Name: electrophoretic delivery of &#x3b3;-aminobutyric acid (gaba) into epileptic focus prevents seizures in mice
Uploaded: 2019-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electrophoretic Delivery of Î³-aminobutyric Acid GABA into Epileptic Focus Prevents Seizures in Mice at JoVE.com

C.M.P.는 국제 교육 기관에서 관리 하는 휘 태 커 국제 학자 보조금의 기금을 인정 한다. 에반젤린는 마리 퀴리 IEF (No. 625372)의 후원을 받았습니다. A.W.는 유럽 연합 (eu)의 Horizon 2020 연구 및 혁신 프로그램에 따른 유럽 연구 위원회 (ERC)의 자금 조달을 승인 합니다 (보조금 계약 번호 716867). A.W.는 엑스-마르세유 대학 A * MIDEX의 우수성 이니셔티브를 인정, 프랑스의 "Investissements" 프로그램. 저자는 일 케 Uguz 박사, 사 히 카 나 우, 빈 첸 쿠 토 박사, 메리도 나 휴 박사, 마크 페로 박사, 그리고 조 소 피아 마그리트가 유익한 토론에 참여 했음을 인정 합니다.

모든 실험 절차는 연구소 드 신경 과학 des 시스템의 윤리적 지침에 따라 수행 하 고 지역 윤리 위원회 및 수의학 사무실에 의해 승인.
참고: 17 명의 성인 남성 OF1 마우스를 실험에 사용 하였다. 마우스는 음식 및 물 사용 가능한 광고 libitum와 12 h 빛/어두운 주기에 훈련을 받았다.
1. 마 취
<ol><li>케 타 민과 자일 린 100 (복 강 내의 체중과 ...

<ol>
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간 질에 대 한 급성 마우스 모델에서 새로운 실험적 프로토콜을 개발 함으로써, SLEs는 발작 초점에 이식 된 µ FIP의 도움으로 성공적으로 제어 될 수 있었습니다. 시간 및 공간 정밀도와 GABA를 제공 하는 그것의 기능 덕분에, 4AP 유도 SLEs 포착의 개시에 통제 되었다. 간 질병의 치료는 이론적으로는 발작 시작의 장소에서 신경 네트워크 방전의 제어가 달성 되는 경우에 가능 하다. 제시 된 프로토콜은...

간 질은 넷째 가장 일반적인 신경 장애: 인구의 약 1%는 간 질을 앓고 있으며, 영향을 받는의 1/3 정도 재발 발작이 있습니다. 대부분의 경우 발작을 약물로 조절할 수 있습니다. 그러나, 약물 치료는 개별적으로 모든 환자에 대 한 설정 될 필요가, 어디 적절 한 먹이 지 수 년은1,2를 찾는 데 걸리는. 추가적으로, 대부분의 약물은 삶의 질을 감소 시키는 심각한 부작용을 갖는다,4,5,6,7. 마지막으로, 환자의 30%에서 환자는 약물에 내성이 있으며, 일정 한 단일 발작 발생기 궤적의 경우에만 전염 성 신경 수술이 발작의 발생을 감쇠 할 수 있습니다8. 따라서, 현대 간 질 연구에 있는 주요한 이니셔티브는 위험한 상태에 환자에 있는 재발 하는 발작을 방지할 수 있는 새로운 전략을 발견 하는 것입니다, 강한 약물 치료 및 침략 적인 전염 하는 수술의 필수품을 감소 시키면서.
간 질 발작이 뇌의 흥분 성 및 억제 회로 내에서 불균형이 있을 때 발생 (일반화 된 뇌 전 증) 또는 두뇌의 국부 적 인 부분 (초점 간 질), 비정상적인 패션에서 뉴런 방전 등9 , 10 , 11. 항 경련 제는 발작 예방에서 두 가지 방법으로 작용할 수 있습니다: 여기를 감소 시키거나 억제를 강화12. 구체적으로, 그들은 세포 막 (13 )에서 이온 채널에 영향을 주는 것에 의해 뉴런 세포의 전기적 활성을 수정 하거나 억제 신경 전달 물질 GABA 또는 흥분 성의 영향을 미치는 신경 간의 화학적 전달에 작용 하 여 시 냅 스14,15에서 조미료. 일부 약물에 대 한, 행동의 모드는 알 수 없는18. 또한, 약물 치료는 환자에 게 지속적인 영향을 주며 발작의 유 병 역학에 적응할 수 없습니다. 이상적으로, 행동의 특정 메커니즘을 가진 약물은 근본적인 간 질 과정에 행동. 최적의 치료는 뇌의 interictally를 만지지 않을 것 이지만 발작이 발달 하기 시작할 때 즉시 작용할 것입니다. 그와는 대조적으로, 간 질의 모든 경우에, 약물은 지금 전체 뇌와 환자의 몸 전체에 영향을 미치는 체계적인 치료를 의미9.
간 질 발작 뇌 외상 등 초기 모욕 후 몇 년 동안 나타날 수 있습니다. 첫 번째 자발적 발작의 초기 모욕과 발생 사이의 기간은 신경 네트워크 연결 및 축 삭의 실종과 함께 신경 사 멸을 포함 하 여 상당한 분자 및 세포 조직 재구성을 특징으로 한다 새로운 연결의 출현으로 발 아/neosynaptogenesis19,21. 발작이 재발 되 면, 그들의 빈도와 심각도는 증가 하는 경향이 있다, 더 많은 뇌 영역을 포함. 발작 기원과 전파의 규칙이 다를 수 있기 때문에, 전파 네트워크에서 발작 개시 (epileptogenic 지역)의 사이트를 구별 하는 것이 중요 합니다. 인간 조직 및 간 질 실험 모델에서 수행 된 연구는 회로의 재 조직 및 발작 생성 능력에 관한 중요 한 데이터를 제공 하 고 있다20,21,22, 23. 그러나 이러한 재조직이 적응 적 응답 인지 또는 epileptogenesis 발작 발생 및 전파12와 관련이 있는지를 확인 하는 것은 어렵습니다.
따라서, 간 질 초점을 현지화 하 고 항 경련 제를 국 소 적으로 적용 하는 것은 현대 간에 서 연구에서 주요 과제 중 하나입니다. 간 질 및 일부 임상 연구의 동물 모델을 사용 하는 몇 가지 실험은 발작 사건의 발병을 발견 하 고 뇌24,25,26,27에서 기저 기전을 정의 하는 것을 목적으로 한다. 이를 위해, 4ap-유도 간 질 모델 (28,29,30,31 )을 사용 하는 새로운 실험 프로토콜을 개발 하 여 3 개의 정밀한 삽입을 가능 하 게 하는 급성 마우스 준비 생체 내 네트워크 활동이 고도로 현지화 된 방식으로 조작 되는 해 마의 주어진 영역으로 장치. 유리 마이크로 피 펫에의 한 국부 적 4AP 주입은 해 마에서 국 소화 된 자리에서 간 질 SLEs를 유도 하는 데 도움을 주며, 한편 신규 한 중합체 기반 µ FIP 프로브의 도움으로 발작 활성의 제어가 동시에 뉴런을 기록 함으로써 달성 된다 장치의 녹화 사이트와 전기적 활동. 해 마 지역 필드 활동은 또한 피 질 및 해 수에서 동시에 층 별 방식으로 멀티 채널 실리콘 프로브로 모니터링 된다.
최근에 발명 한 µ FIP 프로브는 적용 된 전기장을 사용 하 여 마이크로 유체 채널에 저장 된 전 하 약물을 이온 교환 막 (IEM)을 통해 주변 조직으로 밀어내는 방식으로 작동 합니다 (그림 1). IEM은 한 종류의 이온 (양이온 또는 음이온)만을 선택적으로 전송 하 고, 따라서 "off" 상태에서 수동 확산을 제한 하 고 주변 조직에서 장치에 반대 하 여 충전 된 종을 수송 하는 작업을 합니다. 전기장은 미세 유체 채널 내부에 있는 소스 전극과 디바이스 외부에 있는 타겟 전극 사이에 작은 전압 (< 1V)을 인가 함으로써 필요에 따라 생성 된다 (이 경우에는 동물 모델의 헤드 스크류). 약물 전달 속도는 소스와 타겟 전극 사이에 인가 된 전압과 측정 된 전류에 비례 합니다. 약물 전달의 정확한 tunability는 µ FIP의 주요 이점 중 하나입니다. 또 다른 중요 한 이점은, 유체 또는 압력 기반 약물 전달 시스템에 비해, µ FIP에서 약물이 그들의 캐리어 용액 없이 IEM을 통해 전달 되는 약물 전달 출구에서 무시할 압력 증가가 있다는 것 이다.
Μ FIP는 "off" 때 GABA의 수동 누출의 소량이 있다, 하지만 이것은 SLEs를 영향을 하지 발견. Μ FIP는 우리가 이전에 보고 한 전통적인 미세 제조 방법에 따라 주문 제작31.
재발 성 발작을 방지 하는 한 가지 방법은 처음에 또는 심지어 첫 번째 발작 이벤트 전에 네트워크 방전의 봉쇄 이기 때문에, GABA 억제 신경 전달 물질을 간 질 초점으로 전달 하기 위한 제시 된 방법은 훌륭한 국 소 간 질 환자에서 발작 제어를 위한 치료 적 가능성. 이후 GABA는 내 인 성 기질, 그것은 생리 적 농도에서 변경 되지 본질적인 신경 속성을 나뭇잎. GABA의 낮은 수준의 로컬 응용 프로그램은 자연스럽 게 억제에 응답 하는 세포에 영향을 미칠 것입니다., 생리 적 억제에 비슷한 효과 일으킬 것입니다., 깊은 뇌 자극에 반대 (DBS), 모든 세포를 자극 하 여 비 특이 한 행동 그 환경에서 신경 네트워크의, 여기 및 억제를 포함 하는 혼합 된 응답을 일으키는. 결론적으로, 제안 된 방법은 DBS 보다 발작 제어에 대 한 보다 구체적인 접근법을 제공 한다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >4AP</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >275875</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor 488</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab15007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Amplifier</td>
			<td>Neuralynx, Montana, USA</td>
			<td >Digital Lynx 4SX</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Amplifier</td>
			<td >Ampliplex</td>
			<td >KJE-1001</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Atlas Stereotaxique&#160;</td>
			<td>Allen Atlas</td>
			<td>978-0470054086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Borosilica glass pipette</td>
			<td >Sutter</td>
			<td >BF120-69-15</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brain Matrix</td>
			<td >WPI&#160;</td>
			<td >RBMA-200C</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bone trimmer</td>
			<td >FST</td>
			<td >16109-14</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 510</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Connector</td>
			<td>INSTECH</td>
			<td>SC20/15</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coton tige</td>
			<td>Monoprix</td>
			<td>EMD 6107OD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cover slip</td>
			<td >Menzel-Glass</td>
			<td >15747592</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DiI Stain&#160;</td>
			<td >Thermo Fisher</td>
			<td >D282</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DMSO</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >11412-11</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Drill</td>
			<td>FOREDOM</td>
			<td>K1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forceps</td>
			<td >F.S.T.</td>
			<td >11412-11</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >GABA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >GFAP Monoclonal Antibody</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>53-9892-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >GOPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>440167-100M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hamilton seringe&#160;</td>
			<td>Hamilton&#160;</td>
			<td>80330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Headscrew</td>
			<td>Component Supply</td>
			<td>TX00-2FH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating pad&#160;</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>341446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Injection Pump</td>
			<td>WPI&#160;</td>
			<td>UMP3-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Keithley</td>
			<td >Tektoronix</td>
			<td >216A</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ketamine</td>
			<td>Renaudin</td>
			<td>5787419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Magnetic holder</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>612</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Motoric manipulator</td>
			<td>Scientifica, UK</td>
			<td >IVM</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Na2HPO4</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >255793</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaH2PO4</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >7558807</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NeuroTrace DiI&#160;</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>N22880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paper towel</td>
			<td>KIMBERLY CLARK</td>
			<td>7552000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PB</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PEDOT:PSS</td>
			<td>CLEVIOS</td>
			<td>81076212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PFA</td>
			<td>Acros Organic</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Rectal temperature probe</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>521591</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ropivacaine&#160;</td>
			<td>KABI</td>
			<td>1260216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Saline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scalpel</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>AUST R195806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Seringue&#160;</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Serrefine clamp</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>18050-28</td>
			<td>4 is recommended</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silicon probe</td>
			<td>NeuroNexus, Michigan, USA</td>
			<td>A2x16-10mm-50-500-177 or A1x16-5mm-150-703</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereotoxic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51733U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Superfrost Slide</td>
			<td >ThermoScientific</td>
			<td >J38000AMNZ</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tubing</td>
			<td >INSTECH</td>
			<td >LS20</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vaseline&#160;</td>
			<td>Laboratoire Gilbert</td>
			<td>3518646126611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vectashield DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories, California, USA</td>
			<td>H-1200-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vibratome, Leica VT1200S</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>1491200S001</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylazine&#160;</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>4007221032311</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrophoretic delivery of &#x3b3;-aminobutyric acid (gaba) into epileptic focus prevents seizures in mice

간 질은 전세계 수백만의 사람들에 영향을 미치는 신경학 상 무질서의 그룹입니다. 약물 치료는 70%의 경우에 도움이 되지만, 심각한 부작용은 환자의 삶의 질에 영향을 미친다. 더욱이, 간 질 환자의 높은 비율은 약물 내성; 그들의 경우에는 신경 수술이 나 신경 자극이 필요 합니다. 따라서 간 질 연구의 주요 목표는 부작용 없이 간 질을 치료 하거나 약물 내성 환자에서 재발 성 발작을 예방 할 수 있는 새로운 치료법을 발견 하는 것입니다. 신경 공학은 새로운 전략과 기술을 사용 하 여 간 질 환자를 위험에 치료할 수 있는 더 나은 솔루션을 찾도록 합니다.
간 질병의 급성 마우스 모델에서 신규 한 실험 프로토콜을 시연 하는 것으로 서, 직접적으로 현장 전기 영동 약물 전달 시스템이 사용 된다. 즉, 미세 유체 이온 펌프 (µ FIP)를 포함 하는 신경 프로브가 온 디맨드 약물 전달 및 국 소 신경 활성의 동시 기록을 위해 이식 되 고 4-aminopyridine 유도 (4AP 유도) 발작과 같은 제어가 가능한 것으로 입증 이벤트 (SLE) 활동. Γ-아미노 부 티 르 산 (GABA) 농도는 발작 집중에의 한 항 간 질 효과에 도달 하는 GABA 전달의 정밀한 제어에 의해 생리 적 범위 내에서 유지 되지만 과잉 억제 유도 된 반발 파열을 야기 하지 않는다. 이 방법을 통해 병리학 적 활동과 개입을 감지 하 여 억제 신경 전달 물질을 정확한 시 공간적 제어와 함께 간 질 초점에 직접 전달 함으로써 발작을 막을 수 있습니다.
실험 방법에 대 한 개발의 결과로 서, SLEs는 발작 발병 시에 정확 하 게 조정 된 GABA 전달을 통해 발작 제어를 허용 하는 고도로 국 소화 된 방식으로 유도 될 수 있다.

여기에 제시 된 절차를 사용 하 여 마 취 된 마우스에서 4AP 간 질 모델을 이용 하 여 발작을 조절 하는 것에 대 한 항 경련 제 집중을 달성할 수 있다. 임 플 란 트의 정확한 국 소화 (그림 2)는 해 마 국부 잠재력 (Lfps, 도 4)을 기록 하 여 작은 해 마 발작을 유도 하 고 발작 발병 시 GABA를 전달 하는 데 도움이 되었습니다. 임 플 란 ?...

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Electrophoretic Delivery of &#947;-aminobutyric Acid GABA into Epileptic Focus Prevents Seizures in Mice

간 질 연구의 도전은 고전적인 치료가 부적당 한 환자를 위한 새로운 치료를 개발 하는 것입니다. 새로운 프로토콜을 사용 하 여-이식 가능한 약물 전달 시스템의 도움으로-우리는 간 질 초점에 GABA의 전기 영동 전달에 의해 마 취 된 쥐에서 발작을 제어할 수 있습니다.

간 질 초점으로 γ-아미노 버터 산 (GABA)의 전기 영동 전달은 생쥐의 발작을 방지 합니다.

Epilepsy is a group of neurological disorders which affects millions of people worldwide. Although treatment with medication is helpful in 70% of the ...

우리의 프로토콜은 간질 발작의 치료에 새로운 해결책을 제안 할 수있는 매우 새로운 장치를 사용하여 자연적으로 발생하는 억제 신경 전달 물질 GABA의 지방 관리를 활용합니다. 마이크로 에어로필이온 펌프는 우리가 마약을 언제 어디서 정확히 제어할 수 있게 해줍니다. 정밀하게 나사로 스레드된 전기 전광 전달은 그밖 신경학상 질병을 표적으로 하기 위하여 수정될 수 있었습니다.이 약물 전달 기술의 또 다른 장점은 실제로 전달 되는 액체가 없기 때문에 약물 전달 콘센트에서 매우 무시할 수 있는 압력 증가 가 있다는 것입니다. 오히려, 그것은 단지 약물 분자 자체입니다. 프로브의 가까운 현지화가 가장 큰 문제를 야기하기 때문에 정렬 각도를 테스트하고 스테레오탁스 프레임의 더미 프로브로 포지셔닝하는 것은 매우 눈에 잘 띄지 않습니다.스테레오탁스 프레임에 마취 마우스의 머리를 고정하고 30 게이지 바늘을 사용하여 계획된 절개 부위에 국소 진통 피하 부위를 주입하는 것으로 시작합니다. 5분 후 메스를 사용하여 두개골에 중간 선절을 만듭니다. 미세한 집게를 사용하여 피부를 부드럽게 후퇴시킵니다.불독 세로핀 클램프로 피부를 고정합니다. 그리고 근막의 노출 된 두개골 표면을 청소합니다. 미세한 0.4밀리미터 드릴 비트가 있는 치과 드릴을 사용하여 두라가 보일 때까지 소뇌 위의 두개골에 구멍을 뚫습니다.지면 나사를 구멍에 넣고 정밀 드라이버를 사용하여 소뇌의 상단에 도달 할 때까지 나사를 켭니다. 스테레오탁스 프레임을 사용하여, 원하는 뇌 영역에 대한 스테레오탁스 좌표를 측정하고, 얇은, 잘 연마 된 투명 뼈 멤브레인이 남아있을 때까지, 대상 영역에 대한 두개골의 약 1 ~ 2 밀리미터 직경 영역을 얇게 빠른 속도로 드릴을 사용합니다. 그런 다음 사용자 정의 된 후크 팁 바늘을 사용하여 듀라를 제거하고 결과 구멍에 식염수 한 방울을 추가하십시오.멀티 채널 실리콘 프로브 삽입의 경우, 마그네틱 홀더에 부착된 스테레오탁스 암에 프로브를 놓고 팔을 스테레오탁스 프레임 옆에 놓습니다. 스테레오탁스 암을 20도 전방 후방 각도로 설정하여 다른 두 임플란트의 위치를 위한 충분한 공간을 남깁니다. 그리고 프로브를 헤드 스테이지와 지면 나사에 연결합니다.미크론 정밀 스테레오탁스 암을 사용하여 실리콘 프로브를 해마로 천천히 낮추고, 표적 등산적 위치에 도달할 때까지 피질의 상단에서 멀티 채널 실리콘 프로브를 이동하면서 전기 신경 신호를 기록하는 녹음 소프트웨어를 시작합니다. 이어서, 동시에 피질과 해마의 층으로부터의 국소 전위 신호를 컴퓨터 화면상에 침투하는 동안 기록하고, 기록된 국소 영역의 마커로서 기록된 국소 영역 의 피라미드 층에서 리플 활성을 사용한다. 미세 유체 이온 펌프의 충전을 위해 튜브를 펌프 입구에 연결하고 프로브를 0.05 어금강 GABA 용액으로 채웁니다.튜브를 제거하고 파라핀 필름 래핑으로 입구를 닫고 미세 유체 이온 펌프가 홀더에 단단히 부착되도록 하십시오. 전기 리드를 소스 측정 장치에 연결하기 전에 홀더를 마이크로 조작기 암에 장착할 때 주의하십시오. 20도 메디오-측면 각도의 스테레오탁스 암을 사용하면 펌프가 도소벤트럴 좌표에 도달할 때까지 펌프가 구부러지지 않고 가능한 한 프로브에 가깝게 축 이동으로 펌프를 천천히 낮추면 피질 표면에서 음수 1200 마이크로미터를 조정합니다.발작 유도를 준비하기 위해 10 마이크로리터 주사기의 금속 바늘 허브를 제거하고 주사기 끝에 borosilicate 마이크로 파이펫을 고정하십시오. 허브를 마이크로피펫 끝 위에 놓고 주사기를 20도 측면 내측 각도로 배치합니다. 자동화된 미세 주입 펌프를 사용하여 인공 뇌척수액에 500~1000나노리터의 전체 아미노피리딘을 주사기에 적재하고 유리 마이크로피펫을 등쪽 좌표 위치로 낮춥니다.250 나노리터의 용액을 뇌에 주입하고 소프트웨어에서 레코딩을 시작합니다. 그런 다음, 화면을 보고 첫 번째 간 스파이크가 100초 동안 소스와 대상 사이에 1볼트를 적용하기 전에 나타나기를 기다렸다가 30사이클동안 1초 떨어져 GABA 솔루션을 제공합니다. 임플란트의 정확한 국소화는 해마 지역 필드 잠재력을 기록하고, 작은 해마 발작을 유도하고, 발작 발병시 GABA를 전달하는 데 도움이됩니다.또한, 임플란트의 국소화는 사후 허크 히스토로지에 의해 각 실험 후에 검증될 수 있다. 여기서, 발작과 같은 사건이 새로운 뉴런 프로브에 의한 GABA의 전달과 함께 중단될 수 있는 경우, 미세유체 프로브를 통합하는 예가 표시됩니다. 4 개의 aminopyridine더 큰 영역 또는 피 질의 상단에 주입 될 때, 간 질 발작 일반화 되었다, 그래서 전달 된 GABA 간 질 발작의 범위를 수정할 수 없습니다.특히, 나트륨 이온의 전달은 4개의 아미노피리딘 유도 활성에 큰 영향을 미치지 않았다. 따라서 이 프로토콜은 여러 개의 깨지기 쉬운 프로브를 이식하는 모든 스테레오탁스 수술에 유용할 수 있습니다. 미세 유체 이온 펌프의 도움으로, 충전 된 분자의 다른 종은 간질뿐만 아니라 다른 신경 질환을 치료하기 위해 도입 될 수 있습니다.조직 인터페이싱에서 전기 전구 전달은 어떤 연조직에 종을 전달하는 일반적인 새로운 접근을 제시합니다. 독소이고 간질을 유도하기 때문에 4AP를 적용 할 때 특별한주의를 기울이십시오.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrophoretic Delivery of &#x3B3;-aminobutyric Acid (GABA) into Epileptic Focus Prevents Seizures in Mice

GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

랫 뇌 조각의 GABA 활성화된 단일 채널 및 토닉 해류

The GABAA channels are present in all neurons and are located both at synapses and outside of synapses where they generate phasic and tonic currents, ...

연구

신경과학

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

사용하여 여러 개의 CNS 준주로 효율적인 유전자 전달 Utero에서 Electroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Extinction Training During the Reconsolidation Window Prevents Recovery of Fear

Reconsolidation 창 동안 멸종 교육은 두려움의 복구를 방지

Fear is maladaptive when it persists long after circumstances have become safe. It is therefore crucial to develop an approach that persistently prevents ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

글루타민산 염과 GABA의 빠른 마이크로 이온 도입 : 시냅틱 통합을 조사하는 유용한 도구

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Lineage-reprogramming of Pericyte-derived Cells of the Adult Human Brain into Induced Neurons

유도 된 신경 세포로 성숙한 인간 두뇌의 혈관 주위 세포에서 파생 된 세포의 리니지 - 프로그래밍

Direct lineage-reprogramming of non-neuronal cells into induced neurons (iNs) may provide insights into the molecular mechanisms underlying neurogenesis ...

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

중추 신경계에 대상 물질 전달을위한 마우스 미세 주입 기술<i&gt;를 통해</i&gt; 내부 경동맥

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous ...

Subpial Adeno-associated Virus 9 (AAV9) Vector Delivery in Adult Mice

Subpial Adeno-associated Virus 9 AAV9 Vector Delivery in Adult Mice

성인 쥐의 Subpial Adeno-associated Virus 9 (AAV9) 벡터 전달

The successful development of a subpial adeno-associated virus 9 (AAV9) vector delivery technique in adult rats and pigs has been reported on previously. ...

Whole-cell Currents Induced by Puff Application of GABA in Brain Slices

전체 셀 전류 두뇌 분할 영역에서 GABA의 퍼프 응용 프로그램에 의해 유도 된

Pharmacological administration is commonly used when conducting whole-cell patch-clamp recording in brain slices. One of the best methods of drug ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

ImageJ를 사용 하 여 붙일 태그가 단백질의 편견된 분석 통해 초파리 에서 Neurodegeneration의 양적 세포 생물학

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...