Name: assessment and characterization of hyaloid vessels in mice
Uploaded: 2019-05-15T13:30:00
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यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) अनुदान (R01 EY024963 और EY028100) द्वारा जे.सी. जेडडब्ल्यू को समर्थित किया गया था एक शूरवीरों टेम्पलर नेत्र फाउंडेशन कैरियर स्टार्टर अनुदान द्वारा समर्थित था। hyaoid अलगाव प्रक्रिया इस अध्ययन में वर्णित प्रोटोकॉल से संशोधन के साथ अनुकूलित किया गया था उदारता से Drs. रिचर्ड लैंग, Toshihide Kurihara, और लोइस स्मिथ, जिसे लेखक आभारी हैं द्वारा साझा.

सभी जानवरों के अनुसार दृष्टि और नेत्र विज्ञान में अनुसंधान के लिए एसोसिएशन के अनुसार (ARVO) पशु प्रयोगों के लिए नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए वक्तव्य, स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान?...

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तकनीक का आकलन करने और hyaoid वाहिकाओं की विशेषता के लिए पशु मॉडल में hyaoid पोत प्रतिगमन का निरीक्षण करने के लिए सहज और आवश्यक प्रक्रियाओं रहे हैं, विकास के दौरान संवहनी प्रतिगमन अंतर्निहित तंत्र पर अध्ययन की ?...

आंख में रक्त की आपूर्ति रेटिना और आसपास के नेत्र ऊतकों के सामान्य विकास को सुनिश्चित करने और एक उचित दृश्य समारोह से लैस करने के लिए आवश्यक है। आंखों में तीन संवहनी बिस्तर हैं: रेटिना वाहिकाविन्यास, कोरॉइड, और hyaoid वाहिकाओं के एक क्षणिक भ्रूण संचार नेटवर्क. नेत्र वाहिका विन्यास के विकास के लिए भ्रूणजनन और ऊतक परिपक्वता में स्थानिक और लौकिक समन्वय की आवश्यकता होती है। तीन संवहनी बिस्तरों में, hyaoid vascualture नवगठित भ्रूण लेंस और विकासशील रेटिना के लिए पोषण और ऑक्सीजन प्रदान करने के लिए पहली कार्यात्मक रक्त आपूर्ति प्रणाली है। Hyaloid वाहिकाओं एक ही समय में पीछे हटना है कि रेटिना vasculatures विकसित और परिपक्व1. hyaoid vascualture के प्रतिगमन दृश्य समारोह के विकास के लिए एक स्पष्ट दृश्य मार्ग की अनुमति देने के लिए निर्णायक है; इसलिए, इस संवहनी प्रतिगमन प्रक्रिया रेटिना vasculature के विकास के रूप में के रूप में महत्वपूर्ण है. बिगड़ा हुआ hyaloid प्रतिगमन नेत्र रोगों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इसके अलावा, hyaoid वाहिकाओं के प्रतिगमन सेलुलर और आणविक संवहनी प्रतिगमन के विनियमन में शामिल तंत्र की जांच करने के लिए एक मॉडल प्रणाली प्रदान करता है, जो अन्य अंगों में angiogenic विनियमन के लिए प्रभाव हो सकता है के रूप में अच्छी तरह से.
hyaoid vasculature, hyaoid धमनी (एचए) से व्युत्पन्न, वासा hyaloidea propria (वीएचपी), tunica vasculosa lentis (TVL), और pupillary झिल्ली (पीएम) से बना है. यह भ्रूणीय विकास2के दौरान विकासशील रेटिना, प्राथमिक काचाभ और लेंस को पोषण प्रदान करता है। एचए से उत्पन्न, विहिप की शाखाएं लेंस के लिए काच के माध्यम से पूर्ववर्ती रूप से। TVL लेंस कैप्सूल के पीछे की सतह कप, और प्रधानमंत्री को anastomoses, जो पूर्वकाल पक्ष्माभी धमनियों को जोड़ता है, लेंस के पूर्वकाल की सतह को कवर2,3,प्रधानमंत्री में जहाजों के एक नेटवर्क के गठन में जिसके परिणामस्वरूप 3 , 4 , 5. दिलचस्प बात यह है कि hyaloid vasculature में कोई नसों रहे हैं, और प्रणाली शिरापरक जल निकासी को पूरा करने के लिए choroidal नसों का उपयोग करता है.
मानव भ्रूण में, गर्भकेश के लगभग नौवें सप्ताह में हयालॉयड वाहिकाललकाण्ड लगभग पूरा हो जाता है और जब प्रथम रेटिना वाहिकाओं में दिखाई देते हैं, तो गर्भावधि2के चौथे महीने के दौरान वे पीछे हटने लगते हैं। विहिप के शोष के साथ शुरू, TVL, प्रधानमंत्री के केशिका नेटवर्क के प्रतिगमन, और अंत में, हा बाद में होता है2,3. इस बीच, प्राथमिक काचालु और माध्यमिक काचा भोंच बनाने के लिए शुरू होता है, कोलेजन फाइबर सहित extracellular मैट्रिक्स घटकों से बना. गर्भ के छठे महीने तक, प्राथमिक काच एक छोटी पारदर्शी नहर के लिए प्रकाशिक्त तंत्रिका डिस्क से लेंस तक विस्तार करने के लिए कम हो जाता है, क्लोकेट नहर या hyaoid नहर कहा जाता है, और माध्यमिक vitreous पीछे खंड का मुख्य घटक बन जाता है २ , 3. जन्मसेठीक 3 सप्ताह पहले ही हयालॉयड परिसंचरण अधिकतर 35 से 36 सप्ताह के गर्भ में गायब हो जाता है .
मनुष्यों के विपरीत, जिसमें hyaoid vascualture जन्म के समय पूरी तरह से प्रतिगामी है, माउस hyaloid संवहनी प्रणाली जन्म के बाद पीछे हटना शुरू होता है. चूंकि माउस रेटिना का जन्म एक संवहनी और रेटिना वाहिकाओं के बाद होता है, hyaloid वाहिकाओं प्रसव के बाद के दिन से समवर्ती प्रतिगामी (पी) 4 और ज्यादातर पूरी तरह से P216 द्वारा पीछे हट रहे हैं (चित्र 1) . प्रधानमंत्री P10 और P12 के बीच पहले गायब हो जाता है, और विहिप P12 और P16 के बीच गायब हो जाता है, जबकि TVL और हा कोशिकाओं की एक छोटी संख्या P16 पर भी रहते हैं, और P21 द्वारा hyaoid संवहनी प्रणाली प्रतिगमन लगभग पूरा हो गया है6. इस बीच, रेटिना वाहिका जन्म के बाद विकसित होने लगती है। संवहनी जाल की सतही परत पूरी तरह से P7-P8 पर परिधीय रेटिना तक फैली हुई है, गहरी परत (बाहरी plexiform परत में स्थित) P7-P12 से विकसित होती है, और अंत में, आंतरिक plexiform परत में मध्यवर्ती जाल P12 और P15 7 के बीच विकसित होता है . के रूप में रेटिना vascualture विकसित करता है, यह धीरे-धीरे सहवर्ती hyaoid वाहिकाओं के समारोह की जगह, विकासशील आंख को पोषण और ऑक्सीजन प्रदान. चूहों में hyaoid पोत प्रतिगमन के प्रसव के बाद की घटना का निरीक्षण और hyaloid vascualture का अध्ययन करने के लिए एक आसानी से सुलभ प्रयोगात्मक मॉडल प्रदान करता है, साथ ही आणविक आधार दोनों शारीरिक और के तहत संवहनी प्रतिगमन प्रक्रियाओं को नियंत्रित रोग की स्थिति8|
hyaloid प्रतिगमन की विफलता PHPV जैसे रोगों में देखा जा सकता है, जो भ्रूण के एक असफल या अधूरा प्रतिगमन के परिणामस्वरूप आंख की एक दुर्लभ जन्मजात विकासात्मक विसंगति है, प्राथमिक काचाभ और hyaloid vasculature9. hyaloid vasculature के प्रतिगमन प्रक्रिया को विनियमित तंत्र जटिल हैं और मोटे तौर पर अध्ययन किया. Hyaloid वाहिकाओं के सामान्य प्रतिगमन के लिए आवश्यक एक प्रमुख आणविक मार्ग Wnt संकेतन मार्ग10है , के रूप में इस मार्ग में आनुवंशिक उत्परिवर्तन दोनों Wnt ligand और रिसेप्टर्स को प्रभावित करने के रूप में मानव में PHPV के साथ जोड़ा गया है9. प्रायोगिक अध्ययनों में एक Wnt ligand, Wnt7b, जो इस प्रतिगमन प्रक्रिया मध्यस्थता करने के लिए विकासशील आँख में hyaloid जहाजों के आसपास मैक्रोफेज द्वारा उत्पादित है की पहचान की. Wnt7b रिसेप्टर्स frizzled4 के साथ बाध्यकारी द्वारा Wnt संकेतन को सक्रिय करता है (एफजेडडी4) / LRP5 आसन्न endothelial कोशिकाओं में सेल apoptosis आरंभ करने के लिए, hyaloid वाहिकाओं के प्रतिगमन के लिए अग्रणी10. एक परिणाम के रूप में, Wnt7bकमी चूहों hyaoid वाहिकाओं10की दृढ़ता दिखा. इसी प्रकार, एक गैर-परंपरागत वंट लिगंड, नॉरिन (एनडीपी जीन द्वारा एनकोड किया गया), विकास के दौरान हयालॉयड पोत प्रतिगमन को प्रेरित करने के लिए एफजेडडी4/एलआरपी 5 को भी बांधता है। Ndpy/-, Lrp5-/-, और Fzd4/- चूहों सभी प्रदर्शन स्थगित hyaoid पोत प्रतिगमन, Wnt संकेत11,12की एक महत्वपूर्ण नियामक भूमिका का समर्थन, 13,14,15,16. इसके अलावा, एक और Wnt coceptor LRP6 अपने समारोह में LRP5 के साथ ओवरलैप hyaoid संवहनी endothelial कोशिकाओं में Wnt संकेतन मार्ग नियमन पर17. अन्य कारकों है कि भी hyaloid प्रतिगमन में योगदान कर सकते हैं hypoxia-प्रेरक कारक18,19,संवहनी endothelial विकास कारक20,21, कोलेजन-1822शामिल हैं, 23, आर्फ24, एंजियोपोइटिन-225, और हड्डी मॉर्फोजेनेटिक प्रोटीन-426. इस पेपर में, हम लगातार hyaoid वाहिकाओं के एक मॉडल के रूप में Lrp5-/- चूहों का उपयोग करने के लिए मूल्यांकन और दोनों vivo और पूर्व vivo तरीकों में दोनों के माध्यम से hyaoid vascualture की विशेषता की तकनीक का प्रदर्शन.
विवो और पूर्व विवो में hyaoid vascualture के दृश्य hyaloid पोत प्रतिगमन के तंत्र का अध्ययन करने के लिए आवश्यक है. Hyaoid vasculature निरीक्षण करने के लिए वर्तमान तरीकों मुख्य रूप से VISUALizing और विहिप और हा का विश्लेषण पर ध्यान केंद्रित, OCT और एफएफए छवियों के माध्यम से, आंख पार वर्गों, और hyaoid फ्लैट माउंट. OCT और FFA vivo इमेजिंग उपकरण में शक्तिशाली हैं, जीवित जानवरों में अनुदैर्घ्य अवलोकन की अनुमति के बाद वे अपनी आँखें खोल दिया है. इसके अलावा, अलग hyaloid फ्लैट माउंट पूरे hyaloid vascualture के दृश्य प्रदान करता है और पोत संख्या का एक सटीक परिमाण प्राप्त करने के लिए एक साधन. फिर भी हयालॉयड जहाजों की नाजुक और नाजुक प्रकृति और इसके अलगाव के परिणामस्वरूप तकनीकी कठिनाइयों ने नेत्र अनुसंधान में इसके उपयोग को कुछ हद तक10,17,27तक सीमित कर दिया है . इस पत्र में, हम hyaoid वाहिकाओं के दृश्य का एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, दोनों में vivo लाइव रेटिना इमेजिंग और पूर्व vivo अलग hyaloid फ्लैट माउंट के संयोजन के लिए इन तकनीकों की व्यवहार्यता बढ़ाने के लिए. इस प्रोटोकॉल को लाइव फंडस और ओसीटी इमेजिंग28 की इन विवो विधि और पृथक hyaloid फ्लैट माउंट11के पूर्व विवो विधि पर पिछले प्रकाशनों से संशोधन और विस्तार के साथ अनुकूलित किया गया है .

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:997px;" width="998">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">AK-Fluor (fluorescein injection, USP)</td>
			<td style="width:191px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">17478-253-10</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Anti-CD31 antibody</td>
			<td style="width:191px;">Abcam</td>
			<td style="width:156px;">ab28364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Antifade mounting medium</td>
			<td style="width:191px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:156px;">S2828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:156px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Artificial tear eyedrop</td>
			<td style="width:191px;">Systane</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">C57BL/6J mice</td>
			<td style="width:191px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:156px;">Stock NO: 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Cryostat</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:156px;">CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Cryostat</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:156px;">CM3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Cyclopentolate hydrochloride and phenylephrine hydrochloride eyedrop</td>
			<td>Cyclomydril</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gelatin&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">G9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating board</td>
			<td style="width:191px;">Lab-Line Instruments Inc.</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:355px;">Isolectin GS-IB4, 594 conjugate</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">I21413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Ketamine hydrochloride injection</td>
			<td style="width:191px;">KetaVed</td>
			<td style="width:156px;">NDC 50989-996-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Lrp5-/- mice</td>
			<td style="width:191px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:156px;">Stock NO. 005823</td>
			<td>Developed by Deltagen Inc., San Mateo, CA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Micron IV and OCT</td>
			<td style="width:191px;">Phoenix Research Labs</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td>Imaging software: InSight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Zeiss</td>
			<td style="width:156px;">discovery v8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microsurgery forceps</td>
			<td style="width:191px;">Scanlan International</td>
			<td style="width:156px;">4004-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microsurgery scissors</td>
			<td style="width:191px;">Scanlan International</td>
			<td style="width:156px;">6006-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Optimal cutting temperature compound</td>
			<td style="width:191px;">Tissue-Tek</td>
			<td style="width:156px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Optimal cutting temperature compound</td>
			<td style="width:191px;">Agar Scientific</td>
			<td style="width:156px;">AGR1180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td>Electron&#160;Microscopy&#160;Sciences</td>
			<td style="width:156px;">15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Peel-A-Way disposable embedding molds (tissue molds)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">12-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered saline (PBS) buffer (10X)</td>
			<td style="width:191px;">Teknova</td>
			<td style="width:156px;">P0496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Slide cover glass</td>
			<td style="width:191px;">Premiere</td>
			<td style="width:156px;">94-2222-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfrost microscope slides&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:156px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Xylazine sterile solution</td>
			<td style="width:191px;">Akorn: AnaSed</td>
			<td style="width:156px;">NDC: 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment and characterization of hyaloid vessels in mice

आंख में, भ्रूण hyaloid वाहिकाओं विकासशील लेंस और रेटिना पोषण और पीछे हटना जब रेटिना वाहिकाओं का विकास. hyaoid वाहिकाओं के लगातार या असफल प्रतिगमन लगातार hyperplastic प्राथमिक vitreous (PHPV) जैसे रोगों में देखा जा सकता है, एक बाधित प्रकाश पथ और बिगड़ा दृश्य समारोह के लिए अग्रणी. hyaoid पोत प्रतिगमन अंतर्निहित तंत्र को समझना संवहनी प्रतिगमन प्रक्रिया और संभावित नए तरीके लगातार hyaloid वाहिकाओं के साथ रोगों का प्रबंधन करने के लिए नए आणविक अंतर्दृष्टि के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. यहाँ हम ऑप्टिकल सामंजस्य टोमोग्राफी (OCT) और fundus fluorcein एंजियोग्राफी (FFA) और अलग और फ्लैट-माउंटिंग hyaloid ex vivo के लिए मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक विस्तृत तकनीकी प्रोटोकॉल के साथ लाइव चूहों में इमेजिंग hyaoid के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन. कम घनत्व लिपोप्रोटीन रिसेप्टर से संबंधित प्रोटीन 5 (LRP5) नॉकआउट चूहों लगातार hyaloid वाहिकाओं के एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया, तकनीक वर्णन करने के लिए. एक साथ, इन तकनीकों संवहनी प्रतिगमन के एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में hyaloid वाहिकाओं की एक पूरी तरह से मूल्यांकन की सुविधा हो सकती है और लगातार hyaloid वाहिकाओं के तंत्र पर अध्ययन.

लाइव चूहों में hyaoid वाहिकाओं के विवो इमेजिंग में चित्र 3 एक 3 महीने पुराने WT और Lrp5मेंरेटिना और hyaoid ऊतकों के लिए OCT छवियों के पार अनुभागीय विचारों का पता चलता है - चूहों, लगातार hya...

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Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice Video (Video) | JoVE

यह प्रोटोकॉल विवो और पूर्व विवो विधियों दोनों में पूरी तरह से कल्पना और hyaloid वाहिकाओं की विशेषता के लिए वर्णन करता है, माउस आंखों में संवहनी प्रतिगमन का एक मॉडल, ऑप्टिकल सामंजस्य टोमोग्राफी और फंडस फ्लोरेसीइन एंजियोग्राफी का उपयोग कर लाइव इमेजिंग और पूर्व vivo के लिए मात्रात्मक विश्लेषण के लिए hyaoid के अलगाव और बाद में फ्लैट माउंट.

चूहे में Hyaoid जहाजों का आकलन और विशेषता

In the eye, the embryonic hyaloid vessels nourish the developing lens and retina and regress when the retinal vessels develop. Persistent or failed ...

हमारा प्रोटोकॉल वैस्कुलर प्रतिगमन का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में आंख के भीतर हायलॉयड वेक्यूलेचर की कल्पना और विशेषता के लिए वीवो और पूर्व वीवो दोनों उपायों में प्रदान करता है। यह तकनीक जीवित चूहों और पूर्व वीवो विज़ुअलाइज़ेशन और विच्छेदित पूरे हाइलाइड जहाजों के सटीक मात्राकरण में हाइलाइड जहाजों के वीवो देशांतर अवलोकन दोनों में जोड़ती है। हमारी तकनीक रोगजनन और लगातार भ्रूण वाक्यूलेचर के बुनियादी तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक व्यावहारिक और व्यवहार्य विधि प्रदान करती है।यह विधि नेत्र संवहनी प्रतिगमन के नियमन में शामिल सेलुलर और आणविक तंत्र में भी अंतर्दृष्टि प्रदान करती है जो अन्य अंगों में एंजियोजेनेसिस अनुसंधान के लिए प्रासंगिक हो सकती है। हायलॉयड अलगाव कदम शुरुआती लोगों के लिए तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हो सकते हैं। अभ्यास और धैर्य के बहुत से एक सफल विच्छेदन सुनिश्चित करने में मदद मिलेगी ।इस विधि की कल्पना करने से उस तकनीक के बारे में विस्तृत जानकारी और सुझाव मिलेंगे जो दर्शकों को कौशल को अधिक कुशलता से महारत हासिल करने में सहायता कर सकते हैं। ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी या OCT इमेजिंग के लिए, माउस और जांच को समायोजित करें ताकि ऑप्टिकल तंत्रिका सिर फंडस छवि में दृश्य क्षेत्र के केंद्र में हो और छवियों को प्राप्त करने से पहले लगातार हायलॉयड जहाजों को प्रकट करने के लिए ऑक्टॉप इमेजिंग सॉफ्टवेयर में इंगित लाइन के फोकस और कोण को समायोजित करे। हाइलाइड जहाजों की फंडस फ्लोरोसेइन एंजियोग्राफी इमेजिंग के लिए, दृश्य क्षेत्र के केंद्र में ऑप्टिक तंत्रिका सिर को स्थिति में रखने के लिए संरेखण को थोड़ा समायोजित करें और माइक्रोस्कोप फिल्टर को हरे फ्लोरोसेंट चैनल में बदल दें।फिर लगातार हाइलॉयड जहाजों पर ध्यान केंद्रित करें और जहाजों को देखने के लिए सिग्नल-टू-बैकग्राउंड अनुपात के लिए सबसे अच्छा समय बिंदु निर्धारित करने के लिए एक, तीन, पांच और 10 मिनट के बाद कई छवियों को प्राप्त करें। पूर्व वीवो हायलॉयड पोत विच्छेदन और दृश्य के लिए माइक्रोसर्जरी संदंश का उपयोग एक प्रसवोत्तर दिन की पलकों को खोलने के लिए-आठ माउस और एक आंख की कक्षा में दुनिया के नीचे घुमावदार माइक्रोसर्जरी संदंश जगह आंखों की पुतली निचोड़ के बिना ऑप्टिक तंत्रिका समझ । धीरे से खींचो और संदंश के साथ आंखों की पुतली को हटा दें और कमरे के तापमान पर 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड में आंख को ठीक करें।30 मिनट के बाद एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत बर्फ ठंडा PBS के लिए तय आंखों हस्तांतरण और लिम्बस के आसपास चार अलग समान रूप से दूरी साइटों पर आंखों की पुतली के विट्रियस शरीर में जिलेटिन समाधान के ५० माइक्रोलीटर सुई । फिर विट्रियस स्पेस के भीतर इंजेक्ट किए गए जिलेटिन को जमना करने के लिए 30 मिनट तक बर्फ पर आंखों की पुतली को इनक्यूबेट करें। जब जिलेटिन ने आंखों की पुतली को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत पीबीएस की पेट्री डिश में स्थानांतरित कर दिया है और कॉर्निया को हटाने के लिए लिम्बस में चीरा लगाने के लिए माइक्रोसर्जरी कैंची का उपयोग करें।स्निप और विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत ऑप्टिक तंत्रिका को हटा दें। दो जोड़ी संदंश का उपयोग करना छील और स्क्लेरा, कोरॉयड और रेटिना वर्णक एपिथेलियम परतों को त्यागें, इसके बाद आईरिस को हटा दिया जाता है। रेटिना के ऑप्टिक तंत्रिका पक्ष के साथ ऊपर का सामना करना पड़ रहा है और लेंस नीचे का सामना करना पड़ रहा है, बस रेटिना कप के नीचे PBS के ५० माइक्रोलीटर सुई जिलेटिनीकृत विट्रियस शरीर और रेटिना के बीच PBS के संचय की अनुमति है ।रेटिना कप और सिलियरी बॉडी को विट्रेस बॉडी से धीरे-धीरे छीलने के लिए माइक्रोसर्जरी संदंश का इस्तेमाल करें। एक स्थानांतरण पिपेट का उपयोग करके पीबीएस में डूबे हाइलॉयड ऊतक से युक्त जिलेटिन कप को माइक्रोस्कोप स्लाइड में स्थानांतरित करें। और शेष ऊतकों को चालू करें ताकि लेंस का सामना करना पड़े।इसके बाद लेंस को उठाएं और लेंस ट्यूनिका वास्कुलोसा लेंटिस को हटाने के लिए माइक्रोसर्जरी कैंची के साथ हाइलॉयड धमनी को काटने से पहले लेंस ट्यूनिका वास्कुलोसा लेंटिस और वासा हाइलोइडिया प्रोप्रिया के बीच संबंध को धीरे-धीरे ढीला करें। फ्लैट माउंट के लिए हाइलाइड कप के वासा हायलोइडिया प्रोप्रिया क्षेत्र रखें। हायलॉयड पोत नमूनों के फ्लैट बढ़ते के लिए धीरे ताजा PBS के साथ hyaloid कप कुल्ला किसी भी विच्छेदन मलबे को दूर करने के लिए ।पीबीएस में तैरते ऊतक के साथ माइक्रोसर्जरी संदंश का उपयोग धीरे से व्यवस्था और जिलेटिनीकृत हायलॉयड कप की स्थिति को समायोजित करने के लिए इतना है कि कप के रिम नीचे का सामना करना पड़ रहा है । 37 डिग्री सेल्सियस पर एक स्लाइड गर्म पर पीबीएस में डूबे हाइलॉयड कप के साथ स्लाइड रखें। जिलेटिन पिघलने के बाद और हायलॉयड फ्लैट्स स्लाइड को हटा देते हैं जब यह मुश्किल से सूखा होता है और हायलॉयड जहाजों में नाभिक को दाग देने के लिए DAPI के साथ एंटी-फीका बढ़ते माध्यम की एक बूंद जोड़ता है।फिर धीरे-धीरे फ्लैट माउंट को पूरा करने के लिए हाइलॉइड पर एक कवरलिप रखें। हाइलाइड जहाजों के डीएपीआई धुंधला छवि के लिए एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के चरण पर घुड़सवार नमूना हस्तांतरण और पुष्टि करते है कि केंद्रीय hyaloid धमनी दिखाई दे रहा है । फिर सीधे हाइलॉयड धमनी से प्राप्त पोत शाखाओं की पहचान करें और मात्राकरण के लिए पोत शाखाओं की संख्या को मैन्युअल रूप से गिनें।यहां, तीन महीने पुराने जंगली प्रकार और कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर से संबंधित प्रोटीन पांच या LRP5 नॉकआउट चूहों, लगातार हायलॉयड जहाजों के साथ एक पशु मॉडल में रेटिना और हायलॉयड ऊतकों के लिए अक्टूबर छवियों के क्रॉस-सेक्शनल दृश्य दिखाए जाते हैं । इन फंडस फ्लोरोसेइन एंजियोग्राफी में लगातार हायलॉयड जहाजों की छवियां हाइलॉयड जहाजों की आठ शाखाएं छह सप्ताह पुराने नॉकआउट चूहों के विट्रियस शरीर में देखी जाती हैं जबकि एक ही उम्र के जंगली प्रकार के जानवरों में हाइलाइड जहाजों का कोई अवशेष नहीं देखा जाता है । इन हाइलाइड पोत फ्लैट में संवहनी कोशिकाओं और संबद्ध मैक्रोफेज को उनके परमाणु DAPI धुंधला द्वारा पहचाना जा सकता है।और केंद्रीय हायलॉयड धमनी से शाखाओं में बंटी कोशिकाओं की प्रत्येक पंक्ति वासा हायलोइडिया प्रोपरिया के एक पोत का प्रतिनिधित्व करती है। जंगली प्रकार के चूहों में प्रसवोत्तर दिन आठ में हाइलाइड जहाजों की औसतन 12 शाखाएं होती हैं, जबकि उम्र से मेल खाने वाले एलआरपी 5 नॉकआउट पिल्ले हायलॉयड वेक्यूलेचर के काफी बिगड़ा प्रतिगमन का प्रदर्शन करते हैं। इसके अलावा, एलआरपी 5 नॉकआउट पिल्ले में देरी और अधूरा रेटिना संवहनी विकास भी देखा जाता है।दरअसल, हायलॉयड जहाजों अभी भी आठ दिन बाद में LRP5 नॉकआउट नेत्र ऊतक वर्गों के पार वर्गों में पहचान की जा सकती है । जबकि जंगली प्रकार की आंखें अब इन जहाजों को प्रदर्शित नहीं करती हैं। याद रखने के लिए सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि रेटिना और अन्य नेत्र ऊतकों से हायलॉयड सिस्टम को अलग करते समय कोमल और रोगी होना चाहिए।हाइलॉयड रेजीडेंसी को विनियमित करने वाले सेलुलर इंटरैक्शन को उजागर करने के लिए विभिन्न सेल मार्कर के साथ इम्यूनोदाता हाइलाइड जहाजों को अलग करने के बाद किया जा सकता है। यह तकनीक नेत्र एंजियोजेनेसिस अनुसंधान में लगातार भ्रूण संवहनी के अंतर्निहित सेलुलर और आणविक तंत्र की पड़ताल करती है। पैराफॉर्मलडिहाइड, केटामाइन और जाइलाज़ीन खतरनाक हैं।कृपया उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरणों का उपयोग करके इन अभिकर्मकों को रासायनिक धुएं के हुड में तैयार करें।

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test Video (Video) | JoVE

खाली पेट के गैर मोटे मधुमेह का उपयोग कर एक चूहे में मूल्यांकन [<sup13&gt;</sup&gt; सी] octanoic एसिड सांस परीक्षण

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice

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चूहे में सही दिल की Echocardiographic आकलन

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice Video (Video) | JoVE

चूहे में Taxanes के फार्माकोकाइनेटिक और pharmacodynamic विश्लेषण के लिए मन्या धमनी आधान

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography Video (Video) | JoVE

माइक्रो-गणना टोमोग्राफी के साथ नग्न चूहों में मानव फैट इंजेक्शन की व्यवहार्यता का आकलन

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice Video (Video) | JoVE

चूहे में दबाव अधिभार मॉडल का उपयोग कर कोरोनरी धमनी फ्लो और कोरोनरी फ्लो रिजर्व के अल्ट्रासाउंड आधारित मूल्यांकन

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice Video (Video) | JoVE

एचोकर्दिओग्रफिक के प्रयास और चूहे में वाल्वुलर हृदय रोग की व्यापक प्ररूपी विशेषता के लिए प्रोटोकॉल

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

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डबल चैंबर Plethysmography द्वारा जागरूक चूहों में श्वसन समारोह का मूल्यांकन

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

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चूहों में Dorsiflexor मांसपेशी समारोह के गैर इनवेसिव आकलन

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

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हाइपोक्सिया/SU5416 मॉडल का उपयोग कर चूहों में फेफड़े के उच्च रक्तचाप का प्रेरण और लक्षण वर्णन

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

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चूहे में सही वेंट्रिकुलर सिस्टम और हाइपोक्सिया-प्रेरित पल्मोनरी धमनी उच्च रक्तचाप के लिए आक्रामक हेमोडायनामिक आकलन

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...