età o dal rumore). Qui forniamo una descrizione dettagliata e integrativa di come registrare le risposte uditive con cellule staminali cerebrali (ADR) nei topi utilizzando l'applicazione click e tone-burst. Un obiettivo specifico di questo protocollo è l'alloggiamento degli animali pre-sperimentale, l'anestesia, la registrazione ABR, i processi di filtraggio ABR, l'analisi automatizzata della funzione di crescita dell'ampiezza basata sulle wavelet e il rilevamento della latenza.

Le registrazioni ABR evocate da raffiche di tipo click- e tono possono essere utilizzate per valutare le differenze di soglia dell'udito, la funzione di crescita dell'ampiezza e il confronto della latenza. ADR a cui è esibito con il clic nella modalità di aumento SPL sono illustrati nella Figura 1 per i controlli e due linee di mouse mutantiesemplari che sono carenti per il canale Cav3.2 T-type voltage-gated Ca2 <...

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Data Acquisition and Analysis In Brainstem Evoked Response Audiometry In Mice

L'audiometria di risposta evocata dal tronco encefalico è uno strumento importante nella neurofisiologia clinica. Al giorno d'oggi, l'audiometria di risposta evocata dal tronco encefalico viene applicata anche nella scienza di base e negli studi preclinici che coinvolgono modelli animali farmacologici e genetici. Qui forniamo una descrizione dettagliata di come le risposte del tronco encefalico uditivo possono essere registrate e analizzate con successo nei topi.

Acquisizione e analisi dei dati nel cervello evocato Audiometria di risposta nei topi

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as ...

Questo protocollo fornisce informazioni dettagliate su come pianificare, eseguire e analizzare le risposte del tronco uditivo evocato click e tone-burst nei topi. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente una profilazione uditiva complessa e veloce di modelli di topi farmacologici e mutanti. Le nuove intuizioni sull'APP iniziale e sui relativi cambiamenti nell'elaborazione uditivo nei topi e nei ratti possono essere tradotte nell'uomo.Pertanto, questo metodo è di importanza centrale nella caratterizzazione e nella fenotipizzazione di malattie uditivi, neurologiche e. Questo metodo è molto importante per l'identificazione di disacusi, ipoacusi e anacusi. Ad esempio, nella perdita dell'udito metabolica, congenita e aspi-met-acury causata dal rumore, nonché nei deficit udizionali dovuti a deformità o malformazioni, lesioni e neoplasie.Gli utenti nuovi alla tecnica, dovrebbero prestare particolare attenzione al corretto elettro-posizionamento e alla calibrazione pre-sperimentale del sistema. La dimostrazione visiva del metodo è fondamentale per illustrare l'anestesia, la registrazione ABR, i processi di filtraggio ABR e i neur-o-lass-es ABR automatizzati. Iniziare accendendo il preamplificatore collegato al microfono, almeno cinque minuti prima della calibrazione, per consentire l'equilibrazione del sistema.Accendere l'oscilloscopio. Quindi posizionare il microfono, collegato a un preamplificatore all'interno del cubicolo attenuante del suono, per imitare l'orecchio murino sperimentale. Successivamente, aprire i software di elaborazione e acquisizione disponibili in commercio e programmare i protocolli di stimolo per i clic e i tone burst.Inizia con l'entità di stimolo del clic per l'analisi e determinare le soglie dei clic. Seguito dalla simmetria ABR dell'orecchio sinistro e destro. E ampiezze e latenze dell'ABR in seguito.Successivamente, utilizzare lo stesso software per verificare il protocollo di stimolazione del tone burst utilizzando il software di progettazione degli stimoli Sig-Gen RZ. E controlla le impostazioni di stimolo, sotto il software di acquisizione Bio-Sig RZ. Programmare l'intervallo di frequenza appropriato da testare, a seconda della domanda scientifica, e assicurarsi che le gamme di frequenza da applicare soddisfino le capacità tecniche dell'altoparlante.Per la media, impostare il numero di stimoli acustici sequenziali, ad esempio clic o raffiche di tono, a 300 volte, con una velocità di 20 al secondo;una durata media di 25 millisecondi e il fattore di amplificazione del preamplificatore, 20 volte. Successivamente, verificare la frequenza di campionamento appropriata per l'acquisizione dei dati ABR e quindi passare il filtro utilizzando un filtro del valore del burro a sei sondaggi. Attivare il filtro tacca, se necessario.Avviare la calibrazione del tone burst selezionando il file calibrazione:CAL200K;all'interno del software, per attivare la modalità di configurazione della calibrazione. E scegliere i perimetri in base alle condizioni sperimentali. Utilizzare il sistema del processore per eseguire la procedura di calibrazione.Assicurarsi che le specifiche tecniche del microfono e dell'altoparlante, in termini di livello di pressione sonora o limiti SPL, gamma di frequenza e distribuzione, si armonizzno. Quindi, selezionare e avviare il protocollo di stimolazione dei clic predefiniti. Eseguire un singolo clic SPL per verificare che lo spettro degli stimoli sonori sia analizzato dalla rapida trasformazione online a quattro ay dell'oscilloscopio, corrisponde ai requisiti.Selezionare e avviare il protocollo di stimolazione burst di tono predefiniti, nell'intervallo da uno a 42 kilohertz. Confermare lo spettro di frequenza degli stimoli di prova acustici registrati, utilizzando un oscilloscopio e fft online. Infine, completare la calibrazione del tone burst caricando il file di calibrazione creato nel protocollo di stimolo burst del tono.Inizia posizionando il mouse anestetizzato all'interno di un cubicolo attenuante del suono, rivestito con schiuma acustica. Per la registrazione dello stelo cerebrale mono evocato potenziali uditivi, inserire elettrodi sub-dermici in acciaio inossidabile al vertice, assiali dell'occhio-spillo e ventrale-laterale della pinna destra o sinistra a seconda dell'orecchio da misurare. Dall'altra parte, per le registrazioni binaurale, posizionare gli elettrodi negativi sia all'apice destro che sinistro.Posizionare l'elettrodo di terra all'anca dell'animale. Prima dell'inserimento, formare una forma a gancio sulla punta dell'elettrodo in acciaio inossidabile che è la fissazione sub-dermica degli elettrodi è garantita. E una volta inserito, posizionare correttamente il rostro del mouse di 10 centimetri di fronte all'altoparlante.Collegare tutti gli elettrodi allo stadio della testa e verificare la loro impedenza. Quindi, eseguire misurazioni di impedenza di tutti gli elettrodi, prima di ogni registrazione, per verificare il corretto posizionamento e conducibilità degli elettrodi. Registrare gli ABOR in condizioni di campo libero utilizzando un singolo altoparlante.Infine, condurre analisi ABR tramite il rilevamento automatico delle soglie e l'analisi della latenza delle onde per determinare picchi positivi e onde negative. Come primo passo nell'analisi delle prestazioni generali dell'udito, gli ABR evocati a clic per diversi SMR, tra zero e 90, sono stati esaminati utilizzando il sistema automatizzato di rilevamento delle soglie ABR. Sono state analizzate potenziali alterazioni nei livelli di soglia ABR evocate da diverse frequenze di burst del tono.Nelle linee del mouse esemplari, Cav3.2 più, meno e Cav3.2 meno, meno mostrato aumentato click e tone burst relative alle soglie udizioni rispetto ai controlli. Infine, la funzione di crescita dell'ampiezza ABR evocata da clic e l'analisi della latenza della forma d'onda ABR sono state effettuate tramite approccio basato su wavelet. Quest'ultimo consente di comprendere la possibile influenza spacio-temporale del gene di interesse sull'elaborazione delle informazioni uditivo all'interno dell'orecchio interno e del tronco encefalico.Un corretto posizionamento degli elettrodi ABR nella misurazione di Pinna e nella calibrazione del sistema sono essenziali per eseguire questa tecnica. L'approccio uditivo qui presentato, può essere utilizzato anche in combinazione con un sistema di telemetria per analizzare potenzialità complesse, a media latenza e evocate tardive. Questo aiuta nella caratterizzazione e nella fenotipizzazione delle malattie uditivo, neurologico e neurologico.

Research

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