Name: assessment and characterization of hyaloid vessels in mice
Uploaded: 2019-05-15T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice at JoVE.com

Bu çalışma, National Institutes of Health (NıH) hibe (R01 EY024963 ve EY028100) için JC Z.W. tarafından desteklenen bir Knights Templar göz Vakfı kariyer Starter Grant tarafından desteklenmektedir. Bu çalışmada açıklanan hyaloid yalıtım prosedürü, yazarların minnettar olduğu DRS. Richard Lang, Toshihide Kurihara ve Lois Smith tarafından cömertçe paylaşılan protokollerden değişiklik ile adapte edildi.

Tüm hayvanlar, Ulusal Sağlık Enstitüleri 'nin yönergelerine uygun olarak, hayvan deneyleri için oftalmik ve vizyon araştırmalarında hayvanların kullanımı için vizyon ve Oftalmoloji Araştırma Derneği (ARVO) beyanı uyarınca tedavi edildi ( NıH), Boston Çocuk Hastanesi 'nde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıanuc) tarafından belirlenen düzenlemeler ve deneysel prosedürler için hayvanların bakımı ve kullanımı ile ilgili. Lrp5-/- fareler (stok No. 005823; Jackso...

<ol>
	<li>Lutty, G. A., McLeod, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+hyaloid,+choroidal+and+retinal+vasculatures+in+the+fetal+human+eye.">Development of the hyaloid, choroidal and retinal vasculatures in the fetal human eye.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 62, 58-76 (2018).</li><li>Anand-Apte, B., Hollyfield, J., Besharse, J., Bok, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+anatomy+of+the+retinal+and+choroidal+vasculature.">Developmental anatomy of the retinal and choroidal vasculature.</a> The Retina and its Disorders. , (2011).</li><li>Hobbs, R. P., Hartnett, M. E., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+2:+The+hyaloidal+vasculature+and+its+role+in+development.">Chapter 2: The hyaloidal vasculature and its role in development.</a> Pediatric Retina: Second Edition. , (2013).</li><li>Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+retinal+vasculature.">Development of the retinal vasculature.</a> Angiogenesis. 10 (2), 77-88 (2007).</li><li>Saint-Geniez, M., D'Amore, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+pathology+of+the+hyaloid,+choroidal+and+retinal+vasculature.">Development and pathology of the hyaloid, choroidal and retinal vasculature.</a> The International Journal of Developmental Biology. 48 (8-9), 1045-1058 (2004).</li><li>Ito, M., Yoshioka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regression+of+the+hyaloid+vessels+and+pupillary+membrane+of+the+mouse.">Regression of the hyaloid vessels and pupillary membrane of the mouse.</a> Anatomy and Embryology. 200 (4), 403-411 (1999).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>Liu, C. H., Wang, Z., Sun, Y., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ocular+angiogenesis:+from+development+to+pathologies.">Animal models of ocular angiogenesis: from development to pathologies.</a> FASEB Journal. 31 (11), 4665-4681 (2017).</li><li>Shastry, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+hyperplastic+primary+vitreous:+congenital+malformation+of+the+eye.">Persistent hyperplastic primary vitreous: congenital malformation of the eye.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 37 (9), 884-890 (2009).</li><li>Lobov, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WNT7b+mediates+macrophage-induced+programmed+cell+death+in+patterning+of+the+vasculature.">WNT7b mediates macrophage-induced programmed cell death in patterning of the vasculature.</a> Nature. 437 (7057), 417-421 (2005).</li><li>Kato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cbfa1-independent+decrease+in+osteoblast+proliferation,+osteopenia,+and+persistent+embryonic+eye+vascularization+in+mice+deficient+in+Lrp5,+a+Wnt+coreceptor.">Cbfa1-independent decrease in osteoblast proliferation, osteopenia, and persistent embryonic eye vascularization in mice deficient in Lrp5, a Wnt coreceptor.</a> The Journal of Cell Biology. 157 (2), 303-314 (2002).</li><li>Xia, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+familial+exudative+vitreoretinopathy+caused+by+LPR5+mutations.">A model for familial exudative vitreoretinopathy caused by LPR5 mutations.</a> Human Molecular Genetics. 17 (11), 1605-1612 (2008).</li><li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+development+in+the+retina+and+inner+ear:+control+by+Norrin+and+Frizzled-4,+a+high-affinity+ligand-receptor+pair.">Vascular development in the retina and inner ear: control by Norrin and Frizzled-4, a high-affinity ligand-receptor pair.</a> Cell. 116 (6), 883-895 (2004).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norrin,+frizzled-4,+and+Lrp5+signaling+in+endothelial+cells+controls+a+genetic+program+for+retinal+vascularization.">Norrin, frizzled-4, and Lrp5 signaling in endothelial cells controls a genetic program for retinal vascularization.</a> Cell. 139 (2), 285-298 (2009).</li><li>Ohlmann, A. V., Adamek, E., Ohlmann, A., Lutjen-Drecoll, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norrie+gene+product+is+necessary+for+regression+of+hyaloid+vessels.">Norrie gene product is necessary for regression of hyaloid vessels.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (7), 2384-2390 (2004).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+expression+of+Wnt-pathway+mediated+genes+in+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+5+(Lrp5)+knockout+mice.">Retinal expression of Wnt-pathway mediated genes in low-density lipoprotein receptor-related protein 5 (Lrp5) knockout mice.</a> PLoS One. 7 (1), 30203 (2012).</li><li>Nayak, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+vascular+regression+is+regulated+by+a+Wnt/beta-catenin,+MYC+and+CDKN1A+pathway+that+controls+cell+proliferation+and+cell+death.">Developmental vascular regression is regulated by a Wnt/beta-catenin, MYC and CDKN1A pathway that controls cell proliferation and cell death.</a> Development. 145 (12), (2018).</li><li>Kurihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+pVHL+and+HIF-alpha+isoforms+are+required+for+embryonic-to-adult+vascular+transition+in+the+eye.">Astrocyte pVHL and HIF-alpha isoforms are required for embryonic-to-adult vascular transition in the eye.</a> The Journal of Cell Biology. 195 (4), 689-701 (2011).</li><li>Huang, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+HIF-1alpha+partially+rescues+the+abnormal+hyaloid+vascular+system+in+Cited2+conditional+knockout+mouse+eyes.">Deletion of HIF-1alpha partially rescues the abnormal hyaloid vascular system in Cited2 conditional knockout mouse eyes.</a> Molecular Vision. 18, 1260-1270 (2012).</li><li>Yoshikawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regression+of+hyaloid+vasculature+is+triggered+by+neurons.">Developmental regression of hyaloid vasculature is triggered by neurons.</a> The Journal of Experimental Medicine. 213 (7), 1175-1183 (2016).</li><li>Garcia, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+VEGF-A+in+lens+development:+formation+of+the+hyaloid+capillary+network+and+protection+against+transient+nuclear+cataracts.">The function of VEGF-A in lens development: formation of the hyaloid capillary network and protection against transient nuclear cataracts.</a> Experimental Eye Research. 88 (2), 270-276 (2009).</li><li>Hurskainen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+maturation+of+the+retinal+vasculature+in+type+XVIII+collagen/endostatin+deficient+mice+and+changes+in+retinal+glial+cells+due+to+lack+of+collagen+types+XV+and+XVIII.">Abnormal maturation of the retinal vasculature in type XVIII collagen/endostatin deficient mice and changes in retinal glial cells due to lack of collagen types XV and XVIII.</a> FASEB journal. 19 (11), 1564-1566 (2005).</li><li>Fukai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+collagen+XVIII/endostatin+results+in+eye+abnormalities.">Lack of collagen XVIII/endostatin results in eye abnormalities.</a> The EMBO Journal. 21 (7), 1535-1544 (2002).</li><li>McKeller, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Arf+tumor+suppressor+gene+promotes+hyaloid+vascular+regression+during+mouse+eye+development.">The Arf tumor suppressor gene promotes hyaloid vascular regression during mouse eye development.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (6), 3848-3853 (2002).</li><li>Hackett, S. F., Wiegand, S., Yancopoulos, G., Campochiaro, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiopoietin-2+plays+an+important+role+in+retinal+angiogenesis.">Angiopoietin-2 plays an important role in retinal angiogenesis.</a> Journal of Cellular Physiology. 192 (2), 182-187 (2002).</li><li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficient+Bmp4+ocular+phenotypes+include+anterior+segment+dysgenesis+with+elevated+intraocular+pressure.">Haploinsufficient Bmp4 ocular phenotypes include anterior segment dysgenesis with elevated intraocular pressure.</a> BMC Genetics. 2, 18 (2001).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+Activation+of+Wnt+Signaling+by+Lithium+Normalizes+Retinal+Vasculature+in+a+Murine+Model+of+Familial+Exudative+Vitreoretinopathy.">Pharmacologic Activation of Wnt Signaling by Lithium Normalizes Retinal Vasculature in a Murine Model of Familial Exudative Vitreoretinopathy.</a> The American Journal of Pathology. 186 (10), 2588-2600 (2016).</li><li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice.">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PLoS One. 10 (7), 0132643 (2015).</li><li>Kishimoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+characteristics+of+regressing+vessels+in+the+hyaloid+vascular+system+of+neonatal+mice:+Novel+implication+for+vascular+atrophy.">Histochemical characteristics of regressing vessels in the hyaloid vascular system of neonatal mice: Novel implication for vascular atrophy.</a> Experimental Eye Research. 172, 1-9 (2018).</li><li>Lang, R. A., Bishop, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+required+for+cell+death+and+tissue+remodeling+in+the+developing+mouse+eye.">Macrophages are required for cell death and tissue remodeling in the developing mouse eye.</a> Cell. 74 (3), 453-462 (1993).</li><li>Riazifar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+Bst+/-+mouse+retina.">Phenotypic and functional characterization of Bst+/- mouse retina.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 8 (8), 969-976 (2015).</li></ol>

Hiyoid damarların değerlendirilmesi ve karakterize edilmesi teknikleri, geliştirme sırasında vasküler regresyon temel mekanizmaları üzerinde çalışmalar sağlamak için, hayvansal modellerde hyaloid damar regresyon gözlemlemek için sezgisel ve gerekli prosedürler vardır. In vivo Retina Görüntüleme aynı hayvan içinde hyaloid regresyon uzunlamasına gözlem sağlar iken, OCT ve FFA için bir kemirgen fundus görüntüleme sistemine erişim sınırlayıcı bir faktör olabilir. Ayrıca, canlı fareler iç...

Göz kan kaynağı Retina ve çevredeki oküler dokularda normal gelişimini sağlamak ve uygun bir görsel fonksiyon donatmak için esastır. Göz üç vasküler yatak vardır: Retina damar, koroid, ve hyaloid damarların geçici embriyonik dolaşım ağı. Oküler damar gelişimi, embriyogenit ve doku olgunlaşma boyunca uzamsal ve temporal koordinasyon gerektirir. Üç vasküler yatak arasında, hyaloid damarsal yeni oluşturulan embriyonik objektif ve gelişmekte olan Retina beslenme ve oksijen sağlamak için ilk fonksiyonel kan kaynağı sistemidir. Hyaloid damarların aynı zamanda Retina vasculatures geliştirmek ve olgun1gerileme. Hyaloid damarsal regresyon görsel fonksiyon gelişimi için net bir görsel yol sağlamak için önemli olan; Bu nedenle, bu vasküler regresyon süreci Retina damarının büyümesi kadar önemlidir. Bozulmuş hyaloid regresyon göz hastalıklarına yol açabilir. Ayrıca, hyaloid damarların regresyon vasküler regresyon düzenlenmesi dahil hücresel ve moleküler mekanizmaları araştırmak için bir model sistemi sağlar, hangi de diğer organlarda anjiyojenik düzenleme için etkileri olabilir.
Hyaloid vasküler (ha), hiyoid damarsal, Vasa hyaloidea propria (vhp), tunika vaskas lentis (TVL) ve Pupiller membran (PM) oluşur. Bu gelişen retinaya beslenme sağlar, primer vitreus, ve embriyonik gelişim sırasında objektif2. Objektif vitreus aracılığıyla ha, vhp dalları anteriora kaynaklanan. TVL bardak lens kapsülünün posterior yüzeyi, ve anterior siliyer arterlere bağlanan PM anastomozlar, objektif anterior yüzeyi kapsayan2,3, PM gemiler bir ağ oluşumu sonuçlanan 3 ' ü , 4 , 5. ilginçtir, hyaloid damar içinde hiçbir damarlar vardır, ve sistem venöz drenajı gerçekleştirmek için koroid damarları kullanır.
İnsan embriyo, hyaloid damar neredeyse gebelikte yaklaşık dokuzuncu hafta içinde tamamlanmış ve ilk Retina damarların ortaya çıktığında gerileme başlar, gebelik dördüncü ayında2. Vhp atrofisi ile başlayan, TVL kapiller ağları regresyon, PM, ve son olarak, ha sonradan oluşur2,3. Bu arada, primer vitreus geri çeker ve ikincil vitreus forma başlar, kollajen lifleri de dahil olmak üzere, ekstrasellüler matris bileşenleri oluşur. Gebelik altıncı ay, primer vitreus lens için optik sinir diski uzanan küçük bir şeffaf kanala azalır, Cloquet kanalı veya hyaloid kanal denilen, ve ikincil vitreus posterior segmentin ana bileşeni haline gelir 2 , 3. hyaloid sirkülasyon çoğunlukla 35 kadar kaybolur 36 gebelik hafta, sadece Doğum3önce.
Insanlardan farklı olarak, kim hyaloid damar tamamen Doğum geriledi, fare hyaloid vasküler sistem doğumdan sonra gerileme başlar. Fare retinası doğduğunda avasküler ve Retina damarlarının postnatal gün (P) 4 ' ten aynı anda, hyaloid damarların gerileme ve çoğunlukla tamamen P216 (Şekil 1) tarafından gerilmiş. PM ilk P10 ve P12 arasında kaybolur ve VHP P12 ve P16 arasında kaybolur, TVL ve HA hücrelerin az sayıda bile P16 kalır, ve P21 hyaloid vasküler sistem regresyon neredeyse tam6. Bu arada, Retina damar doğduktan sonra gelişmeye başlar. Vasküler pleksakın yüzeysel tabakası P7 – P8 periferik retinaya tam olarak uzanır, derin tabaka (Outer pleksiform katmanında bulunur) P7 – P12 ' den gelişir ve son olarak, iç pleksiform katmanındaki ara plekbe P12 ile P15 7 arasında gelişir. . Retina damar gelişimi geliştikçe, gelişen gözle beslenmeyi ve oksijeni sağlayan hyalüroid damarların giderek gerilmesi fonksiyonunun yerini alır. Fareler içinde hyaloid damar regresyon postnatal oluşumu gözlemlemek ve hyaloid damarsal çalışma, hem fizyolojik ve altında vasküler regresyon süreçleri yöneten moleküler temelinde bir kolay erişilebilir deneysel model sağlar patolojik koşullar8.
Hyalüroid regresyon yetmezliği, embriyolojik, primer vitreus ve hyaloid damarsal9' da başarısız veya tamamlanmamış bir regresyon kaynaklanan göz nadir konjenital gelişimsel anomali olan PHPV gibi hastalıklarda görülebilir. Hyalüroid damarsal regresyon sürecini düzenleyen mekanizmalar karmaşık ve geniş bir şekilde incelenmiştir. Hiyoid damarların normal regresyon için gerekli olan bir büyük moleküler yol WNT sinyalizasyon yolu10, bu yol hem WNT ligand ve reseptörleri etkileyen genetik mutasyonlar Insanlar PHPV ile bağlantılı olduğu gibi9. Deneysel çalışmalar bir WNT ligand, Wnt7b, bu regresyon süreci aracılık için gelişmekte olan göz hyaloid damarların etrafında makrofajlar tarafından üretilen tespit. Wnt7b reseptörleri ile bağlama tarafından WNT sinyalizasyon etkinleştirir frizzled4 (FZD4)/LRP5 hücre apoptozis başlatmak için bitişik endotel hücrelerde, hyaloid damarların regresyon önde gelen10. Sonuç olarak, Wnt7b-eksikliği fareler hyaloid damarların bir kalıcılık göstermek10. Benzer şekilde, geleneksel olmayan bir WNT ligand, Norrin ( NDP geni ile kodlanmış), aynı zamanda FZD4/LRP5, geliştirme sırasında hyaloid damar regresyon neden bağlanır. NDPy/-, Lrp5-/-, ve Fzd4-/- fareler tüm ekran ertelendi hyaloid damar regresyon, WNT sinyalizasyon kritik bir düzenleyici rolünü destekleyen11,12, 13,14,15,16. Dahası, başka bir WNT coreceptor LRP6 hyaloid vasküler endotel hücrelerde WNT sinyalizasyon yolu modüle üzerindeki işlevlerinde LRP5 ile çakışıyor17. Hyaloid regresyon için de katkı sağlayan diğer faktörler arasında hypoxia-indüklenebilir faktör18,19, vasküler endotel büyüme faktörü20,21, kollajen-1822, 23, ARF24, angiopoietin-225, ve kemik morfogenetik protein-426. Bu yazıda, hiyoid damarların hem in vivo hem de ex vivo yöntemlerle değerlendirilmesi ve karakterize edilmesi tekniklerini göstermek için Lrp5-/- Mice ' i kalıcı hyalüroid damar modeli olarak kullanıyoruz.
Hyaloid damarsal in vivo ve ex vivo görselleştirme Hiyoid damar regresyon mekanizmaları incelemek için gereklidir. Hyaloid damarsal gözlemlemek için geçerli yöntemler özellikle görselleştirme ve VHP ve HA analiz odaklanmak, OCT ve FFA görüntüleri aracılığıyla, göz çapraz bölümler, ve hyaloid düz montaj. OCT ve FFA güçlü içinde vivo görüntüleme araçları, onlar gözlerini açtıktan sonra canlı hayvanların boyuna gözlem sağlar. Dahası, izole hyaloid düz montaj tüm hyaloid damar ölçünün görselleştirilmesini ve gemi numaralarının doğru bir şekilde ölçülmesini sağlamak için bir araç sağlar. Henüz hyaloid damarların hassas ve kırılgan doğası ve izolasyonlarının ortaya çıkan teknik zorluklarının göz araştırmalarında kullanımı biraz10,17,27sınırlı olabilir. Bu yazıda, bu tekniklerin fizibilitesini geliştirmek için hem in vivo canlı retina görüntüleme hem de ex vivo izole hyaloid düz montajı birleştiren hyaloid damarların görselleştirmesinde ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz. Bu protokol, Live fundus ve OCT Imaging28 ' in In vivo yöntemi ve yalıtılmış hyaloid Flat Mount11' in ex vivo yöntemi ile önceki yayınlardan değişiklik ve genişleme ile adapte edilmiştir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:997px;" width="998">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">AK-Fluor (fluorescein injection, USP)</td>
			<td style="width:191px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">17478-253-10</td>
			<td style="width:296px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Anti-CD31 antibody</td>
			<td style="width:191px;">Abcam</td>
			<td style="width:156px;">ab28364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Antifade mounting medium</td>
			<td style="width:191px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:156px;">S2828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:156px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Artificial tear eyedrop</td>
			<td style="width:191px;">Systane</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">C57BL/6J mice</td>
			<td style="width:191px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:156px;">Stock NO: 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Cryostat</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:156px;">CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Cryostat</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:156px;">CM3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Cyclopentolate hydrochloride and phenylephrine hydrochloride eyedrop</td>
			<td>Cyclomydril</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gelatin&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">G9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating board</td>
			<td style="width:191px;">Lab-Line Instruments Inc.</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:355px;">Isolectin GS-IB4, 594 conjugate</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">I21413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Ketamine hydrochloride injection</td>
			<td style="width:191px;">KetaVed</td>
			<td style="width:156px;">NDC 50989-996-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Lrp5-/- mice</td>
			<td style="width:191px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:156px;">Stock NO. 005823</td>
			<td>Developed by Deltagen Inc., San Mateo, CA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Micron IV and OCT</td>
			<td style="width:191px;">Phoenix Research Labs</td>
			<td style="width:156px;">N/A</td>
			<td>Imaging software: InSight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Zeiss</td>
			<td style="width:156px;">discovery v8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microsurgery forceps</td>
			<td style="width:191px;">Scanlan International</td>
			<td style="width:156px;">4004-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Microsurgery scissors</td>
			<td style="width:191px;">Scanlan International</td>
			<td style="width:156px;">6006-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Optimal cutting temperature compound</td>
			<td style="width:191px;">Tissue-Tek</td>
			<td style="width:156px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Optimal cutting temperature compound</td>
			<td style="width:191px;">Agar Scientific</td>
			<td style="width:156px;">AGR1180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde (16%)</td>
			<td>Electron&#160;Microscopy&#160;Sciences</td>
			<td style="width:156px;">15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:355px;">Peel-A-Way disposable embedding molds (tissue molds)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:156px;">12-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered saline (PBS) buffer (10X)</td>
			<td style="width:191px;">Teknova</td>
			<td style="width:156px;">P0496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Slide cover glass</td>
			<td style="width:191px;">Premiere</td>
			<td style="width:156px;">94-2222-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfrost microscope slides&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:156px;">12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Xylazine sterile solution</td>
			<td style="width:191px;">Akorn: AnaSed</td>
			<td style="width:156px;">NDC: 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment and characterization of hyaloid vessels in mice

Göz içinde, embriyonik hiyojenik damarlarda Retina damarların gelişmesinde gelişen objektif ve Retina ve gerileme besler. Hiyoid damarların kalıcı veya başarısız regresyon, kalıcı hiperplastik primer vitreus (PHPV) gibi hastalıklarda görülebilir, engel olan bir ışık yoluna ve görsel fonksiyona zarar verebilir. Hyaloid damar regresyon temel mekanizmaları anlamak vasküler regresyon sürecine yeni moleküler anlayışlar ve kalıcı hyaloid damarlarla hastalıkları yönetmek için potansiyel yeni yollar neden olabilir. Burada, optik uyum tomografi (OCT) ve fundus floresan anjiyografi (FFA) ile canlı farelerde görüntüleme hyaloidinin prosedürlerini ve nicel analiz için düz montaj hyaloid ex vivo ile izole edilen ayrıntılı bir teknik protokol açıklanmaktadır. Düşük yoğunluklu lipoprotein reseptör ile ilgili protein 5 (LRP5) nakavt fareler deneysel kalıcı hyaloid damarların modeli olarak kullanılan, teknikleri göstermek için. Bu teknikler birlikte, vasküler regresyon deneysel bir model olarak hyalooid damarların kapsamlı bir değerlendirme ve kalıcı hyaloid damarların mekanizması üzerinde çalışmalar kolaylaştırabilir.

Canlı fareler içinde hyaloid damarların In vivo görüntüleme Şekil 3 3 aylık WT ve Lrp5-/-fareler, kalıcı hyaloid ile bir hayvan modeli Retina ve hyaloid dokular için Oct görüntüleri çapraz kesit görünümleri ortaya çıkarır. WT gözü hyaloid dokusunun yokluğunda gösterir, ancak Lrp5-/-Eye optik sinir kafası türetilen iki kalıcı hyaloid damarlarını gösterir. Şekil 3...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice at JoVE.com

Assessment and Characterization of Hyaloid Vessels in Mice

Bu protokol hem in vivo hem de ex vivo metotları, hiyoid damarların, fare gözlerindeki vasküler regresyon modeli, canlı görüntüleme ve ex vivo için optik uyum tomografi ve fundus florcein anjiyografi kullanılarak tam olarak görselleştirilmesi ve karakterize edilmesini tanımlar. izolasyon ve nicel analiz için hyaloid sonraki düz montaj.

Farelerde hyaloid damarlarının değerlendirilmesi ve karakterize edilmesi

In the eye, the embryonic hyaloid vessels nourish the developing lens and retina and regress when the retinal vessels develop. Persistent or failed ...

Protokolümüz, göz içindeki hyaloid vaskülatürü vasküler regresyon eğitimi için yararlı bir deneysel model olarak görselleştirmek ve karakterize etmek için hem in vivo hem de ex vivo önlemler vermektedir. Bu teknik canlı farelerde hyaloid damarların in vivo longitudinal gözlem ve ex vivo görselleştirme ve parçalanmış tüm hyaloid damarların doğru nicel leştirme birleştirir. Tekniğimiz, kalıcı fetal vaskülatürün patogenezi ve temel mekanizmalarının incelenmesi için pratik ve uygulanabilir bir yöntem sağlar.Bu yöntem aynı zamanda diğer organlarda anjiyogenez araştırmaları için ilgili olabilir oküler vasküler regresyon düzenlenmesinde yer alan hücresel ve moleküler mekanizmalar içine fikir sağlar. Hyaloid izolasyon adımları teknik olarak yeni başlayanlar için zor olabilir. Uygulama ve sabır Bol başarılı bir diseksiyon sağlamak için yardımcı olacaktır.Bu yöntemi görselleştirmek, izleyicilere becerilerde daha verimli bir şekilde ustalaşmalarında yardımcı olabilecek teknik hakkında ayrıntılı uygulamalı bilgiler ve ipuçları sağlayacaktır. Optik koherens tomografisi veya OCT görüntüleme için, fareyi ve sondayı, optik sinir başlığının fundus görüntüsündeki görme alanının merkezinde olması için ayarlayın ve görüntüleri elde etmeden önce kalıcı hyaloid damarları ortaya çıkarmak için OCT görüntüleme yazılımında belirtilen çizginin odak ve açısını ayarlayın. Hyaloid damarların fundus floresan anjiyografi görüntüleme için, görüş alanının merkezinde optik sinir kafası konumlandırmak ve yeşil floresan kanal mikroskop filtresi değiştirmek için biraz hizalama ayarlayın.Daha sonra kalıcı hyaloid damarlara odaklanın ve damarları gözlemlemek için sinyal-arka plan oranı için en iyi zaman noktasını belirlemek için enjeksiyon sonrası bir, üç, beş ve 10 dakika birden fazla görüntü elde edin. Ex vivo hyaloid damar diseksiyonu ve görselleştirme için bir postnatal gün-sekiz fare göz kapaklarını açmak ve göz küresi sıkma olmadan optik sinir kavramak için bir gözün yörüngesinde dünya altında kavisli mikrocerrahi forseps yerleştirmek için mikrocerrahi forseps kullanın. Yavaşça çekin ve forseps ile göz küresi kaldırmak ve oda sıcaklığında% 4 paraformaldehit göz düzeltmek.30 dakika sonra sabit göz kürelerini bir diseksiyon mikroskobu altında buz gibi PBS'ye aktarın ve 50 mikrolitre jelatin çözeltisini göz küresinin vitreus vücuduna limbus çevresindeki dört farklı eşit aralıklı alanda enjekte edin. Daha sonra vitreus alanı içinde enjekte jelatin katılaşmak için 30 dakika buz üzerinde göz küresi kuluçka. Jelatin tedavi olduğunda, göz küresini diseksiyon mikroskobu altında PBS'nin Petri kabına aktarın ve korneayı çıkarmak için limbusta bir kesi yapmak için mikrocerrahi makas kullanın.Kesip inceleyerek mikroskop altında optik sinir kaldırmak. İki çift forceps kullanarak sklera, koroid ve retinapigment epitel tabakalarını soyup atın, ardından iris inçıkarılması. Retinanın optik sinir tarafı yukarı bakacak ve lensler aşağı bakacak şekilde, jelatinize vitreus vücut ve retina arasında PBS birikimine izin vermek için retina fincan hemen altında PBS 50 mikrolitre enjekte.Hafifçe vitreus vücuttan retina fincan ve silikal vücut soymak için mikrocerrahi forceps kullanın. Bir transfer pipet kullanarak bir mikroskop slayt PBS dalmış hyaloid doku içeren jelatin fincan aktarın. Ve lens yukarı bakacak şekilde kalan dokuları ters çevirin.Sonra lens kaldırın ve yavaşça lens tunica vasculosa lentis ve vasa hyaloidea propria lens tunica vasculosa lentis kaldırmak için mikrocerrahi makas ile hyaloid arter kesmeden önce arasındaki bağlantıyı gevşetin. Düz montaj için hyaloid fincan vasa hyaloidea propria bölge tutun. Hyaloid damar örnekleridüz montaj için yavaşça taze PBS ile hyaloid fincan durulayın herhangi bir diseksiyon enkaz kaldırmak için.PBS yüzen doku ile yavaşça düzenlemek ve fincan kenarı aşağı bakacak şekilde jelatinize hyaloid fincan konumunu ayarlamak için mikrocerrahi forceps kullanın. PBS'ye batırılmış hyaloid fincanı olan slaytı 37 santigrat derecedebir kaydırak ısıtıcısına yerleştirin. Jelatin erir ve hyaloid düzleştirir sonra zar zor kuru ve hyaloid kaplarda çekirdekleri leke DAPI ile anti-fade montaj ortamı bir damla eklemek slayt kaldırmak.Sonra yavaşça düz montaj tamamlamak için hyaloid bir coverslip yerleştirin. Hyaloid damarların DAPI boyama görüntü bir floresan mikroskop aşamasına monte örnek transfer ve merkezi hyaloid arter görünür olduğunu doğrulamak için. Daha sonra doğrudan hyaloid artertüretilen damar dalları belirlemek ve elle quantification için damar dallarının sayısını saymak.Burada, üç aylık yabani tip ve düşük yoğunluklu lipoprotein reseptör ilişkili protein beş veya LRP5 nakavt fareler, kalıcı hyaloid damarları ile bir hayvan modeli retina ve hyaloid dokular için OCT görüntüleri kesitsel görünümleri gösterilmiştir. Bu fundus floresan anjiyografide, altı haftalık nakavt farelerin vitreus vücudunda, aynı yaştaki yabani tip hayvanlarda ise, kalıcı hyaloid damarların sekiz dalı gözlenen bir anjiyografi görüntüleri görülmektedir. Bu hyaloid damar düz vasküler hücreleri bağlar ve ilişkili makrofajlar onların nükleer DAPI boyama ile tespit edilebilir.Ve merkezi hyaloid arter dallanmış hücrelerin her satır vasa hyaloidea propria bir damar temsil eder. Yabani tip fareler doğum sonrası sekizinci günde ortalama 12 dal hyaloid damara sahipken, yaşla eşleşen LRP5 nakavt yavruları hyaloid vaskülature'un önemli ölçüde bozulmuş regresyonunu gösteren 25 dal hyaloid damarda sergilenmektedir. Buna ek olarak, gecikmiş ve eksik retina vasküler gelişim de LRP5 nakavt yavru görülür.Nitekim, hyaloid damarlar hala doğum sonrası gün sekiz LRP5 nakavt göz dokusu bölümlerinin kesitlerinde tespit edilebilir. Oysa vahşi tip gözler artık bu damarları göstermiyor. Hatırlanması gereken en önemli şey retina ve diğer oküler dokulardan hyaloid sistemi izole ederken nazik ve sabırlı olmaktır.Hyaloid damarları izole ettikten sonra farklı hücre belirteçleri ile immünboyama hyaloid regresyon düzenleyen hücresel etkileşimleri ortaya çıkarmak için yapılabilir. Bu teknik, oküler anjiyogenez araştırmalarında kalıcı fetal vaskülatürin altta yatan hücresel ve moleküler mekanizmalarını inceler. Paraformaldehit, ketamin ve ksilazin tehlikelidir.Lütfen bu reaktifleri uygun kişisel koruyucu ekipmanı kullanarak kimyasal duman kaputuna hazırlayın.

assessment-and-characterization-of-hyaloid-vessels-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used techniques require killing of the animals and postmortem recovery of the meal1,2. This approach prevents longitudinal studies to determine changes in gastric emptying with age and progression of disease. The commonly used [13C]-octanoic acid breath test for humans3 has been modified for use in mice4-6 and rats7 and we previously showed that this test is reliable and responsive to changes in gastric emptying in response to drugs and during diabetic disease progression8. In this video presentation the principle and practical implementation of this modified test is explained. As in the previous study, NOD LtJ mice are used, a model of type 1 diabetes9. A proportion of these mice develop the symptoms of gastroparesis, a complication of diabetes characterized by delayed gastric emptying without mechanical obstruction of the stomach10.
This paper demonstrates how to train the mice for testing, how to prepare the test meal and obtain 4 hr gastric emptying data and how to analyze the obtained data. The carbon isotope analyzer used in the present study is suitable for the automatic sampling of the air samples from up to 12 mice at the same time. This technique allows the longitudinal follow-up of gastric emptying from larger groups of mice with diabetes or other long-standing diseases.

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Determination of gastric emptying with a non-invasive [13C]-octanoic acid breath test for tracking gastroparesis in female NOD LtJ mice.

Bir Kullanarak Non-obez Diyabetik Farelerde Mide boşaltılması Değerlendirilmesi [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-oktanoik asit Nefes Testi

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Tıp

Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential therapies. Given the expense and time involved in creating animal models of disease, it is critical that researchers have tools to accurately assess phenotypic expression of disease. Right ventricular dysfunction is the major manifestation of pulmonary hypertension. Echocardiography is the mainstay of the noninvasive assessment of right ventricular function in rodent models and has the advantage of clear translation to humans in whom the same tool is used. Published echocardiography protocols in murine models of PAH are lacking.
In this article, we describe a protocol for assessing RV and pulmonary vascular function in a mouse model of PAH with a dominant negative BMPRII mutation; however, this protocol is applicable to any diseases affecting the pulmonary vasculature or right heart. We provide a detailed description of animal preparation, image acquisition and hemodynamic calculation of stroke volume, cardiac output and an estimate of pulmonary artery pressure.

This article provides a protocol for the echocardiographic assessment of right ventricular size and pulmonary hypertension in mice. Applications include phenotype determination and serial assessment in transgenic and toxin-induced mouse models of cardiomyopathy and pulmonary vascular disease.

Farelerde Sağ Kalp Ekokardiyografik Değerlendirilmesi

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow reserve (CFR) in humans. Reduced CFR is accompanied by marked intramyocardial and pericoronary fibrosis and is used as an indication of the severity of dysfunction. This study explores, step-by-step, the real-time changes measured in the coronary flow velocity, CFR and systolic to diastolic peak velocity (S/D) ratio in the setting of an aortic banding model in mice. By using a Doppler transthoracic imaging technique that yields reproducible and reliable data, the method assesses changes in flow in the septal coronary artery (SCA), for a period of over two weeks in mice, that previously either underwent aortic banding or thoracotomy. 
During imaging, hyperemia in all mice was induced by isoflurane, an anesthetic that increased coronary flow velocity when compared with resting flow. All images were acquired by a single imager. Two ratios, (1) CFR, the ratio between hyperemic and baseline flow velocities, and (2) systolic (S) to diastolic (D) flow were determined, using a proprietary software and by two independent observers. Importantly, the observed changes in coronary flow preceded LV dysfunction as evidenced by normal LV mass and fractional shortening (FS). 
The method was benchmarked against the current gold standard of coronary assessment, histopathology. The latter technique showed clear pathologic changes in the coronary artery in the form of peri-coronary fibrosis that correlated to the flow changes as assessed by echocardiography. 
The study underscores the value of using a non-invasive technique to monitor coronary circulation in mouse hearts. The method minimizes redundant use of research animals and demonstrates that advanced ultrasound-based indices, such as CFR and S/D ratios, can serve as viable diagnostic tools in a variety of investigational protocols including drug studies and the study of genetically modified strains.

Coronary flow reserve (CFR) is useful for assessment of myocardial oxygen demand and evaluation of cardiovascular risk. This study establishes a step-by-step transthoracic Doppler echocardiographic (TTDE) method for longitudinal monitoring of the changes in CFR, as measured from coronary artery in mice, under the experimental pressure overload of aortic banding.

Farelerde Basınç Aşırı Modeli Koroner Arter Akış ve Koroner Akım Rezervi Ultrason Dayalı Değerlendirme

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in rodents, with detailed descriptions of the appropriate methods for anesthesia, the echocardiographic windows used, the imaging planes and probe orientations for image acquisition, the methods for data analysis, and the limitations of emerging technologies for the evaluation of cardiac and valvular function. Importantly, we also highlight several future areas of research in cardiac and heart valve imaging that may be leveraged to gain insights into the pathogenesis of valve disease in preclinical animal models. We propose that using a systematic approach to evaluating cardiac and heart valve function in mice can result in more robust and reproducible data, as well as facilitate the discovery of previously underappreciated phenotypes in genetically-altered and/or physiologically-stressed mice.

This protocol provides a detailed description of the echocardiographic approach for comprehensive phenotyping of heart and heart valve function in mice.

Farelerde Kalp Kapak Hastalıkları Kapsamlı Fenotipik Karakterizasyonu için ekokardiyografik Yaklaşımlar ve Protokoller

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to non-invasively assess some features of the respiratory function in humans as well as in laboratory animals. The present article focuses on the application of the double-chamber plethysmography (DCP) in small animals. It provides background information on the methodology as well as a detailed step-by-step procedure to successfully assess respiratory function in conscious, spontaneously breathing animals in a non-invasive manner. The DCP can be used to monitor the respiratory function of multiple animals in parallel, as well as to identify changes induced by aerosolized substances over a chosen time period and in a repeated manner. Experiments on control and allergic mice are used herein to demonstrate the utility of the technique, explain the associated outcome parameters, as well as to discuss the related advantages and shortcomings. Overall, the DCP provides valid and theoretically sound readouts that can be trusted to evaluate the respiratory function of conscious small animals both at baseline and after challenges with aerosolized substances.

The objective of the present article is to provide a detailed description of the recommended procedures to evaluate respiratory function in conscious mice by double-chamber plethysmography.

Solunum fonksiyon çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde değerlendirilmesi

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

Non-invaziv Dorsiflexor kas fonksiyonu farelerde değerlendirilmesi

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Induction and Characterization of Pulmonary Hypertension in Mice using the Hypoxia/SU5416 Model

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by right heart&#160;catheterization. A broad spectrum of diseases can lead to PH, differing in their etiology, histopathology, clinical presentation, prognosis, and response to&#160;treatment. Despite significant progress in the last years, PH remains an uncured disease. Understanding the underlying mechanisms can pave the way for the development of new therapies. Animal models are important research tools to achieve this goal. Currently, there are several models available for recapitulating PH. This protocol describes a two-hit mouse PH model. The stimuli for PH development are hypoxia and the injection of SU5416, a vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor antagonist. Three weeks after initiation of Hypoxia/SU5416, animals develop pulmonary vascular remodeling imitating the histopathological changes observed in human PH (predominantly Group 1). Vascular remodeling in the pulmonary circulation results in the remodeling of the right&#160;ventricle (RV). The procedures for measuring RV pressures (using the open chest method), the morphometrical analyses of the RV (by dissecting and weighing both cardiac ventricles) and the histological assessments of the remodeling (both pulmonary by assessing vascular remodeling and cardiac by assessing RV cardiomyocyte hypertrophy and fibrosis) are described in detail. The advantages of this protocol are the possibility of the application both in wild type and in genetically modified mice, the relatively easy and low-cost implementation, and the quick development of the disease of interest (3 weeks). Limitations of this method are that mice do not develop a severe phenotype and PH is reversible upon return to normoxia. Prevention, as well as therapy studies, can easily be implemented in this model, without the necessity of advanced skills (as opposed to surgical rodent models).

This protocol describes the induction of pulmonary hypertension (PH) in mice based on the exposure to hypoxia and the injection of a VEGF receptor antagonist. The animals develop PH and right ventricular (RV) hypertrophy 3 weeks after the initiation of the protocol. The functional and morphometrical characterization of the model is also presented.

Hipoksi/SU5416 Modeli kullanılarak Farelerde Pulmoner Hipertansiyonun İndüksiyonu ve Karakterizasyonu

Pulmonary Hypertension (PH) is a pathophysiological condition, defined by a mean pulmonary arterial pressure exceeding 25 mm Hg at rest, as assessed by ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. However, the evaluation of right ventricular pressure (RVP) and pulmonary artery pressure (PAP) remains technically challenging in mice. RVP and PAP are more difficult to measure than left ventricular pressure because of the anatomical differences between the left and right heart systems. In this paper, we describe a stable right heart hemodynamic measurement method and its validation using healthy and PAH mice. This method is based on open-chest surgery and mechanical ventilation support. It is a complicated procedure compared to closed chest procedures. While a well-trained surgeon is required for this surgery, the advantage of this procedure is that it can generate both RVP and PAP parameters at the same time, so it is a preferable procedure for the evaluation of PAH models.

Here, we present a protocol to perform an invasive hemodynamic assessment of the right ventricle and pulmonary artery in mice using an open-chest surgery approach.

Farelerde Sağ Ventrikül Sistemi ve Hipoksiye Bağlı Pulmoner Arteriyel Hipertansiyon için İnvaziv Hemodinamik Değerlendirme

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Greft Kalite Değerlendirmesi için Kimyasal Biyopsi Kullanımı

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...