Name: use of in vivo single-fiber recording and intact dorsal root ganglion with attached sciatic nerve to examine the mechanism of conduction failure
Uploaded: 2019-08-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti della National Natural Science Foundation of China (31671089 e 81470060) e del Shaanxi Provincial Social Development Science and Technology Research Project (2016SF-250).

L'attuale protocollo segue la Guida per la politica del Servizio Sanitario Pubblico degli Stati Uniti sulla cura umana e l'uso degli animali da laboratorio, e il Comitato per l'etica degli esperimenti sugli animali della Quarta Università Medica Militare ha approvato il protocollo.
1. Animali
<ol><li>Dividere 24 ratti Sprague-Dawley (4-8 settimane) in due gruppi. Produci il modello completo di adiuvante di Freund (CFA) mediante iniezione intraplantara di 100 Gradi l di CFA in un gruppo di 1...

<ol>
	<li>Koski, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+validation+of+diagnostic+criteria+for+chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy.">Derivation and validation of diagnostic criteria for chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy.</a> Journal of the Neurological Sciences. 277 (1-2), 1-8 (2009).</li><li>Allen, T. J., Knight, D. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+compression+of+mouse+dorsal+root+ganglion+alters+voltage-gated+sodium+and+potassium+currents+in+medium-sized+dorsal+root+ganglion+neurons.">Chronic compression of mouse dorsal root ganglion alters voltage-gated sodium and potassium currents in medium-sized dorsal root ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 106 (6), 3067-3072 (2011).</li><li>Ma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+electrophysiological+changes+in+axotomized+and+neighboring+intact+dorsal+root+ganglion+neurons.">Similar electrophysiological changes in axotomized and neighboring intact dorsal root ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 89 (3), 1588-1602 (2003).</li><li>Boucher, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+analgesic+effects+of+GDNF+in+neuropathic+pain+states.">Potent analgesic effects of GDNF in neuropathic pain states.</a> Science. 290 (5489), 124-127 (2000).</li><li>Ma, C., Greenquist, K. W., Lamotte, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mediators+enhance+the+excitability+of+chronically+compressed+dorsal+root+ganglion+neurons.">Inflammatory mediators enhance the excitability of chronically compressed dorsal root ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 95 (4), 2098-2107 (2006).</li><li>Gong, K., Ohara, P. T., Jasmin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+Clamp+Recordings+on+Intact+Dorsal+Root+Ganglia+from+Adult+Rats.">Patch Clamp Recordings on Intact Dorsal Root Ganglia from Adult Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), (2016).</li><li>Schoenen, J., Delree, P., Leprince, P., Moonen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotransmitter+phenotype+plasticity+in+cultured+dissociated+adult+rat+dorsal+root+ganglia:+an+immunocytochemical+study.">Neurotransmitter phenotype plasticity in cultured dissociated adult rat dorsal root ganglia: an immunocytochemical study.</a> Journal of Neuroscience Research. 22 (4), 473-487 (1989).</li><li>Zheng, J. H., Walters, E. T., Song, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+of+dorsal+root+ganglion+neurons+induces+hyperexcitability+that+is+maintained+by+increased+responsiveness+to+cAMP+and+cGMP.">Dissociation of dorsal root ganglion neurons induces hyperexcitability that is maintained by increased responsiveness to cAMP and cGMP.</a> Journal of Neurophysiology. 97 (1), 15-25 (2007).</li><li>Hanani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Satellite+glial+cells:+more+than+just+rings+around+the+neuron.">Satellite glial cells: more than just rings around the neuron.</a> Neuron Glia Biology. 6 (1), 1-2 (2010).</li></ol>

Anche se studi recenti hanno ottenuto l'imaging del calcio dei neuroni DRG in vivo16, l'esecuzione della registrazione in vivo di morsetti da singoli nocicettori DRG rimane estremamente impegnativa. Pertanto, un approccio in vivo a fibra singola per il campo del dolore è di continua importanza. La registrazione a fibra singola nel presente protocollo consente l'osservazione oggettiva dei fenomeni di guasto della conduzione, e la combinazione di questa tecnica con la preparazione ex vivo sviluppat...

La normale trasmissione di informazioni lungo le fibre nervose garantisce la normale funzione del sistema nervoso. Il funzionamento anomalo del sistema nervoso si riflette anche nella trasmissione del segnale elettrico delle fibre nervose. Ad esempio, il grado di demielinazione nelle lesioni di demielinazione centrale può essere classificato mediante il confronto dei cambiamenti nella velocità di conduzione nervosa prima e dopo l'intervento applicazione1. È difficile registrare intracellulare le fibre nervose, tranne che in preparazioni speciali come l'assone gigante dei calamari2. Pertanto, l'attività elettrofisiologica è registrabile solo tramite la registrazione extracellulare di singole fibre. Come uno dei metodi elettrofisiologici classici, la registrazione a fibra singola ha una storia più lunga rispetto ad altre tecniche. Tuttavia, meno elettrofisiologi che afferrano questo metodo nonostante la sua ampia applicazione. Pertanto, per la sua applicazione appropriata è necessaria un'introduzione dettagliata del protocollo standard per la registrazione a fibra singola.
Anche se varie tecniche patch-clamp hanno dominato lo studio elettrofisiologico moderno, la registrazione a fibra singola svolge ancora un ruolo insostituibile nella registrazione delle attività delle fibre nervose, in particolare le fibre che trasmettono sensazioni periferiche con la loro corpo cellulare sensoriale situato nel ganglione della radice dorsale (DRG). Il vantaggio di utilizzare la registrazione a fibra singola qui è che la registrazione in fibra in vivo fornisce un lungo tempo di osservazione con la capacità di registrare le risposte agli stimoli naturali in modelli preclinici senza disturbo dell'ambiente intracellulare3 , 4.
Un numero crescente di studi negli ultimi due decenni ha esaminato funzioni complesse lungo le fibre nervose5, e il fallimento di conduzione, che è definito come uno stato di trasmissione dell'impulso nervoso infruttuoso lungo l'assone, era presente in molti diversi nervi periferici6,7. La presenza di fallimento di conduzione nella nostra indagine è servita come un meccanismo intrinseco autoinibitorio per la modulazione dell'input nocicettivo persistente lungo le fibre C8. Questo fallimento di conduzione è stato significativamente attenuato in condizioni di iperalgesia4,9. Pertanto, il targeting dei fattori coinvolti nell'insufficienza di conduzione può rappresentare un nuovo trattamento per il dolore neuropatico. Per osservare il fallimento della conduzione, il modello di cottura deve essere registrato e analizzato sulla base di picchi scaricati in sequenza in base alla registrazione a fibra singola.
Per comprendere a fondo il meccanismo di fallimento della conduzione, è necessario identificare le proprietà di trasmissione dell'assone, o più precisamente, le proprietà della membrana dei neuroni DRG, in base alle loro proprietà anatomiche pseudo-unipolari. Molti studi precedenti in questo campo sono stati eseguiti su neuroni DRG dissociati10,11, che potrebbero non essere fattibili per lo studio del fallimento della conduzione a causa di due ostacoli. In primo luogo, vari metodi meccanici e chimici vengono utilizzati nel processo di dissociazione per liberare i neuroni DRG, che può provocare cellule malsane o alterare il fenotipo / proprietà dei neuroni e confondere i risultati. In secondo luogo, i nervi periferici attaccati sono fondamentalmente rimossi, e i fenomeni di guasto di conduzione non sono osservabili in questi preparati. Pertanto, una preparazione di neuroni DRG intatti con un nervo attaccato è stato migliorato per evitare gli ostacoli di cui sopra.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:605px;" width="605">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:161px;">Instruments and software used in single fiber recording</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Amplifier</td>
			<td style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td style="width:93px;">MEZ-8201</td>
			<td style="width:203px;">Amplification of the electrophysiological signals</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:161px;">Bioelectric amplifier monitor</td>
			<td style="width:148px;">ShangHai JiaLong Teaching instrument factory</td>
			<td style="width:93px;">SZF-1</td>
			<td style="width:203px;">Monitor firing process via sound which is transformed from physiological discharge signal</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Data acquisition and analysis system</td>
			<td style="width:148px;">CED</td>
			<td style="width:93px;">Spike-2</td>
			<td style="width:203px;">Software for data acquisition and analysis</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Electrode manipulator</td>
			<td style="width:148px;">Narishige</td>
			<td style="width:93px;">SM-21</td>
			<td style="width:203px;">Contro the movement of the electrode as required</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Hairspring tweezers</td>
			<td style="width:148px;">A.Dumont</td>
			<td style="width:93px;">5#</td>
			<td style="width:203px;">Separate the single fiber</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Isolator</td>
			<td style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td style="width:93px;">SS-220J</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="64" rowspan="2" style="height:64px;width:161px;">Memory oscilloscope</td>
			<td rowspan="2" style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td rowspan="2" style="width:93px;">VC-9</td>
			<td style="width:203px;">Display recorded discharge during</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:203px;">experiment</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:148px;">ZEISS</td>
			<td style="width:93px;">SV-11</td>
			<td style="width:203px;">Have clear observation when separate the local tissue and single fiber</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Stimulator</td>
			<td style="width:148px;">Nihon kohden</td>
			<td style="width:93px;">SEZ-7203</td>
			<td style="width:203px;">Delivery of the electrical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Von Frey Hair</td>
			<td style="width:148px;">Stoelting accompany</td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;">Delivery of the mechanical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Water bath</td>
			<td style="width:148px;">Scientz biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;">SC-15</td>
			<td style="width:203px;">Heating paroline to maintain at 37oC</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Instruments and software used in patch clamp recording</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:161px;">Amplifier</td>
			<td style="width:148px;">Axon Instruments</td>
			<td style="width:93px;">Multiclamp 700B</td>
			<td style="width:203px;">Monitors the currents flowing through the recording electrode and also controls the stimuli by sending a signal to the electrode</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Anti-vibration table</td>
			<td style="width:148px;">Optical Technology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;">Isolates the recording system from vibrations induced by the environment</td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:161px;">Camera</td>
			<td style="width:148px;">Olympus</td>
			<td style="width:93px;">TH4-200</td>
			<td style="width:203px;">See the neurons in bright field; the controlling software allows to take pictures and do live camera image to monitor the approach of the electrode to the cell</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Clampex</td>
			<td style="width:148px;">Axon</td>
			<td style="width:93px;">Clampex 9.2</td>
			<td style="width:203px;">Software for data acquisition and delivery of stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Clampfit</td>
			<td style="width:148px;">Axon</td>
			<td style="width:93px;">Clampfit 10.0</td>
			<td style="width:203px;">Software for data analysis</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:161px;">Electrode puller</td>
			<td style="width:148px;">Sutter</td>
			<td style="width:93px;">P-97</td>
			<td style="width:203px;">Prepare recording pipettes of about 2&#956;m diameter with resistance about 5 to 8 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:148px;">Sutter</td>
			<td style="width:93px;">BF 150-75-10</td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:148px;">Sutter</td>
			<td style="width:93px;">MP225</td>
			<td style="width:203px;">Give a precise control of the microelectrode</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:161px;">Microscope</td>
			<td style="width:148px;">Olympus</td>
			<td style="width:93px;">BX51WI</td>
			<td style="width:203px;">Upright microcope equipped with epifluorescence for clearly observe the cells which would be patched</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Origin</td>
			<td style="width:148px;">Origin lab</td>
			<td style="width:93px;">Origin 8</td>
			<td style="width:203px;">Software for drawing picture</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Perfusion Pump</td>
			<td style="width:148px;">BaoDing LanGe Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;">BT100-1J</td>
			<td style="width:203px;">Perfusion of DRG in whole-cell patch clamp</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Other instruments</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Electronic balance</td>
			<td style="width:148px;">Sartorius</td>
			<td style="width:93px;">BS 124S</td>
			<td style="width:203px;">Weighing reagent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">pH Modulator</td>
			<td style="width:148px;">Denver Instrument</td>
			<td style="width:93px;">UB7</td>
			<td style="width:203px;">Adjust pH to 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Solutions/perfusion/chemicals</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Calcium chloride</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">C5670</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:161px;">Chloralose</td>
			<td style="width:148px;">Shanghai Meryer Chemical Technology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;">M07752</td>
			<td style="width:203px;">Mixed solution for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Collagenase</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">SLBQ1885V</td>
			<td style="width:203px;">Enzyme used for clearing the surface of DRG</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">D (+) Glucose</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">G7528</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Liquid Paraffin</td>
			<td style="width:148px;">TianJin HongYan Reagent Co., Ltd.</td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:203px;">Maintain fiber wetting</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Magnesium sulfate</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">M7506</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">P3911</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Protease</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">62H0351</td>
			<td style="width:203px;">Enzyme used for clearing the surface of DRG</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S5671</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S5886</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S0751</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:161px;">Sucrose</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">S0389</td>
			<td style="width:203px;">Extracellular solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:161px;">Urethane</td>
			<td style="width:148px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">U2500</td>
			<td style="width:203px;">Mixed solution for Anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of in vivo single-fiber recording and intact dorsal root ganglion with attached sciatic nerve to examine the mechanism of conduction failure

La registrazione a fibra singola è stata una tecnica elettrofisiologica classica ed efficace negli ultimi decenni a causa della sua applicazione specifica per le fibre nervose nei sistemi nervosi centrali e periferici. Questo metodo è particolarmente applicabile ai gangli della radice dorsale (DRG), che sono neuroni sensoriali primari che presentano una struttura pseudo-unipolare dei processi nervosi. I modelli e le caratteristiche dei potenziali di azione passati lungo gli assoni sono registrati in questi neuroni. Il presente studio utilizza registrazioni in singola fibra in vivo per osservare il fallimento della conduzione dei nervi sciatici nei ratti trattati con adiuvazione di Freund (CFA) completati. Poiché il meccanismo sottostante non può essere studiato utilizzando registrazioni in vivo a singola fibra, le registrazioni patch-clamp dei neuroni DRG vengono eseguite sui preparati di DRG intatto con il nervo sciatico collegato. Queste registrazioni rivelano una correlazione positiva tra l'insufficienza di conduzione e la pendenza crescente del potenziale post-iperpolarizzazione (AHP) dei neuroni DRG negli animali trattati con CFA. Il protocollo per le singole fibre grafiche in vivo consente la classificazione delle fibre nervose attraverso la misurazione della velocità di conduzione e il monitoraggio di condizioni anomale nelle fibre nervose in determinate malattie. La DRG intatta con nervo periferico attaccato consente l'osservazione dell'attività dei neuroni DRG nella maggior parte delle condizioni fisiologiche. La registrazione a fibra singola in modo conclusivo combinato con la registrazione elettrofisiologica dei DRG intatti è un metodo efficace per esaminare il ruolo del fallimento della conduzione durante il processo analgesico.

L'esito del protocollo di registrazione a fibra singola dipende dalla qualità della dissezione della fibra. L'animale per gli esperimenti in vivo deve essere in una buona situazione per mantenere il tronco nervoso sano per una facile dissezione (vedi consigli nella sezione discussione). Un bagno di applicazione farmaco è necessario in molti casi per la somministrazione di farmaci sulle fibre. La figura 1 illustra come è stata gestita la registrazione in a fibra singola in vivo (Fi...

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Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

La registrazione a fibra singola è una tecnica elettrofisiologica efficace applicabile al sistema nervoso centrale e periferico. Insieme alla preparazione della DRG intatta con il nervo sciatico attaccato, viene esaminato il meccanismo di guasto della conduzione. Entrambi i protocolli migliorano la comprensione del rapporto del sistema nervoso periferico con il dolore.

Uso della registrazione in fibra singola in vivo e della radice dorsale intatta Ganglion con il nervo Sciatico attaccato per esaminare il meccanismo del fallimento della conduzione

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

La registrazione in fibra singola svolge un ruolo importante nella registrazione delle attività delle fibre nervose. Soprattutto le attività che trasmettono la sensazione periferica dai campi ricettivi ai neuroni nel ganglio della radice dorsale. Nella registrazione wavel della fibra, fornisce un periodo di durata con capacità di registrare le risposte agli stimoli della natura, ed è stato successivamente disturbo dell'ambiente intercellulare.In una singola fibra la registrazione richiede neutroni automatici buoni per la situazione. Il terapeuta chiama il requisito per la preparazione di test DRG integrati il nervo sciatico è integrato. Il risultato della situazione demo mostra quasi tutti i dettagli dei nervi in una buona fase di decalcomania fisica.E terzo, l'intera preparazione DRG come sono integrati. Per iniziare questa procedura, preparare e disinfettare tutti gli strumenti chirurgici prima dell'intervento chirurgico. Quindi preparare da uno a due litri della normale soluzione extracellulare di Ringer e conservare a quattro gradi Celsius fino all'uso.Per esporre il tronco del nervo sciatico per la registrazione, in primo luogo, tagliare la pelle e i muscoli del ratto anestetizzato sulla parte dorsale della coscia. Quindi, eseguire una dissezione smussata lungo il bicipite femorale. Isolare con cura il tronco nervoso sciatico usando forbici oftalmiche e un ago di separazione del vetro e mantenere il tessuto umido utilizzando la soluzione di Ringer.Successivamente, fissare l'animale su un cerchio di metallo fatto in casa cucendo la pelle nella fessura intorno ad esso. Tirare leggermente la pelle verso l'alto per stabilire un bagno fluido. Esporre un centimetro di tronco nervoso sciatico sul lato prossimale.Posizionare una piccola piattaforma marrone sotto il tronco nervoso per migliorare il contrasto al fine di osservare chiaramente il tronco nervoso fine. Successivamente, applicare una paraffina liquida calda sulla parte superiore del tronco nervoso per evitare l'essiccazione della superficie della fibra. Rimuovere il fluido se c'è un'essudazione intorno al tronco nervoso.Per eseguire la registrazione, selezionare il filamento di platino come elettrodo di registrazione. Mangia e crea un piccolo gancio alla fine. Successivamente, attaccare l'elettrodo a un micromanipolatore.Nella vasca da bagno, posizionare un elettrodo di riferimento accanto al tessuto sottocutaneo. Dividere la dura spinale e il Pia mater e ottenere il nervo sciatico. Al microscopio stereo con ingrandimento del 25%, prendere un fasccicolo fine e sospendere l'estremità approssimativa dell'assone sul gancio dell'elettrodo di registrazione.Identificare il campo ricettivo di una singola fibra c non concepitiva utilizzando una simulis meccanica e uno stimolo termico. Se la cottura della fibra nervosa risponde agli stimoli meccanici e all'acqua calda, considerala come una fibra c polimoto e non ingannevole. Successivamente, inserire due elettrodi di stimolo dell'ago con un intervallo di due millimetri nella pelle del campo di identificazione per l'erogazione degli stimoli elettrici.Visualizzare la forma d'onda di un potenziale d'azione sull'oscilloscopio e utilizzare al computer una scheda d con una frequenza di campionamento del segnale di 20 kilohertz. Quindi, registra i picchi utilizzando il software di acquisizione dati e analizzalo in seguito con un software professionale. Per misurare il guasto alla conduzione, fornire gli stimoli ripetitivi degli elettrodi in diverse frequenze a una fibra c per 60 secondi.Lasciare un intervallo di 10 minuti affinché la fibra si rilassi tra uno stimolo e l'altro. Quindi, calcola il rapporto tra il numero di guasti e il numero di impulsi di stimolo ripetitivi consegnati e moltiplica per il 100% per ottenere il grado di fallimento della conduzione. Per esporre il ganglio della radice dorsale, prima tagliare la pelle dalla linea mediana della schiena al segmento da l4 a l5.Successivamente, rimuovere i muscoli del processo della colonna vertebrale e del processo trasversale utilizzando un rongeur osseo ed esporre il corpo NDRG del midollo spinale. Coprire il midollo spinale esposto, NDRG, con cotone imbevuto della normale soluzione extracellulare di Ringer per mantenere l'attività neurale. Fermare il sanguinamento e rimuovere il sangue se necessario.Successivamente, utilizzando forbici oftalmiche, rimuovere la struttura ossea da l4 a s1 sopra il forame vertebrale al fine di esporre il DRG e il nervo spinale collegato. Fai un taglio sulla pelle per esporre il nervo sciatico alla coscia centrale. Separare e scollegare il nervo sciatico dall'estremità distale del nervo dove entra nel muscolo.E ligar il tronco nervoso con linea chirurgica alla fine del nervo prima del taglio. Quindi, separare il nervo sciatico dal tessuto connettivo sottostante sollevando il punto di legatura nervosa. Rimuovere per dura dal midollo spinale e separare il DRG dal tessuto connettivo sottostante fino a raggiungere la parte adiacente del nervo sciatico.Pertanto, isolare l'intera preparazione del DRG con un nervo sciatico attaccato. Per cancellare la superficie del DRG, con ingrandimento 4x, rimuovere con cura la dura spinale sulla superficie da l4 a l6 DRG utilizzando una pinzetta. Posizionare il DRG con un nervo sciatico attaccato in un tubo di vetro contenente un millilitro di enzimi misti.Digerire in un bagno d'acqua di 37 gradi Celsius per 15 minuti. Dopo 15 minuti, sollevare la fine della linea chirurgica e spostare la preparazione su un piatto riempito con la normale soluzione extracellulare di Ringer per lavare l'enzima. Quindi, trasferire il DRG digerito in un contenitore riempito con la soluzione extracellulare di Ringer ossigenata per la registrazione.Per eseguire la registrazione, preparare la soluzione intracellulare e memorizzarla a zero gradi Celsius fino all'uso. Usando un'ancora a fette, stabilizzare i gangli e collegare l'estremità nervosa a un elettrodo stimolante dell'aspirazione. Con un ingrandimento di 40x, visualizzare e selezionare un neurone DRG con un obiettivo di emersione dell'acqua.Piegare un elettrodo e riempirlo con soluzione intracellulare. Attaccare l'elettrodo sul supporto e applicare una pressione positiva nella pipetta con una resistenza finale da quattro a sette megaohms. Quindi, portare l'elettrodo sulla superficie cellulare.Quindi, applicare una pressione negativa sulla pipetta per formare un sigillo. Una volta raggiunta una guarnizione gigaohm, impostare il potenziale della membrana a circa meno 60 millivolt e stabilire tutta la modalità di registrazione cellulare. Successivamente, fornire stimoli ripetitivi da 5 a 50 hertz al nervo sciatico attraverso l'elettrodo di aspirazione per lo schermo per il fallimento della conduzione.Misurare l'ampiezza dell'AHP dal basale al picco e la durata dell'80%AHP. Questa figura mostra le registrazioni consecutive originali di singole ri-cottura c5 da ratti in risposta alla stimolazione elettrica di 10 hertz. Ogni ventesima sweep viene mostrata e visualizzata dall'alto verso il basso.L'inserto mostra un potenziale di azione rappresentativo. Ecco le registrazioni di singole fibre c da ratti iniettati CFA in risposta alla stessa stimolazione del pannello precedente. Questa figura mostra le registrazioni continue delle risposte di attivazione in serie a cinque stimolazioni hertz in condizioni di controllo, o la somministrazione di diverse concentrazioni di ZD7288 in un neurone DRG di piccolo diametro da ratti classificati CFA.Gli inserti mostrano tracce espanse per i periodi di registrazione specificati. Le macchie scure rappresentano errori di picco. L'AHP ha mostrato una pendenza crescente più grande nel controllo.Mentre una pendenza crescente più piccola è stata osservata dopo 125 micromolari all'applicazione ZD7288. Quando una registrazione a cinque tempi, penso che sia importante tagliare la fibra mantenerà gli animali è buona qualsiasi condizione di sicurezza. E microambiente attorno al neutrone.La combinazione di registrazione a fibra singola e applicazione di DRG intatto collegato al nervo sciatico, ha migliorato la nostra comprensione del sistema nervoso periferico relativo al dolore.

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Channels and the Electrical Properties of Membranes

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Studio genetico della rigenerazione assonale con colture di neuroni adulti Root dorsali gangliari

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Radice dorsale Ganglion iniezione e dorsale radice Lesioni Crush come un modello per sensoriale Axon Regeneration

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Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Inquirenti rigenerazione dell'assone dei mammiferi: In Vivo elettroporazione del ganglio di radice dorsale del topo adulto

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Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

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