Name: assessment and characterization of hyaloid vessels in mice
Uploaded: 2019-05-15T13:30:00
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Este trabalho foi apoiado pelos institutos nacionais de saúde (NIH) subvenções (R01 EY024963 e EY028100) para J.C. Z.W. foi apoiado por um Knights Templar Eye Foundation carreira Starter Grant. O procedimento de isolamento hialóide descrito neste estudo foi adaptado com modificação de protocolos generosamente compartilhados pelos Drs. Richard Lang, Toshihide Kurihara, e Lois Smith, a quem os autores são gratos.

Todos os animais foram tratados de acordo com a declaração de associação para pesquisa em visão e oftalmologia (ARVO) para o uso de animais em pesquisa oftalmológica e de visão para experimentos com animais, seguindo as diretrizes dos institutos nacionais de saúde ( NIH) em relação ao cuidado e uso de animais para procedimentos experimentais e os regulamentos estabelecidos pelo Comitê institucional de cuidado e uso de animais (IACUC) no hospital infantil de Boston. Lrp5-/- camundongos (est...

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	<li>Lutty, G. A., McLeod, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+hyaloid,+choroidal+and+retinal+vasculatures+in+the+fetal+human+eye.">Development of the hyaloid, choroidal and retinal vasculatures in the fetal human eye.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 62, 58-76 (2018).</li><li>Anand-Apte, B., Hollyfield, J., Besharse, J., Bok, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+anatomy+of+the+retinal+and+choroidal+vasculature.">Developmental anatomy of the retinal and choroidal vasculature.</a> The Retina and its Disorders. , (2011).</li><li>Hobbs, R. P., Hartnett, M. E., Hartnett, M. 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Técnicas para avaliar e caracterizar vasos hialóides são procedimentos intuitivos e necessários para observar a regressão dos vasos hialóides em modelos animais, para permitir estudos sobre os mecanismos subjacentes à regressão vascular durante o desenvolvimento. Enquanto a imagem latente in vivo da retina permite a observação longitudinal da regressão hialóide no mesmo animal, o acesso a um sistema de imagem de fundo de roedores para OCT e FFA pode ser um fator limitante. Além, in vivo a imagem latente em r...

O suprimento sanguíneo no olho é essencial para garantir o desenvolvimento normal da retina e dos tecidos oculares circundantes e para equipar uma função visual adequada. Há três camas vasculares no olho: o vasculature retinal, o choroid, e uma rede circulatória embrionário transiente de embarcações hialóide. O desenvolvimento da vasculatura ocular requer coordenação espacial e temporal em toda a embriogênese e maturação tecidual. Entre as três camas vasculares, a vasculatura hialóide é o primeiro sistema de suprimento de sangue funcional para fornecer nutrição e oxigênio para a lente embrionária recém-formada e a retina em desenvolvimento. As embarcações de hyaloid regredir ao mesmo tempo que os vasculatures do retina desenvolvem e amadurecem1. A regressão da vasculatura hialóide é fundamental para permitir uma via Visual clara para o desenvolvimento da função Visual; Portanto, este processo de regressão vascular é tão importante quanto o crescimento da vasculatura retiniana. A regressão hialóide prejudicada pode levar a doenças oculares. Além disso, a regressão dos vasos hialóides fornece um sistema modelo para investigar os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na regulação da regressão vascular, o que pode ter implicações para a regulação angiogênica em outros órgãos também.
A vasculatura hialóide, derivada da artéria hialóide (ha), é composta por Vasa hyaloidea própria (VHP), Tunica lentis do cristalino (TVL) e membrana pupilar (PM). Fornece a nutrição à retina tornando-se, ao vitreous preliminar, e à lente durante o desenvolvimento embrionário2. Decorrente do HA, VHP ramifica-se anteriormente através do vítreo para a lente. Os copos TVL a superfície posterior da cápsula da lente, e anastomoses para o PM, que se conecta às artérias ciliares anteriores, cobrindo a superfície anterior da lente2,3, resultando na formação de uma rede de vasos no PM 3. º , 4. º , 5. Curiosamente, não há veias na vasculatura hialóide, e o sistema faz uso de veias choroidais para realizar a drenagem venosa.
No embrião humano, a vasculatura hialóide está quase completa em aproximadamente a nona semana de gestação e começa a regredar quando os primeiros vasos retinianos aparecem, durante o quarto mês de gestação2. Começando com a atrofia do VHP, a regressão das redes capilares do TVL, o PM, e finalmente, o ha ocorre subseqüentemente2,3. Entretanto, as retrações vítreo preliminares e o vítreo secundário começam a dar forma, compor dos componentes extracelular da matriz, incluindo fibras do colagénio. Pelo sexto mês da gestação, o vítreo preliminar é reduzido a um canal transparente pequeno que estende do disco do nervo ótico à lente, chamado o canal de Cloquet ou o canal hialóide, e o vítreo secundário transforma-se o componente principal do segmento do posterior 2. º , a circulação 3. The hialóide desaparece na maior parte em 35 a 36 semanas da gestação, apenas antes do nascimento3.
Ao contrário dos seres humanos, em quem o vasculatura hialóide é regressed completamente no nascimento, o sistema vascular hialóide do rato começa regres após o nascimento. À medida que a retina do camundongo nasce vasos avascular e retinianos desenvolvem-se postnatalmente, os vasos hialóides regredir concomitantemente do dia pós-natal (P) 4 e são, na sua maioria, completamente regredido por P216 (Figura 1). O PM desaparece primeiramente entre P10 e P12, e o VHP desaparece entre P12 e P16, quando um número pequeno de pilhas de TVL e de ha remanescer mesmo em P16, e por P21 a regressão vascular hialóide do sistema é quase completa6. Entretanto, a vasculatura retiniana começa a se desenvolver após o nascimento. A camada superficial do plexo vascular estende-se totalmente à retina periférica em P7 – P8, a camada profunda (localizada na camada plexiforme externa) se desenvolve a partir de P7 – P12 e, finalmente, o plexo intermediário na camada plexiforme interna se desenvolve entre P12 e P157 . Como a vasculatura da retina se desenvolve, ele gradualmente substitui a função de concomitantemente regressando vasos hialóides, proporcionando nutrição e oxigênio para o olho em desenvolvimento. A ocorrência pós-natal de regressão de vasos hialóides em camundongos fornece um modelo experimental de fácil acesso para observar e estudar a vasculatura hialóide, bem como a base molecular que rege os processos de regressão vascular ambos os fisiológicos e condições patológicas8.
A falha da regressão hialóide pode ser considerada nas doenças tais como o phpv, que é uma anomalia desenvolvente congenital rara do olho resultando de uma regressão falhada ou incompleta do vasculatura embriológico, preliminar vítreo e hialóide9. Os mecanismos que regulam o processo de regressão da vasculatura hialóide são complicados e amplamente estudados. Uma das principais vias moleculares essenciais para a regressão normal dos vasos hialóides é a via de sinalização WNT10, pois mutações genéticas nesta via que afetam tanto o ligante WNT quanto os receptores têm sido ligadas ao phpv em humanos9. Estudos experimentais identificaram um ligante de WNT, Wnt7b, que é produzido por macrófagos em torno de vasos hialóides no olho em desenvolvimento para mediar esse processo de regressão. Wnt7b ativa a sinalização de WNT ligando-se aos receptores frizzled4 (FZD4)/LRP5 nas células endoteliais adjacentes para iniciar a apoptose celular, levando à regressão dos vasos hialóides10. Em conseqüência, os ratos Wnt7b-deficientes mostram uma persistência de embarcações hialóide10. Similarmente, um ligante não convencional de WNT, Norrin (codificado pelo gene de NDP ), igualmente liga-se a FZD4/LRP5 para induzir a regressão hialóide da embarcação durante o desenvolvimento. NDPy/-, Lrp5-/-, e Fzd4-/- ratos todos exibem regressão de vasos hialóides adiados, apoiando um papel regulatório crítico da sinalização WNT11,12, 13,14,15,16. Além disso, um outro co-receptor de WNT LRP6 sobrepõe com o LRP5 em sua função em modular a via de sinalização de WNT em pilhas endothelial vasculares hialoid17. Outros fatores que podem também contribuir para a regressão hialóide incluem o fator inducible hipóxia18,19, fator de crescimento endotelial vascular20,21, colágeno-1822, 23, ARF24, angiopoietina-225e Proteína morfogenética óssea-426. Neste trabalho, utilizamos camundongos Lrp5-/- como modelo de vasos hialóides persistentes para demonstrar as técnicas de avaliação e caracterização da vasculatura hialóide através de métodos in vivo e ex vivo.
A visualização da vasculatura hialóide in vivo e ex vivo é essencial para o estudo dos mecanismos de regressão de vasos hialóides. Os métodos atuais para observar a vasculatura hialóide concentram-se principalmente na visualização e análise do VHP e HA, através de imagens de OCT e FFA, seções transversais oculares e a montagem plana hialóide. OCT e FFA são poderosas ferramentas de imagem in vivo, permitindo a observação longitudinal em animais vivos depois de terem aberto os olhos. Além disso, a montagem lisa hialóide isolada fornece o visualização do vasculatura hialóide inteiro e de um meio para conseguir uma quantificação exata dos números da embarcação. No entanto, a natureza delicada e frágil dos vasos hialóides e as dificuldades técnicas resultantes do seu isolamento podem ter limitado o seu uso na pesquisa ocular um pouco10,17,27. Neste artigo, nós fornecemos um protocolo detalhado da visualização de vasos hialóides, combinando tanto in vivo imagens retinianas vivos e ex vivo isolado hialoide plano de montagem para melhorar a viabilidade dessas técnicas. Este protocolo foi adaptado com modificação e expansão de publicações anteriores sobre o método in vivo de fundo vivo e OCT28 e o método ex vivo de montagem plana hialóide isolada11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:997px;" width="998">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">AK-Fluor (fluorescein injection, USP)</td>
			<td style="width:191px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">17478-253-10</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Anti-CD31 antibody</td>
			<td style="width:191px;">Abcam</td>
			<td style="width:156px;">ab28364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Antifade mounting medium</td>
			<td style="width:191px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:156px;">S2828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:156px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Artificial tear eyedrop</td>
			<td style="width:191px;">Systane</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">C57BL/6J mice</td>
			<td style="width:191px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:156px;">Stock NO: 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Cryostat</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:156px;">CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Cryostat</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:156px;">CM3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Cyclopentolate hydrochloride and phenylephrine hydrochloride eyedrop</td>
			<td>Cyclomydril</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gelatin&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">G9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating board</td>
			<td style="width:191px;">Lab-Line Instruments Inc.</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:355px;">Isolectin GS-IB4, 594 conjugate</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">I21413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Ketamine hydrochloride injection</td>
			<td style="width:191px;">KetaVed</td>
			<td style="width:156px;">NDC 50989-996-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Lrp5-/- mice</td>
			<td style="width:191px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:156px;">Stock NO. 005823</td>
			<td>Developed by Deltagen Inc., San Mateo, CA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Micron IV and OCT</td>
			<td style="width:191px;">Phoenix Research Labs</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td>Imaging software: InSight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Zeiss</td>
			<td style="width:156px;">discovery v8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microsurgery forceps</td>
			<td style="width:191px;">Scanlan International</td>
			<td style="width:156px;">4004-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microsurgery scissors</td>
			<td style="width:191px;">Scanlan International</td>
			<td style="width:156px;">6006-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Optimal cutting temperature compound</td>
			<td style="width:191px;">Tissue-Tek</td>
			<td style="width:156px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Optimal cutting temperature compound</td>
			<td style="width:191px;">Agar Scientific</td>
			<td style="width:156px;">AGR1180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td>Electron&#160;Microscopy&#160;Sciences</td>
			<td style="width:156px;">15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Peel-A-Way disposable embedding molds (tissue molds)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">12-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered saline (PBS) buffer (10X)</td>
			<td style="width:191px;">Teknova</td>
			<td style="width:156px;">P0496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Slide cover glass</td>
			<td style="width:191px;">Premiere</td>
			<td style="width:156px;">94-2222-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfrost microscope slides&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:156px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Xylazine sterile solution</td>
			<td style="width:191px;">Akorn: AnaSed</td>
			<td style="width:156px;">NDC: 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment and characterization of hyaloid vessels in mice

No olho, os vasos hialóides embrionários nutrem a lente e a retina em desenvolvimento e regredir quando os vasos retinianos se desenvolvem. A regressão persistente ou falhada de embarcações hialóide pode ser considerada nas doenças tais como o vítreo preliminar hyperplastic persistente (phpv), conduzindo a um trajeto claro obstruído e a uma função visual danificada. Compreender os mecanismos subjacentes à regressão do vaso hialóide pode levar a novas percepções moleculares sobre o processo de regressão vascular e novas formas potenciais de administrar doenças com vasos hialóides persistentes. Aqui nós descrevemos os procedimentos para a imagem latente hialóide em ratos vivos com tomography ótico da coerência (OCT) e a angiografia da fluoresceína do fundo (FFA) e um protocolo técnico detalhado de isolar e de montar liso hialoid ex vivo para a análise quantitativa. Os camundongos Knockout de proteína 5 (LRP5) da lipoproteína de baixa densidade foram utilizados como modelo experimental de vasos hialóides persistentes, para ilustrar as técnicas. Juntas, essas técnicas podem facilitar uma avaliação minuciosa dos vasos hialóides como modelo experimental de regressão vascular e estudos sobre o mecanismo de vasos hialóides persistentes.

Imagens in vivo de vasos hialóides em camundongos vivos Figura 3 A revela visões transversais de imagens de OCT para a retina e tecidos hialóides em 3 meses de idade WT e Lrp5-/-camundongos, um modelo animal com hialoide persistente. O olho do WT mostra a ausência de tecido hialóide, enquanto que o Lrp5-/-Eye mostra dois vasos hialóides persistentes derivados da cabeça do nervo óptico. F...

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Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice Video (Video) | JoVE

Este protocolo descreve os métodos in vivo e ex vivo para visualizar e caracterizar plenamente os vasos hialóides, um modelo de regressão vascular em olhos de rato, usando tomografia de coerência óptica e angiografia por fluoresceina de fundo para a imagem ao vivo e ex vivo isolamento e posterior montagem plana de hialóide para análise quantitativa.

Avaliação e caracterização de vasos Hialóides em camundongos

In the eye, the embryonic hyaloid vessels nourish the developing lens and retina and regress when the retinal vessels develop. Persistent or failed ...

Nosso protocolo fornece medidas in vivo e ex vivo para visualizar e caracterizar a vasculatura hialoide dentro do olho como um modelo experimental útil para estudar a regressão vascular. Esta técnica combina tanto a observação longitudinal in vivo de vasos hialoides em camundongos vivos e visualização ex vivo e quantificação precisa de vasos hialoides inteiros dissecados. Nossa técnica fornece um método prático e viável para estudar a patogênese e mecanismos básicos de vasculatura fetal persistente.Este método também fornece insights sobre mecanismos celulares e moleculares envolvidos na regulação da regressão vascular ocular que pode ser relevante para a pesquisa de angiogênese em outros órgãos. Os passos de isolamento hialoide podem ser tecnicamente desafiadores para iniciantes. Muita prática e paciência ajudarão a garantir uma dissecção bem sucedida.A visualização deste método fornecerá informações práticas detalhadas e dicas sobre a técnica que podem auxiliar os espectadores a dominar as habilidades de forma mais eficiente. Para tomografia óptica de coerência ou imagem OCT, ajuste o mouse e a sonda para que a cabeça nervosa óptica esteja no centro do campo visual na imagem fundus e ajuste o foco e o ângulo da linha indicada no software de imagem OCT para revelar os vasos hialoides persistentes antes de obter imagens. Para a angiografia de fundus fluoresceína dos vasos hialoides, ajuste o alinhamento ligeiramente para posicionar a cabeça do nervo óptico no centro do campo de visão e altere o filtro do microscópio para um canal fluorescente verde.Em seguida, concentre-se nos vasos hialoides persistentes e obtenha múltiplas imagens em uma, três, cinco e 10 minutos de pós-injeção para determinar o melhor ponto de tempo para a relação sinal-fundo para observar os vasos. Para dissecção e visualização de vasos hialoides ex vivo usam fórceps de microcirurgia para abrir as pálpebras de um rato pós-natal de oito dias e colocar fórceps de microcirurgia curva sob o globo na órbita de um olho para agarrar o nervo óptico sem apertar o globo ocular. Puxe suavemente e remova o globo ocular com fórceps e fixe o olho em 4% de paraformaldeído à temperatura ambiente.Após 30 minutos, transfira os globos oculares fixos para PBS gelado sob um microscópio de dissecção e injete 50 microlitros de solução de gelatina no corpo vítreo do globo ocular em quatro locais espaçados uniformemente diferentes ao redor do limbus. Em seguida, incubar o globo ocular no gelo por 30 minutos para solidificar a gelatina injetada dentro do espaço vítreo. Quando a gelatina tiver curado transfira o globo ocular para uma placa de Petri de PBS sob o microscópio dissecando e use uma tesoura de microcirurgia para fazer uma incisão no limbus para remover a córnea.Corte e remova o nervo óptico sob o microscópio dissecando. Utilizando dois pares de fórceps descascam e descartam as camadas de esclera, coroide e pigmento da retina, seguidas pela remoção da íris. Com o lado nervoso óptico da retina voltado para cima e as lentes viradas para baixo, injete 50 microliters de PBS logo abaixo do copo de retina para permitir o acúmulo do PBS entre o corpo vítreo gelatinizado e a retina.Use fórceps de microcirurgia para descascar suavemente o copo de retina e o corpo ciliar do corpo vítreo. Usando uma tubulação de transferência, transfira o copo de gelatina contendo o tecido hialoide imerso em PBS para um slide de microscópio. E vire os tecidos restantes para que a lente fique virada para cima.Em seguida, levante a lente e solte suavemente a conexão entre a lente tunica vasculosa lentis e a vasa hyaloidea propria antes de cortar a artéria hialoide com a tesoura de microcirurgia para remover a lente tunica vasculosa lentis. Mantenha a região vasa hyaloidea propria do copo hialoide para a montagem plana. Para a montagem plana das amostras do vaso hialoide, enxágue suavemente o copo hialoide com PBS fresco para remover quaisquer detritos de dissecção.Com o tecido flutuando em PBS use fórceps de microcirurgia para organizar suavemente e ajustar a posição do copo hialoide gelatinizado para que a borda do copo esteja virada para baixo. Coloque o slide com o copo de hialoide imerso em PBS em um aquecedor de slides a 37 graus Celsius. Depois que a gelatina derreter e o hialoide achatar remover o slide quando ele mal está seco e adicionar uma gota de meio de montagem anti-fade com DAPI para manchar os núcleos nos vasos hialoides.Em seguida, coloque suavemente uma mancha de cobertura no hialoide para completar a montagem plana. Para imaginar a coloração da DAPI dos vasos hialoides, transfira a amostra montada para o estágio de um microscópio fluorescente e confirme que a artéria hialoide central é visível. Em seguida, identifique os ramos do vaso diretamente derivados da artéria hialoide e conte manualmente o número de ramos de vasos para quantificação.Aqui, são mostradas vistas transversais das imagens de OCT para os tecidos de retina e hialoides em tipo selvagem de três meses de idade e proteína relacionada ao receptor de lipoproteína de baixa densidade cinco ou camundongos de nocaute LRP5, um modelo animal com vasos hialoides persistentes. Nestas imagens de angiografia de fluoresceína fundus de vasos hialoides persistentes oito ramos de vasos hialoides são observados no corpo vítreo de camundongos eliminatórios de seis semanas de idade, enquanto nenhum remanescente dos vasos hialoides é observado em animais do tipo selvagem da mesma idade. Nestes vasos hialoides, os suportes planos das células vasculares e dos macrófagos associados podem ser identificados por sua coloração nuclear da DAPI.E cada linha de células ramificadas da artéria hialoide central representa um vaso de vasa hyaloidea propria. Ratos do tipo selvagem têm uma média de 12 ramos de vasos hialoides no oitavo dia pós-natal, enquanto filhotes de nocaute LRP5 com idade exibem cerca de 25 ramos de vasos hialoides demonstrando uma regressão significativamente prejudicada da vasculatura hialoide. Além disso, o desenvolvimento vascular de retina retardada e incompleto também é observado em filhotes de nocaute LRP5.De fato, os vasos hialoides ainda podem ser identificados em seções transversais de seções de tecido ocular nocaute LRP5 no oitavo dia. Considerando que os olhos do tipo selvagem não exibem mais esses vasos. A coisa mais importante a se lembrar é ser gentil e paciente ao isolar o sistema hialoide da retina e outros tecidos oculares.Depois de isolar os vasos hialoides imunossundo com diferentes marcadores celulares podem ser realizados para descobrir as interações celulares que regulam a regressão hialoide. Esta técnica explora os mecanismos celulares e moleculares subjacentes da vasculatura fetal persistente na pesquisa de angiogênese ocular. Paraformaldeído, cetamina e xilazina são perigosos.Por favor, prepare estes reagentes em um capô de fumaça química usando o equipamento de proteção pessoal adequado.

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test Video (Video) | JoVE

Estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanóico teste de respiração Ácido

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Medicina

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Avaliação ecocardiográfica do coração direito em Ratos

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Infusões artéria carótida para farmacocinéticas e farmacodinâmicas Análise de taxanos em Ratos

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

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Avaliação da viabilidade de gordura humana injecção em ratinhos nu com Micro-Tomografia Computadorizada

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

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Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

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Abordagens ecocardiograma e protocolos de Comprehensive Caracterização fenotípica de doença cardíaca valvular em ratos

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Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

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Avaliação da função respiratória em ratos conscientes por pletismografia dobro-câmara

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

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Avaliação não-invasiva da função de músculos levantadores em ratos

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

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Indução e Caracterização da Hipertensão Pulmonar em Camundongos usando o Modelo De Hypoxia/SU5416

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice Video (Video) | JoVE

Avaliação Hemodinâmica Invasiva para o Sistema Ventricular Direito e hipertensão arterial pulmonar induzida por hipóxia em camundongos

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...