Name: compartmentalization of human stem cell-derived neurons within pre-assembled plastic microfluidic chips
Uploaded: 2019-05-03T13:00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips at JoVE.com

Författarna erkänner stöd från Xona microfluidics, LLC, National Institute of Mental Health (R42 MH097377), och det nationella institutet för neurologiska sjukdomar och stroke (R41 NS108895, P30 NS045892). Innehållet är uteslutande författarnas ansvar och representerar inte nödvändigtvis de officiella åsikter som finns hos National Institutes of Health.

Anmärkning: figur 1a, B visar en schematisk av förmonterade COC-chip, inklusive platser för de viktigaste kanalerna eller fack, brunnar och microgrooves. Den uppdelade chip kan etablera distinkta fluidic mikromiljöer inom ett fack som visar genom isolering av mat färgämne (figur 1c). Protokollet för beredning av det förmonterade flerfacks-chip ges i Nagendran et al., avsnitt 112.
1. beläggning av flera fack chips för hSC-neuroner
Anm.: figur 2A visar en översikt över beläggnings procedurerna.
<ol><li>Lös Poly-L-Ornithine i cellodling-grade destillerat vatten för att göra 600 μL lösning per chip av en 20 μg/mL arbetslösning.</li>
	<li>Aspirera resterande PBS kvar efter beredning av flis från brunnarna. När aspirera, se till att Pipettera spetsen är borta från kanal öppningen. Obs: mikrofluidiska kanaler måste förbli ifyllda för hela denna procedur. Sug inte upp vätska från kanalerna/facken, endast brunnarna.</li>
	<li>Ladda 150 μL av poly-L-Ornithine arbetslösning i den övre högra brunnen. Vänta 90 s eller tills vätskan börjar fylla den nedre högra brunnen. Tillsätt 150 μL media till den nedre högra brunnen och vänta i 5 min för att låta vätskan passera genom mikrospåren.</li>
	<li>Tillsätt 150 μL media till den övre vänstra brunnen. Vänta 90 s och tillsätt sedan 150 μL till den nedre vänstra brunnen. Linda hållaren av chip (s) med parafilm och plats vid 4 ° c över natten. Obs: alternativt placera chip och hållare vid 37 ° c i 1 h.</li>
	<li>Aspirera media från brunnarna och se till att Pipettera-spetsen är placerad bort från kanal öppningen. Tillsätt 150 μL sterilt vatten till den övre högra brunnen. Vänta 90 s och tillsätt sedan 150 μL till den nedre högra brunnen. Vänta 5 min för att låta vätskan passera genom microgrooves.</li>
	<li>Tillsätt 150 μL sterilt vatten till den övre vänstra brunnen, vänta 90 s och tillsätt sedan ytterligare 150 μL till den nedre vänstra brunnen.</li>
	<li>Upprepa steg 1.5-1.6.</li>
	<li>Tina laminin långsamt vid 2 ° c till 8 ° c och Bered en arbetslösning på 10 μg/mL.</li>
	<li>Fyll 150 μL av lamininarbetslösning till den övre högra brunnen. Vänta 90 s eller tills vätskan börjar fylla den nedre högra brunnen. Pipet 150 μL till den nedre högra brunnen. Vänta 5 min för att låta laminin gå igenom microgrooves.</li>
	<li>Tillsätt 150 μL laminin i övre vänstra brunnen. Vänta 90 s och tillsätt sedan 150 μL till den nedre vänstra brunnen. Inkubera chippet i hållaren i 2 h vid 37 ° c.</li>
	<li>Skölj chipet med PBS (utan ca2 + och mg2 +). Ladda 150 μL PBS till den övre högra brunnen. Vänta 90 s eller tills vätskan börjar fylla den nedre högra brunnen. Tillsätt 150 μL PBS till den nedre högra brunnen och vänta i 5 min för att låta PBS gå igenom mikrospåren.</li>
	<li>Pipet 150 μL PBS till den övre vänstra brunnen. Efter 90 s Pipettera 150 μL till den nedre vänstra brunnen.</li>
	<li>Aspirera PBS från chip och skölj sedan chip med NSC media (se tabell över material). Ladda 150 μL media till den övre högra brunnen. Efter 90 s eller när vätskan passerar genom rätt kanal i den nedre högra brunnen, tillsätt 150 μL till den nedre högra brunnen. Vänta i 5 min för att låta medierna flöda genom microgrooves.</li>
	<li>Tillsätt 150 μL media till den övre vänstra brunnen och en annan 150 μL till den nedre vänstra brunnen. Inkubera chippet i en inkubator på 37 ° c med 5% CO2 för att förkonditionera chippet tills det är färdigt att Seed nscs. Obs: chips kan förkonditioneras över natten om det behövs.</li>
</ol>2. sådd NSCs i multifacks chip
Anmärkning: detta protokoll används kommersiellt inköpta NSCs, till skillnad från vår tidigare publikation som inleddes med mänskliga embryonala stammar celler5. I detta protokoll är neurala stamceller pläterade direkt i plast chips där de differentieras till nervceller. Cellerna kan tillåtas att förgöra sig som NSCs (utan differentiering) för upp till 2 passager och lagras i flaskor i flytande N2 för vidare användning. Detta protokoll använder NSC-injektionsflaskor lagrade i Liquid N2 efter passage 1 eller 2. Figur 2b visar en översikt över beläggnings procedurerna.
<ol><li>NSCs enligt tillverkarens anvisningar. ANMÄRKNINGAR: den här proceduren gäller för H9-härledda NSCs. Andra cellinjer kommer att kräva celltäthet optimering.</li>
	<li>Räkna cellkoncentrationen med hjälp av en hemocytometern och justera med hjälp av NSC media för att få en koncentration av 7 x 106 celler per ml.</li>
	<li>Aspirera media från varje brunn av chip. Undvik aspirera media från de viktigaste kanalerna.</li>
	<li>Pipet 5 μL av cell lösningen till den övre högra brunnen, följt av 5 μL till den nedre högra brunnen (totalt 70 000 celler). Kontrollera att cellerna pipetteras mot de viktigaste kanal öppningarna. Använd ett mikroskop för att kontrollera att celler har kommit in i kanalen. Vänta 5 min för celler att hålla sig till botten av chip. Anmärkning: antingen eller båda fack kan användas för att ladda celler.</li>
	<li>Pipet ~ 150 μL av NSC-mediet till den övre högra brunnen och sedan 150 μL till den nedre högra brunnen. Upprepa på vänster sida. Inkubera vid 5% CO2, 37 ° c i en lämplig fuktad behållare.</li>
	<li>Efter 48 timmar, aspirera NSC media från brunnarna och ersätta med neurala differentiering Media genom att lägga till 150 μL till varje topp väl och varje botten väl.</li>
	<li>Kultur nervceller inom en 5% CO2, 37 ° c inkubator i en lämplig fuktad behållare. Obs: Media bör bytas ut var 2-3 dag. På grund av de små volymer som används i chipet kan avdunstning även inom en fuktad inkubator väsentligen påverka cellernas lönsamhet. Använd en lämplig sekundär behållare för att ge ytterligare fukt för långsiktig kultur av celler med chip (se tabell över material).</li>
</ol>3. viral fluorescerande märkning av hSC-neuroner inom chip
Obs: flera virus kan användas för att märka nervceller inom chip. Instruktionerna nedan beskriver användningen av G-utgår rabies-mCherry eller – eGFP virus. Potentiellt smittsamma material måste hanteras i enlighet med tillämpliga regler och förordningar, och kan kräva ytterligare utbildning och institutionellt godkännande.
<ol><li>Varm ~ 400 μL av färska neurala differentierings medier per chip till 37 ° c.</li>
	<li>Ta bort 50 μL media från en brunn i Axon-facket till ett centrifugrör och tillsätt sedan 100 000 virala enheter av modifierat rabiesvirus till röret. Obs: kassera förbrukade Pipettera-spetsar och centrifugrör som innehåller virus.</li>
	<li>Ta bort kvarvarande neurala differentiering media från axonal facket och placera i ett centrifug röret. Förvaras vid 37 ° c. Obs: se till att kanalerna förblir fyllda med vätska.</li>
	<li>Blanda 50 μL virus lösning med 150 μL värmda media. Pipet 100 μL till en brunn i axonfacket och 100 μL till det andra axonfacket väl. Inkubera i 2 timmar inom en inkubator på 37 ° c. Obs: skillnaden i volym mellan axonala och somatiska fack hjälper till att säkerställa att viruset stannar i axonal facket under infektion/inkubationstider.</li>
	<li>Ta bort och kassera virusinnehållande media. FÖRSIKTIGHET: ta inte bort vätska i de medföljande mikrofluidiska kanalerna.</li>
	<li>Försiktigt Pipettera 75 μL av färska medier till ett Axon fack väl och låt Media flödet genom kanalen till andra Axon väl.</li>
	<li>Ta bort material från Axon-facket och kassera det på rätt sätt.</li>
	<li>Upprepa steg 3,6 och 3,7.</li>
	<li>Fyll Axon-facket med det sparade mediet. Pipet ytterligare 50 μL färsk media, om det behövs, och sedan returnera kretsen till inkubatorn. Denna extra fräscha media är att räkna mot förlust av media vid vätskeöverföring och avdunstning under processen. Obs: synlig fluorescerande märkning med dessa modifierade rabiesvirus sker genom 48 h och upp till 8 dagar efter vilken celldöd av infekterade nervceller uppstår i allmänhet på grund av virustoxicitet. Neuron avbildning kan utföras som med andra vanliga kulturplattformar (t. ex. glasbotten rätter), men särskild hänsyn behövs för att bibehålla tillräcklig fuktighet för att förhindra avdunstningsförluster.</li>
</ol>4. fluidic isolering, axotomy, och immunofärgning inom chip
<ol><li>Följ fluidic isolation, axotomy och immunofärgning med chip som beskrivs i Nagendran et al.12.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Taylor, A. M., Wu, J., Tai, H. C., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+translation+of+beta-catenin+regulates+synaptic+vesicle+dynamics.">Axonal translation of beta-catenin regulates synaptic vesicle dynamics.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (13), 5584-5589 (2013).</li><li>Virlogeux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituting+Corticostriatal+Network+on-a-Chip+Reveals+the+Contribution+of+the+Presynaptic+Compartment+to+Huntington&#8217;s+Disease.">Reconstituting Corticostriatal Network on-a-Chip Reveals the Contribution of the Presynaptic Compartment to Huntington&#8217;s Disease.</a> Cell Reports. 22 (1), 110-122 (2018).</li><li>Neto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalized+Microfluidic+Platforms:+The+Unrivaled+Breakthrough+of+&#60;em&#62;In+Vitro&#60;/em&#62;+Tools+for+Neurobiological+Research.">Compartmentalized Microfluidic Platforms: The Unrivaled Breakthrough of &#60;em&#62;In Vitro&#60;/em&#62; Tools for Neurobiological Research.</a> The Journal of Neuroscience. 36 (46), 11573-11584 (2016).</li><li>Pinto, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+proteasome+controls+presynaptic+differentiation+through+modulation+of+an+on-site+pool+of+polyubiquitinated+conjugates.">The proteasome controls presynaptic differentiation through modulation of an on-site pool of polyubiquitinated conjugates.</a> The Journal of Cell Biology. 212 (7), 789-801 (2016).</li><li>Bigler, R. L., Kamande, J. W., Dumitru, R., Niedringhaus, M., Taylor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Messenger+RNAs+localized+to+distal+projections+of+human+stem+cell+derived+neurons.">Messenger RNAs localized to distal projections of human stem cell derived neurons.</a> Scientific Reports. 7 (1), 611 (2017).</li><li>Nagendran, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+axotomy+enhances+retrograde+presynaptic+excitability+onto+injured+pyramidal+neurons+via+trans-synaptic+signaling.">Distal axotomy enhances retrograde presynaptic excitability onto injured pyramidal neurons via trans-synaptic signaling.</a> Nature Communications. 8 (1), 625 (2017).</li><li>Van Laar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+compartmentalized+axonal+mitochondrial+biogenesis:+Mitochondrial+DNA+replication+increases+in+distal+axons+as+an+early+response+to+Parkinson&#39;s+disease-relevant+stress.">Evidence for compartmentalized axonal mitochondrial biogenesis: Mitochondrial DNA replication increases in distal axons as an early response to Parkinson&#39;s disease-relevant stress.</a> The Journal of Neuroscience. , (2018).</li><li>del R&#237;o, J. A., Ferrer, I., Gav&#237;n, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cellular+prion+protein+in+interneuronal+amyloid+transmission.">Role of cellular prion protein in interneuronal amyloid transmission.</a> Progress in Neurobiology. 165-167, 87-102 (2018).</li><li>Jia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiR-34a+Regulates+Axonal+Growth+of+Dorsal+Root+Ganglia+Neurons+by+Targeting+FOXP2+and+VAT1+in+Postnatal+and+Adult+Mouse.">MiR-34a Regulates Axonal Growth of Dorsal Root Ganglia Neurons by Targeting FOXP2 and VAT1 in Postnatal and Adult Mouse.</a> Molecular Neurobiology. , (2018).</li><li>Taylor, A. M., Dieterich, D. C., Ito, H. T., Kim, S. A., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+local+perfusion+chambers+for+the+visualization+and+manipulation+of+synapses.">Microfluidic local perfusion chambers for the visualization and manipulation of synapses.</a> Neuron. 66 (1), 57-68 (2010).</li><li>Menon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+E3+Ubiquitin+Ligase+TRIM9+Is+a+Filopodia+Off+Switch+Required+for+Netrin-Dependent+Axon+Guidance.">The E3 Ubiquitin Ligase TRIM9 Is a Filopodia Off Switch Required for Netrin-Dependent Axon Guidance.</a> Developmental cell. 35 (6), 698-712 (2015).</li><li>Nagendran, T., Poole, V., Harris, J., Taylor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Pre-Assembled+Plastic+Microfluidic+Chips+for+Compartmentalizing+Primary+Murine+Neurons.">Use of Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips for Compartmentalizing Primary Murine Neurons.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (141), (2018).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature Methods. 2 (8), 599-605 (2005).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+mRNA+in+uninjured+and+regenerating+cortical+mammalian+axons.">Axonal mRNA in uninjured and regenerating cortical mammalian axons.</a> The Journal of Neuroscience. 29 (15), 4697-4707 (2009).</li><li>Oh, J. H., Jung, C. R., Lee, M. O., Kim, J., Son, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Comparative+analysis+of+human+embryonic+stem+cellderived+neural+stem+cells+as+an+in+vitro+human+model."> Comparative analysis of human embryonic stem cellderived neural stem cells as an in vitro human model.</a> International Journal of Molecular Medicine. 41 (2), 783-790 (2018).</li><li>Lazar, M., Miles, L. M., Babb, J. S., Donaldson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+deficits+in+young+adults+with+High+Functioning+Autism+and+their+impact+on+processing+speed.">Axonal deficits in young adults with High Functioning Autism and their impact on processing speed.</a> Neuroimage Clinical. 4, 417-425 (2014).</li><li>DePaul, M. A., Lin, C. Y., Silver, J., Lee, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatory+repair+strategy+to+promote+axon+regeneration+and+functional+recovery+after+chronic+spinal+cord+injury.">Combinatory repair strategy to promote axon regeneration and functional recovery after chronic spinal cord injury.</a> Scientific Reports. 7 (1), 9018 (2017).</li></ol>

S.P. och T.N. deklarerar inga konkurrerande ekonomiska intressen. V.P. är anställd hos Xona microfluidics, LLC. J.H. är medlem i Xona microfluidics, LLC. A.M.T. är en uppfinnare av mikroflödessystem avdelningen/chip (US 7419822 B2, EPO 2719756 B1) och är medlem i Xona microfluidics, LLC.

Den förmonterade multi-kupé COC chip är en enkel att använda uppdelade plattform för att differentiera och underhålla mänskliga nscs i nervceller för långsiktig (> 4 veckor). I detta protokoll visar vi differentiering av mänskliga NSCs i glutamaterga neuroner, retrograd etikett nervceller, utföra immunocytokemi, visualisera dendritiska ryggraden morfologi och utföra axotomy. Dessa chips är kompatibla med högupplöst avbildning och det finns ingen autofluorescence med COC12.
COC multi-kupé chips är funktionellt likvärdiga med silikon-baserade uppdelade enheter, och har fördelar och nackdelar som beskrivs tidigare12. Tabell 1 jämför multi-fack COC chips och silikon enheter för odling HSC-neuroner. COC uppdelade chips ger en bättre hydrofila yta för fastsättning och underhåll av stamceller under en lång kultur period. PDMS-baserade enheter måste monteras och fästas på glas täckband. Den hydrofoba karaktären av PDMS enheter orsakar aggregering av stamceller5; Detta leder till både utmaningar i Imaging på cellnivå och större känslighet för fysiska skador på grund av förflyttning av cell aggregat under Media förändringar. Plastchip övervinner dessa utmaningar. COC är gas ogenomtränglig, till skillnad från PDMS, så luftfickor fångade eller bildas inom kanalerna måste tas bort av användaren. Pre-Coating lösning minskar möjligheten för luft att fastna i kanalerna. Denna lösning består av etanol och andra agenter. Ett tidigare publicerat protokoll för odling av murina neuroner inom dessa plast chips ger ytterligare information om Pipettera celler och media inom markerna12. NSCs är mer bräckliga att murina nervceller, så måste hanteras mer försiktigt. Det är också viktigt att blanda stamcellerna grundligt före pläteringen genom att försiktigt Pipettera dem upp och ner.
Användning av nervceller som härrör från in vitro-differentierade mänskliga stamceller blir allt populärare inom medicin och forskning. Dessa nervceller är viktiga för forskning och kliniska tillämpningar för många CNS-sjukdomar, inklusive neurodegenerativa sjukdomar och traumatiska hjärnskador. Dessa nervceller liknar nära mänskliga foster nervceller15. I framtiden, lämpligt åldrade nervceller kan genereras från stamceller för att efterlikna åldersrelaterade neuronala funktion och används i samband med dessa uppdelade enheter. Dessa enheter kommer att underlätta forskning om sjukdomar som påverkar Axon hälsa och funktion såsom Axon underskott i nervceller av patienter som diagnostiserats med autismspektrumstörningar och axonal förnyelse efter skada16,17.

Mänskliga stamceller differentierade neuroner (hSC-neuroner) används alltmer för biologisk forskning. Dessa nervceller, som kan härledas från mänskligt källmaterial, är av stort intresse för translationell forskning, inklusive studiet av traumatiska hjärnskador och neurodegenerativa sjukdomar som Alzheimers sjukdom. Sålunda, verktyg för att förbättra och underlätta studiet av hSC-neuroner är efterfrågade.
För att studera den unika polariserade morfologin av nervceller, många forskare använder multi-compartmentalized mikroflödessystem enheter1,2,3,4,5,6, 7,8,9,10,11. Dessa enheter möjliggör mätningar och manipulationer av långa projektion nervceller med unik subcellulär åtkomst. Multi-compartmentalized mikroflödessystem enheter består av två parallella mikroflödessystem fack åtskilda av microgrooves, som styr axonal tillväxt. Neuroner eller neurala stamceller (NSCs) är pläterade i somatodendritic facket, och sedan hålla sig till botten av utrymmet ytan efter minuter. Differentierade nervceller växa och utvidga sina axoner/projektioner genom Microgroove regionen i ett angränsande och isolerade axonal fack. Förr i tiden var dessa anordningar uteslutande görs med hjälp av poly (dimethylsiloxane) (PDMS) replika gjutning. PDMS enheter har många nackdelar som tidigare beskrivits12, inklusive ihållande vattenavvisande egenskaper och behovet av att montera till en glastäckslip omedelbart före användning. Förmonterade formsprutade chips övervinna många av dessa nackdelar och säljs kommersiellt (se tabell över material)12. De delar av dessa chips är permanent tillverkade hydrofila och hela chip är formsprutade i optiskt transparent cyklisk olefin sampolymer (COC).
Detta protokoll visar hur man använder detta COC-chip för att skilja mänskliga NSCs i excitatoriska nervceller, och att separera och fluidiskt isolera sina långa neuronala projektioner. För denna demonstration, neuroner differentierades från NIH-godkända H9 stamceller. Liknande procedurer kan användas för att differentiera humana inducerade pluripotenta stamceller.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor hydrazide 488</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A10436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor secondary antibodies</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti_beta-tubulin III</td>
			<td>Aves</td>
			<td>TUJ</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-vGAT antibody</td>
			<td>Synaptic Systems</td>
			<td>131 003</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-vGlut1 antibody</td>
			<td>NeuroMab</td>
			<td>75-066</td>
			<td>clone N28/9, 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>complete neural stem cell media:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;REC HU EGF 
			10 UG BIOSOURCE (TM)&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>PHG0314</td>
			<td>20ng/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REC HU FGF BASIC 
			10 UG BIOSOURCE (TM)&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>PHG0024</td>
			<td>20ng/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX Supplement (100X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>2mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut DMEM/F-12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific&#160;</td>
			<td>12660012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Neural Supplement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A1050801</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence imaging system</td>
			<td>EVOS Fluorescence imaging system</td>
			<td>AMF4300</td>
			<td>10x objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorinated ethylene propylene film</td>
			<td>American Durafilm</td>
			<td>50A</td>
			<td>0.5 mil thickness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount G</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>00-4958-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco DPBS without Calcium and Magnesium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GIBCO HUMAN NSC (H9) KIT 
			COMBO KIT 
			&#160; 
			&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>N7800200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Laminin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>23017015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS7095D5X SIGMA</td>
			<td>5.75 in length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H9-DERIVED HU NEURAL STEM CELL 
			1E6 CELLS/VIAL; 1 ML&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>510088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hibernate-E Medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A1247601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator, 5% CO2 37 &#176;C</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning confocal imaging system</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV3000RS</td>
			<td>30x silicone oil objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>modified rabies virus</td>
			<td>Salk Institute for Biological Studies</td>
			<td>G-deleted Rabies-eGFP</td>
			<td>Material Transfer Agreement required</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mr. Frosty&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>5100-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neural differentiation media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Per 100 mL.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240112</td>
			<td>1mL (100X)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8960</td>
			<td>200mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDNF</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>PHC7074</td>
			<td>40 ng/mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco B27 Plus Supplement (50X)</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>A3582801</td>
			<td>2mL (50X)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco CultureOne Supplement (100X)&#160;</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>A3320201</td>
			<td>1mL (100X)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Neurobasal Plus Medium</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>A3582901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taylor Wharton Liquid N2 dewar</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>20HCB11M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>triton X-100</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>28314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XC pre-coat&#160;</td>
			<td>Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td>XC Pre-Coat</td>
			<td>included with XonaChips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XonaChip</td>
			<td>Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td>XC450</td>
			<td>450 &#181;m length microgroove barrier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidifier Tray</td>
			<td>Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td>humidifier tray</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

compartmentalization of human stem cell-derived neurons within pre-assembled plastic microfluidic chips

Användning av mikroflödessystem enheter för att kategoriserar odlade nervceller har blivit en standardmetod i neurovetenskap. Detta protokoll visar hur man använder en förmonterad multi-fack chip som gjorts i en cyklisk olefin sampolymer (COC) att kategoriserar nervceller åtskilda från mänskliga stamceller. Fotavtryck av dessa COC-chips är desamma som en vanlig Mikroskop bild och är lika kompatibla med högupplöst mikroskopi. Neuroner skiljer sig från mänskliga neurala stamceller (NSCs) i glutamatergic neuroner inom chip och underhålls i 5 veckor, vilket ger tillräcklig tid för dessa nervceller att utveckla synapser och dendritiska taggar. Vidare visar vi flera vanliga experimentella procedurer med hjälp av dessa multi-fack chips, inklusive viral märkning, upprättande av mikromiljöer, axotomy, och immunocytochemistry.

Efter en vecka (7-10 dagar) i chip med differentiering media, NSCs differentiera till nervceller och neuronala projektioner in i axonal facket (figur 3). Inom chip, nervceller fäster och fördela jämnt inom det somatiska facket. I jämförelse, neuroner i PDMS enheter klumpar/aggregat så tidigt som 5 dagar efter tillsats av differentiering media, vilket leder till nedsatt cell hälsa som kan ses i figur 3b (dag 13 förstorade bilden). Nervceller i markerna ser friska med medföljande axoner. Friska nervceller kan upprätthållas inom markerna för 4-5 veckor.
För att visualisera neuron mognad och dendritiska ryggraden utveckling, modifierad rabiesvirus levererades till axonal facket på dag 29 till retrograd etikett nervceller, inklusive dendritiska taggar, med mCherry fluorescerande protein. Fyra dagar efter rabiesvirus infektion, neuroner utvidga axoner i axonal facket uttryckte mCherry. Nervceller på differentiering dag 33 visade bildandet av dendritiska Taggar (figur 4). Visualisering av dendritiska Taggar visar att NSC härledda neuroner åtskilda i markerna bildar mogna synapser.
Multi-fack chip är också kompatibel med vävnad att visualisera cellulära lokalisering av protein. Efter 26 dagar för att upprätthålla nervceller i differentiering media, neuroner var märkta för excitatoriska synaptisk markör, vGlut1 (figur 5). Dessa resultat visar att viralt märkta neuroner Co-Localize med vGlut1 (figur 5E) och neuron specifik markör, β-TUBULIN III (figur 5F-H).
Förmågan att skapa olika mikromiljöer isolerade till axoner visades också med hjälp av Alexa fluor 488 hydrazid, en låg molekylvikt fluorescerande färgämne (figur 6).
Axon skade studier utförs ofta inom uppdelade enheter. Ett bevis på princip experiment utfördes för att selektivt skada axoner av differentierade nervceller med förmonterade COC chip (figur 7). Resultat var likvärdiga med silikon uppdelade enheter6,13,14.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig1.jpg"> Figur 1: den förmonterade COC, multifacks mikroflödessystem chip. Aen ritning av det chip som identifierar de övre och nedre brunnarna. Storleken på chip är 75 mm x 25 mm, storleken på standard Mikroskop diabilder. (B) en zoomad region som visar kanalerna och mikrospåren som separerar kanalerna. Ytterligare detaljer finns i Nagendran et al.12. (C) Detta fotografi illustrerar skapandet av isolerade mikromiljöer inom varje fack med hjälp av karamellfärg färgämne. Hela denna siffra har reproducerats från 12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig1large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig2.jpg"> Figur 2: plast uppdelade chip beläggning och NSC cellplätering tidslinje. (A) plast multifacks chips var belagda med en pre-Coating lösning, och sedan Poly-L-Ornithine och laminin innan förkonditionering med NSC media. (B) nscs var pläterade med 7 x 104 celler i somatiska avdelning av chip. Cellerna odlades i NSC media för 24 h och sedan medierna ersattes med neurala differentiering media. Differentierade neuroner observerades av 7-10 dagar efter differentiering. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig2large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig3.jpg"> Figur 3: hSC-neuron tillväxt jämförelse i chips och PDMS enheter. (A) en faskontrast bild av HSC-neuroner som odlas vid 13 dagar efter differentiering i plast multifacks chip. (B) en inzoomad region av HSC-neuroner odlade inom den vita rutan i (a) och en likvärdig region inom en PDMS-enhet (höger). hSC-neuroner inom spånorna fäster väl. Aggregerad neuron kluster form i PDMS-baserade enheter. Representativ för 2 oberoende experiment. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig3large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig4.jpg"> Figur 4: mänskliga NSC-härledda neuroner visar dendritiska ryggraden morfologi. Retrograd märkt mCherry neuron på differentiering dag 33 odlas inom chip. Den förstorade regionen som beskrivs i rött, belyser närvaron av dendritiska taggar, som ger belägg till stöd för utvecklingen av mogna glutamatergic synapser. Röda pilar pekar mot dendritiska taggar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig4large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig5.jpg"> Figur 5: mänskliga NSC härledda nervceller odlade inom chips uppvisar excitatoriska synapser. Immunofärgning utfördes vid differentierings dag 26. Neuron avbildning utfördes i somatiska facket. A) vGlut1 (grön) och (B) DAPI (blå) immunolabeling. (C) mcherry-märkta neuroner (röd) retrograd märkt med hjälp av en modifierad rabiesvirus. D) en sammanslagen fluorescerande Mikrograf (a-C). (E) dendritiska Taggar och vGlut1 positiva Auktor samlokaliserade med mcherry-positiva dendriter, visas i en inzoomad region från (D). Immunofluorescensmikrografer av (F) neuron specifik markör, β-TUBULIN III (magenta) och (G) vGlut1 (grön). H) överlagring av β-TUBULIN III och vGlut1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig5large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig6.jpg"> Figur 6: viralt sensorik mcherry neuroner förlänga projektioner till en Axon lokaliserad mikromiljö etablerad inom den förmonterade COC-chip. (A) mcherry märkt neuron förlänga axoner genom mikrospår av chip och i ett isolerat Axon fack. Isoleringen av axon-facket visualiseras med hjälp av Alexa fluor 488 maleinhydrazid. Avbildning av nervceller inträffade vid differentiering dag 26 och 3 dagar efter infektion med den modifierade Rabiesviruset. (B) fluorescensbilden i (a) slås samman med en DIC-bild. Notera placeringen av microgrooves. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig6large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59250/59250fig7.jpg"> Figur 7: Axotomi som utförs inom COC multifacks chip. (A) mcherry märkta neuroner vid differentiering dag 33 var avbildas före axotomy. "Fire" färg look-up tabell. Bomedelbart efter axotomi, som visar att axoner är helt avbrutit. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59250/59250fig7large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Multifacks-chips i plast</td>
			<td>PDMS-enheter med flera fack</td>
		</tr>
<tr>
<td>isolera axoner</td>
			<td>isolera axoner</td>
		</tr>
<tr>
<td>etablera mikromiljöer</td>
			<td>etablera mikromiljöer</td>
		</tr>
<tr>
<td>axotomize nervceller</td>
			<td>axotomize nervceller</td>
		</tr>
<tr>
<td>optiskt transparent</td>
			<td>optiskt transparent</td>
		</tr>
<tr>
<td>kompatibel med högupplöst avbildning</td>
			<td>kompatibel med högupplöst avbildning</td>
		</tr>
<tr>
<td>kompatibel med fluorescens-mikroskopi</td>
			<td>kompatibel med fluorescens-mikroskopi</td>
		</tr>
<tr>
<td>färdigmonterad</td>
			<td>montering till substrat krävs</td>
		</tr>
<tr>
<td>friska axoner > 21 dagar</td>
			<td>friska axoner > 14 dagar</td>
		</tr>
<tr>
<td>hydrofila odlingsyta</td>
			<td>Hydrofoba</td>
		</tr>
<tr>
<td>gas ogenomtränglig</td>
			<td>gas genomsläpplig</td>
		</tr>
<tr>
<td>rundade mikrospår och kanaler</td>
			<td>raka mikrospår</td>
		</tr>
<tr>
<td>inte kompatibel med laser ablation</td>
			<td>Kan användas för laser ablation när PDMS Chambers monteras på speciella laser ablation kompatibla bilder.</td>
		</tr>
<tr>
<td>enheten kan inte ändras för att ta bort</td>
			<td>toppen är avtagbar för färgning inom microgrooves</td>
		</tr>
<tr>
<td>inte kompatibel med mineraloljebaserade doppoljor (silikon-baserade oljor är bra)</td>
			<td>kompatibel med mineraloljebaserade immersionsolja</td>
		</tr>
<tr>
<td>ogenomtränglig för små molekyler och organiska lösningsmedel</td>
			<td>absorption av små molekyler & organiska lösningsmedel</td>
		</tr>
<tr>
<td>Inga läckage problem med chip</td>
			<td>beläggning med poly-L-Ornithine och laminin gör enheterna läckande</td>
		</tr>
<tr>
<td>differentierade neuroner förblir jämnt fördelade (> 4 veckor) vid de testade cell tätheter</td>
			<td>differentierade nervceller börjar aggregera efter 3-4 dagar i kulturen vid den testade cell tätheter</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1: jämförelse av multi-kupé COC-chips och silikon enheter för odling av neuroner

Watch this Scientific Journal Video about Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips at JoVE.com

Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips

Uppdelning av mänskliga stamceller-härledda neuroner inom förmonterade plast Microfluidic chips

Detta protokoll visar användningen av uppdelade mikroflödessystem chips, injektion gjuten i en cyklisk olefin sampolymer till odlade nervceller åtskilda från mänskliga stamceller. Dessa chips är förmonterade och lättare att använda än traditionella uppdelade poly (dimethylsiloxane) enheter. Flera vanliga experimentella paradigm beskrivs här, inklusive viral märkning, fluidic isolering, axotomy, och immunofärgning.

Use of microfluidic devices to compartmentalize cultured neurons has become a standard method in neuroscience. This protocol shows how to use a ...

Compartmentalized mikrofluidiska enheter tillåter nervceller att studeras i deras mycket polariserad form. Dessa enheter är instrumentella för både grundläggande och translationell neurovetenskaplig forskning. Detta protokoll beskriver hur du använder cykliska olefin samlymer chips till compartmentalize nervceller differentierade från mänskliga stamceller.Dessa COC chips producerar friskare kulturer av differentierade nervceller över PDMS multi-fack enheter. I detta protokoll, vi visar kulturen av nervceller differentierade från NIH-godkända H9 stamcellslinje. Liknande förfaranden kan användas för att skilja nervceller från mIPSCs.Flisen med flera fack måste placeras i sekundär inneslutning med extra befuktning. Kanalerna i flisorna med flera fack måste fyllas med en precoatlösning, och sedan spolas med PBS. Till att börja, lös poly-L-ornitin i cellkultur grade destillerat vatten för att göra 600 mikroliter av lösning per chip.Aspirera den återstående PBS från brunnarna, se till att pipetten spets är borta från kanalen öppning. Ladda 150 mikroliter av poly-L-ornitin arbetslösning i övre högra brunnen. Vänta i 90 sekunder och tillsätt 150 mikroliter av lösningen till den nedre högra brunnen.Vänta fem minuter och upprepa inläsningsprocessen med lösningen för de vänstra brunnarna. Placera sedan luftfuktarbrickan med chip vid fyra grader Celsius över natten. Om du använder en petriskål, linda den med Parafilm och placera den på fyra grader Celsius över natten.Därefter aspirera lösningen från brunnarna, vilket säkerställer att pipettens spets placeras bort från kanalöppningen. Och upprepa lastning höger och vänster brunnar med 150 mikroliter vardera av sterilt vatten två gånger. Förbered arbetslösningen för Laminin.Ladda höger och vänster brunnar med 150 mikroliter vardera av laminin arbetslösningen. Inkubera chipet i facket i två timmar vid 37 grader Celsius. Skölj chipet med PBS utan kalcium och magnesium.Ladda höger och vänster brunnar med 150 mikroliter vardera av PBS. Vänta fem minuter. Aspirera PBS från brunnarna och skölj chipet med NSC-media.Ladda höger och vänster brunnar med 150 mikroliter vardera av NSC-media. Inkubera chipet i facket över natten i 37 grader Celsius inkubatorn med 5%CO2 för att i förväg konditionera chipet. För att så mänskliga neurala stamceller i flera fack chip, först räkna cellkoncentrationen med hjälp av en hemocytometer.Sedan aspirera media från brunnarna. Pipetter fem mikroliter av celllösningen till den övre högra brunnen, följt av fem mikroliter till den nedre högra brunnen. Använd ett mikroskop för att kontrollera att celler har kommit in i kanalen.Vänta fem minuter för celler att hålla sig till botten av chipet. Pipettera ca 150 mikroliter NSC-media till höger och vänster brunnar. Inkubera vid 5%CO2, 37 grader Celsius inom en lämplig befuktad behållare.Efter 48 timmar, aspirera NSC media från brunnarna och ersätta den med neural differentiering media genom att lägga till 150 mikroliter till varje topp väl och varje botten väl. Kultur nervceller inom en 5%CO2, 37 grader Celsius inkubator inom en luftfuktare bricka. Ta bort de återstående neurala differentiering media från axonal facket och placera den i en centrifug röret.Förvaras på 37 grader Celsius. Blanda 50 mikroliter av viruslösningen med 150 mikroliter av det uppvärmda mediet. Pipett 100 mikroliter av blandningen till båda brunnarna i axonfacket.Inkubera i två timmar inom en 37 grader Celsius inkubator. Dra tillbaka och kassera virusinnehållande medier. Försiktigt pipettera 75 mikroliter av de färska medierna till ett axonfack väl och låt media flöda genom kanalen in i andra axon väl.Upprepa denna process en gång. Fyll slutligen axonfacket med det sparade mediet, och överför chipet till inkubatorn. Efter en vecka i chipet med differentiering media, mänskliga neurala stamceller differentieras till nervceller, fäst och fördelas jämnt inom det somatiska facket.I jämförelse, nervceller i PDMS enheter aggregerade så tidigt som fem dagar efter tillägg av differentiering media, vilket leder till äventyras cell hälsa. Visualisering av märkta nervceller och dendritic spines med mCherry fluorescerande protein visade att NSC-härledda nervceller differentierade inom chipsen bildar mogna synapser. Nervceller var märkta för excitatoriska synaptiska markör, vGlut1.Immunfärgning resultat visar att viralt märkta nervceller kunde samlokalisera med vGlut1, och neuron-specifika markör, Beta-tubulin tre. Viralt transduced mCherry nervceller utvidga prognoser till en axon-lokaliserade mikromiljö etablerade inom premonterade chip. En jämförelse mellan bilderna av mCherry märkt nervceller före och omedelbart efter axotom visade helt avhuggna axons.Det är kritiskt att se till att kanalerna förblir fyllda med vätska utom när du utför axotomy förfarandet. COC-compartmentalized chips är lätta att använda och kan öppna dörren till ett flertal utredningar relaterade till neuronal skada, synaptogenes, synaptisk plasticitet, och patofysiologi av sjukdom.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

Specifikationen av Telencephalic glutamaterg nervceller från mänskliga pluripotenta stamceller

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Functional Evaluation of Biological Neurotoxins in Networked Cultures of Stem Cell-derived Central Nervous System Neurons

Funktionell utvärdering av biologisk Nervgifter i nätverkande Kulturer av stamceller som härrör centrala nervsystemet nervceller

Therapeutic and mechanistic studies of the presynaptically targeted clostridial neurotoxins (CNTs) have been limited by the need for a scalable, ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modellering Zika Virus infektion av utveckla mänskliga hjärnan In Vitro med stamceller härstammar Cerebral Organoids

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Simple Generation of a High Yield Culture of Induced Neurons from Human Adult Skin Fibroblasts

Enkla Generation av en hög avkastning kultur av inducerade nervceller från mänsklig vuxen hud fibroblaster

Induced neurons (iNs), the product of somatic cells directly converted to neurons, are a way to obtain patient-derived neurons from tissue that is easily ...

Method for High Speed Stretch Injury of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Neurons in a 96-well Format

Metod för hög hastighet Stretch skada av mänskliga inducerade pluripotenta stamceller-derived nervceller i en 96-väl Format

Traumatic brain injury (TBI) is a major clinical challenge with high morbidity and mortality. Despite decades of pre-clinical research, no proven ...

Use of Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips for Compartmentalizing Primary Murine Neurons

Användning av förmonterade plast mikroflödessystem chip för Compartmentalizing primära murina nervceller

Microfabricated methods to compartmentalize neurons have become essential tools for many neuroscientists. This protocol describes the use of a ...

Post-differentiation Replating of Human Pluripotent Stem Cell-derived Neurons for High-content Screening of Neuritogenesis and Synapse Maturation

Efter differentiering Replating av mänskliga pluripotenta stamceller-härledda nervceller för hög innehåll screening av Neuritogenes och synapsen mognad

Neurons differentiated in two-dimensional culture from human pluripotent stem-cell-derived neural progenitor cells (NPCs) represent a powerful model ...

Migration, Chemo-Attraction, and Co-Culture Assays for Human Stem Cell-Derived Endothelial Cells and GABAergic Neurons

Migration, Chemo-Attraction och Co-Kultur Analyser för humanstamcells-härledda endotelceller och GABAergic nervceller

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have ...

Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia

Analysera mitokondriell transport och morfologi i mänskliga inducerad pluripotent stamcell-härledda nervceller i ärftliga spastisk paraplegi

Neurons have intense demands for high energy in order to support their functions. Impaired mitochondrial transport along axons has been observed in human ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Subretinal transplantation av mänsklig embryonal stamcellsderiverad näthinnevävnad i en kattmodell för stora djur

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...